Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-20Bitstream added on 2014-06-13T18:09:12Z : No. of bitstreams: 1 pereira_ca_me_sjc.pdf: 3427201 bytes, checksum: 7d684064d1dd59c89bf2d7b2b63a765e (MD5) / O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) em biofilmes formados por C. albicans (GI), S. aureus (GII) e S. mutans (GIII), isolados e em associações (GIV-VII). Os biofilmes foram formados em discos de resina acrílica esterilizados imersos em caldo de infusão cérebro coração com 5% de sacarose, inoculados com a suspensão microbiana e incubados por 5 dias. Após o período de incubação, os discos foram lavados com solução fisiológica esterilizada para remover as células não-aderidas. Foram avaliados os efeitos do fotossensibilizador azul de metileno (AM) na concentração de 0,1 mg/mL por 5 min e laser AsGaAl (660 nm) por 98 s, isolados e em conjunto. Os biofilmes foram desprendidos em solução fisiológica em agitador ultrasônico. Foram realizadas diluições e alíquotas semeadas em ágar seletivos e incubadas por 48 h. Os números de UFC/mL em Log10 foram analisados estatisticamente (ANOVA, teste de Tukey, p< 0.05). Também foi realizada a microscopia eletrônica de varredura (MEV) nos discos com biofilmes dos grupos controle e TFD. Foram observadas reduções significativas na viabilidade de todos os biofilmes expostos ao AM e laser. As reduções (log10) foram maiores em biofilmes isolados, com: 40.22% para C. albicans (GI), 55.91% para S. aureus (GII) e 47.35% para S. mutans (GIII). Nos biofilmes mistos as reduções (log10) foram: 35.08% para C. albicans e 43.9% para S. aureus (GIV); 31.54% para C. albicans e 38.7% para S. mutans (GV); 40.12% para S. aureus e 37.14% para S. mutans (GVI); 19.56% para C. albicans, 28.41% para S. aureus e 24.94% para S. mutans (GVII). As imagens de MEV demonstraram uma fotossensibilização letal predominantemente nas camadas superiores dos biofilmes. Conclui-se que a TFD pode ser uma abordagem útil no controle de biofilmes bucais. / The purpose of this study was to evaluate the antimicrobial effect of photodynamic therapy (PDT) in biofilms formed by C. albicans (GI), S. aureus (GII) and S. mutans (GIII), alone and in associations (GIVGVII). The biofilms were grown in acrylic resin discs immersed in sterile brain heart infusion broth (BHI) containing 5% sucrose, inoculated with microbial suspension and incubated for 5 days. On the fifth day, the discs were washed in sterile saline solution in order to remove loosely bound material. The effects of the methylene blue (MB) photosensitizers at a concentration of 0,1 mg/mL for 5 min and AsGaAl laser (660 nm) for 98 s, alone and conjugated were evaluated. The dics were placed into tubes with sterile saline solution and sonicated for 30 s in order to disperse the biofilms. Ten-fold serial dilutions were carried out and aliquots plated in selective agar which were then incubated for 48 h. Then the numbers CFU/mL (log10) were counted and analyzed statistically (ANOVA, Tukey´s test, p< 0,05) Scanning electron microscopy (SEM) on discs with PDT and control biofilms groups were performed. Significant decreases in the viability of all microorganisms were observed when biofilms were exposed to both MB and laser. Reductions (log10) in single-species biofilms were greater than associated biofilms with: 40.22% for C. albicans (GI), 55.91% for S. aureus (GII) and 47.35% for S. mutans (GIII). In associated biofilms the reductions (Log10) were: 35.08% for C. albicans and 43.9% for S. aureus (GIV); 31.54% for C. albicans and 38.7% for S. mutans (GV); 40.12% for S. aureus and 37.14% for S. mutans (GVI); 19.56% for C. albicans, 28.41% for S. aureus and 24.94% for S. mutans (GVII). Scanning electron microscopy micrographs suggested that lethal photosensitization occurred predominantly in the outermost layers of the biofilms. It was concluded that PDT using MB photosensitizer and laser may be a useful approach in the control of oral biofilms.

Vancomycin is one of the most extensively used antibacterial agents for the treatment of severe gram positive infections including methicillin-resistant Staphylococcus aureus. It is also known that the use of this antimicrobial is a risk factor for subsequent colonization or infection with vancomycin-resistant Enterococcus (VRE). This retrospective observational study was to evaluate the results of vancocinemias that were conducted in adult and pediatric patients hospitalized in the period january to november 2012 at the University Hospital of Santa Maria (HUSM). Were evaluated 353 vancocinemias performed in 115 patients. Of the total, 180 vancocinemias were collected in the TROUGH, of these 150 (83.33%) were above the recommended range, 20 (11.11%) were within the expected values and 10 (5.56%) showed lower than expected. The review was carried out in 26 patients at the PEAK, 15 (57.69%) showed lower serum concentrations recommended, 5 (19.23%) were within the range and 6 (23.08%) had values greater than those expected. The remaining 147 (41.64%), was not collected in strips of PEAK and TROUGH. These data confirm the importance and necessity of conducting a routine therapeutic monitoring of vancomycin, through the creation and implementation of a collection routine. / A vancomicina constitui-se em um dos agentes antibacterianos mais extensivamente utilizados para o tratamento de infecções severas de patógenos gram positivos envolvendo Staphylococcus aureus resistentes à meticilina. Sabe-se também que o uso desse antimicrobiano constitui fator de risco para subsequente colonização ou infecção por Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE). Esse estudo observacional retrospectivo teve como objetivo avaliar os resultados das vancocinemias que foram realizadas nos pacientes adultos e pediátricos internados no período de janeiro a novembro de 2012 no Hospital Universitário de Santa Maria (HUSM). Foram avaliadas 353 vancocinemias realizadas em 115 pacientes. Do total, 180 (50,99%) vancocinemias foram coletadas no VALE, destas 150 (83,33%) estavam acima da faixa recomendada, 20 (11,11%) estavam dentro dos valores esperados e 10 (5,56%) apresentaram valores abaixo do esperado. O exame foi realizado em 26 (7,37%) pacientes no PICO, sendo que 15 (57,69%) apresentaram valores inferiores às concentrações séricas recomendadas, 5 (19,23%) encontravam-se dentro da faixa e 6 (23,08%) tiveram valores superiores aos esperados. O restante, 147 (41,64%), não foi coletado em faixas de PICO e VALE. Estes dados confirmam a importância e a necessidade da realização de uma rotina de monitoramento terapêutico da vancomicina, através da criação e implementação de uma de rotina de coleta.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-10Bitstream added on 2014-06-13T19:10:41Z : No. of bitstreams: 1 melo_ec_me_botfm.pdf: 1085719 bytes, checksum: fb9a60b6f761f7fdad4d8e8048a3820d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A emergência e disseminação de microrganismos multirresistentes em serviços de saúde é um evento preocupante em todo o mundo. Dois agentes são especialmente relevantes: (1) Staphylococcus aureus, principalmente quando resistente à Meticilina (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA); e (2) Pseudomonas aeruginosa, freqüentemente resistente a múltiplos antimicrobianos. Foram realizados três estudos observacionais retrospectivos para identificar fatores de risco para aquisição desses agentes em pacientes de um hospital de ensino (285 leitos). O Estudo 1 utilizou delineamento “caso-caso-controle” para analisar fatores de risco para colonização nasofaríngea por MRSA em uma unidade de terapia intensiva (UTI) clínico-cirúrgica. O Estudo 2 aplicou metodologia semelhante para analisar fatores associados à aquisição de MRSA por pacientes queimados. Por outro lado, o Estudo 3 (uma coorte retrospectiva) procurou identificar fatores de risco para colonização orofaríngea por isolados de P. aeruginosa. Nos Estudo 1 e 3 casos e controles foram selecionados entre os pacientes internados na UTI clínico-cirúrgica entre Março de 2005 e Maio de 2006. Casos foram pacientes que adquiriram colonização por MRSA (Estudo 1) e P. aeruginosa (Estudo 3) durante a estadia na UTI. Controles foram selecionados entre pacientes não colonizados. Estratégia semelhante foi utilizada no Estudo 2, para seleção de casos e controles entre pacientes da Unidade de queimados. Em todos os estudos, foram analisados dados demográficos, comorbidades, realização de procedimentos, inserção de dispositivos e uso de antimicrobianos. Os resultados foram ajustados para gravidade dos pacientes (pontuações de APACHE II e Charlson) e para o tempo de exposição ao ambiente hospitalar. Análises univariadas e multivariadas (regressão logística) foram utilizadas... / The emegence and spread of multidrug-resistant microorganism in healthcare settings is a worldwide concern. Two bacteria are specially relevant: (1) Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and (2) Pseudomonas aeruginosa (usually resistant to multiple antimicrobials). We conducted three observational studies to identify risk factors for MRSA and P. aeruginosa acquisition in a teaching hospital with 285 beds. Study #1 employed a “casecase- control” design to analyze risk factors for nasopharyngeal colonization with MRSA in a medical-surgical Intensive Care Unit (ICU). Study #2 used a similar design to identify risk factors for MRSA acquisition in burn patients. Study #3 (a retrospective cohort) aimed to identify risk factors for oropharyngeal colonization with P. aeruginosa. Studies #1 and 3 selected subjects among patients admitted to the medical-surgical ICU from March 2005 through May 2006. Cases were defined as individuals who acquired colonization with MRSA and P. aeruginosa, respectively, in the ICU. Controls were selected among noncolonized individuals. A similar strategy was used to select cases and controls for Study #2 among patients from the burn unit. In all studies, several data were analyzed: demographic information, comorbidities, procedures, inserted devices and antimicrobial use. Data were adjusted for severity-of-illness (APACHE II and Charlson scores) and for time of exposure to hospital environment. In Study #1, 27 out of 122 patients included acquired MRSA colonization. Significant risk factors were: use of Ciprofloxacin (Odds Ratio[OR]=5.05, 95% Confidence Interval[CI]=1.38-21.90, p=0.015) and time of ICU stay (OR= 1.12, 95%CI=1.06-1.19, p<0.001). On the other hand, the use of Levofloxacin had a protective effect (OR=0.08, 95%CI=0.01-0.55, p=0.01). In Study #2, 75 out of 143 burn patients acquired MRSA... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1728060 bytes, checksum: 29c473da9426832816bbcb073e84e4f1 (MD5) Previous issue date: 2014-10-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bacterial resistance to drugs can happen due to different mechanisms. Among these, efflux bombs highlights and these structures are integrant part of membran cell. The increasing incidence of resistant bacteria has undermined the therapeutic value of available antibacterials, creating the necessity, increasingly, the search for alternatives that can reverse or decrease the resistance, as the search for inhibitors of resistance mechanisms. In order to resolve this problem, products from plants (extracts, essencial oils and phytoconstituents) rise as rich research source on drug resistance modulators , that is, drugs that increase antibiotics activity or even revert bacterial resistance. In this work, we investigated how modifiers of antibiotic activity act in Staphylococcus aureus strains that are efflux bombs carriers. The essencial oils used were extracted from Rosmarinus officinalis L., Illicium verum Hook., Cananga odorata, Eucalytus globulus, Pelargonium graveolens , Citrus paradisi, Cymbopogon flexuosus, Melaleuca alternifolia, Mentha Spicata, Origanum vulgare, Cymbopogon Martini, and their major constituents used were 1,8-cineol, Anetol, Trans-Caryophyllene, Citronelol, Limoneno, Citral, Terpenen-4-ol, L-carvone, Carvacrol and Geraniol. Our results show that the natural products evaluated, in general, present significant antibacterial activity, and probably they operate as modifiers of antibiotic activity, strains through reduction of CIM of tested antibiotics (tetracycline, erythromycin and norfloxacin) from 2 to16 fold. The results show that natural products from plants are in fact potential antibiotics adjuvants. / A resistência bacteriana a drogas pode ser ocasionada por diferentes mecanismos. Dentre esses, podemos destacar as chamadas bombas de efluxo as quais são partes integrantes da membrana plasmática. A crescente incidência de bactérias resistentes tem minado o valor terapêutico dos antibacterianos existentes, criando a necessidade, cada vez maior, da busca por alternativas capazes de reverter ou diminuir a resistência. Na tentativa de encontrar uma solução para esse problema, os produtos de origem vegetal (extratos, óleos essenciais e fitoconstituintes) surgem como uma rica fonte de pesquisa na busca de potenciais moduladores da resistência à droga , ou seja, drogas que aumentam a atividade de certos antibióticos ou mesmo revertem a resistência bacteriana. Neste trabalho, avaliamos o efeito modificador da atividade antibiótica em linhagens de Staphylococcus aureus - portadoras das bombas de efluxo - o óleo essencial de Rosmarinus officinalis L., Illicium verum Hook., Cananga odorata, Eucalytus globulus, Pelargonium graveolens , Citrus paradisi, Cymbopogon flexuosus, Melaleuca alternifólia, Mentha Spicata, Origanum vulgare, Cymbopogon Martini e seus constituintes majoritários, 1,8 cineol, Anetol, Trans-Caryophyllene, Citronelol, Limoneno, Citral, Terpinen-4-ol, L-carvone, Carvacrol e Geraniol. Como resultado, observou-se que os produtos naturais avaliados, de maneira geral, apresentaram significativa atividade antibacteriana e podem atuar como modificadores da atividade antibiótica ao reduzirem a CIM dos antibióticos testados (tetraciclina, eritromicina e norfloxacina) de 2 a 16 vezes. Os resultados indicam que produtos naturais de origem vegetal são, de fato, potenciais adjuvantes de antibióticos.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:02:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 786983 bytes, checksum: eac9b468ba5f066caa74a9a3589e7b0c (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Staphylococcus aureus is widespread in nature and is the bacteria most often found in skin infections, although it is able to colonize many organ in the human body. This pathogen can also to contaminate food and staphylococcal food poisoning is one of foodborne diseases more common around the world. This study aimed to isolate and characterize samples of S. aureus isolates from surface preparation of meat and vegetables in public hospitals located in the city of João Pessoa - Paraíba - Brazil, as the production of lipase, protease, antibiotic resistance profile and detection of mecA. Further, evaluation was made in the production of lipase strains of S. aureus isolated from animals (udder and nasal cavities), food (cottage cheese) and infected human wounds (hospital). It was observed lipase production in isolates from human wounds (43/50) animals (16/30), cheese (34/41), bench preparation of meat (24/24) and surface preparation plant (22 / 24). All isolates surface preparation of meat, vegetables and cheese produced protease precipitation with zones of diameters ranging from <0.5 to 4 mm. Among the 48 S. aureus isolates from food processing surfaces tested, 100% were sensitive to chloramphenicol, norfloxacin and methicillin. Twelve isolates were resistant to erythromycin and tetracycline, whereas all isolates were resistant to penicillin and streptomycin. The fragment corresponding t the mecA gene was not identified among isolates. The lipolytic and proteolytic activities, as well as antibiotic resistance (even those already with no therapeutic value) constitute important epidemiological and genetic markers may contribute to the characterization of samples environment or host-specific, and, if performed periodically to distinguish those new strains endemic. / Staphylococcus aureus está disseminado na natureza de forma variável, e apresenta-se como a bactéria mais frequentemente encontrada em infecções de pele, todavia é capaz de colonizar quase todos os órgãos do corpo humano. Esse patógeno também pode contaminar alimentos. Intoxicação alimentar estafilocócica é uma das doenças veiculadas por alimentos mais comuns em todo o mundo. Este estudo teve como objetivo isolar e caracterizar amostras de S. aureus isolados de superfícies de preparo de carne e vegetais de hospitais públicos situados na cidade de João Pessoa Paraíba Brasil, quanto a produção de lipase, protease, perfil de resistência a antimicrobianos e detecção de gene mecA. Ainda, foi realizada a avaliação da produção de lipase de cepas de S. aureus isoladas de animais (úbere e fossas nasais), alimentos (queijo ricota) e de feridas humana infectadas (ambiente hospitalar). Foi observada a produção de lipase nos isolados de feridas humanas (43/50), animais (16/30), queijo (34/41), bancada de preparo de carne (24/24) e bancada de preparo de vegetais (22/24). Todas as cepas isoladas de bancada de corte de carne, vegetais e de queijo produziram protease com zonas de precipitação de diâmetros variando de < 0,5 a 4 mm. Dentre 48 S. aureus isolados de superfícies de processamento de alimentos testados, 100% foram sensíveis a clorafenicol, norfloxacina e meticilina. Doze isolados foram resistentes a eritromicina e tetraciclina, enquanto todos os isolados foram resistentes à estreptomicina e penicilina. Nas reações de amplificação não foi identificado o fragmento correspondente ao gene mecA entre os isolados avaliados. As atividades lipolítica e proteolítica, bem como resistência a antibióticos (mesmo para aqueles já sem valor terapêutico) se constituem em importantes marcadores genéticos e epidemiológicos podendo contribuir para a caracterização de amostras ambiente ou hospedeiro-específicas, bem como, se realizada periodicamente, para se distinguir novas linhagens daquelas endêmicas.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:03:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3546652 bytes, checksum: 8e9dbee6579c5859b11ab942573194a3 (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to evaluate the ability of adhesion, the kinetics of separation, the pattern of biofilm formation of strains of S. aureus isolated from different Food and Nutrition Services from João Pessoa - PB, when cultured in meat-based broth and vegetable-based broth, and incubated at temperatures of 28ºC and 7°C for an extended time (24 72 h). Still, we evaluated the effect of applying sanitizers sodium hypochlorite (250 mg/L) and peracetic acid (30 mg/L) at inactivating bacterial cells in the biofilm matrix formed previously. These experiments were used as coupons (2 x 2 cm) of polypropylene and stainless steel AISI 304, whereas these materials are widely used in the composition of surfaces, equipment and / or utensils used in various types of food services. The results showed a high adhesion capacity of the strains tested in meat-based broth and vegetable-based broth with counts above 5 log CFU/cm2, regardless of surface type and incubation temperature. The detachment of cells on the surface was at least 103 during the first 6 CFU/cm2 contact with agar for both types of substrate used, featuring a high persistence over a prolonged incubation time (24 to 72h). There was not a clear influence from the surface and the temperature used to evaluate the adhesion. In general, for both types of substrate was shown a similar pattern of biofilm formation when strains were subjected to different combinations of surface types and growth temperatures. The number of cells (105-107 CFU/cm2) required for biofilm formation was observed in all experimental systems already after 3 days of incubation followed by a linear decrease after the 6th day, with the exception of strain S28 grown in vegetablebased broth, which showed values around 104 CFU/cm2 the first 24 hours of incubation. A range from 2.6 to 3.7 log CFU/cm2 for strains incubated meat-based broth and 2.0 to 3.3 log CFU/cm2 for strains incubated in vegetable-based broth was observed in reducing cells in the matrix of the biofilm caused by peracetic acid while the sodium hypochlorite reduction was about 2.1 to 2.7 log CFU/cm2 and 1.5 to 2.1 CFU/cm2 for strains grown in meat-based broth and vegetables, respectively. From the results obtained, it can be concluded that the strains tested showed a high capacity for adhesion and biofilm formation on food contact surfaces when exposed to different culture media and environmental characteristics. Furthermore, the sanitizers used, although reducing the number of adhered cells, demonstrate a certain ineffectiveness in removing cells from the biofilm matrix considering the number of remaining cells found after the process of applying sanitizers. / O presente estudo teve como objetivo avaliar a capacidade de adesão, a cinética de separação, a formação de biofilmes de cepas de S. aureus isoladas de diferentes Serviços de Alimentação e Nutrição da cidade de João Pessoa PB, quando cultivadas em caldo substrato base carne e caldo substrato base vegetais, e incubadas em temperaturas de 28ºC e 7ºC por um tempo prolongado (24 72 h) além de avaliar o efeito da aplicação dos sanitizantes hipoclorito de sódio (250 mg/L) e ácido peracético (30 mg/L) em inativar células bacterianas na matriz do biofilme previamente formado. Nestes experimentos foram utilizadas como superfícies-testes minisuperfícies (3 x 3 cm) de polipropileno e de aço inoxidável AISI 304, visto que tais materiais são amplamente utilizados na composição de superfícies, equipamentos e/ou utensílios utilizados nos variados tipos de serviços de alimentação. Os resultados mostraram uma alta capacidade de adesão das cepas avaliadas em caldo substrato base carne e em caldo substrato base vegetal com contagens superiores a 5 log UFC/cm2, independente do tipo de superfície e a temperatura de incubação. O descolamento das células nas superfícies foi de pelo menos 103 UFC/cm2 durante os 6 primeiros contatos com o ágar para os dois tipos de substrato utilizados, caracterizando uma alta persistência durante um tempo prolongado de incubação (24 a 72h). Não foi encontrada uma clara influência em relação à superfície e a temperatura utilizada na avaliação da capacidade de adesão. Em geral, para os dois tipos de substratos utilizados foi demonstrado um padrão de formação de biofilme semelhante, ao final de 15 dias de incubação, quando as cepas foram submetidas às diferentes combinações de tipos de superfícies e temperaturas de crescimento. O número de células (105 107 UFC/cm2) necessários para a formação do biofilme foi observado em todos os sistemas experimentais já após 3 dias de incubação seguidos de uma redução linear após o 6º dia, com exceção da cepa S28 cultivada em caldo substrato base vegetais, que apresentou valores em torno de 104 UFC/cm2 nas primeiras 24h de incubação. Um intervalo de 2,6 3,7 log UFC/cm2 para as cepas incubadas em caldo substrato base carne e de 2,0 3,3 log UFC/cm2 para as cepas incubadas em caldo substrato base vegetal foi observado na redução das células na matriz do biofilme causado pelo ácido peracético enquanto que pelo hipoclorito de sódio a redução foi da ordem de 2,1 2,7 log UFC/cm2 e de 1,5 2,1 UFC/cm2 para cepas cultivadas em caldos substrato base carne e vegetais, respectivamente. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que as cepas testadas evidenciam uma elevada capacidade de adesão e formação de biofilme em superfícies de contato de alimentos quando expostas a diferentes meios de cultura e características ambientais. Alem disso, os sanitizantes utilizados, apesar de reduzirem o número de células aderidas às superfícies, demonstraram ineficácia na remoção de células da matriz do biofilme tendo em vista o número de células viáveis encontradas após o processo de aplicação dos sanitizantes.

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Banca: Lourdes Botelho Garcia / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Fernando de Sá Del Fiol / Banca: Luiz Marcos da Fonseca / Resumo: O efeito de amoxicilina e ciprofloxacino, agentes antimicrobianos com diferentes mecanismos de ação, sobre alguns fatores relacionados à sua virulência em Staphylococcus aureus ATCC 25923 foi comparado. Efeito pós-antimicrobiano, atividade hemolítica para hemácias de carneiro, atividade de citolisinas extracelulares para células McCoy, susceptibilidade à fagocitose dependente e não dependente de opsonização, por neutrófilos de Rattus albinus norvegicus, foram avaliados em bactérias crescidas na presença de concentração subinibitória (½ CIM) do antimicrobiano e a capacidade de induzir estresse oxidativo foi determinada diretamente sobre as células bacterianas através da detecção da produção de ânion superóxido. Amoxicilina e ciprofloxacino demonstraram efeito sobre o crescimento de S. aureus estatisticamente significativo em relação ao controle, sendo maior para amoxicilina. A atividade hemolítica foi diminuída na presença de amoxicilina e ambos antimicrobianos induziram aumento na atividade de citolisinas extracelulares. A técnica de quimiluminescência dependente de luminol, utilizada para avaliar susceptibilidade à fagocitose através do burst oxidativo de polimorfonucleares neutrófilos, demonstrou que amoxicilina influenciou positivamente a fagocitose dependente de opsoninas e ciprofloxacino estimulou a fagocitose não opsonizada. Visto o burst oxidativo ser um método indireto para a demonstração de fagocitose, a confirmação de células bacterianas fagocitadas/aderidas foi realizada através da observação de esfregaços corados em microscopia ótica comum (1000 x). Apesar de ambos antimicrobianos induzirem aumento de ânion superóxido intracelular, detectado em ensaios de redução de nitroblue tetrazolium (NBT), o ciprofloxacino induziu maior quantidade que a amoxicilina. A demonstração de que diferentes antimicrobianos possam atuar sobre...( Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Amoxycillin and ciprofloxacin are antimicrobials with dissimilar mechanisms of action against bacteria. This is a comparative study of how each of these agents affects some of the factors related to the virulence of the pathogenic strain of Staphylococcus aureus ATCC 25923. The post-antibiotic effect, hemolytic activity against sheep erythrocytes, cytolysin activity against McCoy cells and susceptibility to opsonin-dependent and independent phagocytosis by neutrophils from Rattus albinus norvegicus were assessed in bacteria grown in a subinhibitory concentration (½ MIC) of each agent. Induction of oxidative stress was observed directly by detecting superoxide production in response to the bacteria. Both the antimicrobials exerted effect on the growth of S. aureus, which was significantly different from the growth of controls, though amoxycillin had the stronger effect. Hemolytic activity was diminished in the presence of amoxycillin, but both agents induced an increase in the activity of secreted cytolysins. By employing luminol-dependent chemiluminescence to assess the susceptibility of the bacteria to phagocytosis by detecting the respiratory burst in polymorphonuclear neutrophils, it was shown that amoxycillin had a positive effect on opsonin-dependent phagocytosis, while ciprofloxacin stimulated non-opsonized phagocytosis. Since detection of the respiratory burst is an indirect demonstration of phagocytosis, direct observation of stained slides under the light microscope at 1000 × magnification was used to confirm the presence of bacteria ingested by and adhering to neutrophils. While both agents induced a rise in the intracellular level of superoxide, assayed by nitroblue tetrazolium reduction, ciprofloxacin produced the stronger response. The demonstration that distinct antimicrobials... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2015-05-26T15:04:31Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1017420 bytes, checksum: bb1f5f1df7d6abdcf38a42cb7bbe0d9d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T15:04:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1017420 bytes, checksum: bb1f5f1df7d6abdcf38a42cb7bbe0d9d (MD5) Previous issue date: 2015-04-01 / Phenolic compounds are a major class of plant secondary metabolites synthesized for plant and adaptation to environmental stress defense. Are divided into three groups: phenolic acids, flavonoids and tannins. Have been proposed as having a variety of biological effects on human health and microorganisms such as S. aureus. Cases of infections caused by strains of S. aureus multi drug resistant (MDR) has increased over the years. Among the strategies to combat resistance of S. aureus to antibiotics, is the discovery of so-called modifiers resistance (Resistance-Modifying Agents - RMA). In this study, we evaluated the potential modulator and synergistic effect of flavonoids, tannins and phenolic acid on antibiotic activity norfloxanina (NOR), tetracycline (TET) and erythromycin (ERI) in strains of S. aureus. Six flavonoids have been tested - O-glycoside and C-glycoside - and their aglycone derivatives, two tannins (gallotannin and ellagitannin), phenolic acids (hydroxydiphenic acid and cinnamic acid derivatives). The compounds tested showed no antimicrobial activity at 128 μg/mL (MIC between 256 and 512 μg/mL). In the modulation test, the O-glycosylated flavonoids showed no reducing effect of the MIC of antibiotics tested, however, its aglycone derivatives reduced the MIC in the NOR sixteen fold (8 to 128 μg/mL), in contrast, the Cglycosylated flavonoids, quercetin and myricetin, reduced the MIC in the NOR up to four fold (32 to 128 μg/mL) and their aglycone derivatives showed no reducing effect MIC of the tested antibiotics; the hexahydroxydiphenic acid (gallic acid) showed no reducing effect of MIC of the tested antibiotics; among the cinnamic acid derivatives tested, only 3-methoxycinnamic acid, 3,4-dimethoxycinnamic acid and 3,4,5-trimethoxycinnamic acid reduced the MIC in the NOR (64 to 128 μg/mL), while the 3-methoxycinnamic acid presented reducing effect of tetracycline MIC (64 to 32 μg/mL); the ellagitannin (ellagic acid) showed no reducing effect of MIC of antibiotics tested, already the gallotannin (tannic acid - TA) reduced thirty-two fold the MIC NOR (128 to 4 μg/mL), the test checkerboard TA had effect synergistic when applied in combination with NOR (FICI = 0.15) TA MIC decreased from 512 to 64 μg/mL (eight fold) while the MIC of NOR decreased from 128 to 4 μg/mL (thirty-two fold). The results demonstrate that the phenolic compounds have a potential application as an adjunct to antibiotics, particularly when in combination with NOR. / Os compostos fenólicos constituem uma das principais classes de metabólitos secundários de plantas, sintetizados para a defesa vegetal e adaptação ao estresse ambiental. Estão subdivididos em três grupos: ácidos fenólicos, flavonoides e taninos. Têm sido propostos como tendo uma variedade de efeitos biológicos na saúde humana e sobre microrganismos como S. aureus. Casos de infecções provocadas por cepas de S. aureus multi droga resistentes (MDR) têm aumentando ao longo dos anos. Dentre as estratégias de combate à resistência de S. aureus a antibióticos, está a descoberta dos chamados agentes modificadores da resistência (RMA- resistance-modifying agents). Neste estudo, avaliamos o potencial modulador e efeito sinérgico de flavonoides, taninos e ácido fenólicos sobre a atividade antibiótica de norfloxanina (NOR), tetraciclina (TET) e eritromicina (ERI) em linhagens de S. aureus. Foram testados seis flavonoides - O-glicosídeo e C-glicosídeo - e seus derivados aglicona, dois taninos (galotanino e elagitanino), ácidos fenólicos (ácido hidroxidifênico e derivados do ácido cinâmico). Os compostos testados não apresentaram atividade antimicrobiana a 128 μg/mL (CIM entre 256 e 512 μg/mL). No teste de modulação, os flavonoides O-glicosilados não apresentaram efeito redutor da CIM dos antibióticos testados, no entanto, seus derivados aglicona reduziram a CIM da NOR em até dezesseis vezes (128 para 8 μg/mL), em contra partida, os flavonoides C-glicosilados, miricetrin e quercetrin, reduziram a CIM da NOR em até quatro vezes (128 para 32 μg/mL) e os seus derivados aglicona não apresentaram efeito redutor da CIM dos antibióticos testados; o ácido hexahidroxidifênico (ácido gálico) não apresentou efeito redutor da CIM dos antibióticos testados; dentre os derivados do ácido cinâmico ensaiados, apenas o ácido 3-metoxicinâmico, ácido 3,4-dimetoxicinâmico e ácido 3,4,5-trimetoxicinâmico reduziram a CIM da NOR (128 para 64 μg/mL), enquanto o ácido 3- metoxicinâmico, apresentou efeito redutor da CIM da tetraciclina (64 para 32 μg/mL); o elagitanino (ácido elágico) não apresentou efeito redutor da CIM dos antibióticos testados, já o galotanino (ácido tânico – AT) reduziu trinta e duas vezes a CIM da NOR (128 para 4 μg/mL), no teste checkerboard o AT apresentou efeito sinérgico quando aplicado em combinação com NOR (ICIF = 0,15) CIM do AT diminuiu de 512 para 64 μg/mL (oito vezes), enquanto a CIM da NOR diminuiu de 128 para 4 μg/mL (trinta e duas vezes). Os resultados obtidos demonstram que compostos fenólicos, possuem um potencial de aplicação como adjuvante de antibióticos, particularmente quando em uso combinado com NOR.

Introdução: Pneumonias causadas por Staphylococcus aureus meticilina resistentes (Methicillin resistant Staphylococcus aureus - MRSA) estão associadas com uma alta mortalidade em pacientes internados em Centros de Terapia Intensiva (CTI). Não é incomum que ocorra falha no tratamento de pneumonia por MRSA com vancomicina. Alguns estudos têm mostrado que há uma relação entre mortalidade em infecções por MRSA e concentrações inibitórias mínimas (CIM) elevadas para vancomicina por Etest®, apesar dos isolados serem sensíveis à vancomicina (CIM ≤2μg/mL), conforme o Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar as CIMs para vancomicina em pacientes com diagnóstico de pneumonia por MRSA, descrever a relação entre a CIM da vancomicina obtido por Etest® e microdiluição em caldo com mortalidade em 30 dias em pacientes com pneumonia por MRSA internados em um hospital terciário, acadêmico, no sul do Brasil. Métodos: Estudo prospectivo de coorte. Foram incluídos todos os pacientes com pneumonia adquirida no hospital (hospital adquired pneumonia - HAP) e pneumonia associada à ventilação (ventilator associated pneumonia - VAP) por MRSA entre Junho de 2009 e Dezembro de 2011. A CIM da vancomicina do primeiro isolado do trato respiratório foi determinado por Etest® e microdiluição em caldo. As variáveis selecionadas para serem analisadas incluíram idade, sexo, comorbidades, dosagem sérica de vancomicina, escore APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) e a presença do accessory gene regulator II (agr II). O desfecho principal foi morte em 30 dias. Resultados: Foram incluídos 85 pacientes. A mortalidade em 30 dias foi de 42,4%. Em sessenta e oito pacientes (80,1%) as CIMs da vancomicina obtidos por Etest® foram menores ou iguais a 1,0μg/mL, enquanto todas as CIMs (N=85) obtidas por microdiluição em caldo foram ≤1,0μg/mL. Não houve correlação entre as CIMs por Etest® e microdiluição em caldo com morte em 30 dias. Quarenta e seis isolados de MRSA (54,1%) foram positivos para o locus agr II. A média da vancomicina sérica foi 20,7μg/mL (12,0 – 29,0) e a média do escore APACHE II foi 23,0 (17,5 – 29,0). O escore APACHE II foi relacionado com mortalidade em 30 dias. Conclusões: As CIMs da vancomicina obtidas por Etest® e microdiluição em caldo não foram associadas com altos níveis de mortalidade em pacientes com pneumonia grave por MRSA. / Background: Pneumonias due to methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) are associated with significant mortality in Intensive Care Units (ICU) patients. Vancomycin treatment failure in MRSA pneumonia patients is not uncommon. Some reports found a link between high mortality in MRSA infections and higher vancomycin minimum inhibitory concentrations (MICs) by Etest®, despite the susceptibility of the isolates (MIC ≤2,0μg/mL), according to the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objectives: The purpose of this study was evaluate vancomycin MICs in patients with MRSA pneumonia, describe the relationship between vancomycin MIC generated by Etest® and broth microdilution with 30-day mortality in MRSA pneumonia patients. Methods: We conducted a prospective cohort study. All patients with MRSA hospital acquired pneumonia (HAP) and ventilator-associated pneumonia (VAP) admitted in ICU between June 2009 and December 2011 were included. Vancomycin MIC for the first isolate of the respiratory tract was determined by Etest® and broth microdilution. The variables selected for the analysis included age, sex, comorbid conditions, vancomycin serum trough concentration, APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) score and the presence of the accessory gene regulator II (agr II). The primary outcome was mortality at 30-day. Results: Eithy five patients were included. All case mortality at the 30-day was 42.4%. Sixty eight of the patients (80.1%) of the vancomycin MICs generated by Etest® were equal or below 1.0μg/mL. While all MICs generated by broth microdilution were ≤1.0μg/mL. MICs generated by Etest® and broth microdilution were not associated with 30-day mortality. Forty six isolates of MRSA (54.1%) from patients were positive for agr II. The median serum vancomycin was 20.7μg/mL (12.0 – 29.0) and the median APACHE II score was 23.0 (17.5 – 29.0). The APACHE II score was related to 30-day mortality. Conclusions: Vancomycin MICs by Etest® and broth microdilution were not associated with higher mortality leves in patients with severe MRSA pneumonia.

Recentemente, uma molécula baseada em nucleotídeos, a adenosina monofosfato dimérica cíclica (c-di-AMP), foi identificada em várias bactérias patogênicas, ganhando rapidamente o status de um sinalizador central no controle de diversos processos bacterianos essenciais, tais como transporte iônico e vigilância a danos no DNA. Em Staphylococcus aureus, por exemplo, o c-di-AMP é essencial para homeostase da parede celular e resistência aos estresses ambientais. A biossíntese de c-di-AMP envolve a condensação de duas moléculas de ATP, catalisadas por enzimas que contenham o domínio DAC (diadenilato ciclase). Especialmente em S. aureus, somente uma ciclase (DacA) é responsável pela síntese desse segundo-mensageiro, através da enzima DacA. Recentemente, nosso grupo determinou a estrutura da DacA de S. aureus, demonstrando a importância do seu estado oligomérico para o mecanismo catalítico. Diferentemente da primeira diadenilato caracterizada, a DisA, uma enzima octamérica, a atividade enzimática da DacA ocorre através do encontro de dois dímeros distintos, formando uma interface cataliticamente competente. Dadas essas características, o foco desse trabalho foi a busca de novos inibidores para a DacA, através de triagens em larga escala (HTS), triagem cristalográfica por fragmentos e docagem molecular. Foram encontrados 30 compostos com atividade inibitória nos ensaios de HTS, 15 compostos derivados de fragmentos da triagem cristalográfica e construída uma biblioteca de 480 compostos docados virtualmente no sítio ativo. Os compostos encontrados na triagem cristalográfica foram caracterizados com respeito ao seu valor de IC50 frente à atividade enzimática. O composto AN-584/43409544 se demonstrou bastante promissor, com valor de IC50 de 54 &micro;M. Ainda, um análogo desse composto foi encontrado na interface dimérica da DacA nos estudos cristalográficos, o que mostra um possível sítio alostérico para o desenvolvimento e busca de inibidores. Os resultados gerados nesse projeto podem servir de base para estudos futuros e desenvolvimento de novos antibióticos, que em combinação com os tratamentos atualmente disponíveis pode levar ao controle das infecções até mesmo das formas mais resistentes de S. aureus. / Recently, a nucleotide-based molecule, the cyclic dimeric adenosine monophosphate (c-di-AMP), has been identified in several pathogenic bacteria, rapidly gaining the status of a central signaling controlling several essential bacterial processes, such as ion transport and DNA damage surveillance. In Staphylococcus aureus, for example, c-di-AMP is essential for homeostasis of the cell wall and resistance to environmental stresses. The biosynthesis of c-di-AMP involves the condensation of two molecules of ATP, catalyzed by enzymes that contain the DAC (diadenylate cyclase) domain. Especially in S. aureus, only one cyclase (DacA) is responsible for the synthesis of this second-messenger. Recently, our group determined the structure of the S. aureus diadenylate cyclase, demonstrating the importance of their oligomeric state for the catalytic mechanism. Unlike DisA, a octameric diadenylate cyclase, the enzymatic activity of DacA occurs through the meeting of two dimers forming a catalytically competent interface. Given these characteristics, the focus of this work was the search for new inhibitors through high-throughput screening (HTS), crystallographic screening of fragments and molecular docking. It was found 30 compounds with inhibitory activity in HTS assays, 15 compounds derived from fragments of crystallographic screening and built a 480 compound library virtually docked in the active site. The compounds found in the crystallographic screening were characterized with respect to its IC50 value. The compound AN-584/43409544 has been shown verry promising, with IC50 of 54 &micro;M. Also, an analog of this compound was found in the dimeric interface of DacA in crystallographic assays, which shows a possible allosteric site for inhibitors search and development. The results generated in this project can serve as a basis for future studies and development of new antibiotics, which in combination with the currently available treatments can lead to infection control even of the most resistant strains of S. aureus.