Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-08-31T20:27:06Z No. of bitstreams: 1 ElizabethLimaCosta.pdf: 1115114 bytes, checksum: d6818412fe12c8ac2583651c4f42aed3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-31T20:27:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ElizabethLimaCosta.pdf: 1115114 bytes, checksum: d6818412fe12c8ac2583651c4f42aed3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-04 / FAPEMA / Introduction: Several risk factors are associated with the ECC, including the S. mutans, identified as responsible for the onset of the disease; maternal saliva, the main source of primary infection to the child, socioeconomic factors, dietary habits and oral hygiene shared in the family environment. Thus, this thesis is divided into two chapters: Chapter I aimed at analyzing the contamination of S. mutans in the mother mediated by the contamination of S. mutans in the child together with the ECC. Chapter II aimed at analyzing the association between the consumption of added sugar by the mother and the frequency of the child's added sugar consumption. Methods: The sample consisted of 697 preschool children between 24 and 71 months old and their mothers. The mothers answered a questionnaire on their general and oral health as well as the child and a food frequency questionnaire (FFQ) to assess the diet of the binomial and the consumption of added sugar by the mother and the child. Mothers and children were subjected to an oral clinical examination to measure the caries index (DMF/ceo), IPV, ISG, anthropometric analysis of the mother's waist circumference and microbiological examination of saliva in 400 mothers / children pairs. A theoretical model based on causal diagrams (DAGs) that allows control of confounding factors in the most appropriate manner and at the same time avoids unnecessary adjustments to mothers / children mediators has been prepared. For Article 1, two models have been suggested, adjusted and analyzed: a total effect model and a mediated effect model of the association between maternal contamination S. mutans and ECC. The Paramed test was used to quantify the proportion of maternal S. mutans contamination effects mediated by contamination by S. mutans in the child in the ECC. To Article 2, two models have been suggested to study the association between the consumption of added sugar by the mother and child: an Effect 1 model and an Effect 2 model. The multinomial regression analysis was used to test the models, based on th e DAGs. The marginal structural model was estimated by weighting by the inverse of the probability of consumption exposure in order to assess the association between consumption of added sugar by the mother and child. We estimated the prevalence ratio (PR) and confidence intervals (95% CI), in a 5% significance level. Results: In the total effect model, the presence of high colonization of S. mutans in the mother, the largest measurement of the waist circumference of the mother were associated with the ECC; Maternal IPV; child's age ≥ 4 years old and higher frequency of sugar consumption by the child. In the mediated effect model, the high maternal colonization remained linked to the ECC. Paramed test showed the proportion of mediated effect in 33% of maternal contamination of S. mutans by contamination in the child of S. mutans in the ECC. In effect model 1, the second and third tertile of the mother added sugar consumption was associated with the second tertile of added sugar consumption by the child; likewise the second and third tertile of consumption by the mother were also associated with the third tertile of the child's added sugar consumption. In effect model 2, all these variables of maternal consumption were also associated with the greatest child's consumption tertiles; yet maternal CW ≥88cm was also associated with the highest tertile of sugar consumption by the child. In marginal structural model, the consumption of added sugar by the mother was associated with added sugar consumption by the child. Conclusions: The contamination of S. mutans in the child only partially measured the association of the mother's S. mutans contamination in ECC. Other factors must be considered in the mother/child binomial, such as diet, oral hygiene practices and history of caries in the family environment. Sugar consumption by the mother and the highest maternal metabolic risk seem to explain the child's added sugar consumption in early childhood. / Introdução: Diversos fatores de risco estão associados à CPI, dentre eles os S.mutans, apontados como responsável pelo início da doença; a saliva materna, como principal fonte de infecção primária para o filho, os fatores socioeconômicos, os hábitos de dieta e de higiene bucal compartilhados no ambiente familiar. Assim sendo, esta tese foi dividida em dois capítulos: O capítulo I teve como objetivo, analisar a contaminação de S.mutans na mãe mediado pela contaminação de S.mutans no filho em associação com a CPI. O capítulo II teve como objetivo analisar a associação entre o consumo de açúcar de adição pela mãe e a frequência do consumo de açúcar de adição pelo filho. Métodos: A amostra foi composta por 697 pré-escolares de 24 a 71 meses de idade e suas mães. As mães responderam a um questionário sobre saúde geral e bucal da mãe e do filho e questionário de frequência alimentar (QFA), para avaliar a dieta do binômio e o consumo de açúcar de adição pela mãe e consumo de açúcar de adição pelo filho. Mães e filhos foram submetidos a um exame clínico bucal para aferição do índice de cárie (CPOD/ceo), IPV, ISG, análise antropométrica da circunferência da cintura da mãe e exame microbiológico da saliva em 400 pares mães/filhos. Foi elaborado um modelo teórico baseado em diagramas causais (DAGs) que permite o controle de fatores de confusão da forma mais adequada e ao mesmo tempo evita ajustes desnecessários para mediadores mães/filhos. Para o Artigo 1, dois modelos foram sugeridos, ajustados e analisados: um modelo de efeito total e outro modelo de efeito mediado da associação entre contaminação de S. mutans materna e CPI. O teste paramed foi usado para quantificação da proporção do efeito da contaminação de S. mutans materna mediada pela contaminação por S. mutans no filho na CPI. Para o artigo 2, foram sugeridos dois modelos para o estudo da associação entre o consumo de açúcar de adição pela mãe e o consumo de açúcar de adição pelo filho: um modelo de Efeito 1 e um modelo de Efeito 2. A análise de regressão multinomial foi usada para testar os modelos, baseados nos DAGs. Modelo estrutural marginal foi estimado pela ponderação pelo inverso da probabilidade do consumo da exposição, para avaliar a associação entre consumo de açúcar de adição pela mãe e consumo de açúcar de adição pelo filho. Estimou-se o razão de prevalência (RP) e os respectivos intervalos de confiança (IC 95%), a um nível de significância de 5%. Resultados: No modelo de efeito total, foram associadas à CPI, a presença de alta colonização de S. mutans na mãe, as maiores medidas da circunferência da cintura materna; IPV materno; idade da criança ≥ 4 anos e maior frequência de consumo de açúcar pelo filho. No modelo de efeito mediado, a alta colonização materna permaneceu associada à CPI. O teste paramed mostrou a proporção do efeito mediado de 33% da contaminação materna de S. mutans pela contaminação no filho de S. mutans na CPI. No modelo de efeito 1, o segundo e terceiro tercil do consumo de açúcar de adição pela mãe foram associados o segundo tercil do consumo de açúcar de adição pela filho; da mesma forma o segundo e terceiro tercil de consumo pela mãe foram também associados ao terceiro tercil do consumo de açúcar de adição pelo filho. No modelo de efeito 2, todas essas variáveis de consumo maternas também foram associadas aos maiores tercis de consumo do filho; ainda a CC materna ≥88cm também foi associada ao maior tercil de consumo de açúcar pelo filho. No modelo estrutural marginal, o consumo de açúcar de adição pela mãe foi associado ao consumo de açúcar de adição pelo filho. Conclusões: A contaminação de S. mutans no filho media apenas parcialmente a associação da contaminação de S. mutans da mãe na CPI. Outros fatores devem ser considerados no binômio mãe-filho, como hábitos alimentares, práticas de higiene bucal e a história da cárie no ambiente familiar. O consumo de açúcar pela mãe e o maior risco metabólico materno parecem explicar o consumo de açúcar de adição pelo filho na primeira infância.

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Coorientadora: Juliana Ferreira Strixino / Banca: Natalia Mayumi Inada / Banca: Ana Lia Anbinder / Resumo: A terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando eficaz na redução de patógenos bucais e diferentes fotossensibilizadores têm sido investigados. O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia da TFD sobre Streptococcus mutans usando dois fotossensibilizadores derivados da Clorina, Photoditazine (PDZ) e Fotoenticine (FTC), associados à irradiação Laser (660nm, 50 mw/cm²). Esses fotossensibilizadores também foram comparados com o Azul de Metileno (AM) que já tem seus efeitos comprovados contra S. mutans. Para realização desse trabalho, foram isoladas 11 amostras clínicas de S. mutans a partir de pacientes com lesões de cáries ativas. Essas amostras foram identificadas pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), seguida por confirmação em sequenciamento automático. Também foi incluída no estudo uma cepa padrão de referência (S. mutans UA159). Os efeitos da TFD foram testados sobre S. mutans em culturas planctônicas e sobre biofilmes formados em dentes bovinos. Os resultados foram avaliados pela contagem de células viáveis e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A capacidade dos fotossensibilizadores em penetrar nas células de S. mutans foi avaliada por meio da absorbância em espectrofotômetro. Os dados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey. Na identificação das amostras, verificou-se que todas apresentaram o fragmento de 517 pb específico para S. mutans e que o sequenciamento demonstrou similaridade de 87% com a cepa de referência. Em culturas planctônicas, todos os fotos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Photodynamic therapy (PDT) has been shown to be effective in reducing oral pathogens and different photosensitizers have been investigated. The objective of this study was to evaluate the efficacy of PDT on Streptococcus mutans using two photosensitizers derived from Chlorine, Photoditazine (PDZ) and Fotoenticine (FTC) associated with Laser irradiation (660 nm, 50 mw / cm²). These photosensitizers were also compared to Methylene Blue (AM) that already has its proven effects against S. mutans. To perform this work, 11 clinical samples of S. mutans were isolated from patients with active caries lesions. These samples were identified by the Polymerase Chain Reaction (PCR), for confirmation in automatic sequencing. Also included in the study was a standard standard (S. mutans UA159). The effects of PDT were tested on S. mutans in planktonic cultures and on biofilms formed in bovine teeth. Results of viable cell and Scanning Electron Microscopy (SEM) tests. The ability of the photosensitizers to penetrate the S. mutans cells was evaluated by spectrophotometer absorption. Data were analyzed by ANOVA and Tukey's test. In the identification of the samples, all the presentations of the 517 bp fragment specific for S. mutans and that the sequencing demonstrate similarity of 87% with a reference strain were found. In planktonic cultures, all photosensitizers reduced as S. mutans cells with a significant difference in relation to the untreated group. The FTC achieved a 100% reduction for both the reference strain and the clinical strains. In biofilm tests, there was a 4 log reduction for AM, 6 log for PDZ and 5 to 8 log for FTC. In the standard reference strain, FTC led to the complete elimination of S. mutans cells. In addition, it was found that FTC was the photosensitizer with the greatest capacity to de-structure the biofilm and penetrate S. mutans cells. It was concluded ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Objetivos: avaliar o papel da Candida albicans (ATCC 90028) no potencial cariogênico e acidogênico de biofilmes in vitro de Streptococcus mutans (UA159). Métodos: biofilmes de dupla-espécie (C. albicans + S. mutans) e de espécie única (S. mutans ou C. albicans) foram cultivados sobre a superfície hígida de blocos de esmalte bovino com dureza inicial conhecida na presença de meio de cultura suplementado com glicose 20 mM e sacarose 3 mM por 24, 48 e 72 horas. O meio foi substituído diariamente e seu pH foi registrado. Blocos de esmalte foram então coletados ao final de cada período experimental e contagens de células viáveis foram realizadas. A desmineralização foi avaliada através da porcentagem de alteração de microdureza superficial (% SMC) e análise de microradiografia transversal (perda mineral integrada e profundidade de lesão). Resultados: o pH do meio de cultura permaneceu constante nos biofilmes de espécie única de C. albicans causando quase nenhuma desmineralização no esmalte. Não houve diferença no potencial acidogênico dos biofilmes de espécie única de S. mutans ao longo dos períodos experimentais sendo estes valores de pH sempre menores quando comparados ao pH relacionado aos demais biofilmes (p < 0.01) A % SMC dos biofilmes de espécie única de S. mutans aumentou significativamente com o tempo. Além disso, lesões de cárie após 72 horas de crescimento de biofilme bacteriano apresentaram maior perda mineral integrada e foram mais profundas do que lesões de cárie relacionadas a biofilmes de dupla-espécie (p < 0.01). O pH do meio de cultura relacionado a biofilmes de dupla-espécie foi baixo no primeiro dia, mas aumentou no decorrer do tempo para valores acima do pH crítico para desmineralização do esmalte. Em consequência, a % SMC permaneceu a mesma depois de 48 horas de crescimento de biofilmes de dupla-espécie e foi significantemente menor do que os valores relacionados a S. mutans em espécie única (p < 0.01). Conclusões: os presentes dados sugerem que a C. albicans apresenta um baixo potencial de desmineralização de esmalte e esse micro-organismo parece reduzir tanto o potencial cariogênico quanto acidogênico de biofilmes de S. mutans pela modulação do pH extracelular durante o crescimento in vitro de biofilmes de dupla-espécie. / Aim: evaluate the role of Candida albicans (ATCC 90028) on the cariogenic and acidogenic potentials of Streptococcus mutans (UA159) in vitro biofilms. Methods: dual-species (C. albicans + S. mutans) and single-species (S. mutans or C. albicans) biofilms were grown on the surface of sound bovine enamel slabs with known baseline hardness in the presence of culture medium supplemented with 20 mM glucose and 3 mM sucrose for 24, 48 and 72 hours. The medium was replaced daily and its pH was recorded. Enamel slabs were collected at the end of each experimental period and counts of viable cells were performed. Demineralization was evaluated through percentage of surface microhardness change (% SMC) and transversal microradiography analysis (integrated mineral loss and lesion depth). Results: spent medium pH remained neutral in C. albicans single-species biofilms causing almost no enamel demineralization. No difference in acidogenic potential of S. mutans single-species biofilms was found among experimental periods and its pH was always lower than pH related to other biofilms (p < 0.01). The % SMC in S. mutans single-species biofilms significantly increased with time. In addition, caries lesions after 72 hours of S. mutans biofilm growth had higher integrated mineral loss and were deeper than caries lesions related to dual-species biofilms (p < 0.01). Spent medium pH related to dual-species biofilms was low in the first day, but increased with time to values above critical pH for enamel demineralization. As a consequence, the % SMC remained the same after 48 hours of dual-species biofilm growth and was significantly lower than S. mutans single-species related values (p < 0.01). Conclusions: the present data suggest that C. albicans has low enamel demineralization potential and may decrease both the cariogenic and acidogenic potentials of S. mutans by modulating extracellular pH during in vitro dual-species biofilm growth.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa), utilizando laser de baixa potência, em duas densidades de energia, associado ao azul de toluidina em biofilme de S. mutans. Biofilmes de S. mutans UA159 foram crescidos por 5 dias em discos de resina acrílica (3 mm de diâmetro x 2 mm de altura) a 37&ordm;C 5 % de CO2;. Os espécimes foram divididos aleatoriamente em 4 grupos de tratamento (n=3): Digluconato de clorexidina 0,12% (CHX, controle positivo); Solução salina a 0,89% (NaCl, controle negativo); Terapia fotodinâmica antimicrobiana com azul de toluidina e laser de baixa potência (densidade de energia 320 J/cm&sup2;) (TFDa 320); Terapia fotodinâmica antimicrobiana com azul de toluidina e laser de baixa potência (densidade de energia 640 J/cm&sup2;) (TFDa 640). Os tratamentos foram realizados 2x/dia durante 3 dias. Ao final dos 5 dias, os biofilmes foram coletados e número de bactérias viáveis e a concentração de polissacarídeos extracelulares insolúveis (PECI) e intracelulares (PIC) foram determinadas e analisadas estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, p < 0,05). O tratamento com a TFDa (320 e 640 J/cm&sup2;) reduziu o número de bactérias viáveis em biofilmes de S. mutans, de uma maneira dose-dependente (p < 0,05). Além disso, a TFDa 640 J/cm&sup2;, reduziu a viabilidade bacteriana de forma tão eficaz quanto a CHX (p > 0,05). Em relação a PECI e PIC, os grupos TFDa (320 e 640 J/cm&sup2;) não foram significativamente diferentes de CHX (p > 0,05). Os resultados mostraram que a terapia fotodinâmica antimicrobiana, mediada pelo azul de toluidina e laser de diodo (640 J/cm&sup2;), pode ser uma abordagem utilizada no controle do biofilme dental cariogênico. / The aim of this study was to evaluate the effect of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), using low-power laser, with two energy densities, associated with toluidine blue in S. mutans biofilm. S. mutans UA159 biofilms were grown for 5 days on acrylic resin discs (3 mm diameter x 2 mm height) a 37&ordm;C, 5 % de CO2. The specimens were randomly divided into 4 treatment groups (n = 3): 0.12% chlorhexidine digluconate (CHX, positive control); 0,89% Saline (NaCl, negative control); Antimicrobial photodynamic therapy with toluidine blue and low power laser (energy density of 320 J/cm&sup2;) (aPDT 320); Antimicrobial photodynamic therapy with toluidine blue and low power laser (energy density of 640 J/cm&sup2;) (aPDT 640). Treatments were performed 2x/day for 3 days. At the end of 5 days, the biofilms were collected and the number of viable bacteria and the concentration of insoluble extracellular (IEPS) and intracellular polysaccharides (IPS) were determined and analyzed statistically (ANOVA and Tukey\'s test, p<0.05). Treatment with aPDT (320 and 640 J/cm&sup2;) reduced the number of viable bacteria of S. mutans biofilms in a dose-dependent manner (p<0.05). Furthermore, the aPDT 640 group reduced the bacterial viability as effectively as CHX group (p>0.05). For IEPS and IPS, the aPDT groups (320 and 640 J/cm&sup2;) were not significantly different CHX (p>0.05). The results showed that the antimicrobial photodynamic therapy mediated by toluidine blue and diode laser (640 J/cm&sup2;) may be an approach used to control the cariogenic dental biofilm.

A mastite é uma doença complexa que pode ter diferentes causas, graus de intensidade e variações de duração e de conseqüências. Os processos inflamatórios na glândula mamária são especialmente freqüentes e importantes em bovinos leiteiros. A mastite infecciosa é a mais importante sob os pontos de vista econômico e de saúde pública. A forma subclínica é a mais onerosa e prevalente com um comprometimento mundial de 40% do rebanho leiteiro e perdas econômicas entre 5% e 25% da produção leiteira. No Brasil, a mastite subclínica caracteriza-se pela alta incidência, com índices variando de 44,88% a 97,0%, e a redução da produção leiteira situa-se entre 25,4% e 43,0%. Dentre os agentes etiológicos mais isolados em casos de mastite subclínica destacam-se os Staphylococcus spp., os Streptococcus spp. e o Corynebacterium bovis. A quantidade de UFC/mL no leite proveniente diretamente da glândula mamária bovina com infecção permitiria o conhecimento da quantidade de microrganismos associada a uma determinada intensidade de processo inflamatório na glândula. A comparação destas informações com a contagem de células somáticas na amostra avaliaria mais acuradamente a natureza do processo inflamatório e infeccioso na glândula. Importante seria o risco que representa a presença de microrganismos no leite, sobretudo se considerar o hábito do consumo de leite in natura, verificando em um estudo quantitativo desta natureza, a carga microbiana ingerida pelo homem. Foram examinadas 80 amostras de leite de vacas mestiças ou holandesas, primíparas e multíparas, em diferentes estágios de lactação de plantéis do Estado de São Paulo. Quatro grupos foram formados de 20 animais cada: grupos com crescimento negativo, de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. em cultura pura e grupo com a associação de ambos microrganismos. O objetivo deste trabalho consistiu em avaliação comparativa da quantidade de UFC/mL de microrganismos e CCSs no leite proveniente de glândulas mamárias bovinas, associadas com a presença dos microrganismos Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. e infecções mistas ocorridas com a presença de ambos. Tanto Staphylococcus spp. (mediana = 4,772), quanto Streptococcus spp. em cultura pura (mediana = 5,933), não apresentam diferenças significativas na contagem de UFC com seus respectivos agentes em associação (Staphylococcus spp. com mediana da associação foi de 5,048 e mediana de Streptococcus spp. da associação foi de 5,792). Nas amostras em que houve crescimento de Staphylococcus spp. e Streptococcus spp. associados, a quantidade de UFC de Streptococcus spp. foi estatisticamente maior. Comparados entre si (crescimento em cultura pura de Staphylococcus spp. com mediana = 5,765 e Streptococcus spp., mediana = 5,920), mesmo apresentando um maior número na CCSs no grupo de crescimento de Streptococcus spp., este aumento não foi significativo estatisticamente. Porém, quando associados (mediana = 5,673), comparados à cultura pura de Staphylococcus spp. (mediana = 5,765), este último teve aumento significativo. Tanto em cultura pura como em associação, a presença dos microrganismos quando comparados, não induziram a um aumento significativo na CCSs ou à contagem de UFCs em amostras de leite com sinais de mastite subclínica, porém Staphylococcus spp. induziu maior contagem de células somáticas / Mastitis is a complex disease that can occur due to different causes, intensity of degrees and variation of duration and consequences. The inflammatory processes in the mammary gland are specially frequent and important in dairy producing cattle. The infectious mastitis is the most important because of the economic aspects and public health. The subclinical manifestation is the most expensive and prevailing affecting 40% of the milk producing herd and causing an economic loss between 5% and 25% of all dairy production. In Brazil, the subclinical mastitis is characterized by high incidence, with indexes varying from 44,8% to 97,0 % with the reduction of milk production between 25,4% and 43%. Among the more isolated etiological agents in subclinical mastitis, is the Staphylococcus spp., the Streptococcus spp. and the Corynebacterium bovis. The amount of CFU/mL in the milk directly originated from the infected cow mammary gland would make possible to know the amount of microorganisms associated to a determined intensity of inflammatory process in the gland. The comparison between this information with the number of body cells in the sample would evaluate more precisely the nature of the inflammatory process in the gland. The risk represented by the presence of microorganisms in the milk is very important mainly because of the habit of milk consumption in natura, checked in a quantitative study of this nature, based on the amount of microbes intake by man. Eight milk samples of half-breed cows and Dutch cows were examined as well as those in first or after various calving, in different lactation stages in breeding stocks in São Paulo State. Four groups were organized, with 20 animals in each with negative Staphylococcus spp. growth and Streptococcus spp. in pure culture and group, with the association of both microorganisms. The purpose of this study is the comparative assessment of the amount of CFU/mL of microorganisms and CCSs in the milk from the mammary bovine glands, associated with the presence of microorganisms Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. and a mixed infection that occurred with the presence of both. The Staphylococcus spp. (median = 4,772) as well as the Streptococcus spp. in pure culture (median= 5,933) did not show significant differences in the CFU count, with their respective agents in association (Staphylococcus spp. with median of association was of 5,048 and median of Streptococcus spp. of the association was of 5,792). On the samples in which there was a growth of Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. associated, the amount of CFU of Streptococcus spp. was statistically larger. Compared between themselves (growth in pure culture of Staphylococcus spp., median = 5,920, this increase wasnt statistically significant. Although when associated (median=5,673), compared to the pure culture of Staphylococcus spp. (median=5,765), the latter had a significant increase. In pure culture as well as in association, the presence of microorganisms when compared to a significant increase in CCSs or to the CFUs count in milk samples with indication of subclinical mastitis, but the Staphylococcus spp. induced a larger count of somatic cells

Streptococcus pneumoniae é um importante agente causador de pneumonia, meningite e septicemia. O alto custo e a cobertura limitada da vacina conjugada atual reforçam a necessidade de se desenvolver uma vacina mais abrangente e acessível. A proteína de superfície de pneumococo A (PspA) é imunogênica e protetora em modelos animais; porém, devido à sua diversidade - há 6 clados e 3 famílias de PspA - uma vacina baseada em PspA deverá incluir fragmentos das duas famílias prevalentes (1 e 2). Neste estudo, foram produzidos fragmentos contendo a região N-terminal de PspA das famílias 1 e 2, e proteínas híbridas - contendo fusões destes fragmentos. Os anticorpos gerados contra os híbridos reconheceram PspAs nativas das duas famílias, foram capazes de se ligar a bactérias íntegras, e de aumentar a deposição de complemento em sua superfície. Finalmente, a imunização de camundongos com os híbridos foi capaz de proteger contra desafio com pneumococos contendo PspAs diversas, mostrando que estes seriam candidatos promissores na composição de uma vacina anti-pneumocócica. / Streptococcus pneumoniae is an important cause of pneumonia, meningitis and septicaemia. The high cost and limited coverage of the available conjugate vaccine reinforce the need for cost effective strategies, with broader coverage. Pneumococcal Surface Protein A (PspA) is immunogenic and protective in animal models; however, due to its diversity - there are six clades and threee families of PspA - a PspA based vaccine should include fragments of each major family (1 and 2). In the present study, we have produced fragments of the N-terminal region of PspAs families 1 and 2, and hybrid proteins - containing fusions of these fragments. Sera made against the hybrids induced antibodies that recognized PspAs from both families; these sera were also able to bind pneumococcal strains bearing diverse PspAs, and to increase complement deposition on their surface. Finally, immunization of mice with PspA hybrids was protective against challenge with pneumococci bearing diverse PspAs, showing that these hybrids should constitute promising candidates in an anti-pneumococcal vaccine.

As infecções por Streptococcus pneumoniae (pneumococo) ainda desafiam os sistemas de saúde em todo mundo. Este é um estudo observacional, de seguimento retrospectivo, que avaliou aspectos microbiológicos e clínicos das cepas de pneumococo isoladas de pacientes com doença invasiva pneumocócica (DIP) isolados nos Departamentos Regionais de Saúde (DRS) de Araraquara, Barretos, Franca e Ribeirão Preto, em um período de 16 anos (1998-2013). As informações foram obtidas junto ao Instituto Adolfo Lutz e, no banco de dados do Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto (HCRP). Analisou-se 796 linhagens, com predominio do gênero masculino (58,9%), da faixa etária de 20 a menores de 60 anos de idade (32,2%) e do período de 2003 a 2010 (60,2%). As DIPs mais comuns foram a meningite (45,7%) e a pneumonia (45,0%). Quanto aos sorotipos mais frequentes, observou-se em 83,3%: 14, 3, 19F, 1, 6A, 6B, 23F, 9V, 18C, 19A, 12F, 4, 7F, 5, 22F, 11A, 8, 9N, 10A e 15C, sendo o 14 o mais comum nos quatro DRS estudados. Os sorotipos 14, 3 e 19F foram mais frequentes na meningite, enquanto os sorotipos 14, 3 e 1 na pneumonia. Após 2010, verificou-se diminuição dos sorotipos 14, 1, 23F e 5 e aumento de 12F, 11A e 8, não contidos na vacina. A resistência à penicilina foi de 14,8%, sendo 3,0% resistência intermediária e 11,8% de resistência plena. Para ceftriaxona, 5,3% foram não sensíveis. A sensibilidade ao cloranfenicol, eritromicina e ceftriaxona manteve-se acima dos 90%, no período estudado. O maior nível de resistência foi observado para Sulfametoxazol/trimetoprim (49,4%). Destaca-se o aumento dos sorotipos 12F, 11A e 8 após a vacinação, considerando que nenhum deles compõe as vacinas conjugadas disponíveis. Observou-se variabilidade de resistência entre os diferentes sorotipos de pneumococo. A DIP mais frequente nos pacientes cadastrados no HCRP foi a pneumonia (67,8%), seguida da meningite (22,9%) tendo como sorotipos mais frequentes 14, 6A, 23F, 1, 3, 18C, 19F, 12F, 4,9V, 6B e 19A. Destes pacientes 67,5% apresentaram cura sem sequelas, 6,9% tiveram algum tipo de sequela e 25,6% evoluíram para óbito. A pneumonia causou 18,2% dos óbitos, principalmente na faixa etária de 20 a menores de 60 anos de idade. Os sorotipos 12F, 14, 18C, 9V, 18A, 19A e 23F foram responsáveis por 64,9% dos óbitos por meningite, enquanto os sorotipos 3, 14, 9V, 6B, 23F e 19F estiveram envolvidos em 63,4% das mortes por pneumonia. Entre os pacientes que morreram 68,2% tinham algum tipo de comorbidade, sendo HIV/AIDS, alcoolismo e câncer as mais comuns. A faixa etária com 60 anos ou mais foi a mais significativa (OR=4,2) para o insucesso, independente da presença de comorbidade. A presença do sorotipo 18C foi fator de risco significativo tanto na análise bruta (OR=3,8), quanto ao ajustar por comorbidade (OR=5,0) ou ajustada por idade (OR=5,4). O mesmo ocorreu para o sorotipo 12F (respectivamente, OR=5,1, OR=5,0 e OR=4,7). Observou-se alterações na circulação de alguns sorotipos de pneumococo no período pós VPC10. Ressalta-se a importância da continuidade da vigilância das DIPs, afim de determinar oscilações clínicas e microbiológicas da doença. Além disto, na era das vacinas conjugadas, o contínuo monitoramento sobre a distribuição de sorotipos na população é necessário para a avaliação do impacto e adequação da imunização / Infections by Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) are still a challenge to health systems worldwide. An observational retrospective study was developed to assess microbiological and clinical aspects of pneumococcus strains isolated from patients with invasive pneumococcal diseases (IPD) which were isolated in the Regional Health Departments (DRS) of Araraquara, Barretos, Franca and Ribeirão Preto, in a period of 16 years (1998-2013). Data were obtained at the Adolfo Lutz Institute and in databases of the Clinics Hospital of Ribeirão Preto (HCRP). A total of 796 strains were analyzed, with prevalence of male individuals (58.9%), aged between 20 and 60 years (32.2%), and in the period between 2003 and 2010 (60.2%). The most common IPD were meningitis (45.7%) and pneumonia (45.0%). Regarding the most frequent serotypes, in 83.3% they were: 14, 3, 19F, 1, 6A, 6B, 23F, 9V, 18C, 19A, 12F, 4, 7F, 5, 22F, 11A, 8, 9N, 10A and 15C, with 14 being the most common in the four DRS studied. Serotypes 14, 3 and 19F were more frequent in meningitis, whereas serotypes 14, 3 and 1 were more frequent in pneumonia. After 2010, there was a decrease in serotypes 14, 1, 23F and 5, and an increase in 12F, 11A and 8, which are not included in the vaccine. Resistance to penicillin was 14.8%, with 3.0% being intermediate, and 11.8% full resistance. For ceftriaxone, 5.3% were not sensitive. Sensitivity to chloramphenicol, erythromycin and ceftriaxone remained over 90% in the studied period. The highest level of resistance was observed for Sulfamethoxazole/trimethoprim (49.4%). It is noteworthy that there was an increase in the s serotypes 12F, 11A and 8 after vaccination, considering that none of them make up the combined vaccines available. Resistance varied among the different serotypes of pneumococcus. The most frequent IPD in the patients registered in the HCRP was pneumonia (67.8%), followed by meningitis (22.9%), with the most frequent serotypes being 14, 6A, 23F, 1, 3, 18C, 19F, 12F, 4, 9V, 6B and 19A. Of these patients, 67.5% were cured without sequela, 6.9% had some sort of sequela and 25.6% evolved to death. Pneumonia caused 18.2% of the deaths, mainly in the age range between 20 and 60 years. Serotypes 12F, 14, 18C, 9V, 18A, 19A and 23F were responsible for 64.9% of the deaths by meningitis, whereas serotypes 3, 14, 9V, 6B, 23F and 19F were involved in 63.4% of the deaths by pneumonia. Among the patients who died, 68.2% had some sort of comorbidity, with HIV/AIDS, alcoholism and cancer being the most common. The age range over 60 years was the most significant (OR=4.2) for failure, regardless of the presence of a comorbidity. The presence of serotype 18C was a significant risk factor both in the gross analysis (OR=3.8), and in the adjustment as for comorbidity (OR=5.0) or age (OR=5.4). This was also true for the serotype 12F (respectively, OR=5.1, OR=5.0 and OR=4.7). There were alterations in the circulation of some pneumococcus serotypes in the period after VPC10. it is emphasized the importance of continued monitoring of DIPs, in order to determine clinical and microbiological fluctuations of the disease. In addition, in the era of combined vaccines, it is necessary to keep monitoring the distribution of serotypes in the population to assess the impact and adequacy of immunization

Streptococcus pneumoniae é um importante patógeno respiratório que causa pneumonia, meningite e otite média. A vacina atualmente utilizada, composta de polissacarídeos capsulares (PS) derivados de 23 sorotipos diferentes, tem pouca eficácia em crianças, idosos e em pacientes imunocomprometidos. Vacinas com PS conjugados à proteína são mais eficientes, mas sua produção tem alto custo para ser amplamente utilizada. Além disso, o aumento de isolados clínicos de S. pneumoniae resistentes à antibióticos suporta o desenvolvimento de uma nova e mais eficiente vacina. O uso de bactérias ácido-lácticas (LAB) recombinantes vivas, como um sistema de apresentação do antígeno, representa uma estratégia promissora de vacinação de mucosa, já que são bactérias geralmente consideradas seguras (GRAS-status) e capazes de induzir resposta imune sistêmica e de mucosa. Neste trabalho, Lactococcus lactis, Lactobacillus casei e Lactobacillus helveticus foram engenheirados para expressão constitutiva de PspA (proteína A de superfície de pneumococo), um importante fator de virulência de S. pneumoniae. As bactérias recombinantes foram capazes de expressar PspA em duas localizações celulares: intracelular ou ancorada à parede celular, como analisado por Western-blot, utilizando anticorpos policlonais produzidos contra PspA recombinante purificada de E. coli. A estimulação humoral do sistema imune foi avaliada em termos de produção de anticorpos anti-PspA do tipo IgG no soro ou do tipo IgA na saliva, após administração intranasal de LABs recombinantes em camundongos. / Streptococcus pneumoniae is an important respiratory pathogen that causes pneumonia, meningitis and otitis media. The current vaccine in use is composed of capsular polysaccharides (PS) derived from 23 different serotypes, and has little efficacy in young children, elderly and in patients with immunodeficiencies. PS-protein conjugate vaccines are more effective, but their production is expensive for widespread use. Moreover, the increase in antibiotic-resistant S. pneumoniae clinical isolates supports the development of new and more effective vaccines. The use of live recombinant lactic acid bacteria (LAB) as antigen delivery and presentation systems represents a promising strategy for mucosal vaccination, since they are generally regarded as safe bacteria (GRAS-status) and are able to elicit both systemic and mucosal immune responses. In this work, Lactococcus lactis, Lactobacillus casei and Lactobacillus helveticus were engineered for constitutive expression of PspA (Pneumococcal Surface Protein A), an important S. pneumoniae virulence factor. Recombinant bacteria were able to express PspA in two cellular locations: intracellular or cell-surface exposed, as analyzed by Western-blot, using polyclonal antibodies produced against recombinant PspA purified from E. coli. Stimulation of humoral immune system was evaluated in terms of production of anti-PspA IgG in the sera or IgA in saliva, after intranasal administration of recombinant LAB in mice.

Após o nascimento, os recém-nascidos são expostos a vários tipos de micro-organismos, que podem determinar um processo infeccioso devido a sua imaturidade imunológica. Dentro deste processo, a amamentação tem um papel importante pela transferência passiva de imunoglobulina A (IgA). A cavidade oral é a principal porta de entrada destes agentes, especialmente os estreptococos, sendo que alguns colonizam inicialmente como Streptococcus gordonii (SGO), S. sanguinis (SSA) e S. mitis (SMI) e outros podem causar doenças, como S. mutans (SM), por ser o principal agente etiológico da cárie dentária. Pouco se sabe sobre a especificidade de IgA do colostro contra antígenos importantes destes estreptococos, o que pode ajudar na investigação dos mecanismos de estimulação antigênica e desenvolvimento da resposta imune de mucosa. Para tanto, foi avaliado no presente estudo, a especificidade e os níveis de IgA três antígenos de virulência de SM: glucan binding protein B (gbpB), glicosiltransferase (GTF) e antígeno I/II (Ag I/II) envolvidos na capacidade destas bactérias de aderir e acumular no biofilme. Além disso, as glicosiltransferases: 153 kDa de SGO e 170 kDa de SSA e IgA1- protease de SMI (220 kDa) em amostras de colostro humano. Um total de 77 amostras de colostro foram analisadas quanto aos níveis de immunoglobulian A, M e G por ELISA. A complexidade da IgA contra as bactérias foram analisadas por Western blot. Os resultados mostraram que a concentração média de IgA foi de 2850,2 (±2567,2) mg/100 mL sendo estatisticamente maior (p<0.05) dos níveis de IgM e de IgG (respectivamente 321,8±90,3 e 88,3± 51,5 mg/100 mL). A maioria das amostras tiveram níveis detectáveis de anticorpos IgA para extratos de antígenos de bactérias e seus antígenos de virulência, apresentando um elevado número de bandas reativas. Não houve diferença estatisticamente significante no número médio de IgA reativas a Ags entre os antígenos (p>0.4). A detecção de gbpB foi significativamente menor do que os outros antígenos de SM (p<0.05). Assim, o leite materno das primeiras horas após o nascimento apresentou níveis significativos de IgA contra importantes antígenos de virulência dos estreptococos orais estudados, que pode sugerir que a amamentação antes da erupção dos dentes pode interferir no processo de instalação e acumulação destes microorganismos na cavidade oral. / After birth, newborn babies are exposed to several types of microorganisms that can determine an infectious process due to their immunological immaturity. In this case, the feeding plays an important role by passive transfering of immunoglobulin A (IgA). The oral cavity is the main gateway of these agents, especially streptococci, some initially colonize as Streptococcus gordonii (SGO), S. sanguinis (SSA) and S. mitis (SMI) and others can cause diseases such as S. mutans (SM), as the main agent of tooth decay. Little is known about the specific IgA against major antigens of these streptococci which can help in the investigation of antigenic stimulation mechanisms and development of mucosal immune response. Therefore, we evaluated in this study, the specificity and levels of IgA from colostrum against three SM virulence antigens: glucan binding protein B (gbpB), glycosyltransferase (GTF) and antigen I/II (Ag I/II) involved in capacity these bacteria to adhere to and accumulate in the biofilm. Also, the glycosyltransferases: 153 kDa-SGO and 170 kDa-SSA and IgA1- protease of SMI (220 kDa). This study involved 77 samples of colostrum that were analyzed for levels of immunoglobulian A, M and G by Elisa. The specificity of IgA against extracts of SM and initials colonizators (SSA, SMI, SGO) were analyzed by the western blot. The mean concentration of IgA was 2850.2 (± 2567.2) mg/100ml followed by IgM and IgG (respectively 321.8 ± 90.3 and 88.3 ± 51.5), statistically different (p<0.05). Results showed that the majority of samples had detectable levels of IgA antibodies to extracts of bacteria antigens and theirs virulence antigens. To SM, the GbpB was significantly lower detected than others antigens of SM (p<0.05). High complexities of response to Ags were identified in the samples. There were no significant differences in the mean number of IgA-reactive Ags between the antigens (p>0.4). So, the breast milk from first hours after birth presented significant levels of IgA specific against important virulence of antigens those oral streptococci, which can disrupt the installation and accumulation process of these microorganisms in the oral cavity.

Dorstenia asaroides Hook. é um erva perene, conhecida como carapiá, utilizada na medicina popular contra uma variedade de enfermidades. Este estudo teve como objetivo obter e caracterizar o perfil fitoquímico de frações orgânicas (hexânica, acetato e clorofórmica) do extrato de rizomas de D. asaroides, bem como avaliar o efeito in vitro sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 (multiplicação, potencial acidogênico e biofilme) e analisar a citotoxicidade destas frações. Os extratos estudados foram obtidos a partir do extrato bruto (rizomas tratados com etanol). A fração hexânica (FrH) revelou a presença de ácidos graxos e/ou seus ésteres metílicos ou etílicos, além de um esteróide, campesterol e triterpenos. A fração acetato (FrA) é composta principalmente de furanocumarina e um triterpeno, já a fração clorofórmica (FrC) é composta pelas furanocumarinas: isopsoraleno e/ou psoraleno e bergapteno. As frações que apresentaram maior valor de inibição do potencial acidogênico foram FrH e FrA, ambas com 100% de inibição na concentração de 12,5mg/mL. A concentração inibitório mínima (CIM) para FrH e FrC foi igual a 80µg/mL, e 50µg/mL para FrA. Nos estudos de biofilme, verificou-se que a partir de 3h de incubação S. mutans foi capaz de aderir a superfícies de vidro e aço inoxidável, formando biofilme em 9h de incubação com populações médias de 3,41 Log de UFC/cm2 nas lâminas de vidro e de 4,84 Log de UFC/cm2 nas lâminas de aço inoxidável. Os melhores resultados de controle de biofilme foram obtidos com a fração FrA, a qual apresentou diferenças significativas em relação ao controle. As frações hexânica e acetato não se mostraram citotóxicas em concentrações inferiores a 6,25µg/mL. Já para a fração clorofórmica, não houve citotoxicidade em concentrações menores que 25µg/mL. Os resultados obtidos com as frações FrH, FrA e FrC do extrato de rizomas de D. asaroides mostram-se promissores, uma vez que apresentaram potencial anticariogênico sobre S. mutans. / Dorstenia asaroides Hook. (Moraceae), a plant occurring endemically in Africa and Central and South America, is used in medicinal plant therapy. In this study, we analyzed the chemical compounds from the hexane fraction (HFr), chloroform fraction (CFr) and ethyl acetate fraction (EFr). These fractions were obtained from crude extracts of the rhizomes of D. asaroides. The antimicrobial activity against S. mutans, the acid inhibition properties, the effect on S. mutans biofilm formed on a glass surface and cytotoxicity were also evaluated. Phytochemical analysis of these organic fractions from the extract of D. asaroides rhizomes revealed the presence of substances with known antimicrobial activity, such as campesterol, triterpenes and coumarins. Both the MIC and MBC values for the HFr and CFr are 80µg/mL, and for the EFr 50µg/mL. Among the fractions tested, the fractions with the highest value of inhibition of the acidogenic potential were HFr and EFr, with 100.3% and 105.3% inhibition, respectively, at a concentration of 12.5mg/mL. The treatment of biofilms was statistically significant for all three fractions at the highest concentrations tested compared with the control (biofilm at 12 hours). The results for EFr were particularly pronounced, showing significant differences at all concentrations. The HFr and EFr were not cytotoxic at concentrations below 6.25g/mL. CFr was not cytotoxic at concentrations less than 25g/mL. Thus, the fractions have shown a substantial anticariogenic activity against S. mutans and further studies are needed to fully elucidate properties of these fractions.