A procura de um método que permita um melhor resultado na anastomose de um nervo completamente seccionado é antiga. Há muitos anos a técnica, dita convencional, para aproximação dos cotos afastados do nervo lesado, é realizada com pontos de fios microcirúrgicos. Mais recentemente, a utilização da cola de fibrina tem permitido a adesão de tecidos, como pele, fáscia e outras estruturas anatômicas. O uso da cola de fibrina, na aproximação das extremidades nervosas, tem sido propagada pela indústria como um fato incontestável. No entanto, somente com a realização de estudos comparativos clínicos e laboratoriais tornou-se possível comparar a eficácia da cola de fibrina como agente de reconstituição em lesões de nervos periféricos. Com o objetivo de comprovar essa afirmação foi realizado um trabalho através de uma mensuração nas bainhas de mielina de cotos regenerados de nervos entre diferentes tipos de anastomose nervosas em nervo isquiático de ratos da raça Wistar. Com esse mesmo escopo, foi mensurado o número de axônios em regeneração após o uso dessa cola. Foi utilizada uma amostra de 35 ratos divididos em 03 grupos (A, B e C). No grupo A, 25 ratos foram submetidos à cirurgia com o uso da cola de fibrina para a anastomose nervosa. No grupo B, 05 ratos foram submetidos ao mesmo procedimento; entretanto, ao reparo nervoso acrescentou-se a utilização de dois pontos opostos de mononylon 9-0, usando-se cola de fibrina no seu interior. No terceiro grupo (C), 05 ratos foram submetidos a neurorrafia com 6 a 8 pontos de mononylon 9-0 sem auxílio da cola de fibrina (anastomose nervosa convencional). Os animais foram submetidos a um novo procedimento após 90 dias, quando o nervo isquiático tratado foi retirado e encaminhado para o estudo. Após esse procedimento, os animais foram sacrificados. Cabe esclarecer que os espécimens foram submetidas a uma preparação histológica, sendo avaliados. Para tanto, foi realizada uma mensuração da espessura média da bainha de mielina das fibras regeneradas. Também foi realizada uma medição do número de axônios regenerados em um milímetro quadrado. Com base nesses achados, foram comparados os resultados. / The search for a method that allows better results for the anastomosis of a completely sectioned nerve has been pursuitted from a long time. From many years the conventional technique using microsurgical sutures has been used to bring near the separated stumps of the injured nerve. Actually, the fibrin glue use is allowing tissue adhesion of the skin, fascia and other anatomical structures. The fibrin glue use for the nervous edges approach, have been propagated by the industries as an incontestable fact. Trying to verify this affirmation an evaluation through the myelin sheath was made along regenerated nerve edges between different techniques of anastomosis of an injured sciatic nerve from Wistar. Was also measured the axon regeneration after this glue application. A 35 rats sample was separated in 03 groups (A, B and C). In group A 25 rats were submitted to nervous anastomosis surgery using fibrin glue. In group B, 05 rats were submitted to the same procedure; however, during nervous repair, two opposite stitches of mononylon 9-0 were added with inward fibrin glue. In group C 05 rats were submitted to neuroraphy with 6-8 stitches of mononylon 9-0 without fibrin glue use (conventional nervous anastomosis). The animals were submitted to a new procedure, 90 days after the initial surgery, to remove and lead to additional study the healed portion of the sciatic nerve. After this procedure the animals were sacrificed. These specimens were submitted to histological preparation and evaluated. The myelin sheath thickness average of the regenerated fibers was measured. The number of regenerated axons by (milimetro quadrado) was also measured. Using these measures a comparison between the results were made.

Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: José Carlos Souza Trindade Filho / Banca: Fernando Gonçalves de Almeida / Banca: Margarida Juri Saeki / Resumo: Levando-se em consideração avanços tecnológicos na área médica, a engenharia de tecidos (ET) surgiu como um capítulo do livro da Medicina Regenerativa a qual se caracteriza pelo desenvolvimento e manipulação de moléculas, células, tecidos, ou órgãos, desenvolvidos em laboratório, para apoiar ou substituir a função de partes do corpo defeituosas ou danificadas. Dentre os principais desafios está a abordagem dos chamados biomateriais ou scaffolds, que atuam como substratos adesivos para as células implantadas, propiciando suporte físico tridimensional e auxílio no crescimento de um tecido organizado, como é o caso do polímero constituído de quitosana. A quitosana é um polissacarídeo derivado da quitina, o qual apresenta propriedades inerentes dos biomateriais, sendo aqui apresentado sob a forma de membrana. Assim, foram aliadas técnicas derivadas da biotecnologia para a viabilização do uso desse biomaterial, in vivo, à demanda existente por alternativas visando restabelecer as funções vesicais para então,posteriormente, se constituir a materialização da Ampliação vesical. Propor o interfaceamento das áreas de urologia e de Engenharia de Tecidos visando à aplicabilidade do scaffold de quitosana em bexiga. Padronizar critérios necessários para o devido emprego da membrana in vivo. Foram produzidos dois grupos de membranas divididos em três subgrupos cada, elencados em função da concentração de ácido usado para diluição do polímero, quantidade de quitosana em gramas e acréscimo ou não de fatores de crescimento de plaquetas, sendo os subgrupos diferenciados pela denominação "Membranas não Dopadas" e "Dopadas". Amostras de células de tecido muscular liso de bexiga foram retiradas de coelhos e submetidas a testes de caracterização por imunocitoquímica (ICQ) e citometria de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Due to medicine technological advances, tissue engineering (TE) has emerged as a Regenerative Medicine chapter, characterized by the development and manipulation of molecules, cells, tissues, and organs, cultivated in laboratory to support or replace body's defective or damaged functions or parts. One of the main challenges is the approach of the biomaterials or scaffolds, responsible to guide and explore living tissue interactions between synthetic materials to optimize processes such as fixation, recognition, and colonization. As adhesive substrates for cells implanted; they provide tridimensional physical support assisting an organized tissue growth. Chitosan polymer is a polysaccharide derived from chitin that demonstrates inherent properties of biomaterials, presented here in a membrane form. Therefore, biotechnological techniques to validate the use of this biomaterial in vivo were allied to the demand for alternatives in order to restore bladder function, instigating bladder augmentation materialization. Propose to interface Urology and TE in order to apply the Chitosan scaffold in bladder. Standardize necessary criteria for the proper membrane use in vivo. Each one of the two groups of membranes produced was divided into three subgroups, listed according to the addition or not of Platelet Growth Factors. They were called "doped membranes" and "no doped membranes", respectively. Rabbit's bladder smooth muscle cells samples were removed and characterized by immunocytochemistry (ICC) and flow cytometry (FC) techniques for subsequent implant in the scaffolds. In relation to the membranes, it was proposed a standardized production of the different subgroups; sterilization by the Sterrad® method; adhesion test; evaluation of cellular cytotoxicity using Caspase-3- and Annexin... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Nátalie Massaro Rosa Ballaben (namassaro@yahoo.com.br) on 2018-06-18T16:27:57Z No. of bitstreams: 1 tese doutorado versão definitiva enviar (1).pdf: 2032603 bytes, checksum: b3356a9e79dcd1ae5a6c01c83ff25316 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-06-18T23:41:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rosaballaben_nm_dr_jabo.pdf: 2032603 bytes, checksum: b3356a9e79dcd1ae5a6c01c83ff25316 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-18T23:41:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rosaballaben_nm_dr_jabo.pdf: 2032603 bytes, checksum: b3356a9e79dcd1ae5a6c01c83ff25316 (MD5) Previous issue date: 2018-05-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A lesão medular não é um evento incomum na medicina humana e veterinária e resulta em disfunções neurológicas de graus variados. Apesar dos esforços no tratamento, lesões medulares frequentemente causam sequelas permanentes, desde déficit proprioceptivo isolado até paralisia completa de membros. A membrana confeccionada à base de látex natural extraído da seringueira Hevea brasiliensis tem sido utilizada com sucesso para regeneração de tecidos, e seu potencial regenerador foi reconhecido como sendo de uma fração proteica conhecida como proteína P1. Este novo biomaterial foi eficaz em vários testes de regeneração em animais de experimentação e humanos, e, ainda que tenha mostrado potencial regenerador em teste de lesão de nervo periférico, a proteína ainda não foi testada em Sistema Nervoso Central. Objetivou-se avaliar o potencial regenerador da fração proteica extraída do látex natural (P1) na hemissecção da medula espinhal em ratos. Foram utilizados 18 ratos machos adultos submetidos à hemissecção medular no segmento medular T13 subdivididos em dois grupos: GHP (tratados com proteína P1 em gel de ácido hialurônico) e GHSP (tratado somente com ácido hialurônico). Foram realizadas análises neuroclínicas, bem como avaliação funcional da marcha em plataforma de acrílico. Após oito semanas os animais foram submetidos à eutanásia e os segmentos medulares envolvidos foram avaliados por histoquímica pela coloração Tricrômico de Masson e Luxol Fast Blue, além de avaliação da reação astroglial por imunoistoquímica. Não houve diferença significativa entre os dois grupos para as avaliações neuroclínicas, não sendo observado melhora clínica satisfatória para as variáveis analisadas, porém, em relação à análise histológica foi notada diferença importante entre os grupos, evidenciando menor reação cicatricial e degeneração do tecido medular restante, além de presença de hipercelularidade organizada e menor reação astroglial nos animais tratados com a fração protéica P1. Apesar da não evidência de melhora nos parâmetro neuroclínicos com o uso da proteína P1, houve alterações histológicas notórias e relevantes nos animais em que foi utilizada, além de ser benéfica como indutora de neuroproteção. / Spinal cord injury is not an uncommon event in human and veterinary medicine and results in neurological dysfunctions of varying degrees. Despite efforts in treatment, spinal cord injuries often cause permanent sequelae, ranging from isolated proprioceptive deficit to complete limb paralysis. The membrane made from natural latex extracted from the rubber tree Hevea brasiliensis has been successfully used for tissue regeneration and its regenerative potential has been recognized as being of a protein fraction known as P1 protein. This new biomaterial has been effective in several regeneration tests in experimental animals and humans, and although it has shown a potential regenerator in a peripheral nerve injury test, the protein has not yet been tested in the Central Nervous System. The objective of this study was to evaluate the regenerative potential of the protein fraction extracted from natural latex (P1) in the hemisection of the spinal cord in rats. Eighteen adult male rats submitted to medullary hemisection in the T13 medullary segment were subdivided into two groups: GHP (treated with protein P1 in hyaluronic acid gel) and GHSP (treated with hyaluronic acid only). Neuroclinical analyzes were performed as well as functional evaluation of gait on acrylic platform. After eight weeks the animals were submitted to euthanasia and the involved spinal segments were evaluated by histochemistry by Masson and Luxol Fast Blue Trichrome staining, as well as evaluation of the astroglial reaction by immunohistochemistry. There was no significant difference between the two groups for the neuroclinical evaluations, and no satisfactory clinical improvement was observed for the analyzed variables; however, in relation to the histological analysis, an important difference between the groups was observed, evidencing a smaller cicatricial reaction and degeneration of the remaining spinal cord tissue, besides the presence of organized hypercellularity and less astroglial reaction in the animals treated with the protein fraction P1. Although there was no evidence of improvement in the neuroclinical parameters with the use of the P1 protein, there were significant and relevant histological changes in the animals in which it was used, besides being beneficial as inducer of neuroprotection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-03Bitstream added on 2014-06-13T19:49:28Z : No. of bitstreams: 1 ochandio_bs_me_rcla.pdf: 1920711 bytes, checksum: 80d927f31e28ee2a2da9e4e04b3bc1f1 (MD5) / As nadadeiras dos peixes teleósteos apresentam uma capacidade de regeneração bastante rápida, o que as torna um modelo biológico importante e adequado para o estudo in vivo. Estudos mostram que corticóides usados por longos períodos podem atrasar o processo de cicatrização, influenciando na reepitelização, na neovascularização e na síntese do colágeno. Os constituintes das nadadeiras dos peixes teleósteos contêm grande quantidade de colágeno e assim o objetivo do presente trabalho foi estudar o efeito da dexametasona (um antiinflamatório e glicocorticóide esteróide bastante utilizado no tratamento de doenças reumáticas) durante o processo regenerativo das nadadeiras caudais das carpas (Cyprinus carpio). Para isso, foram montados dois aquários de vidro, um para o grupo controle e outro para o grupo tratado com a dexametasona (Henrifarma) na concentração de 20mg/L. Os peixes distribuídos nesses aquários tiveram suas nadadeiras caudais amputadas transversalmente e permaneceram nos respectivos aquários para que ocorresse a regeneração. Foram feitas coletas das nadadeiras em regeneração em intervalos de um, dois, quatro, seis, oito e 10 dias após a amputação. As amostras foram processadas histologicamente para permitir os estudos ao microscópio de luz e a análise estatística. Observou-se que nos peixes do grupo controle, as nadadeiras regeneraram normalmente e cresceram o esperado em cada intervalo de tempo. Nos peixes do grupo tratado com dexametasona, no entanto, a regeneração das nadadeiras caudais foi mais lenta. Verificou-se que, em cada intervalo analisado, as nadadeiras regeneradas dos peixes expostos à droga eram menores que a medida das nadadeiras dos peixes do grupo controle, provavelmente porque a dexametasona tenha influenciado a expressão dos genes necessários para o processo de regeneração. Os resultados obtidos nessa pesquisa mostraram que... / The fins of teleost fish have a capacity for rapid regeneration, which makes them a suitable biological model for in vivo investigation. Studies have shown that, when used over long periods, corticoids may slow down the healing process, thereby influencing re-epithelialization, neovascularization and collagen synthesis. As the fins of teleost fish contain a large amount of collagen, the aim of the present study was to investigate the effect of dexamethasone (an anti-inflammatory steroid glycocorticoid often used in the treatment of rheumatic diseases) during the regeneration process of the caudal fin of the carp (Cyprinus carpio). Two glass aquaria were used for each regeneration interval - one for the control group and another for the group treated with dexamethasone (Henrifarma) at a concentration of 20 mg/L. The caudal fins were amputated transversely and the fish remained in their respective aquaria until regeneration had occurred. Collections of regenerating fin tissue were performed at one, two, four, six, eight and ten days following amputation. The samples were processed for light microscopy and statistical analysis. The fins in the control group regenerated normally and grew at the expected rate in each time interval. The fins in the group treated with dexamethasone regenerated at a slower rate at each time interval. It is possible that dexamethasone affected the expression of the genes needed for the regeneration process. The results of the present study demonstrate delayed regeneration with dexamethasone at the concentration used, but not total inhibition of the process. Thus, the caudal fin proved to be a good model for the histological investigation of tissue regeneration and the toxic effect of this drug on this process. In order to gain a better understanding of the alterations in all phases of the regeneration process, histological analysis should be combined with... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-12-09T13:52:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-12-09T13:55:23Z : No. of bitstreams: 1 000870881_20170306.pdf: 367778 bytes, checksum: db82c4998c7d49050765cd4b14882f61 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-10T13:07:30Z: 000870881_20170306.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-10T13:08:15Z : No. of bitstreams: 1 000870881.pdf: 6408119 bytes, checksum: a00dbe5b7026255d78fde75fe5e150aa (MD5) / Estruturas tridimensionais (scaffolds) construídas por técnicas de impressão tridimensional vêm ganhando espaço em reconstrução e regeneração de tecidos, pois permitem a fabricação de scaffolds com formas complexas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar físico-química e biologicamente matrizes de poli (3-hidroxibutirato) (PHB), confeccionadas por impressão tridimensional via sinterização seletiva a laser (selective laser sinterization - SLS), funcionalizadas com fibroína da seda (FB), apatitas (HA) e/ou peptídeo de crescimento osteogênico (osteogenic growth peptide - OGP), com finalidade de regeneração óssea. Os resultados de caracterização demonstraram que a impressão via SLS produziu scaffolds de PHB com percentual de porosidade de 55,8±0,7% e com poros regulares de 500-700 µm. A adição de FB e HA mantiveram resultados de porosidade semelhantes e aumentaram a taxa de absorção de água do PHB no período inicial de 2 h. A incorporação de FB melhorou a resistência à compressão e o módulo de elasticidade, sendo este também melhorado por FB-HA. Nos ensaios in vitro observou-se uma boa adesão, espraiamento e proliferação celular em todos os grupos. Na avaliação indireta da precipitação de cálcio sobre as amostras, observou-se um melhor resultado no grupo FB-HA, principalmente em 3 dias. In vivo, os grupos experimentais falharam em estimular a osteogênese de contato, entretanto mantiveram a espessura da área de implantação, o que não ocorreu no grupo controle coágulo. Conclui-se que os scaffolds avaliados possuem algumas propriedades favoráveis a aplicação em regeneração óssea, entretanto alguns mecanismos de funcionamento dos mesmos in vivo, principalmente em longo prazo, ainda precisam ser entendidos e melhorados. / Three-dimensional structures (scaffolds) fabricated by three-dimensional printing techniques (3DP), have been widely used in tissues reconstruction and regeneration. The main advantage of that technique is the possibility of manufacturing scaffolds with complex shapes. The aim of this study was to perform physicochemical and biological characterization of three-dimensional matrices of poly (3-hydroxybutyrate) (PHB), made by 3DP via selective laser sintering (SLS), functionalized with silk fibroin (FB), apatites (HA) and / or osteogenic growth peptide (OGP), to favor bone regeneration. The results demonstrated that SLS 3DP produced PHB scaffolds with porosity percentage of 55.8 ± 0.7% with regular pores of 500-700 µm. The addition of HA and FB results in similar porosity and enhanced PHB water absorption rate, at the 2h timepoint. The incorporation of FB improved compressive strength and elastic modulus, which was also improved by FB-HA. In vitro tests showed good cell adhesion, spreading and proliferation in all. In the indirect evaluation of calcium precipitation a better result was observed in FB-HA group mainly in 3 days. In vivo experimental groups failed to stimulate contact osteogenesis. However, the scaffolds preserved the thickness of implantation area, which did not occur in the control clot group. It was concluded that the scaffolds evaluated in this study have some favorable properties for bone regeneration. However some of their action mechanisms in vivo, especially in long-term periods, still have to be better understood.

Made available in DSpace on 2015-06-25T02:05:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000471017-Texto+Completo-0.pdf: 5708318 bytes, checksum: 28730b4a87bc0d3ea819556c7b2b4dc6 (MD5) Previous issue date: 2015 / Lesions in bone tissue reach 15 million cases per year worldwide. Thus, a significant amount of bone tissue transplants have been performed in recent years. A promising alternative to bone graft is in the field of tissue engineering, which is based on the use of polymeric structures acting as support for hard tissue regeneration. The objective of this project was look for the association of the PLGA copolymer, to the bioceramic hydroxyapatite, to form a polymeric bioactive macroporous structure. The preparation was made through the PLGA dissolution in chloroform, followed by addition of sodium chloride and hydroxyapatite (porogenic agent). Molding of the samples was performed by compression in hydraulic press. After, was performed the leaching of the scaffolds, followed by treatment with NaOH. Finally the composites obtained were characterized by FEG - SEM, in order to analyze qualitatively the morphology, porosity and interconnectivity of the pores; the hydrophilicity of the surface was evaluated by wettability tests it was proved chemical treatment efficiency; in vitro hydrolytic degradation assays performed as a function of time demonstrate that the percentage of degradation of various types of scaffolds did not showed significant changes between 14 and 42 days. Hydrolytic degradation assays found yet that the fluid retention was higher in scaffolds chemically treated; compression tests evaluated the mechanical behavior of different types of scaffolds made. It was concluded then that the methodology used originated macroporous composites that may be applied in bone tissue engineering. / Lesões em tecido ósseo chegam a somar 15 milhões de casos por ano mundialmente. Diante disso, uma quantidade significativa de transplantes de tecidos ósseos tem sido realizada nos últimos anos. Uma alternativa promissora para enxertos ósseos está na área da engenharia de tecidos, que se baseia na utilização de estruturas poliméricas atuando como scaffolds para regeneração do tecido duro. O objetivo deste trabalho foi buscar a associação entre o copolímero PLGA e a biocerâmica hidroxiapatita com a finalidade de formar uma estrutura polimérica bioativa macroporosa. A confecção foi dada através da dissolução de PLGA em clorofórmio, seguida da adição de hidroxiapatita e cloreto de sódio (agente porogênico). A moldagem das amostras foi realizada por compressão em prensa hidráulica. Após, foi feita a lixiviação das amostras, seguida do tratamento com NaOH. Finalmente os compósitos obtidos foram caracterizados através de MEV-FEG, visando analisar qualitativamente a morfologia, a porosidade e a interconectividade dos poros; a hidrofilicidade das superfícies foi analisada por testes de molhabilidade em que foi comprovada a eficiência do tratamento químico; ensaios de degradação hidrolítica realizados em função do tempo revelaram que o percentual de degradação dos diferentes tipos de scaffolds não apresentou mudança significativa entre os tempos de 14 e 42 dias. O ensaio de degradação hidrolítica constatou ainda que a retenção de líquido fora maior em scaffolds tratados quimicamente; os ensaios de compressão avaliaram o comportamento mecânico dos diferentes tipos de scaffolds confeccionados. Concluiu-se, então, que a metodologia utilizada originou compósitos macroporosos que podem vir a ser aplicados na engenharia de tecido ósseo.

Orientador: Joni Augusto Cirelli / Banca: Ana Paula Faloni de Souza / Banca:Paulo Tambasco de Oliveira / Banca: Roberto Henrique Barbeiro / Banca: Elcio Marcantonio Junior / Resumo: Estruturas tridimensionais (scaffolds) construídas por técnicas de impressão tridimensional vêm ganhando espaço em reconstrução e regeneração de tecidos, pois permitem a fabricação de scaffolds com formas complexas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar físico-química e biologicamente matrizes de poli (3-hidroxibutirato) (PHB), confeccionadas por impressão tridimensional via sinterização seletiva a laser (selective laser sinterization - SLS), funcionalizadas com fibroína da seda (FB), apatitas (HA) e/ou peptídeo de crescimento osteogênico (osteogenic growth peptide - OGP), com finalidade de regeneração óssea. Os resultados de caracterização demonstraram que a impressão via SLS produziu scaffolds de PHB com percentual de porosidade de 55,8±0,7% e com poros regulares de 500-700 µm. A adição de FB e HA mantiveram resultados de porosidade semelhantes e aumentaram a taxa de absorção de água do PHB no período inicial de 2 h. A incorporação de FB melhorou a resistência à compressão e o módulo de elasticidade, sendo este também melhorado por FB-HA. Nos ensaios in vitro observou-se uma boa adesão, espraiamento e proliferação celular em todos os grupos. Na avaliação indireta da precipitação de cálcio sobre as amostras, observou-se um melhor resultado no grupo FB-HA, principalmente em 3 dias. In vivo, os grupos experimentais falharam em estimular a osteogênese de contato, entretanto mantiveram a espessura da área de implantação, o que não ocorreu no grupo controle coágulo. Conclui-se que os scaffolds avaliados possuem algumas propriedades favoráveis a aplicação em regeneração óssea, entretanto alguns mecanismos de funcionamento dos mesmos in vivo, principalmente em longo prazo, ainda precisam ser entendidos e melhorados. / Abstract: Three-dimensional structures (scaffolds) fabricated by three-dimensional printing techniques (3DP), have been widely used in tissues reconstruction and regeneration. The main advantage of that technique is the possibility of manufacturing scaffolds with complex shapes. The aim of this study was to perform physicochemical and biological characterization of three-dimensional matrices of poly (3-hydroxybutyrate) (PHB), made by 3DP via selective laser sintering (SLS), functionalized with silk fibroin (FB), apatites (HA) and / or osteogenic growth peptide (OGP), to favor bone regeneration. The results demonstrated that SLS 3DP produced PHB scaffolds with porosity percentage of 55.8 ± 0.7% with regular pores of 500-700 µm. The addition of HA and FB results in similar porosity and enhanced PHB water absorption rate, at the 2h timepoint. The incorporation of FB improved compressive strength and elastic modulus, which was also improved by FB-HA. In vitro tests showed good cell adhesion, spreading and proliferation in all. In the indirect evaluation of calcium precipitation a better result was observed in FB-HA group mainly in 3 days. In vivo experimental groups failed to stimulate contact osteogenesis. However, the scaffolds preserved the thickness of implantation area, which did not occur in the control clot group. It was concluded that the scaffolds evaluated in this study have some favorable properties for bone regeneration. However some of their action mechanisms in vivo, especially in long-term periods, still have to be better understood. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-03-15T02:01:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000454708-Texto+Completo-0.pdf: 503289 bytes, checksum: ad5f0c77d8fc1163a56cb76e1be4884d (MD5) Previous issue date: 2014 / In recent decades, tissue engineering techniques have been reported in the literature as an alternative to conventional autogenous grafts for bone defects and subsequent installation of dental implants, combining a material with the same biological properties of autogenous bone without its limiting factors. This technology requires a carrier for the cells, where hyaluronic acid, a natural glycosaminoglycan, appears to have suitable characteristics to carry out this role. It exerts various biological functions depending on its molecular weight, which can be classified as high (> 1000 kDa), low (from 50 to 1000 kDa) or very low (<50 kDa). Furthermore, there is the hyaluronidase, an enzyme that degrades hyaluronic acid into smaller fragments, influencing the cellular response. Thus, this study aimed to evaluate in vitro the influence of the enzyme hyaluronidase (HYAL) on the high hyaluronic acid (HA-HMW) and low molecular weight (HA-LMW) and their potential cytotoxicity on NIH - 3T3 cells. The MTT assay was performed analyzing cell viability of the following groups: (G1) Cells + HA-HMW; (G2) Cells + HA- LMW; (G3) Cells + HA-HMW + HYAL; (G4) Cells + HA-LMW + HYAL; (G5) Cells + HA-HMW + hydroxyapatite; (G6) Cells + HA-LMW + hydroxyapatite; (G7) Cells + HA-HMW + HYAL + hydroxyapatite; (G8) Cells + HA-LMW + HYAL + hydroxyapatite; (G9) Cells (positive control); (G10) Cells + hypochlorite (negative control). The cell viability for each group were as follows: (G1) 76,0%, (G2) 63,3%, (G3) 67,4%, (G4) 76,5%, (G5) 57,6%, (G6) 60,8%, (G7) 64,4%, (G8) 74,3%, (G9) 100% e (G10) 12,4%.It was found that all groups had significantly higher cell viability compared to the negative control. And although there was no significant difference between experimental groups, only the G1, G4 and G8 groups did not differ significantly from the positive control. Therefore, HA-HMW had better viability in the absence of enzyme hyaluronidase, although HA-LMW provided greater cell viability in the presence of the enzyme. Results indicated that the low-weight hyaluronic acid might be applicable for tissue engineering grafting techniques. / Nas últimas décadas, técnicas envolvendo engenharia tecidual têm sido reportadas na literatura como opção alternativa aos enxertos autógenos convencionais para correção de defeitos ósseos e posterior instalação de implantes dentários. Estas buscam basicamente um material que apresente as mesmas propriedades biológicas do osso autógeno sem seus fatores limitantes. Tal tecnologia necessita, entre outros componentes, de um scaffold para as células, onde o ácido hialurônico, um glicosaminoglicano natural, parece ter características adequadas para exercer este papel. Ele exerce funções biológicas diferentes dependendo do seu peso molecular, que pode ser classificado em alto (> 1000 kDa), baixo (de 50 a 1000 kDa) ou baixíssimo (< 50 kDa). Além disso, no organismo humano há a presença da hialuronidase, enzima que degrada o ácido hialurônico em fragmentos menores, elementos estes que possivelmente podem influenciar a resposta celular. Desta forma, este estudo buscou avaliar, in vitro, a influência da enzima hialuronidase (HIAL) sobre o ácido hialurônico de alto (AH-APM) e baixo peso molecular (AH-BPM), bem como seu possível potencial citotóxico sobre células da linhagem NIH-3T3.Para tal, foi realizado o teste de MTT analisando a viabilidade celular dos seguintes grupos: (G1) Células + AH-APM; (G2) Células + AH-BPM; (G3) Células + AH-APM + HIAL; (G4) Células + AH-BPM + HIAL; (G5) Células + AH-APM + Hidroxiapatita; (G6) Células + AH-BPM + Hidroxiapatita; (G7) Células + AH-APM + HIAL + Hidroxiapatita; (G8) Células + AH-BPM + HIAL + Hidroxiapatita; (G9) Células (controle positivo); (G10) Células + hipoclorito (controle negativo). A viabilidade celular média de cada grupo foi: (G1) 76,0%, (G2) 63,3%, (G3) 67,4%, (G4) 76,5%, (G5) 57,6%, (G6) 60,8%, (G7) 64,4%, (G8) 74,3%, (G9) 100% e (G10) 12,4%. Os resultados indicaram que todos os grupos apresentaram viabilidade celular significativamente superior ao controle negativo. E apesar de não haver diferença significativa entre os grupos experimentais, somente os grupos G1, G4 e G8 não diferiram do controle positivo. O AH-APM apresentou melhor viabilidade na ausência da enzima hialuronidase, enquanto que o AH-BPM proporciona uma melhor viabilidade celular na presença desta enzima.

Made available in DSpace on 2014-05-24T02:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000458211-Texto+Completo-0.pdf: 2390147 bytes, checksum: 88c6a01bcd87265c68297af0c6ea8e78 (MD5) Previous issue date: 2014 / Bioresorbable polymers have been used as scaffolds in tissue engineering, thus representing an important alternative for reconstruction of lesions and tissue losses. This study aimed to evaluate the in vivo performance of three-dimensional scaffolds made of polycaprolactone (PCL), by means of through a PCL implant on the subcutaneous tissues of rats’ back and calvaria, as well as the reaction of their kidneys, lungs and liver. The histological analysis of the bone repair process in calvaria showed the presence of newly formed bone growing towards the center of the defects. The formation of a thin fibrous capsule was observed in the tissues adjacent to the scaffold implanted on the back of all animals, with collagenous fibers involving the implant. As for events occurring in animals' kidneys, lungs and liver, there were no harmful tissue alterations in these organs nor the presence of inflammatory process, hyperplasia, metaplasia, dysplasia or hemorrhage. A quantitative analysis of the bone repair process was performed using histomorphometry and cone beam computed tomography (CBCT). Results showed that the newly formed bone grew towards the center of the defects.Statistical analysis revealed that the total area of new bone formation was greater in experimental defects at 21, 60 and 120 days, showing a statistically significant difference. In tomographic analysis found that new bone formation is more likely to occur in experimental defects, but with no statistically significant difference. Considering tomographic analysis as a new method for the assessment of new bone formation, the data obtained from this assessment could not be correlated with those obtained from histomorphometric analysis. Therefore, it can be concluded that PCL scaffolds produced on an additive manufacturing machine are biocompatible, non-cytotoxic and bioresorbable products that promote osteoconduction. PCL showed great potential for clinical use in the treatment of bone defects by increasing bone área and seems to be an appropriate biomaterial to be used in other studies aiming to elucidate issues related to this topic. Additionally, CBCT does not seem to be a useful tool in the evaluation of new bone formation of rat calvaria, which means that histomorphometric analysis is still the most appropriate method. / Polímeros biorreabsorvíveis vêm sendo utilizados como scaffolds na engenharia tecidual, destacando-se como alternativa para reconstrução de lesões e perdas teciduais. Neste estudo, avaliou-se o desempenho in vivo de scaffolds tridimensionais de polímero policaprolactona (PCL), através do implante do PCL nos tecidos subcutâneos do dorso e na calvária, bem como da reação dos órgãos rins, pulmões e fígado de ratos. A análise histológica qualitativa do processo de reparo ósseo nas calvárias mostrou neoformação óssea e que o osso neoformado cresceu em direção ao centro de defeitos. Nos tecidos adjacentes ao scaffold implantado no dorso, percebeu-se que em todos os animais houve formação de cápsula fibrosa fina, com fibras colágenas organizadas envolvendo o implante. Com relação aos eventos ocorridos nos rins, fígado e pulmões dos animais, não houve alterações teciduais danosas aos órgãos, tampouco a presença de processo inflamatório, hiperplasia, metaplasia, displasia ou hemorragia.A análise quantitativa do processo de reparo ósseo foi realizada através de histomorfometria e tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC). Após análise estatística, a área total de neoformação óssea em mm2 foi maior nos defeitos experimentais aos 21, 60 e 120 dias, com diferença estatisticamente significativa. Na análise tomográfica, percebeu-se uma tendência de maior neoformação óssea nos defeitos experimentais, mas sem diferença estatisticamente significativa. Considerando-se a análise tomográfica como uma nova metodologia para avaliação de neoformação óssea, os dados obtidos através dessa avaliação não puderam ser correlacionados com aqueles obtidos na análise histomorfométrica. Portanto, conclui-se que os scaffolds de PCL produzidos na plataforma experimental de manufatura aditiva são biocompatíveis, não citotóxicos, biorreabsorvíveis e promovem osteocondução. O PCL apresentou grande potencial de aplicação clínica nos defeitos onde se espera aumentar a área óssea e parece adequado como um biomaterial de escolha para outros estudos que elucidem as questões pertinentes. A TCFC não parece ser uma ferramenta útil na avaliação da neoformação óssea em calvária de ratos, de modo que a análise histomorfométrica permanece como método mais adequado.

Made available in DSpace on 2014-07-12T02:02:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459191-Texto+Completo-0.pdf: 819229 bytes, checksum: 3f5f2f0e1d369ad5b2e6c1504cd4c144 (MD5) Previous issue date: 2014 / The reposition of a lost osseous structure is challenging in oral rehabilitations involving osseointegrated implants. Tissue engineering techniques aiming reposition of lost calcified tissues has evolved in the last years as an alternative to the autologous bone graft, without the need of a donor site. Among the required techniques and biomaterials, the hyaluronic acid (HA) presents itself as promising alternative for tissue engineering. HA is present in the extracellular matrix of all living tissues, and also allows modifications in its structure, serving as a carrier for several compounds utilized in bone repair. Depending on its molecular weight, studies show that different cytotoxic effects might be observed. Thus, the present study evaluated, in vitro, the cytotoxicity of high and low molecular weight HA on NIH-3T3 cells, following the ISO 10993-12 test standards for cytotoxicity analysis. A MTT test was conducted with the following groups: (G1) cells + high molecular weight hyaluronic acid; (G2) cells + low molecular weight hyaluronic acid; (G3) cells + high molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G4) cells + low molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G5) cells (positive control); (G6) cells+ hypochlorite (negative control). The results show that most groups presented higher cellular viability when compared to the negative control and lower than the positive control group (p<0. 05). Group G1 presented no statistical difference when compared to the positive control (G5) (p<0. 05), indicating that high molecular weight HA might be applicable as a cell carrier for tissue engineering. / A reposição de base óssea perdida é um fator de grande complexidade nas reabilitações orais envolvendo implantes osseointegrados. A engenharia tecidual tem evoluído nos últimos anos por apresentar-se como uma alternativa ao enxerto ósseo autógeno, não exigindo um sitio doador de tecido para tal. Dentre as principais técnicas e biomateriais utilizados em engenharia tecidual, o acido hialurônico (AH) apresenta-se como um composto promissor como veículo celular. Presente na matriz extracelular de todos os tecidos vivos, ele permite sua modificação estrutural, maximizando seu potencial como veículo celular em reparos ósseos. Dependendo do seu peso molecular, estudos mostram diferentes efeitos citotóxicos podem ser verificados. Desta forma, este estudo procurou avaliar, in vitro, a citotoxicidade do AH de alto e de baixo peso molecular, sobre células da linhagem NIH-3T3, segundo o teste padrão da norma ISO 10993-12 para analise de citotoxicidade. Para isso, um teste de MTT foi realizado com o seguinte arranjo de grupos: (G1) Células + AH de alto peso molecular; (G2) Células + AH de baixo peso molecular; (G3) Células + AH de alto peso molecular + Hidroxiapatita; (G4) Células + AH de baixo peso molecular + Hidroxiapatita; (G5) Células (controle positivo); (G6) Células + hipoclorito (controle negativo). Os resultados mostram que todos os grupos apresentam viabilidade superior ao controle negativo e inferior ao controle positivo exceto o grupo G1, onde verificou-se ausência de diferença estatística entre este e o controle positivo. Resultados preliminares apontam para o emprego do AH de alto peso molecular como compatível para veículo celular em engenharia tecidual.