Orientador: Helio Langoni / Resumo: Atualmente dentre as doenças emergentes a maioria são zoonoses, e os morcegos desempenham papel importante como fonte de infecção e transmissão de agentes infecciosos. Histoplasmose e criptococose são doenças fúngicas relatadas em diversas espécies animais, podendo seus agentes serem isolados de grutas, cavernas, solo e fezes de animais. Paracoccidioidomicose, doença fúngica mais importante no Brasil, acomete principalmente populações de baixa renda, na zona rural e já foi relatada em animais silvestres e domésticos. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi realizar a detecção molecular dos fungos Histoplasma capsulatum, Cryptococcus spp. e Paracoccidioides brasiliensis em quirópteros no município de Botucatu e região, SP. O delineamento do estudo foi de série de casos, a partir de morcegos recolhidos e enviados pela Vigilância Epidemiológica municipal de 12 cidades da região Centro-Oeste de São Paulo para o diagnóstico de raiva, no período de abril de 2015 a maio de 2016. Foram coletados pulmão, baço, fígado e intestino de 172 quirópteros, e avaliados pelas técnicas de nested-PCR e cultivo microbiológico. A prevalência encontrada para H. capsulatum foi de 8,14% (14/172), com um morcego positivo somente no cultivo microbiológico, 12 na técnica de nested-PCR, e um animal positivo em ambos os métodos. Dois morcegos foram positivos para Cryptococcus spp. e dois para P. brasiliensis pela técnica de nested-PCR. Como auxílio do software Autocad® foi realizado georreferenciame... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by Giselle Souza da Paz null (giselle.spaz@yahoo.com.br) on 2017-02-24T03:10:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação.pdf: 1081711 bytes, checksum: 854b92b0e4655258cb81dd326f478bd5 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-02T18:12:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paz_gs_me_bot.pdf: 1081711 bytes, checksum: 854b92b0e4655258cb81dd326f478bd5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-02T18:12:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paz_gs_me_bot.pdf: 1081711 bytes, checksum: 854b92b0e4655258cb81dd326f478bd5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Atualmente dentre as doenças emergentes a maioria são zoonoses, e os morcegos desempenham papel importante como fonte de infecção e transmissão de agentes infecciosos. Histoplasmose e criptococose são doenças fúngicas relatadas em diversas espécies animais, podendo seus agentes serem isolados de grutas, cavernas, solo e fezes de animais. Paracoccidioidomicose, doença fúngica mais importante no Brasil, acomete principalmente populações de baixa renda, na zona rural e já foi relatada em animais silvestres e domésticos. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi realizar a detecção molecular dos fungos Histoplasma capsulatum, Cryptococcus spp. e Paracoccidioides brasiliensis em quirópteros no município de Botucatu e região, SP. O delineamento do estudo foi de série de casos, a partir de morcegos recolhidos e enviados pela Vigilância Epidemiológica municipal de 12 cidades da região Centro-Oeste de São Paulo para o diagnóstico de raiva, no período de abril de 2015 a maio de 2016. Foram coletados pulmão, baço, fígado e intestino de 172 quirópteros, e avaliados pelas técnicas de nested-PCR e cultivo microbiológico. A prevalência encontrada para H. capsulatum foi de 8,14% (14/172), com um morcego positivo somente no cultivo microbiológico, 12 na técnica de nested-PCR, e um animal positivo em ambos os métodos. Dois morcegos foram positivos para Cryptococcus spp. e dois para P. brasiliensis pela técnica de nested-PCR. Como auxílio do software Autocad® foi realizado georreferenciamento dos pontos de recolhimento dos animais, verificando quirópteros positivos em escolas, praças, residências e hospitais. Conclui-se que a presença de morcegos positivos para fungos patogênicos em áreas urbanas, é um risco para a saúde pública, visto que estes animais podem favorecer a manutenção e transmissão de patógenos em ambientes caseiros. Medidas de manejo ambiental devem ser orientadas a população pelo Serviço de Vigilância Epidemiológica Municipal, visando diminuir a população de morcegos em ambientes domésticos e minimizar os riscos de transmissão de fungos patogênicos. / Currently, among the emerging diseases, most are zoonosis, and baths play an important role as source of infection and transmission of infectious agents. Histoplasmosis, criptococcosis and paracoccidioidomicosis are fungal diseases reported in several animal species, and their agents can be isolated in grottos, caverns, soils and feces of animals. Paracoccidioidomycosis, the most important fungal disease in Brazil, affects mainly low-income populations in rural areas and has been reported in wild and domestic animals. Thus, the objective of the present study was performing the molecular detection of the fungi Histoplasma capsulatum, Cryptococcus spp. and Paracoccidioides brasiliensis in bats from the city of Botucatu and region, state of São Paulo.The study was delineated with a series of cases, from bats collected and sent by the Municipal Epidemiologic Surveillance of 12 cities from the Midwest region of São Paulo for the rabies diagnosis, within the time period from April 2015 to May 2016. Lung, spleen, liver and intestine were collected from 172 bats and assessed by nested-PCR and microbiological cultive techniques.The prevalence found for H. capsulatum was 8.14% (14/172), with one positive bath only by culturing the fungus, 12 in the nested-PCR technique and a positive animal in both methods. Two bats were positive for Cryptococcus spp. and two for P. brasiliensis by nested-PCR. With the aid of Autocad® software, the georeferencing of the animals’collection spots was performed, verifying positive bats in schools, squares, residences and hospitals. We conclude that the presence of positive baths for pathogenic fungi in urban areas is a risk to public health, since these animals can help on the maintenance and transmission of pathogens in domestic environments. Environmental management measures must be conducted to the population by the Municipal Service of Epidemiologic Surveillance, with the purpose of decreasing the baths population in domestic environments and minimizing the risk of transmitting pathogenic fungi. / FAPESP: 2014/23234-0

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Resumo: Introdução. A correlação entre gravidade da paracoccidioidomicose e patogenicidade e imunogenicidade dos fungos causadores tem sido pouco investigada e foi o objetivo deste estudo. Metodologia. As cincos cepas Pb192, Pb234, Pb326, Pb417 e Pb531 foram identificadas pelo seqüenciamento da região Exon 2 da gp43. A patogenicidade foi determinada pelo cálculo da dose letal 50% (DL50%) e pela contagem do número de unidades formadoras de colônias, realizada na sexta semana pós-infecção de camundongos BALB/c. A imunogenicidade foi determinada pela avaliação da resposta imune humoral específica, utilizando-se a reação de imunodifusão dupla em gel de ágar e da imunidade celular, determinada pela concentração das citocinas interleucina -2, interleucina-10, interferon-γ, fator de necrose tumoral – α e do fator de crescimento do endotélio vascular, em tecido pulmonar. Quatro amostras clínicas foram recém-isoladas de pacientes com paracoccidioidomicose, provenientes da Região de Botucatu - os isolados Pb234 e Pb417, de pacientes com a forma crônica moderada; o Pb326 de um caso com a forma aguda grave; e o Pb531, de um caso com a forma crônica grave. As demais cepas Pb192, Pb01 e 8334 foram cedidas pelo laboratório de Moléstias infecciosas. Resultados. As cepas Pb417 e Pb326 agruparam-se às cepas identificadas como P. brasiliensis S1a, a Pb531 às P. brasiliensis S1b e as cepas Pb234 e Pb192 às cepas depositadas como P. restrepiensis (PS3). Os resultados demonstraram correlação direta entre ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction. The investigation of paracoccidioidomycosis and pathogenicity and immunogenicity of the provoking fungi has been little investigated and was the objective of this study. Methodology. As strains, Pb192, Pb234, Pb326, Pb417 and Pb531 were included by sequencing the Exon 2 region of gp43. The pathogenicity was determined by calculating the 50% lethal dose (LD50%) and by counting the number of colony forming units performed in the sixth week post-infection of BALB / c mice. Immunogenicity was determined by the humoral immune response, using the agar gel immunodiffusion reaction and the cellular immunity, determined the concentration of cytokines interleukin-2, interleukin-10, interferonγ, tumor necrosis factor - and factor of vascular endothelial growth in lung tissue. Surgical has been associated with patients with paracoccidioidomycosis, derived from the Botucatu - the Pb234 and Pb417; the Pb326 of a case with a severe severe form; and Pb531, of a case with severe chronic form. The other strains Pb192, Pb01 and 8334 were transferred by the laboratory of Infectious Diseases. Results. Pb417 and Pb326 strains were grouped into the associated strains P. brasiliensis S1a, Pb531 to P. brasiliensis S1b and strains Pb234 and Pb192 to strains deposited as P. restrepiensis (PS3). The results demonstrate the pathogenicity of disease error and severity. The small LD 50 values were measured in the following cases: severe disease, Pb531 and Pb326. Pb531 strain was considered to... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é micose granulomatosa sistêmica causada por fungos termodimórficos do gênero Paracoccidioides. O presente estudo teve como objetivos avaliar a atividade da liriodenina, extraída de Annona macroprophyllata Donn. Sm, sobre isolados clínicos e cepas padrão de fungos do gênero Paracoccidioides e outras espécies que causam micoses sistêmicas e, através de um estudo-piloto realizado em modelo murino, avaliar a absorção da liriodenina e possíveis efeitos indesejáveis. A concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima (CFM) da liriodenina foram determinadas pelo método de microdiluição. As alterações celulares causadas pela liriodenina em P. brasiliensis / cepa padrão Pb18 foram avaliadas pela microscopia eletrônica de transmissão (MET) e de varredura (MEV). Em estudo-piloto, quatro camundongos isogênicos albinos, da linhagem BALB/c, foram utilizados para avaliar a absorção e os efeitos indesejáveis da liriodenina. Os animais, sem infecção, foram divididos em dois grupos: grupo 1, com dois camundongos que receberam a dose de 0,75 mg.kg-1 e grupo 2, com dois camundongos que receberam a dose de 1,50 mg.kg-1, em única tomada. Após seis e 12 horas após a administração, os animais foram sacrificados e amostras de sangue foram coletadas para a determinação dos níveis séricos. Os intestinos foram coletados para exame histológico. O teste de sensibilidade in vitro revelou que a liriodenina possui atividade sobre parte dos fungos do gênero P... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic granulomatous mycosis caused by thermodymorphic fungi of the genus Paracoccidioides. The present study aimed to evaluate the activity of liriodenine, extracted from Annona macroprophyllata Donn. Sm on clinical isolates and standard strains of fungi of the genus Paracoccidioides and other species that cause systemic mycoses and, through a pilot study conducted in a murine model, to assess the absorption of liriodenine and possible undesirable effects. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (CFM) of liriodenine were determined by the microdilution method. Cellular alterations caused by liriodenin in P. brasiliensis / Pb18 standard strain were evaluated by transmission electron microscopy (SEM) and scanning electron microscopy (SEM). In a pilot study, four albino isogenic mice of the BALB / c strain were used to assess the absorption and undesirable effects of liriodenine. The animals, without infection, were divided into two groups: group 1, with two mice receiving the dose of 0.75 mg.kg-1 and group 2, with two mice receiving the dose of 1.50 mg.kg- 1 , in single outlet. After six and 12 hours after administration, the animals were sacrificed and blood samples were collected for the determination of serum levels. The intestines were collected for histological examination. The in vitro sensitivity test revealed that liriodenine has activity on part of fungi of the genus Paracoccidioides, with MIC v... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Adriele Dandara Levorato Vinche (adrielelevorato@yahoo.com.br) on 2018-03-13T14:11:39Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado Adriele Dandara Levorato Vinche.pdf: 2200417 bytes, checksum: 23e69a47a9fa5126001d659e0803e67a (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-03-13T18:45:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vinche_adl_dr_bot.pdf: 2200417 bytes, checksum: 23e69a47a9fa5126001d659e0803e67a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-13T18:45:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vinche_adl_dr_bot.pdf: 2200417 bytes, checksum: 23e69a47a9fa5126001d659e0803e67a (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A paracoccidioidomicose (PCM) é micose granulomatosa sistêmica causada por fungos termodimórficos do gênero Paracoccidioides. O presente estudo teve como objetivos avaliar a atividade da liriodenina, extraída de Annona macroprophyllata Donn. Sm, sobre isolados clínicos e cepas padrão de fungos do gênero Paracoccidioides e outras espécies que causam micoses sistêmicas e, através de um estudo-piloto realizado em modelo murino, avaliar a absorção da liriodenina e possíveis efeitos indesejáveis. A concentração inibitória mínima (CIM) e concentração fungicida mínima (CFM) da liriodenina foram determinadas pelo método de microdiluição. As alterações celulares causadas pela liriodenina em P. brasiliensis / cepa padrão Pb18 foram avaliadas pela microscopia eletrônica de transmissão (MET) e de varredura (MEV). Em estudo-piloto, quatro camundongos isogênicos albinos, da linhagem BALB/c, foram utilizados para avaliar a absorção e os efeitos indesejáveis da liriodenina. Os animais, sem infecção, foram divididos em dois grupos: grupo 1, com dois camundongos que receberam a dose de 0,75 mg.kg-1 e grupo 2, com dois camundongos que receberam a dose de 1,50 mg.kg-1, em única tomada. Após seis e 12 horas após a administração, os animais foram sacrificados e amostras de sangue foram coletadas para a determinação dos níveis séricos. Os intestinos foram coletados para exame histológico. O teste de sensibilidade in vitro revelou que a liriodenina possui atividade sobre parte dos fungos do gênero Paracoccidioides, com valores de CIM entre 31,2 e 250 μg.mL-1 e sobre a cepa padrão de Histoplasma capsulatum (CIM de 1,95 μg.mL-1). No entanto, menor atividade foi observada em leveduras da maioria das espécies de Candida ensaiadas, com CIM de 125 a 250 μg.mL-1, e maior atividade sobre as cepas padrões de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii (CIM de 62,5 μg.mL-1), enquanto a cepa de Aspergillus fumigatus revelou-se resistente à maior concentração de liriodenina. Deve-se ressaltar a atividade da liriodenina sobre Candida krusei, que é intrinsecamente resistente ao fluconazol e, ao contrário, a ausência de atividade sobre Candida tropicalis. A liriodenina revelou ter atividade fungicida sobre todas as cepas padrão e isolados clínicos que foram inibidos in vitro. A MET revelou alterações citoplasmáticas e danos na parede celular de P.brasiliensis. O estudo-piloto revelou que, após 12 horas da administração da liriodenina, os animais que receberam a dose de 1,50 mg.kg-1 apresentavam gases intestinais e distensão abdominal, achados não observados nos que receberam 0,75 mg.kg-1. Os exames histológicos não evidenciaram alterações de intestino com nenhuma das doses empregadas. Níveis séricos de liriodenina foram detectados em ambos os grupos de animais. No entanto, os animais que receberam 0,75 mg.kg-1 de liriodenina apresentaram aumento da concentração com o passar do tempo, enquanto achado oposto foi observado nos que receberam 1,50 mg.kg-1. Os testes de sensibilidade in vitro indicaram que a liriodenina é uma alternativa promissora no tratamento de várias micoses sistêmicas. O estudo-piloto revelou que a liriodenina é absorvida após administração por gavagem, embora a dose de 1,50 mg.kg-1 tenha induzido alterações funcionais, caracterizadas por formação exagerada de gases e conseqüente distensão abdominal, que talvez possam explicar a diminuição de sua absorção. Os resultados do presente estudo estimulam a realização da avaliação da farmacocinética da liriodenina, de sua ação antifúngica em maior número de isolados de espécies de Candida spp, Cryptococcus spp, Histoplasma capsulatum e fungos do gênero Paracoccidioides e de sua eficácia em infecções experimentais em modelo murino. Por se tratar de composto antifúngico não pertencente às classes hoje utilizadas na terapia antifúngica, pode vir a contribuir com o tratamento de pacientes com infecções fúngicas resistentes. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic granulomatous mycosis caused by thermodymorphic fungi of the genus Paracoccidioides. The present study aimed to evaluate the activity of liriodenine, extracted from Annona macroprophyllata Donn. Sm on clinical isolates and standard strains of fungi of the genus Paracoccidioides and other species that cause systemic mycoses and, through a pilot study conducted in a murine model, to assess the absorption of liriodenine and possible undesirable effects. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (CFM) of liriodenine were determined by the microdilution method. Cellular alterations caused by liriodenin in P. brasiliensis / Pb18 standard strain were evaluated by transmission electron microscopy (SEM) and scanning electron microscopy (SEM). In a pilot study, four albino isogenic mice of the BALB / c strain were used to assess the absorption and undesirable effects of liriodenine. The animals, without infection, were divided into two groups: group 1, with two mice receiving the dose of 0.75 mg.kg-1 and group 2, with two mice receiving the dose of 1.50 mg.kg- 1 , in single outlet. After six and 12 hours after administration, the animals were sacrificed and blood samples were collected for the determination of serum levels. The intestines were collected for histological examination. The in vitro sensitivity test revealed that liriodenine has activity on part of fungi of the genus Paracoccidioides, with MIC values between 31.2 and 250 μg.mL-1 and on the standard Histoplasma capsulatum strain (MIC of 1.95 μg .mL-1 ). However, lower activity was observed in yeasts of most Candida species tested, with MIC of 125 to 250 μg.mL-1 , and greater activity on the standard strains of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii (MIC of 62.5 μg. mL-1 ), while the strain of Aspergillus fumigatus was resistant to the highest concentration of liriodenine. The activity of liriodenine on Candida krusei, which is intrinsically resistant to fluconazole and, on the contrary, the absence of activity on Candida tropicalis should be emphasized. Liriodenin reveale over all standard strains and clinical isolates that were inhibited in vitro. MET showed cytoplasmic alterations and damage to P. brasiliensis cell wall. The pilot study revealed that animals receiving the 1.50 mg.kg-1 dose had no intestinal gas and abdominal distension 12 hours after administration of liriodenine, which were not observed in those receiving 0.75 mg.kg-1 . Histological examinations showed no intestinal changes at any of the doses used. Serum levels of liriodenine were detected in both groups of animals. However, animals receiving 0.75 mg.kg-1 liriodenine showed increased concentration over time, while the opposite finding was observed in those receiving 1.50 mg.kg-1 . In vitro sensitivity tests indicated that liriodenine is a promising alternative in the treatment of various systemic mycoses. The pilot study revealed that liriodenine is absorbed after administration by gavage, although the 1.50 mg.kg-1 dose induced functional alterations, characterized by exaggerated gas formation and consequent abdominal distension, which may explain the decrease of its absorption. The results of the present study stimulate the evaluation of the pharmacokinetics of liriodenine, its antifungal action in a greater number of isolates of Candida species, Cryptococcus spp, Histoplasma capsulatum and fungi of the genus Paracoccidioides and their efficacy in experimental infections in murine model. Because it is an antifungal compound that does not belong to the classes currently used in antifungal therapy, it may contribute to the treatment of patients with resistant fungal infections.