Este trabalho tem por objetivo a obtenção de nanofibras de blendas de policaprolactona (PCL), gelatina (GE), com a adição de hidroxiapatita (HA), através do processo de eletrofiação, a fim de mimetizar a matriz celular nativa (ECM). As nanofibras foram produzidas com o intuito de apresentar boas propriedades térmicas, mecânicas e de superfície, adequadas à utilização na área de engenharia de tecidos ósseos (ETO). Para obtenção de nanofibras com morfologia diferenciada, utilizou-se um coletor estacionário e um tambor rotatório, obtendo materiais com fibras alinhadas ou distribuídas aleatoriamente. Devido as características hidrofílicas das nanofibras de gelatina, foi efetuada a reticulação química nas nanofibras com este polímero após eletrofiação, utilizando o agente de reticulação hidrocloreto de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC). A reticulação mostrou-se efetiva, impedindo a dissolução das nanofibras em ambiente aquoso, comprovado pelo teste de intumescimento e solubilidade. As matrizes, de maneira geral, apresentaram dimensões em escala nanométrica, com presença de gotas em sua morfologia, dependendo da composição polimérica. O alinhamento das nanofibras ocasionou uma melhora nas propriedades mecânicas em relação as fibras com orientação aleatória, tornando o material mais rígido e resistente a tração. A eletrofiação de blendas permitiu a obtenção de fibras mais hidrofílicas. As propriedades térmicas demonstraram que as nanofibras produzidas são estáveis para utilização na temperatura de utilização médica. Os testes biológicos demonstram que as nanofibras com estruturas alinhadas e aleatórias obtidas permitiram a proliferação celular e a diferenciação osteogênica, apresentando potencial de serem utilizadas na engenharia de tecidos ósseos. / This work aims to obtain nanofibers by electrospinning technique with blends of polycaprolactone (PCL), gelatin (GE), and with the addition of hydroxyapatite (HA), in order to mimic a native cell matrix (ECM). Nanofibers were fabricated with the purpose of presenting good thermal, mechanical and surface properties, to be used in the area of bone tissue engineering (ETO). To obtain nanofibers with differentiated morphology, we used a stationary collector and a rotatory drum collector, obtaining materials with aligned or randomly fibers distributed. Due to the hydrophilic characteristics of the gelatin nanofibers, chemical crosslinking was performed in electrospun fibers containing this polymer with 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC). The crosslinking was effective, preventing the dissolution of the nanofibers in an aqueous environment, been proved by the swelling test and solubility. The scaffolds, in general, presented dimensions in nanometric, with presence of beads in their morphology, depending on the polymer composition. The alignment of the nanofibers caused an improvement in the mechanical properties compared with fibers in random orientation, making the material more rigid and resistant to traction. Electrospun blends allowed the production of more hydrophilic fibers. Thermal properties have demonstrated that the nanofibers produced are stable for use at the temperature of medical use. Biological assays demonstrate that both random and aligned nanofibers structures, allowed the cell proliferation and osteogenic differentiation, presenting potential to be used in tissue engineering.

A procura de um método que permita um melhor resultado na anastomose de um nervo completamente seccionado é antiga. Há muitos anos a técnica, dita convencional, para aproximação dos cotos afastados do nervo lesado, é realizada com pontos de fios microcirúrgicos. Mais recentemente, a utilização da cola de fibrina tem permitido a adesão de tecidos, como pele, fáscia e outras estruturas anatômicas. O uso da cola de fibrina, na aproximação das extremidades nervosas, tem sido propagada pela indústria como um fato incontestável. No entanto, somente com a realização de estudos comparativos clínicos e laboratoriais tornou-se possível comparar a eficácia da cola de fibrina como agente de reconstituição em lesões de nervos periféricos. Com o objetivo de comprovar essa afirmação foi realizado um trabalho através de uma mensuração nas bainhas de mielina de cotos regenerados de nervos entre diferentes tipos de anastomose nervosas em nervo isquiático de ratos da raça Wistar. Com esse mesmo escopo, foi mensurado o número de axônios em regeneração após o uso dessa cola. Foi utilizada uma amostra de 35 ratos divididos em 03 grupos (A, B e C). No grupo A, 25 ratos foram submetidos à cirurgia com o uso da cola de fibrina para a anastomose nervosa. No grupo B, 05 ratos foram submetidos ao mesmo procedimento; entretanto, ao reparo nervoso acrescentou-se a utilização de dois pontos opostos de mononylon 9-0, usando-se cola de fibrina no seu interior. No terceiro grupo (C), 05 ratos foram submetidos a neurorrafia com 6 a 8 pontos de mononylon 9-0 sem auxílio da cola de fibrina (anastomose nervosa convencional). Os animais foram submetidos a um novo procedimento após 90 dias, quando o nervo isquiático tratado foi retirado e encaminhado para o estudo. Após esse procedimento, os animais foram sacrificados. Cabe esclarecer que os espécimens foram submetidas a uma preparação histológica, sendo avaliados. Para tanto, foi realizada uma mensuração da espessura média da bainha de mielina das fibras regeneradas. Também foi realizada uma medição do número de axônios regenerados em um milímetro quadrado. Com base nesses achados, foram comparados os resultados. / The search for a method that allows better results for the anastomosis of a completely sectioned nerve has been pursuitted from a long time. From many years the conventional technique using microsurgical sutures has been used to bring near the separated stumps of the injured nerve. Actually, the fibrin glue use is allowing tissue adhesion of the skin, fascia and other anatomical structures. The fibrin glue use for the nervous edges approach, have been propagated by the industries as an incontestable fact. Trying to verify this affirmation an evaluation through the myelin sheath was made along regenerated nerve edges between different techniques of anastomosis of an injured sciatic nerve from Wistar. Was also measured the axon regeneration after this glue application. A 35 rats sample was separated in 03 groups (A, B and C). In group A 25 rats were submitted to nervous anastomosis surgery using fibrin glue. In group B, 05 rats were submitted to the same procedure; however, during nervous repair, two opposite stitches of mononylon 9-0 were added with inward fibrin glue. In group C 05 rats were submitted to neuroraphy with 6-8 stitches of mononylon 9-0 without fibrin glue use (conventional nervous anastomosis). The animals were submitted to a new procedure, 90 days after the initial surgery, to remove and lead to additional study the healed portion of the sciatic nerve. After this procedure the animals were sacrificed. These specimens were submitted to histological preparation and evaluated. The myelin sheath thickness average of the regenerated fibers was measured. The number of regenerated axons by (milimetro quadrado) was also measured. Using these measures a comparison between the results were made.

A insuficiência cardíaca (IC) é uma síndrome clínica complexa com diversas etiologias e elevada prevalência. No infarto agudo do miocárdio, a oclusão aguda da artéria coronária resulta em alterações complexas da arquitetura ventricular. Estas alterações começam a se estabelecer imediatamente após a oclusão arterial, progredindo por várias semanas após o dano isquêmico inicial. O processo inflamatório e a liberação de citocinas fazem parte da resposta a injuria sofrida pelo tecido e desempenha um papel importante no período pós-infarto. Dentre os múltiplos fatores que contribuem para a progressão do remodelamento ventricular, a participação das espécies ativas de oxigênio (EAOs) neste processo é de extrema relevância. Diante deste quadro, novas estratégias terapêuticas têm sido propostas e a terapia celular surge como uma alternativa viável promissora objetivando, em última análise, o reparo cardíaco. A hipótese inicial de que as células-tronco adultas poderiam ter efeito regenerativo do tecido miocárdio tem sido revisada e hoje, é cada vez mais aceito e reconhecido que as células-tronco adultas tem pouca ou nenhuma capacidade regenerativa e que os seus efeitos benéficos envolvam ações parácrinas sobre o tecido hospedeiro. Neste estudo avaliamos o perfil oxidativo e sua correlação com o processo inflamatório e função cardíaca, precocemente, 48 horas pós-infarto agudo do miocárdio (IAM). Analisamos também estes mesmos parâmetros no tecido cardíaco de animais infartados que receberam tratamento com terapia celular. Nosso estudo sugere que o comprometimento da função ventricular precocemente pós-IAM parece se associar com um desequilíbrio do estado redox e este por sua vez interage com os processos iniciais do fenótipo de remodelamento ventricular. A terapia celular, com células derivadas da medula óssea num modelo experimental de 48 horas pós-IAM, foi associada com redução da hipertrofia ventricular e menor secreção de citocinas inflamatórias sugerindo ações parácrinas das células, nesta janela temporal.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:14:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4091_1.pdf: 564155 bytes, checksum: 23f9678f89caac2656768ed02ca44583 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Racional: A apresentação clínica da doença celíaca é variável. Devido ao conhecimento atual de que as lesões da mucosa intestinal podem ocorrer em placa ou mesmo não acometer toda a extensão da mucosa, é possível que pacientes com sintomas gastrintestinais discretos possam ser portadores de doença celíaca e mereçam investigação diagnóstica para essa doença. Objetivo: Determinar as freqüências de sorologia e histologia intestinal positivas para doença celíaca em crianças e adolescentes com sintomas gastrintestinais discretos para doença celíaca e descrever os sintomas presentes nos pacientes com sorologia positiva. Métodos: Foi desenvolvido um estudo descritivo com 147 crianças acima de dois anos de idade e adolescentes atendidos nos Ambulatórios de Pediatria e Gastroenterologia Pediátrica do Hospital das Clínicas e Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira que apresentavam sintomas gastrintestinais discretos para doença celíaca: dor e distensão abdominal, constipação e vômito. Esses pacientes realizaram teste sorológico, com aferição do anticorpo antitransglutaminase tecidual humana, considerando-se positivo valor > 10 U/ml. Aqueles com sorologia positiva foram submetidos à biópsia intestinal por via endoscópica e retirada de quatro fragmentos de mucosa. A análise histológica foi realizada conforme os critérios de Marsh. Resultados: A frequência de anticorpo antitransglutaminase positivo nos pacientes pediátricos com sintomas gastrintestinais discretos para doença celíaca foi de 4,1% (6/147). A histologia intestinal foi positiva (critério de Marsh III) em um dos seis pacientes com sorologia positiva (0,7%; 1/147). A maioria dos pacientes com anticorpo antitransglutaminase tecidual humana positiva apresentava mais de um sintoma, com exceção do paciente no qual foi observada atrofia vilositária na histologia da mucosa intestinal, no qual o único sintoma foi distensão abdominal. Conclusões: O anticorpo antitransglutaminase tecidual humana foi positivo em 4,1% dos pacientes com sintomas gastrintestinais discretos para doença celíaca. A histologia intestinal alterada, conforme o critério de Marsh III, foi observada em um paciente com sorologia positiva. Pacientes com sintomas gastrintestinais discretos devem realizar triagem sorológica para doença celíaca, com indicação de acompanhamento para os casos positivos, mesmo na ausência de alteração histológica que confirme a doença, a fim de realizar avaliação periódica

Submitted by Nathália Neves (nathalia.neves@ufpe.br) on 2015-03-04T18:40:35Z No. of bitstreams: 2 soraia_lins_definitivo.pdf: 1705893 bytes, checksum: 95a7ad9f3f3ee3312d93718df29bfa28 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T18:40:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 soraia_lins_definitivo.pdf: 1705893 bytes, checksum: 95a7ad9f3f3ee3312d93718df29bfa28 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Palythoa caribaerum é um zoantídeo abundante no litoral pernambucano que produz um muco, popularmente conhecido como “baba-de-boi”, capaz de proteger a colônia da dessecação. Estudos demonstram relevante ação microbiológica, hemaglutinantes e importante ação inibitória da hemorragia induzida por peçonhas de jararacas. Ademais, relatos populares descrevem a sua ação cicatrizante. Desta maneira, este trabalho visa avaliar a ação cicatrizante de extratos orgânicos do muco produzido pelo zoantídeo Palythoa Caribaeorum em ratos Wistar e investigar os componentes destes extratos através de uma abordagem fitoquímica. Para tal proposta o muco foi coletado na Praia de Suape localizada no litoral sul do estado de Pernambuco. As amostras foram concentradas por centrifugações e liofilizadas. Para os estudos fitoquímicos, o liófilo foi submetido à extração em metanol, n-butanol, acetato de etila e água e em seguida analisado por cromatografia em camada delgada. Para os ensaios de cicatrização, o material liofilizado foi submetido à extração a frio em etanol (85%) e em seguida o extrato foi incorporado em formulações semi-sólidas tipo gel de Natrosol®. O tratamento tópico foi realizado diariamente após o procedimento cirúrgico utilizando 0.04g de extrato/1g de gel e as áreas das lesões foram aferidas com um paquímetro digital. Em tempos pré-determinados (3, 7 e 14 dias) os animais foram sacrificados, as áreas das lesões removidas, fixadas e processadas para análises histológicas. Os resultados evidenciaram que a cada 1g/ml de amostra bruta liofilizada, havia uma concentração de proteínas totais de 1,857 ± 0,05 mg/ml no liofilizado, 0,493 ± 0,004 mg/ml no extrato etanólico, 1,074 mg/ml ± 0,013 mg/ml no extrato aquoso metanólico, 0,982 ± 0,027 mg/ml no extrato aquoso final e 0,718 ± 0,026 mg/ml no extrato metanólico. Após estudo fitoquímico foi observada a presença de terpeno no extrato acetato etílico e uma marcante presença de açúcares redutores nos extratos aquosos, metanólico, n-butanólico e etanólico. Os resultados demonstraram negativos para proantocianidinas, flavonoides e ácido gálico. O estudo de reparo tecidual com formulações semi-sólidas contendo extrato etanólico revelou a presença de crosta, aumento da proliferação fibroblástica e vascular, além de evidente reepitelização e colagenização ao longo do tratamento. Assim, o extrato do muco do Palythoa caribaeorum demonstrou ser capaz de auxiliar o reparo tecidual em feridas cutâneas aberta em ratos Wistar.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418546-Texto+Completo-0.pdf: 3263858 bytes, checksum: 98405799e09a5518c35fdb38c15ba169 (MD5) Previous issue date: 2009 / Tissue engineering and regeneration involves the use of multipotent precursor cells associated with biomaterials that are capable of providing these cells with a threedimensional environment similar to the extracellular matrix found in living organisms. The objective of this study was to enhance a hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) hydrogel with two scaffold properties, via independent processes, so as to produce a hydrogel capable of being molded or favorable for three-dimensional cell adhesion. Previously described methods were employed to develop effective elastic (moldable) properties through the synthesis of silane on HPMC (Si-HPMC). This synthesis caused the hydrogel to acquire a gelatin state, moldable according to the defect to be corrected, as a result of pH-controlled auto-cross-linking. In a parallel experiment, following another trend in the development of hydrogel scaffolds, HPMC was synthesized with RGDS (arginine-glycine-aspartic acid-serine) adhesion peptides through esterification (RGDS-HPMC). This process provided the hydrogel with adhesion sites, aimed at allowing its interaction with cells in a three-dimensional environment. Next, the viability of human adipose-derived adherent stromal (hADAS) cells cultured in two-dimensional environments in the presence of pure HPMC, Si-HPMC, and RGDS-HPMC hydrogels was tested to assess cytotoxicity (MTT assay – ISO 10993-5). A comparison was performed between the groups and also with negative (NC) and positive controls (PC) after incubation for 24, 48 and 72 hours. No impact was recorded on cell viability (% MTT activity) at the three incubation times with any of the hydrogels when compared to PC (p < 0. 001). Cells cultured in contact with hydrogels showed viability results similar to those of NC. Despite being nontoxic in contact with twodimensional cell cultures, three-dimensional cytotoxicity tests should be performed to confirm the effectiveness of Si-HPMC and RGDS-HPMC hydrogels as suitable scaffolds for use in tissue engineering and regeneration. / A regeneração e engenharia de tecidos passam pela aplicação de células precursoras multipotentes associadas a biomateriais, os quais devem oferecer a elas um ambiente tridimensional análogo à matriz extracelular existente nos organismos vivos. Aprimorar um hidrogel de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), agregando a ele duas funções características de scaffolds, isto é, ser moldável ou favorável à adesão celular tridimensional, para o uso em regeneração e engenharia de tecidos foi a intenção do presente estudo. O desenvolvimento de uma propriedade moldável foi obtido baseado em experiências da literatura que citam a síntese de HPMC com silano (HPMC-Si). Esta síntese permitiu que o hidrogel assumisse o aspecto de gelatina, através de autorreticulação em função do pH, moldável de acordo com o defeito a ser corrigido. Paralelamente, seguindo outra tendência no desenvolvimento de scaffolds compostos por hidrogéis, sintetizou-se HPMC com peptídeos R-G-D-S (arginina- glicina- ácido aspártico- serina), através de reação por esterificação. Isto conferiu ao hidrogel sítios de adesão, visando a sua interação com células dentro de um contexto tridimensional.A partir das sínteses, avaliou-se a viabilidade de células aderentes adiposoderivadas humanas (CAADh), cultivadas em 2D na presença dos hidrogéis HPMC pura, HPMC-Si e HPMC-RGDS, para se determinar a citotoxicidade dos mesmos (ensaio MTT – de acordo com a ISO 10993-5), comparando-os entre si e com grupos-controle negativo (CN) e positivo (CP), em 24, 48 e 72h. Os três hidrogéis presentes nas culturas não interferiram na viabilidade das células (% de atividade MTT), durante os 3 momentos observados, quando comparados com o grupo CP (P< 0,001). Ao mesmo tempo, as células cultivadas em contato com os géis demonstraram viabilidade semelhante ao grupo CN. Entretanto, ainda que sejam atóxicos em contato com culturas de células em monocamada, testes de citotoxicidade em 3D devem confirmar a efetividade dos hidrogéis aprimorados HPMC-Si e HPMC-RGDS como scaffolds aplicáveis em regeneração e engenharia de tecidos.

Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Banca: Mabel Mariela Rodríguez Cordeiro / Banca: Bruno das Neves Cavalcanti / Banca: Renata de Azevedo Canevari / Banca: Márcia Carneiro Valera Garakis / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a função da via de sinalização Wnt/β- catenina através dos receptores LRP6 e Frizzled6 na diferenciação de células-tronco de polpa dental de dentes permanentes (DPSC) em células endoteliais. DPSC foram transduzidas com marcadores eGFP e vetores lentivirais shRNA (LRP6, Frizzled6 ou vetor vazio - controle) para os experimentos. Os testes in vitro avaliaram a expressão de GSK3-β e β- catenina por western blot na presença de rhWnt1 e rhVEGF165 e de VEGF e CXCL-8 (IL-8) por ELISA. A expressão de marcadores endoteliais (western blot e PCR) e formação de túbulos capilares foram analisados após a diferenciação endotelial das DPSCs. In vivo, fatias dentárias/matrizes condutivas semeadas com DPSCs-shRNA foram implantadas em subcutâneo de dorso de camundongos imunodeprimidos por 28 dias e o número de vasos sanguíneos foi determinado por imunohistoquímica para eGFP e coloração por HE. β-catenina ativa foi mais expressa em shRNA-LRP6 e shRNA-Frizzled6 que nas células controle, e sua expressão aumentou com a suplementação com rhVEGF165 e rhWnt1. A expressão de GSK3-β fosforilado foi menor, porém também aumenta ou permanece estável com rhVEGF165 ou rhWnt1. Quanto à expressão de VEGF, em shRNA-Frizzled6 foi maior que nas células controle e em shRNA-LRP6 (p<0,05), enquanto que a expressão de IL8 foi menor em shRNA-LRP6, diferindo estatisticamente das outras células. A expressão dos marcadores endoteliais CD31 e VEGFR2 diminuiu nas células shRNA-LRP6, enquanto que em shRNAFrizzled6 a expressão de VEGFR2 foi aumentada. A formação de túbulos capilares de shRNA-Frizzled6 e shRNA-LRP6 foi menor quando comparado ao controle, porém shRNA-Frizzled6 obteve uma tendência de aumento na proliferação de capilares em 144h. In vivo, DPSC-shRNALRP6 apresentou menor número de capilares formados quando comparados com as outras duas... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the function of Wnt/β-catenin signaling through LRP-6 and Frizzled-6 receptors in the differentiation of dental pulp stem cells from permanent teeth (DPSC) into endothelial cells. DPSC were transduced with EGFP-tagged lentiviral shRNA vectors (LRP6, Frizzled6 or empty vector - control) for experiments. In vitro assay evaluated GSK3-β and β-catenin expression by western blot in rhWnt1 and rhVEGF165 presence, and VEGF and CXCL-8 (IL-8) expression by ELISA. Endothelial markers expression (western blot and PCR) and tube formation were analyzed after endothelial differentiation of DPSCs. In vivo, tooth slices/scaffolds seeded with transduced DPSCs were implanted subcutaneously in back of immunodefficient mice and blood vessels were counted per immunohistochemistry for eGFP and HE staining. Active β- catenin was more expressed in shRNA-LRP6 and shRNA-Frizzled6 than in control cells, and increased with rhVEGF165 and rhWnt1 supplementation. Phosphorylated GSK3-β expression was lower, however also increased or maintained with rhVEGF165 or rhWnt1. VEGF expression was higher in shRNA-Frizzled6 than in control and shRNA-LRP6 (p<0,05), IL8 expression was lower in shRNA-LRP6, with statistically difference of the others cells. Endothelial markers CD31 and VEGFR2 expression decreased in shRNA-LRP6, but VEGFR2 expression increased in shRNAFrizzled6. shRNA-Frizzled6 and shRNA-LRP6 tube formation was lower when compared to control, however shRNA-Frizzled6 had tendency to increase proliferation in 144h. In vivo, shRNA-LRP6 showed fewer blood vessels formed than other cells (p<0,05). Collectively, the results of this study suggest that Wnt/β-catenin signaling regulates endothelial differentiation of DPSC through LRP6 / Doutor

Orientador: Fernando Zambuzzi Willian / Resumo: Artigo 1 Dos transplantes intestinais convencionais à Engenharia de Tecidos: estado da arte Resumo O intestino delgado é responsável pela realização de múltiplas funções, incluindo motilidade, digestão e absorção. Nos distúrbios gastrointestinais, algumas dessas funções são prejudicadas ou perdidas. A ressecção do segmento doente é uma abordagem comum. No entanto, os pacientes sofrem de complicações e de baixa qualidade de vida. Substituições funcionais são, portanto, necessárias para restaurar, reparar ou substituir partes danificadas do intestino. A Engenharia de Tecidos e a Medicina Regenerativa fornecem uma abordagem alternativa para reconstruir diferentes segmentos do trato gastrointestinal. Os desafios são grandes e a área é extremamente promissora. Artigo 2 Avaliação e caracterização de scaffolds de matriz extracelular para aplicações na Engenharia de Tecidos do trato gastrointestinal Resumo Várias estratégias têm sido exploradas para aumentar o número de enxertos de intestino delgado para transplantes e, principalmente, para diminuir as taxas de rejeição deste órgão transplantado. Avanços recentes na Medicina Regenerativa estão fornecendo novas abordagens para os estudos de reparação ou substituição funcional do intestino afetado, seja por traumas ou por doenças. Neste contexto, a Engenharia de Tecidos pode ser uma opção para produzir scaffolds biocompatíveis para a produção de segmentos de intestino delgado em laboratório. Desta forma, o objetivo deste estudo foi ava... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: From conventional intestinal transplants to Tissue Engineering: state of the art ABSTRACT The small intestine is responsible for performing multiple functions including motility, digestion and absorption of food and nutrients. In gastrointestinal disorders, some of these functions are impaired or lost. Resection of the diseased segment is a common approach; however, patients suffer from complications and poor quality of life. Functional replacements are therefore necessary to restore, repair or replace damaged parts of the gut. Tissue Engineering and Regenerative Medicine provide an alternative approach to reconstruct different segments of the gastrointestinal tract. There are many challenges and the research field is extremely promising. Evaluation and characterization of extracellular matrix scaffolds for applications in Tissue Engineering of the gastrointestinal tract ABSTRACT Several strategies have been explored to increase the number of small bowel grafts intended for transplants and, mainly, to decrease the rejection rates of this transplanted tissue. Recent advances in Regenerative Medicine are providing new approaches for studies of functional repair or replacement of the affected bowel, whether by trauma or disease. In this context, Tissue Engineering has become an option to produce biocompatible scaffolds in order to produce segments of the small intestine in the laboratory, mainly through the application of ex-vivo tissue decellularization methodologies. Thus, the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Estima-se, que, no Brasil, ocorram cerca de um milhão de vítimas de queimaduras por ano, e mesmo com a dinâmica de inovações na área da saúde, a reparação deste tipo de lesão tecidual, permanece um grande desafio. Os queimados tendem a contrair infecções sistêmicas, as quais poderão levar a óbito, se não houver o tratamento adequado ao paciente. Desta forma, são necessários cuidados extremos nas etapas que envolvem este complexo reparo tissular. Diante das dificuldades na substituição ou regeneração de órgãos ou tecidos lesionados, surgiu um campo interdisciplinar chamado de engenharia de tecidos, com foco no estudo para o desenvolvimento de suportes tridimensionais, constituídos de materiais sintéticos ou naturais, onde são cultivadas células do próprio paciente, para posteriormente serem reinseridas reparando tecidos ou substituindo órgãos por inteiro. A quitosana é um dos biopolímeros mais utilizados hoje na área de engenharia de tecidos, devido a sua capacidade de agir de forma significativa nas três fases que envolvem a cicatrização de queimaduras, sendo elas: a fase inflamatória, a fase proliferativa e a fase reparadora, e por sua alta ação bacteriostática e fungistática. Diante das propriedades já existentes da quitosana, o objetivo desta pesquisa foi o estudo para intensificá-las, através do aumento do seu grau de desacetilação e modificando-a para uma escala nanométrica aumentando assim sua área superficial. Para isso, a quitosana foi submetida a meio altamente alcalino com variação de temperatura e variação do tempo de reação, utilizando a ferramenta estatística fatorial completo 23. Após a obtenção das amostras desacetiladas, foi verificado, através dos espectros obtidos por espectroscopia na região do infravermelho, que os maiores valores de grau de desacetilação ocorreram utilizando os níveis máximos em todos os fatores envolvidos na reação. Para analisar a cinética da reação e confirmar as informações obtidas do fatorial 23, foi feito um novo planejamento fatorial 22, fixando o tempo de seis horas de reação, e no decorrer deste tempo foram retiradas onze alíquotas, para análise de seus graus de desacetilação (GD). O padrão de resultados dos experimentos permitiu a aplicação de um modelo matemático que representou a realidade do que ocorreu durante a reação, sendo este o modelo do núcleo não reagido. Posteriormente, a quitosana com alto grau de desacetilação foi submetida ao método de ultrassom e pelas análises do diâmetro das partículas, potencial zeta e índice de polidispersão, foi possível verificar que a quitosana após ser submetida ao ultrassom e no pH adequado, foi possível atingir partículas em escala nanométrica. / It is estimated that in Brazil about one million burn victims occur per year, and even with the dynamics of innovations in the health area, the repair of this type of tissue injury, remains a great challenge. Burns tend to contract systemic infections, which can lead to death if the patient is not adequately treated. In this way, extreme care is required in the steps involved in this complex tissue repair. Faced with difficulties in the replacement or regeneration of injured organs or tissues, an interdisciplinary field called tissue engineering has emerged, focusing on the study for the development of three-dimensional supports, consisting of synthetic or natural materials, where the patient\'s own cells are cultured, subsequently reinserted by repairing tissues or replacing whole organs. Chitosan is one of the most widely used biopolymers nowadays in the field of tissue engineering, due to its capacity to act in a significant way in the three phases that involve the healing of burns, namely: inflammatory phase, proliferative phase and repair phase, and for its high bacteriostatic and fungiostatic action. In view of the existing properties of chitosan, the objective of this research was to intensify them by increasing its degree of deacetylation and modifying it to a gauge scale, thus increasing its surface area. For this, chitosan was submitted to a highly alkaline medium with temperature variation and reaction time variation, using the complete factorial statistical tool 23. After obtaining the deacetylated samples, it was verified by spectroscopy in the infrared region, that the highest values of deacetylation degree occurred after using the maximum levels in all factors involved in the reaction. In order to analyze the kinetics of the reaction and to confirm the information obtained from factorial 23, a new 22 factorial design was made, fixing the time of six hours of reaction, during which eleven aliquots were taken for analysis of their degree of desacetylation (GD). The pattern of results of the experiments allowed the application of a mathematical model that represented the reality of what occurred during the reaction, being this the model of the shrinking core model. Subsequently, the chitosan with a high degree of deacetylation was subjected to the ultrasound method and the analysis of particle diameter, zeta potential and polydispersion index allowed to verify that chitosan after being submitted to ultrasound at the appropriate pH achieved particles in nanometer scale.

O reparo tecidual é um estado dinâmico que compreende diferentes processos, entre eles, inflamação, proliferação e remodelação, sendo que cada fase apresenta células e funções específicas. O LED é uma fonte de luz que tem sido utilizada na modalidade fototerapêutica no processo de cicatrização de feridas. A própolis também apresenta características em sua composição que favorece o reparo cicatricial. O presente estudo utilizou como terapias o LED, a própolis e seus usos associados, com o objetivo de compreender a ação desses diferentes tratamentos na resposta inflamatória induzida considerando a cinética do infiltrado inflamatório. O modelo experimental consistia na indução de ferida cirúrgica no dorso de 40 camundongos. Os animais foram divididos em 4 grupos: Controle, LED, Própolis e LED e Própolis, todos apresentaram subgrupos com animais sacrificados aos sete dias e quatorze dias após indução da lesão. A avaliação da histomorfometria foi realizada através de imagens capturadas e avaliadas por sistema de captura de imagens. Os achados da análise nos permitiram concluir que o LED isoladamente tem atividade biomoduladora positiva sobre o número de fibrócitos/fibroblastos e na neovascularização, no entanto, age como antiinflamatório sobre o infiltrado de células do sistema imune. O tratamento isolado com própolis age como proinflamatorio e não apresenta efeito estimulador na proliferação de fibrócitos/fibroblastos, determinando, porém aumento de colágeno e neovascularização enquanto inibe o aumento de SFA. O uso concomitante da própolis e LED atuou como agente antiinflamatório, além de exacerbar a ação do LED na produção de colágeno e na neovascularização.