Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-06-15T20:07:13Z No. of bitstreams: 1 JulianaFernandesDeCarvalho_TESE.pdf: 14225582 bytes, checksum: b37aabce1fb63b496f0af0000c32473b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-06-15T22:52:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JulianaFernandesDeCarvalho_TESE.pdf: 14225582 bytes, checksum: b37aabce1fb63b496f0af0000c32473b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T22:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaFernandesDeCarvalho_TESE.pdf: 14225582 bytes, checksum: b37aabce1fb63b496f0af0000c32473b (MD5) Previous issue date: 2019-03-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Staphylococcus aureus são historicamente reconhecidos como importantes patógenos humanos. São bactérias esféricas e Gram positivas constituintes da microbiota normal da pele e mucosa de grande parte dos mamíferos, incluindo os seres humanos. Fatores orgânicos como imunidade do hospedeiro e integridade da barreira cutânea, bem como fatores inatos ao microrganismo como virulência, contribuem para que a condição de simbiose inicial se torne uma relação patogênica, resultando desde afecções cutâneas e subcutâneas simples até as infecções sistêmicas graves. Não obstante sua intrínseca de virulência, desde o emprego na prática clínica da Penicilina na década de 1940, estas bactérias começaram a desenvolver resistência. A ascensão de cepas de MRSA (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) insensíveis à múltiplos antibióticos empregados na prática clínica é um fenômeno preocupante, pois, além reduzir as opções terapêuticas contribuiu para a disseminação mundial dessa agente, ameaçando a saúde pública na medida em que aumenta a mortalidade, morbidade e custos do tratamento. Neste sentido, novas estratégias clínicas são necessárias e urgentes, e dentre elas, a vetorização de antibióticos através de campo magnético tem se mostrado uma técnica promissora. O direcionamento magnético permite, além da entrega seletiva do fármaco no local da infecção, a ampliação local de campo magnético altíssimo, alterando o microambiente bacteriano. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo estudar a ação do antibiótico, Oxacilina, vetorizado com nanopartículas magnéticas no tratamento de infecção de pele e subcutâneo de rato, provocada por Staphylococcus aureus multirresistente. As partículas magnéticas sintetizadas, ligadas ao fármaco e caracterizadas foram testadas in vivo frente à modelos de infecção com cepa MRSA CCBH 4395 (Fiocruz - RJ) e os resultados indicaram alta concentração do fármaco radiomarcado no local da infecção e revelaram redução significativa no crescimento de UFC em amostras dos animais tratados com o sistema de fármaco magnético, e mesmo daqueles tratados unicamente com o vetor magnético. Esses resultados promissores apontam, talvez, para um novo paradigma de tratamento antibiótico sem moléculas químicas, mas pela ação do campo magnético. / Staphylococcus aureus are historically recognized as important human pathogens. They are spherical and Gram positive bacteria constituting the normal microbiota of the skin and mucosa of most mammals, including humans. Organic factors such as host immunity and integrity of the skin barrier, as well as factors innate to the microorganism as virulence, contribute to the initial symbiosis condition becoming a pathogenic relationship, resulting from simple cutaneous and subcutaneous conditions to severe systemic infections. Despite its intrinsic virulence, since the use in the clinical practice of Penicillin in the 1940s, these bacteria began to develop resistance. The increase of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) insensitive to the multiple antibiotics employed in clinical practice is a worrying phenomenon, since, in addition to reducing the therapeutic options, it has contributed to the worldwide dissemination of this agent, threatening public health as it increases mortality, morbidity and treatment costs. In this sense, new clinical strategies are necessary and urgent, and among them, the vectorization of antibiotics through magnetic field has been shown to be a promising technique. Magnetic targeting allows, in addition to the selective delivery of the drug at the site of infection, the local magnification of a very high magnetic field, altering the bacterial microenvironment. In this sense, the present study aimed to study the action of the antibiotic, Oxacillin, vectorized with magnetic nanoparticles in the treatment of skin and subcutaneous rat infections caused by multiresistant Staphylococcus aureus. The synthesized, drug bound and characterized magnetic particles were tested in vivo against models of infection with MRSA strain CCBH 4395 (Fiocruz - RJ) and the results indicated high concentration of the radiolabeled drug at the site of infection and revealed a significant reduction in the growth of CFU in samples from animals treated with the magnetic drug system, and even from those treated solely with the magnetic vector. These promising results point, perhaps, to a new paradigm of antibiotic treatment without chemical molecules, but throught the action of the magnetic field.

Objetivo: Evaluar in vitro el efecto antibacteriano del extracto metanólico de Uncaria Tomentosa (Uña de Gato) sobre cepas de Staphylococcus aureus (ATCC®25923™) y Fusobacterium nucleatun (ATCC®25586™) Materiales y métodos: El estudio fue de tipo experimental in vitro. Para la actividad antibacteriana se utilizó el método de Difusión en Agar y para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) se trabajó con el método de dilución en caldo en medio Brain Heart infusión Broth (BHI). Mientras que, la evaluación del efecto citotoxico del extracto se evaluó mediante el ensayo colorímetro del 3-(4.5-dimeltiltiazol-2-yl) -2.5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) utilizando la línea celular Madin Darby Canine Kidney (MDCK). Resultados : El extracto metanólico de Uncaria Tomentosa tiene efecto antibacteriano frente a la cepa de Staphylococcus aureus, observándose halos de inhibición de 31.3 ± 2.66 mm. Se utilizó la Clorhexidina al 0.12% como control positivo, con resultados superiores de 59.1 mm ± 3.6 mm. En el caso de Fusobacterium nucleatun, no se evidenció efecto antibacteriano con el extracto metanólico de Uncaria Tomentosa. La CMI del extracto fue de 0.0016 mg/ml frente al Staphylococcus. La viabilidad celular del extracto se mantiene con valores altos (16 000 mg/ml), no se encontró efecto citotóxico. Conclusiones: Con la actividad antimicrobiana del extracto de Uncaria tomentosa, se sugiere seguir con más investigaciones que aporten al conocimiento científico y a partir de ello, se puedan desarrollar nuevos medicamentos antibacterianos en distintas presentaciones y así afrontar los diferentes problemas en la salud oral. / Objective: The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of the methanolic extracts of Uncaria tomentosa (Cat´s Claw) againts Staphylococcus aureus (ATCC® 25923™) y Fusobacterium nucleatun (ATCC® 25586™). Material and Methods: The study was of experimental type in vitro. For the antibacterial activity the diffusion method was used in agar and to determine the minimum inhibitory concentration (MIC), the broth dilution method was used in Brain Heart Broth infusion medium (BHI). While the evaluation of the cytotoxic effect of the extract was evaluated by the colorimeter assay of 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) using the Madin Darby Canine Kidney cell line (MDCK). Results: There is an antibacterial effect of the methanolic extract of Uncaria Tomentosa against Staphylococcus aureus, where inhibition halo of 31.3 ± 2.66 mm were observed. Clorhexidine 0.12% was used as a positive control with superior results of 59.1 mm ± 3.6 mm. On the other hand, there was not antibacterial effect against the Fusobacterium nucleatum strains. Then, the MIC of the extract was 0.0016 mg/ml against Staphylococcus aureus. The cell viability of the extract is maintained at high values (16,000 mg/ml), no cytotoxic effect was found. Conclusion: With the antimicrobial activity of the extract of Uncaria tomentosa, it´s suggested to continue with more research that contributes to scientific knowledge and from this, new antibacterial drugs can be developed in different presentations and thus face the different problems in oral health. / Tesis

Resumo: O leite é de extrema importância na alimentação humana. A exigência quanto à sua qualidade tem aumentado, inclusive com relação à transmissão de patógenos. Staphylococcus aureus é um dos principais agentes da mastite bovina e tem grande importância em saúde pública por produzir enterotoxinas. Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil dos produtores da região considerando-se a atual legislação e a qualidade do leite produzido com ênfase na presença de Staphylococcus enterotoxigênicos, utilizando a PCR na detecção de S. aureus e dos genes codificadores das enterotoxinas sea, seb, sec e sed diretamente do leite de tanque em comparação ao exame microbiológico tradicional, e realizando a detecção das respectivas enterotoxinas pelo método de aglutinação passiva reversa em látex (RPLA) diretamente do leite, comparando com os resultados genotípicos. Utilizaram-se 104 amostras de leite de tanque, estudadas a fresco e após incubação por 5 horas, uma alíquota a 7°C e outra a 25°C concomitantemente. A PCR foi altamente sensível, detectando S. aureus em 99% das amostras, mas com moderada concordância com o microbiológico nas amostras positivas. As amostras de Staphylococcus enterotoxigênicos apresentaram predomínio do gene sec (58,65%), seguido pelo gene sea (43,27%), seb (23,27%) e sed (1,28). Quanto às enterotoxinas, houve a sua detecção em 9% das amostras em quantidades que variaram de 1 a 5 ng/μL. Verifica-se a importância do estudo do potencial do leite como fonte de S. aureus enterotoxigênico e de suas enterotoxinas, fornecendo risco para a saúde pública caso o leite não seja refrigerado adequadamente / Abstract: Milk has extreme importance to human feed. The demand for quality milk has increased, including pathogens transmission. Staphylococcus aureus is one of the main agents of mastitis and has importance in public health for producing enterotoxins. The study aims were to evaluate the region producer's profile, considering the present legislation and the quality of milk produced with emphasis in enterotoxigenic Staphylococcus presence, using PCR in detection of S. aureus and enterotoxins encoding genes sea, seb, sec and sed directly from bulk tank milk in comparison with traditional microbiological test, and carring out the detection of respective enterotoxins by reverse passive latex agglutination method (RPLA) directly from milk comparing with genotypic results. A total of 104 samples of bulk tank milk were used, studied fresh and after 5-hour storage, one bracket at 7°C the another at 25°C concurrently. PCR was highly sensitive, detecting S. aureus in 99% of samples, but with moderate concordance with microbiological test in positive samples. The samples of enterotoxigenic Staphylococcus presented predomination of sec (58.65%), followed by sea (43.27%), seb (23.27%) and sed (1.28%) genes. As the enterotoxins, its detection occurred in 9% of samples in quantities that ranged from 1 to 5 ng/μL. The importance of the study of milk potential as enterotoxigenic S. aureus and enterotoxins source is verified, providing risk to public health if milk is not refrigerated properly / Orientador: Hélio Langoni / Coorientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Luiz Simões do Carmo / Banca: Elizabeth Oliveira da Costa Freitas Guimarães / Doutor

Orientador: Vera Lucia Mores Rall / Coorientador: João Pessoa Araujo junior / Banca: Ary Fernandes Junior / Banca: Carlos Henrique Camargo / Banca: José Paes de Almeida Nogueira / Banca: Lina Casale Aragon-Alegro / Resumo: Staphylococcus sp é agente comum da mastite bovina, causando grandes perdas econômicas na pecuária brasileira. Esse micro-organismo possui fatores de virulência bastante conhecidos como a produção de hemolisinas, leucotoxinas e superantígenos como a toxina do síndrome do choque tóxico e enterotoxinas. Além disso, várias espécies de Staphylococcus podem adquirir genes de resistência aos antibióticos β lactâmicos. O objetivo do estudo foi caracterizar molecularmente isolados de Staphylococcus sp provenientes de leite de vacas com mastite clinica e subclínica de várias regiões do estado de São Paulo. Foram realizadas coletas de leite de vacas com mastite clinica e subclínica de diferentes fazendas no estado de São Paulo e realizados testes fenótipicos de resistência a antimicrobianos e de virulência (Toxina de Panton Valentine, sindrome do choque tóxico e toxinas esfoliativas), além de testes moleculares como Pulse Field Gel Eletrophoresis (PFGE), Multiloccus Sequence Typing (MLST) e Spa typing para comparação entre as cepas epidemiologicamente importantes e da tipagem do cromossomo cassette estafilocócico em cepas meticilina reistentes. As cepas resistentes a meticilina apresentaram amplo perfil de resistência e genes de resistência importantes e pouco relatados, sendo observados genes como fexA, lsaE, lnuB. Foram detectados dois novos spatyping (t10852 e t10856), bem como um novo alelo yqiL e um novo ST (2493). Os ECNs apresentaram resistências à maioria dos antibióticos estudados e foi observado a uma deleção no gene ermC, que codifica a resistência à eritromicina. / Abstract: Staphylococcus sp. is the common agent of bovine mastitis, causing big economic losses in Brazilian cattle. This micro-organism have virulence factors have been well known as the production of hemolysin, and leucotoxinas toxin superantigens such as toxic shock syndrome and enterotoxins. In addition, several Staphylococcus species can acquire antibiotic resistance genes β lactamics. The objective of the study is to characterize molecularly Staphylococcus sp. from milk of cows with subclinical mastitis in various regions of the state of São Paulo. Samples were coleted from milk of cows with subclinical and clinical mastitis from different farms in the state of São Paulo. Tests were performed phenotypic antimicrobial resistance and virulence (toxin Panton Valentine, toxic shock syndrome and exfoliative toxins), molecular tests as Eletrophoresis Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE), Multiloccus Sequence Typing (MLST) and spa typing for comparison between epidemiologically important strains, as well as the typing of strains in staphylococcal cassette chromosome methicillin reistentes. Methicillin-resistant strains showed broad resistance profile and resistance genes important and underreported were detected as fexA, lsaE, lnuB. Two new spatyping (t10852 and t10856) were detected as well as a new allele yqiL and a new ST (2493). The ECN showed resistance to most antibiotics and was observed the deletion in ermC gene encoding resistance to erythromycin. / Doutor

As doenças transmitidas por alimentos provocam perdas humanas, sociais e econômicas, sendo que, para a prevenção de suas ocorrências, a higienização (limpeza e desinfecção) do ambiente de processamento e manipulação é procedimento de relevante importância. Para promover a segurança microbiológica dos alimentos, os compostos inorgânicos liberadores de cloro livre estão entre os desinfetantes químicos mais utilizados. No entanto, as evidências indicam que não há agente químico antimicrobiano frente aos quais os microrganismos não apresentem ou não possam ser selecionados por algum grau de resistência. Para obter dados sobre a ação do cloro como barreira sanitária, o objetivo deste trabalho foi o de verificar, frente ao hipoclorito de sódio, a sensibilidade de 32 amostras de Staphylococcus aureus isoladas no IPB/LACEN/RS de alimentos envolvidos em surtos de DTA entre os anos 2002 e 2006. Através do teste de suspensão, simularam-se condições de uso: concentração de 200 ppm de cloro livre, na ausência e na presença de matéria orgânica (1% de leite U.H.T. integral); subconcentração de 100 ppm de cloro livre; e quatro tempos de contato (5, 10, 15 e 30 minutos). A 200 ppm, na ausência de matéria orgânica, as 32 amostras foram sensíveis, sendo que, aos 10 minutos, 31 delas já estavam inativadas. A 200 ppm, na presença de matéria orgânica, mesmo aos 30 minutos de contato, 27 foram resistentes. Com 100 ppm de cloro livre, foram necessários 30 minutos de contato para que 24 amostras apresentassem sensibilidade. Concluiu-se que a sensibilidade das amostras foi influenciada pela concentração, pela presença de matéria orgânica e pelo tempo de contato. Considerando as condições do experimento quanto à efetividade do cloro como barreira sanitária em DTA, frente ao Staphylococcus aureus, esses três fatores precisam ser levados em consideração. / Foodborne diseases cause human, social and economic losses. Their ocurrence can be avoided chiefly by cleaning and disinfection measures in processing and manipulation premises. Inorganic chlorine compounds are among the most common chemical disinfectants used to promote microbiological food safety. However, evidences indicate that microorganisms are capable to present or develop some degree of resistance to practically every known chemical agent. So, in order to obtain data regarding chlorine compounds as a sanitary barrier, this work evaluated the sensitivity, to sodium hypochlorite, of 32 samples of Staphylococcus aureus isolated at IPB-LACEN/RS from food involved in foodborne diseases outbreaks occurred between 2002-2006. Through the suspension test, usage conditions were simulated: a 200 ppm free chlorine solution in the absence and presence of organic matter (1% UHT whole milk); a subconcentration of 100 ppm free chlorine solution; and four contact times (5, 10, 15 and 30 minutes). At the concentration of 200 ppm, in absence of organic matter, all the 32 samples were sensitive. After 10 minutes,31 of them were already inactivated. At 200 ppm, in presence of organic matter, 27 strains were resistant even after a contact of 30 minutes. At 100 ppm free chlorine concentration, simulating a sub concentration usage, it was necessary a 30 minutes contact to 24 samples demonstrate some sensitivity. It was concluded that the sensitivity of samples was influenced by concentration, presence of organic matter and contact time. In view of the experimental conditions relative to chlorine efficacy as a sanitary barrier, in foodborne diseases associated to Staphylococcus aureus, these three factors must be considered.

Staphylococcus aureus resistente a meticilina (methicillin-resistant Staphylococcus aureus - MRSA) é um patógeno frequentemente hospitalar encontrado em diversos locais do mundo, e vem sendo encarado como uma nova ameaça que parte da comunidade. O fenótipo clássico do MRSA é devido à produção de uma proteína ligante de penicilina modificada (PBP-2a), codificada pelo gene mecA. Esse gene, por sua vez, é carreado em um elemento genético móvel chamado staphylococcal cassette chromosome (SCCmec). Além da resistência aos antibióticos β-lactâmicos, esse elemento contém outros determinantes de resistência que contribuem para caracterizar diferentes tipos de SCCmec. Outras características para a classificação do elemento SCCmec em seus diferentes tipos são seus dois complexos essenciais, mec e ccr, o que resulta na identificação de sete SCCmec distintos: I a VII, cada tipo com suas peculiaridades. Recentemente um novo tipo está sendo proposto (tipo VIII), que surgiu a partir de recombinação homóloga e ainda está em estudo. Por mais de 40 anos após o início do seu reconhecimento, infecções por MRSA foram confinadas a pacientes que tiveram extensivo contato com o sistema hospitalar de saúde. Entretanto, a epidemiologia do S. aureus está mudando e infecções em pacientes que tiveram pouco ou nenhum contato com o sistema hospitalar de saúde nos últimos anos já foram intensamente descritas. Recentemente, estes organismos emergiram como a maior causa de infecções adquiridas da comunidade, gerando a classificação atualmente aceita para MRSA: MRSA adquirido no hospital (healthcare-acquired MRSA - HA-MRSA) e adquirido na comunidade (communityacquired MRSA - CA-MRSA). Além de diferenças circunstanciais, grandes diferenças genotípicas existem entre esses dois grupos de MRSA, o que tem determinado grande número de estudos relacionados com a epidemiologia de MRSA através da tipagem do SCCmec. Neste estudo, foi determinada a prevalência do gene mecA bem como a distribuição dos tipos de SCCmec mais comuns e extensivamente estudados (I, II, III e IV) em um total de 365 HAMRSA, durante 2007-2008. Os resultados foram interpretados em conjunto com o perfil de susceptibilidade a diversos antibióticos. O gene mecA foi encontrado em 148 (40,5%) isolados e 68,5% destes pertenciam ao SCCmec tipo III, 21,2% ao tipo I e 1,4% aos tipos I e III simultaneamente. Não foram encontrados SCCmec tipos II e IV neste estudo e em 8,9% dos isolados de MRSA a tipagem não foi possível (SCCmec atípico). Os isolados com SCCmec tipo III foram mais resistentes aos antibióticos não-β-lactâmicos quando comparado ao SCCmec tipo I, e esta diferença foi estatisticamente significativa para três antimicrobianos: sulfametoxazoltrimetoprim (p<0,001), doxiciclina (p<0,001) e rifampicina (p<0,001). Enfim, este estudo demonstrou que o tipo III, que é um cassete de multiresistência, é o tipo de SCCmec mais prevalente entre pacientes hospitalizados neste hospital e que é possível determinar a resistência esperada aos antimicrobianos de acordo com o tipo de SCCmec encontrado. O fato de que o tipo IV não foi encontrado no nosso estudo pode indicar a ausência de CA-MRSA em pacientes hospitalizados no nosso hospital.

Submitted by Flávia Sousa (flaviabs@ufba.br) on 2013-04-16T16:00:32Z No. of bitstreams: 1 2012 - Mestrado PMPGCF - RNF.pdf: 2912444 bytes, checksum: b76fa79b8643234c9d74ee46adea96a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Sousa(flaviabs@ufba.br) on 2013-05-06T11:43:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012 - Mestrado PMPGCF - RNF.pdf: 2912444 bytes, checksum: b76fa79b8643234c9d74ee46adea96a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-06T11:43:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Mestrado PMPGCF - RNF.pdf: 2912444 bytes, checksum: b76fa79b8643234c9d74ee46adea96a0 (MD5) / CNPq Universal 014/2008, 13389/2010-0; FAPESB/PPUS 008/2009 / O Staphylococcus aureus é um patógeno envolvido em infecções noscomiais e comunitárias. O objetivo deste estudo foi analisar in vitro a atividade antimicrobiana do extrato etanólico da folha de Phanera flexuosa (Moric) L.P.Queiroz (EFPF), conhecida como escada de macaco, coletada na Floresta Nacional Contendas do Sincorá (BA), sobre o crescimento bacteriano e sobre alguns fatores de virulência de Staphylococcus aureus resistentes a antibióticos (MRSA), isolados de ambientes hospitalares de Vitória da Conquista (BA). O EFPF foi testado nas concentrações entre 4000 a 125 μg/mL na determinação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Foram estudados Staphylococcus aureus ATCC 43300 e 31 isolados resistentes a oxacilina em antibiograma e que apresentaram o gene mecA em reação de PCR. Na CIM, as placas foram incubadas a 37°C, 24h, sendo interpretadas de acordo com o crescimento bacteriano e confirmado com o corante ressazurina. Como controle dos experimentos, foi utilizado o veículo, etanol (10%, v/v). Verificou-se a inibição de formação do biofilme de MRSA em 3, 5, 7 e 24 h, após a exposição ao EFPF, avaliou-se a formação de biomassa total com cristal de violeta, viabilidade celular com MTT e morfologia do biofilme usando microscopia confocal após 24 h (isolados clínicos 16A e 92). Foi realizada curva de crescimento de MRSA avaliando a absorbância e viabilidade da cultura bacteriana suplementada com 1% glicose, e tratada com o veículo ou EFPF em concentração subinibitória (CIM50). Nos tempos de 5 e 24 h de exposição ao EFPF, da curva foi analisada a expressão gênica de α-hla, PVL, sea, seb, spa, icaA, icaB, icaC, icaD, icaR dos isolados 16A e 112. Foram realizadas 03 triplicatas para cada experimento e análise estatística. Todos os isolados testados e a cepa ATCC apresentaram CIM ente 125 e 4000 μg/mL, sendo resultados relevantes de CIM (125 μg/mL) foram obtidos para a cepa ATCC 43300 e para os isolados 27A, 27B, 28, 29, 33A, 43.1, 47.1, 52, 76, 85.1, 85.2, 92 e 113. Quanto ao CBM, ocorreu para os isolados 47.1 e 92 (4000 μg/mL), isolado 12D (1000 μg/mL), e isolado 29 (500 μg/mL). Na inibição de formação de biofilme, os resultados em redução de células viáveis e formação da biomassa total ocorreram nos tempos de 7 e 24h, sendo que na concentração 5000 μg/mL foi efetiva no biofilme de 24 h. Quanto à curva de crescimento, a atividade antimicrobiana de EFPF ocorreu na fase final exponencial e estacionária inicial avaliada pela redução de absorbância, e também a redução da viabilidade celular do EFPF em relação ao veículo nas cepas testadas. Houve diminuição da expressão de PVL do isolado 16A tratado com EFPF (p<0,05), aumento da expressão de icaC, icaR e spa do isolado 16A em relação ao veículo (p<0,05). O EFPF apresenta atividade antimicrobiana contra S. aureus e influencia a expressão de fatores de virulência das cepas MRSA testadas, sendo um potencial antimicrobiano e promissora fonte para o isolamento de substâncias bioativas contra microrganismos multirresistentes. PIBIC/CNPq, CNPq Universal 14/2008, 14/2010, 13389/2010-0, Decit/SCTIE/MS (CNPq/FAPESB/SESAB), PERMANECER /UFBA, MEC-PET/SESU/SECAD. / Vitória da Conquista - BA

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-19T18:53:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 654222 bytes, checksum: f55a0d2c139c61eb5e651483661a7bb4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T18:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 654222 bytes, checksum: f55a0d2c139c61eb5e651483661a7bb4 (MD5) Previous issue date: 2000-12-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A adesão de células de Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Escherichia coli K12 foi avaliada em embalagens de polietileno de baixa densidade (PEBD), empregando-se as seguintes condições: área interna da embalagem de 630 cm 2 , temperaturas de adesão de 8 e 18oC, concentrações iniciais das suspensões bacterianas na ordem de 10 5 , 10 6 e 10 7 UFC/mL e tempo de incubação de 12 horas. Constataram-se diferenças significativas (p<0,05) na temperatura de adesão e também nas interações entre microrganismos e as contagens iniciais na suspensão bacteriana. A adesão na temperatura de 18oC foi superior àquela encontrada a 8oC. Também, houve tendência de maior adesão com aumento do número inicial de células na suspensão bacteriana. A eficiência bactericida da radiação ultravioleta (UV) na redução do número de E. coli e S. aureus aderidas ao PEBD foi avaliada a partir de concentrações iniciais na ordem de 10 5 a 10 7 , temperatura de adesão de 18oC por 12 horas e exposição entre 216 e 175 μWcm -2 . Constatou-se que a E. coli é mais resistente à exposição à radiação UV , apresentando valores D de 4,35 e 1,84 segundos, quando os logaritmos dos números iniciais de células são iguais a 5 e 6,8, respectivamente; para S. aureus, os valores de D obtidos foram de 1,96 e 1,18, respectivamente. No estudo da redução da intensidade versus eficiência bactericida da radiação UV, observou-se redução na intensidade de 288 para 78 μWcm -2 após 1.500 horas de uso, sendo esse declínio mais acentuado nas 100 horas iniciais. A eficiência da radiação UV sobre E. coli decresceu de 0,94 RD, após 70 h de uso da lâmpada, para 0,36 RD, após 1500 horas. Para S. aureus, esses valores variaram de 1,04 a 0,58 RD. Foram avaliadas amostras de PEBD de três bobinas, antes e após irradiação, com 137 μWcm -2. por dois segundos. Constatou-se contaminação inicial nas embalagens de 0,16 NMP/cm 2 de mesófilos aeróbios, que, após exposição à radiação, diminuiu para 0,014 NMP/cm 2 , sendo este valor abaixo da recomendação de 0,1 UFC/cm 2 . Por meio de microscopia de força atômica (MFA), observou-se a existência de irregularidades na superfície do PEBD, como fendas e elevações. Essas imperfeições podem alojar bactérias, facilitando o processo de adesão, além de reduzirem a eficiência da radiação UV, devido à presença de regiões que protegem as células do contato com a radiação. Os resultados mostram que a radiação UV apresenta ação sobre bactérias aderidas à superfície de PEBD, sendo uma técnica útil na redução da microbiota presente nessa embalagem. / The cell adhesion of Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli K12 was evaluated on polyethylene packages of low density (LDPE) with the following conditions: package internal area of 630 cm 2 , adhesion temperatures of 8 and 18oC, bacteria suspension initial concentration of 10 5 , 10 6 and 10 7 UFC/mL and incubation period of 12 hours. One has verified significant difference (p<0.05) on adhesion temperature, microorganisms interactions as wellas on initial counts in the bacteria suspension. The adhesion at 18oC was higher than the one found at 8oC. There was, also, a tendency to higher adhesion related to the increase on initial cell number of bacteria suspension. Ultraviolet radiation bactericide efficiency (UV) on reduction of E. coli and S. aureus number adhered to LDPE, was evaluated from initial concentrations of 10 5 to10 7 , adhesion temperature of 18oC for 12 hours and exposition between 216 and 175 μWcm -2 . It was verified that E. coli was more resistant to UV radiation exposition, showing D values of 4.35 and 1.84 seconds, when the initial logarithmic numbers of cells were 5.0 and 6.8, respectively. For S. aureus, the obtained D values were respectively 1.96 and 1.18. In the study of intensity reduction versus UV radiation bactericide efficiency, a reduction in intensity from 288 to 78 μWcm -2 was observed after 1500h of use, being this decrease higher in the 100 first hours. The UV radiation efficiency on E. coli decrease from 0.94 RD, after 70h of lamp use, to 0.36 RD after 1500h. For S. aureus these values varied from 1.04 to 0.58 RD. Samples of LDPE from three bobbins, before and after radiation, with 137 μWcm -2 in 2 seconds. The films were initially contamined wiht 0.16 NMP/cm 2 by aerobic mesophyles, which was reduced to 0.014 NMP/cm 2 after exposition to radiation, being this value below the recommended value of 0.1 UFC/cm 2 . The existence of irregularities on the LDPE surface, like slits and elevations, was observed by atomic power microscopy. These imperfections may lodge bacteria, turning to an easy process adhesion, further on to reduce the UV radiation efficiency due to the presence of regions that protect cells from radiation. The results showed that UV radiation presents efficiency against bacteria adhered to PELD surface, being a useful auxiliary technique on microbiologic control of these packages. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-02T18:10:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T18:10:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) Previous issue date: 2007-12-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os determinantes de resistência aos antimicrobianos vancomicina e oxacilina foram investigados em 264 bactérias do gênero Staphylococcus originados de salame fermentado, de bovinos acometidos com mastite e de casos clínicos humanos. Todos os isolados foram sensíveis ao antibiótico vancomicina e não apresentaram o gene vanA. Dos 57 isolados de salame fermentado, houve um predomínio de CNS, estafilococos coagulase negativos , (89,5%) sobre Staphylococcus aureus (10,5%) e apenas um isolado apresentou-se resistente à oxacilina pelo método de difusão em disco e seu mecanismo de resistência foi proveniente da atividade da -lactamase de expectro extendido). Noventa e cinco isolados de mastite bovina foram submetidos ao teste de atividade da enzima coagulase, predominando a espécie de S. aureus (68,5%), sobre os CNS (32,5%) e ao teste de sensibilidade in vitro, obtendo-se 14 resistentes a oxacilina, sendo dois isolados apresentando o gene mecA e outros 11 atividade de ESBL, predominando este mecanismo de resistência. Dos espécimes clínicos, 52,7% foram CNS e 47,3% S. aureus constituindo 112 isolados, sendo 103 resistentes à oxacilina. Destes, 67 possuíam o gene mecA, 71 apresentaram atividade de ESBL e 40 isolados ambos os mecanismos de resistência. Entre os da espécie S. aureus, predominou a presença do gene mecA como o provável fator de resistência, enquanto nos isolados de CNS, a atividade de ESBL foi mais significativa como possível determinante de resistência. Cinco isolados de origem humana e um de leite mastítico não tiveram seu mecanismo de resistência elucidado, sugerindo ser linhagens MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) ou outro mecanismo de resistência. Os resultados demonstraram a maior prevalência de resistência a antimicrobianos entre os isolados relacionados a espécimes clínicos humanos seguidos daqueles de vacas mastíticas, bem como a diversidade em possíveis mecanismos de resistência. / The determinants of antimicrobial resistance oxacillin and vancomycin were investigated on 264 Staphylococcus bacteria of the genus originated from fermented sausage, ill with bovine mastitis cases in humans. All isolates were sensitive to the antibiotic vancomycin and not had the vanA gene. Of the 57 isolates of fermented sausage, there was a predominance of CNS, coagulase negative staphylococci, (89.5%) on Staphylococcus aureus (10.5%) and only one isolated presented itself resistant to oxacillin by the disk diffusion method, and its mechanism of resistance was coming from the activity of the enzyme ESBL ( -lactamase-spectrum extended). Ninety-five isolates of bovine mastitis were submitted to the test of coagulase activity of the enzyme, most kinds of S. Aureus (68.5%) on the CNS (32.5%) and the test sensitivity in vitro, obtaining 14 resistant to oxacillin and two isolated presenting the mecA gene and 11 other activity of ESBL, mainly this mechanism of resistance. Two clinical specimens, were 52.7% and 47.3% CNS S. Aureus isolates constituting 112, and 103 resistant to oxacillin. Of these, 67 had the mecA gene, 71 showed activity of ESBL and 40 isolates both mechanisms of resistance. Among the species S. Aureus, the predominant presence of the mecA gene as the likely source of resistance, while in isolated from CNS, the activity of ESBL was more significant as a possible determinant of resistance. Five isolates of human origin and a milk mastítico not have its mechanism of resistance clear, suggesting strains be MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) or other mechanism of resistance. The results showed a higher prevalence of resistance to antimicrobial among isolates related to human clinical specimens followed those of cows mastíticas, and the diversity in possible mechanisms of resistance.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-04T15:03:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 242374 bytes, checksum: e0a0f909b979452d08aa2d7671aa36d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-04T15:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 242374 bytes, checksum: e0a0f909b979452d08aa2d7671aa36d4 (MD5) Previous issue date: 2004-06-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Avaliou-se a interferência da caseína, lipídeo, sacarose, Staphylococcus carnosus e esporos de Bacillus subtilis na determinação da bioluminescência. As substâncias orgânicas e os microrganismos em suspensões ou aderidos ao aço inoxidável, AISI 304, n° 4 foram analisados isoladamente e em combinações. A bioluminescência foi determinada em luminômetro comercial, com os resultados expressos em Unidades Relativas de Luz (URL). Em relação às suspensões preparadas com três substâncias orgânicas, houve um aumento (p<0,05) no número de URL com a presença de caseína e lipídeo. A sacarose reduziu a bioluminescência. Neste mesmo tipo de suspensão aderida ao aço inoxidável, o número de URL aumentou (p<0,05) com a presença de caseína e sacarose. O lipídeo reduziu a bioluminescência. Constatou-se um maior (p<0,01) número de URL nas suspensões com 5,4x104 CDM.mL-1 de S. carnosus em relação aquelas com 2,9x104 CDM.mL-1 de esporos de B. subtilis. No que se refere às suspensões de células vegetativas ou esporo bacteriano aderidas ao aço inoxidável, adicionadas ou não das três substâncias orgânicas, a bioluminescência para S. carnosus foi sempre maior (p<0,05) do que para os esporos de B. subtilis, independente da concentração estudada. As três substâncias orgânicas reduziram o número de URL (p<0,05) quando combinadas com 5,4x104 CDM.mL-1 de S. carnosus. Quando se utilizou esporo de B. subtilis, as três substâncias orgânicas não tiveram nenhum efeito significativo (p>0,05) na determinação da bioluminescência. Três resultados diferentes foram observados quando se compararam as suspensões contendo simultaneamente as três substâncias mais célula vegetativa e aquelas que continham somente o microrganismo, todas aderidas ao aço inoxidável: redução (p<0,05) no número de URL, quando a bactéria estava na concentração de 5,4x103 CDM.cm-2, aumento na bioluminescência (p<0,05) nas suspensões onde S. carnosus estava presente na concentração de 5,4x102 CDM.cm-2 e nenhuma diferença significativa (p>0,05) foi detectada em presença de célula vegetativa na concentração de 5,4x101 CDM.cm-2. Foi detectado um aumento no número de URL nas suspensões de caseína, lipídeo e sacarose adicionadas de 2,9x103 CDM.cm-2 esporos de B. subtilis em relação à suspensão com as três substâncias orgânicas, todas aderidas ao aço inoxidável. Na comparação envolvendo as outras duas concentrações de esporo bacteriano e a suspensão com as três substâncias, percebeu-se uma redução no número de URL. As substâncias orgânicas, os microrganismos e as combinações entre eles, tanto em análises em suspensão quanto aderidos ao aço inoxidável interferiram em maior ou menor grau na técnica de bioluminescência. A determinação de ATP nas superfícies não deve ser a única técnica usada para monitorar a eficiência da higienização em indústrias de alimentos. Ela pode ser utilizada como uma ferramenta complementar da avaliação microbiológica tradicional. Além disso, para a obtenção de informações confiáveis, deve-se entender as limitações dessa técnica. / The casein, lipid, sucrose, Staphylococcus carnosus and Bacillus subtilis spores interference in the bioluminescence measurement was evaluated. The organic substances and the microorganisms, presents in suspensions or adhered to the stainless steel, were analyzed separately and in combinations. A commercial luminometer was used, with the results expressed in Relative Units of Light (RUL). In relation to the suspensions with the three organic substances, there were an increase (p<0,05) in the RUL measurements with the casein and lipid addition. The sucrose reduced the bioluminescence. In this same suspension, adhered to the stainless steel, the RUL measurements were increased (p <0,05) with the casein and sucrose addition. The lipid reduced the bioluminescence. It was verified (p <0,01) a higher RUL measurement in the suspensions with 5,4x104 CDM.mL-1 of S. carnosus in relationship those with 5,4x104 CDM.mL-1 of B. subtilis spores. For the suspensions of vegetative cells or bacterial spores adhered to the stainless steel, added or not of the three organic substances, the RUL measurements for S. carnosus were always higher (p <0,05) than for the B. subtilis spores. The suspension containing the three organic substances decreased (p <0,05) the RUL measurement when added of 5,4x104 CDM.mL-1 of S. carnosus. When the microorganism was B. subtilis spores, the three organics substances did not showed difference (p>0,05) in the bioluminescence measurement. Three different results in the bioluminescence were observed in the comparison among the suspensions containing the three substances added of vegetative cell and those that contained only the microorganism, all of them adhered to the stainless steel: it was a reduction (p <0,05) in the measurement of RUL, when the bacteria were in the concentration of 5,4x105 CDM.mL-1, it was observed an increase in the bioluminescence (p <0,05) in the suspensions when S. carnosus was present in the concentration of 5,4x104 CDM.mL-1 and it was not observed difference (p>0,05) when the vegetative cell was in the concentration of 5,4x103 CDM.mL- . An increase was detected in the RUL measurement in the casein suspensions, lipid and sucrose added of 2,9x10-3 CDM.cm-2 of B. subtilis spores in relation to the suspension with the three organic substances, all adhered to the stainless steel. In the comparison involving the other two concentrations of bacterial spore and the suspension with the three substances, it was observed a decrease in the RUL measurement. The organics substances, microorganisms and their combinations, in suspensions or adhered to stainless steel, showed an interference on ATP bioluminescence measurements. This technique should be used as an auxiliary tool associated to traditional microbiological analysis. / Não foi localizado o cpf do autor.