Responsáveis pela produção dos gametas masculinos e pela biossíntese de hormônios essenciais à função reprodutiva masculina, os testículos requerem uma ação hormonal orquestrada para regular seu desenvolvimento e metabolismo, a fim de desenvolver testículos adultos férteis. Três hormônios vêm sendo descritos como indispensáveis para a regulação da fisiologia testicular: FSH, insulina e IGF-1. A sinalização hormonal mediada por receptores de membrana é essencial para a regulação de diversas funções celulares. A maneira como cada interação entre ligante e receptor produz o seu próprio padrão específico de regulação da função celular é uma questão fundamental na biologia. A grande maioria das ações hormonais se dá através da ativação de vias de sinalização intracelular, as quais direcionam a fisiologia celular de acordo com as necessidades dos tecidos e órgãos. O presente trabalho tem como objetivo investigar o envolvimento da via da PI3K/PKB nas ações da insulina e do IGF-1 sobre o potencial de membrana e os transportes de cálcio, aminoácidos e glicose em células de Sertoli de ratos imaturos. Buscamos ainda, identificar os efeitos do FSH e do IGF-1 sobre o metabolismo de células de Sertoli humanas cultivadas in vitro, através da análise do consumo e produção de metabólitos, da atividade da lactato desidrogenase (LDH) e da expressão de proteínas relacionadas ao metabolismo dessas células. Os efeitos estimulantes da insulina e do IGF-1 sobre a captação de cálcio e sobre o transporte de aminoácidos e glicose foram completamente inibidos pela ação do wortmannin, bloqueador da PI3K. O que indica que ambos os hormônios se valem dessa via de sinalização para regular o metabolismo das células de Sertoli de ratos imaturos. Em células de Sertoli humanas, o IGF-1 foi capaz de estimular a produção de lactato por essas células através do aumento da atividade da LDH, enquanto o FSH não apresentou qualquer efeito. Concluímos, que a via de sinalização PI3K/PKB é um importante meio de regulação hormonal do metabolismo das células de Sertoli de ratos imaturos utilizado por FSH, insulina e IGF-1, gerando despolarização da membrana pelo influxo de cálcio e consequente aumento no transporte de aminoácidos e glicose. Entretanto, em células de Sertoli humanas adultas, o IGF-1 parece ser um importante regulador do metabolismo celular, embora o FSH, a exemplo do que acontece em testículos de ratos adultos, tem pouco ou nenhum efeito sobre o metabolismo dessas células. Mais estudos são necessários para identificar as vias de sinalização pelas quais o IGF-1 regula o metabolismo das células de Sertoli.

MARTINS, Jorge André Matias. Avaliação da biometria testicular, epididimal e de glândulas sexuais acessórias e correlações entre características biométricas e histológicas em carneiros deslanados sprd. 2006. 56 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Zootecnia, Fortaleza-CE, 2006. / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-01T12:33:32Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_jammartins.pdf: 532644 bytes, checksum: 997a7780ea614be6ad84b2772b07b79a (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-01T12:33:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_jammartins.pdf: 532644 bytes, checksum: 997a7780ea614be6ad84b2772b07b79a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T12:33:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_jammartins.pdf: 532644 bytes, checksum: 997a7780ea614be6ad84b2772b07b79a (MD5) Previous issue date: 2006 / The present study was conducted to evaluate aspects of the reproductive tract of crossbred rams raised in the semi-arid region of the Brazilian Northeast. Correlations between measurements of the testes, epididymis and accessory sex glands and variables related to the spermatogenic process were also determined. Data were obtained from 19 animals slaughtered at the approximate age of 60 weeks. Seminiferous tubules were studied with regard to volume, length and height and the population of Sertoli and germ cells. Associations between variables were estimated by Pearson’s method (p < 0.05) and linear regression analysis using StatView 5.0 software (SAS, 1998). Significant correlations were found among all testis measurements (weight, length, width and volume) and other aspects of the reproductive trait, such as length of the cauda epididymis (CCauEp; r = 0.66 to 0.68) and weight of the accessory sex glands (AG; r = 0.68 to 0.72). Weight of AG was also associated with epididymal weight and CCauEp (r = 0.56 and 0.70, respectively), suggesting the existence of a synchronized development of the male reproductive trait. Testis width (TW) represented the variable with the most significant correlations with testis weight, length and volume (r = 0.88; 0.87 and 0.94). Moreover, regression model allowed the empirical estimate of testis volume (TV) based on testis width: TV = - 260.17 + 68.479 x TW (R² = 0.95). This characteristic (TW) was highly correlated with important aspects of gonad histology, such as volume of the seminiferous tubules (r = 0.96), number of round spermatids per testis (r = 0.89) and daily production of round spermatids (r = 0.89). Linear regression models with high coefficients of determination (R²) allowed the estimation of histological parameters based on testis width. In conclusion, the present study shows, for the first time, information about the weight of accessory sex glands in crossbred rams. It was also observed that animals with larger testes had larger epididymis and accessory sex glands and greater quantitative estimates of the spermatogenesis. Testis width should be useful for selection of sires because it is of easy measurement. / O objetivo deste estudo foi avaliar a biometria de partes do trato reprodutor de ovinos deslanados sem padrão racial definido (SPRD) criados no semi-árido nordestino, e correlacionar os dados biométricos testiculares, epididimais e de glândulas sexuais acessórias com variáveis associadas ao processo espermatogênico. Os dados biométricos foram obtidos a partir dos testículos, epidídimos e das glândulas sexuais acessórias de 19 animais abatidos em torno de 60 semanas de idade. O parênquima testicular foi avaliado quanto ao diâmetro, volume e comprimento dos túbulos seminíferos, altura do epitélio germinativo e população de células e Sertoli e germinativas. Foram realizadas análises de correlação de Pearson (p < 0.05) entre as características estudadas e montados modelos de regressão linear simples para estas mesmas variáveis através do programa estatístico StatView, 5.0 (SAS, 1998). Correlações significativas foram verificadas entre todas as medidas testiculares (peso, comprimento, largura e volume) e as outras medidas do trato reprodutor, como comprimento da cauda do epidídimo (CCauEp; r=0,66 a 0,68) e as peso das glândulas sexuais acessórias (r=0,68 a 0,72). Estas também tiveram correlações significativas com o peso do epidídimo e com o CCauEp (r=0,56 e 0,70, respectivamente), o que sugere a existência de uma sinergia no desenvolvimento do trato genital masculino. A largura testicular (LT) foi o parâmetro que apresentou correlações mais significativas com peso, comprimento e volume testiculares (r=0,88; 0,87 e 0,94) e os modelos de regressão que permitem estimar qualquer uma dessas características, a exemplo do volume testicular: VT = -260,17 + 68,479 x LT; R²= 0,95. Esta característica também esteve alta e significativamente correlacionada com mportantes parâmetros histológicos, como volume do túbulo seminífero (r=0,96), número de espermátides arredondadas por testículo (r=0,89) e produção diária de espermátides arredondadas (r=0,89). Os modelos de regressão linear simples com coeficientes de determinação (R²) elevados permitem estimar as características histológicas a partir da largura testicular. No presente estudo, foram obtidos, pela primeira vez, os pesos das glândulas vesiculares e bulbo-uretrais em ovinos SPRD e pôde-se observar que animais com maior medidas testiculares também apresentaram elevados parâmetros quantitativos da espermatogênese e maiores epidídimos e glândulas vesiculares. A largura testicular pode ser útil para seleção de reprodutores por ser uma característica de fácil mensuração.

Responsáveis pela produção dos gametas masculinos e pela biossíntese de hormônios essenciais à função reprodutiva masculina, os testículos requerem uma ação hormonal orquestrada para regular seu desenvolvimento e metabolismo, a fim de desenvolver testículos adultos férteis. Três hormônios vêm sendo descritos como indispensáveis para a regulação da fisiologia testicular: FSH, insulina e IGF-1. A sinalização hormonal mediada por receptores de membrana é essencial para a regulação de diversas funções celulares. A maneira como cada interação entre ligante e receptor produz o seu próprio padrão específico de regulação da função celular é uma questão fundamental na biologia. A grande maioria das ações hormonais se dá através da ativação de vias de sinalização intracelular, as quais direcionam a fisiologia celular de acordo com as necessidades dos tecidos e órgãos. O presente trabalho tem como objetivo investigar o envolvimento da via da PI3K/PKB nas ações da insulina e do IGF-1 sobre o potencial de membrana e os transportes de cálcio, aminoácidos e glicose em células de Sertoli de ratos imaturos. Buscamos ainda, identificar os efeitos do FSH e do IGF-1 sobre o metabolismo de células de Sertoli humanas cultivadas in vitro, através da análise do consumo e produção de metabólitos, da atividade da lactato desidrogenase (LDH) e da expressão de proteínas relacionadas ao metabolismo dessas células. Os efeitos estimulantes da insulina e do IGF-1 sobre a captação de cálcio e sobre o transporte de aminoácidos e glicose foram completamente inibidos pela ação do wortmannin, bloqueador da PI3K. O que indica que ambos os hormônios se valem dessa via de sinalização para regular o metabolismo das células de Sertoli de ratos imaturos. Em células de Sertoli humanas, o IGF-1 foi capaz de estimular a produção de lactato por essas células através do aumento da atividade da LDH, enquanto o FSH não apresentou qualquer efeito. Concluímos, que a via de sinalização PI3K/PKB é um importante meio de regulação hormonal do metabolismo das células de Sertoli de ratos imaturos utilizado por FSH, insulina e IGF-1, gerando despolarização da membrana pelo influxo de cálcio e consequente aumento no transporte de aminoácidos e glicose. Entretanto, em células de Sertoli humanas adultas, o IGF-1 parece ser um importante regulador do metabolismo celular, embora o FSH, a exemplo do que acontece em testículos de ratos adultos, tem pouco ou nenhum efeito sobre o metabolismo dessas células. Mais estudos são necessários para identificar as vias de sinalização pelas quais o IGF-1 regula o metabolismo das células de Sertoli.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O objetivo deste estudo foi avaliar a biometria de partes do trato reprodutor de ovinos deslanados sem padrÃo racial definido (SPRD) criados no semi-Ãrido nordestino, e correlacionar os dados biomÃtricos testiculares, epididimais e de glÃndulas sexuais acessÃrias com variÃveis associadas ao processo espermatogÃnico. Os dados biomÃtricos foram obtidos a partir dos testÃculos, epidÃdimos e das glÃndulas sexuais acessÃrias de 19 animais abatidos em torno de 60 semanas de idade. O parÃnquima testicular foi avaliado quanto ao diÃmetro, volume e comprimento dos tÃbulos seminÃferos, altura do epitÃlio germinativo e populaÃÃo de cÃlulas e Sertoli e germinativas. Foram realizadas anÃlises de correlaÃÃo de Pearson (p < 0.05) entre as caracterÃsticas estudadas e montados modelos de regressÃo linear simples para estas mesmas variÃveis atravÃs do programa estatÃstico StatView, 5.0 (SAS, 1998). CorrelaÃÃes significativas foram verificadas entre todas as medidas testiculares (peso, comprimento, largura e volume) e as outras medidas do trato reprodutor, como comprimento da cauda do epidÃdimo (CCauEp; r=0,66 a 0,68) e as peso das glÃndulas sexuais acessÃrias (r=0,68 a 0,72). Estas tambÃm tiveram correlaÃÃes significativas com o peso do epidÃdimo e com o CCauEp (r=0,56 e 0,70, respectivamente), o que sugere a existÃncia de uma sinergia no desenvolvimento do trato genital masculino. A largura testicular (LT) foi o parÃmetro que apresentou correlaÃÃes mais significativas com peso, comprimento e volume testiculares (r=0,88; 0,87 e 0,94) e os modelos de regressÃo que permitem estimar qualquer uma dessas caracterÃsticas, a exemplo do volume testicular: VT = -260,17 + 68,479 x LT; RÂ= 0,95. Esta caracterÃstica tambÃm esteve alta e significativamente correlacionada com mportantes parÃmetros histolÃgicos, como volume do tÃbulo seminÃfero (r=0,96), nÃmero de espermÃtides arredondadas por testÃculo (r=0,89) e produÃÃo diÃria de espermÃtides arredondadas (r=0,89). Os modelos de regressÃo linear simples com coeficientes de determinaÃÃo (RÂ) elevados permitem estimar as caracterÃsticas histolÃgicas a partir da largura testicular. No presente estudo, foram obtidos, pela primeira vez, os pesos das glÃndulas vesiculares e bulbo-uretrais em ovinos SPRD e pÃde-se observar que animais com maior medidas testiculares tambÃm apresentaram elevados parÃmetros quantitativos da espermatogÃnese e maiores epidÃdimos e glÃndulas vesiculares. A largura testicular pode ser Ãtil para seleÃÃo de reprodutores por ser uma caracterÃstica de fÃcil mensuraÃÃo. / The present study was conducted to evaluate aspects of the reproductive tract of crossbred rams raised in the semi-arid region of the Brazilian Northeast. Correlations between measurements of the testes, epididymis and accessory sex glands and variables related to the spermatogenic process were also determined. Data were obtained from 19 animals slaughtered at the approximate age of 60 weeks. Seminiferous tubules were studied with regard to volume, length and height and the population of Sertoli and germ cells. Associations between variables were estimated by Pearsonâs method (p < 0.05) and linear regression analysis using StatView 5.0 software (SAS, 1998). Significant correlations were found among all testis measurements (weight, length, width and volume) and other aspects of the reproductive trait, such as length of the cauda epididymis (CCauEp; r = 0.66 to 0.68) and weight of the accessory sex glands (AG; r = 0.68 to 0.72). Weight of AG was also associated with epididymal weight and CCauEp (r = 0.56 and 0.70, respectively), suggesting the existence of a synchronized development of the male reproductive trait. Testis width (TW) represented the variable with the most significant correlations with testis weight, length and volume (r = 0.88; 0.87 and 0.94). Moreover, regression model allowed the empirical estimate of testis volume (TV) based on testis width: TV = - 260.17 + 68.479 x TW (RÂ = 0.95). This characteristic (TW) was highly correlated with important aspects of gonad histology, such as volume of the seminiferous tubules (r = 0.96), number of round spermatids per testis (r = 0.89) and daily production of round spermatids (r = 0.89). Linear regression models with high coefficients of determination (RÂ) allowed the estimation of histological parameters based on testis width. In conclusion, the present study shows, for the first time, information about the weight of accessory sex glands in crossbred rams. It was also observed that animals with larger testes had larger epididymis and accessory sex glands and greater quantitative estimates of the spermatogenesis. Testis width should be useful for selection of sires because it is of easy measurement.

Resumo não disponível.

Resumo não disponível.

Resumo não disponível.

Nos mamíferos, a determinação sexual é governada pelo equilíbrio entre duas vias de sinalização paralelas e antagônicas: a via masculina SOX9/FGF9 e a via feminina RSPO1/beta-catenina/WNT4. A R-spondina 1 é uma importante reguladora do processo de diferenciação ovariana e atua modulando a via de sinalização Wnt canônica (Wnt/beta-catenina). Em humanos, mutações em RSPO1 causam uma rara síndrome genética autossômica recessiva caracterizada por Distúrbios do Desenvolvimento Sexual (DDS) 46,XX Testicular ou Ovotesticular, hiperceratose palmoplantar (HPP) e predisposição para o desenvolvimento de carcinoma de células escamosas (MIM 610644). Identificamos um paciente brasileiro, proveniente de uma grande família consanguínea, que apresentava a associação de HPP e DDS 46,XX Testicular SRY negativo. A avaliação da região codificadora do gene RSPO1 identificou a nova variante alélica c.305G>A (p.Cys102Tyr). O estudo de segregação realizado em 67 familiares demonstrou que a variante c.305G>A segrega em perfeita concordância com o fenótipo de HPP, exibindo um padrão de herança autossômico recessivo. Na família foram identificados 10 indivíduos afetados pelo fenótipo de HPP. As avaliações clínica e hormonal e os estudos molecular e citogenético nesses indivíduos resultou na caracterização de: (a) quatro indivíduos do sexo masculino 46,XX e/ou SRY negativo, com ambiguidade genital e perfil hormonal alterado; (b) cinco indivíduos do sexo masculino 46,XY e/ou SRY positivo, sem ambiguidade genital, com perfil hormonal normal e (c) uma mulher 46,XX, fértil. Experimentos de transfecção transitória in vitro demostraram que a proteína mutante tem menor capacidade de transativação do plasmídio reporter da via Wnt. As simulações de dinâmica molecular constataram que a troca p.Cys102Tyr aumenta a flexibilidade do backbone da R-spondina-1, diminuindo a energia de ligação da proteína ao complexo de receptores, LGR5 e RNF43. Em conjunto, nossos achados demonstram que a variante c.305G > A é patogênica, sendo responsável pela síndrome genética diagnosticada na família brasileira. As análises de expressão gênica e os estudos de imuno-histoquímica, por sua vez, detectaram um aumento da expressão do gene SOX9 e maior imonorreatividade para a proteína Sox9 no tecido testicular do caso índice. Esses resultados sugerem que o processo de reversão sexual nos indivíduos XX ocorra por uma hiperexpressão de SOX9 secundária à menor ativação da via Wnt/beta-catenina na gônada durante a embriogênese. No presente estudo também relatamos o primeiro caso de indivíduo de cariótipo 46,XX portador de mutação em homozigose no gene RSPO1 que não desenvolveu DDS. A variabilidade do fenótipo sexual não está associada com alterações no número de cópias dos genes WNT4 ou do SOX9 e região cis-regulatória. No entanto, a avaliação do exoma da família encontrou uma associação entre o polimorfismo do receptor LGR5 rs17109924 e a atenuação do fenótipo de DDS. Todavia, serão necessários estudos funcionais para esclarecer o impacto biológico da interação das variantes RSPO1 p.Cys102Tyr e LGR5 rs171099 / In mammals, sex determination is governed by the balance between two parallel and antagonic signaling pathways: the male SOX9/FGF9 and the female, RSPO1/beta-catenin/WNT4 pathways. R-spondin 1 regulates the ovarian differentiation process by its modulating action through the canonic Wnt pathway (Wnt/beta-catenin). In humans, patogenic mutations in RSPO1 cause a rare, autosomic recessive syndrome characterized by 46,XX Testicular or Ovotesticular disorders of sexual development (DSD), palmoplantar keratosis (PPK) and predisposition to squamous cell carcinoma (MIM 610644). We identified and studied a SRY-negative 46,XX DSD patient with PPK from a large, consaguineous, brazillian family. Through a \"candidate gene\" approach we identified in the proband a new allelic variant in the coding region of RSPO1, c.305G > A. This variant presented full concordance with the PPK phenotype by segregation analyses in 10 of 67 members of this family. Clinical, hormonal, cytogenetic and molecular genetic studies characterized three patterns in individuals with this variant: (a) four 46,XX and/or SRY-negative males with ambiguous genitalia and altered hormonal profile; (b) five 46,XY and/or SRY-positive males without ambiguous genitalia with normal hormonal profile; (c) one 46,XX fertile woman. In vitro experiments demonstrated that transient transfection of the mutant protein resulted in lower transactivation of the Wnt pathway-reporter plasmid. Moreover, molecular dinamic studies showed that p.Cys102Tyr increased the R-spondin-1 backbone flexibility, thus decreasing the interaction between this protein and its receptors, LGR5 and RNF43. Thus, both in vitro and in silico analysis demonstrate the pathogenicity of the RSPO1 variant c.305G > A. In addition, in the index case, a higher expression of SOX9, corroborated by a reactive immunohistochemistry in testicular tissue, suggested that the process of sexual reversal in the XX individual is driven by a higher SOX9 expression possibly due to a lower Wnt/beta-catenin signaling pathway activation during embriogenesis. In this study, we also reported the first 46,XX individual with RSPO1 mutation without DSD, in which no copy number abnormality was detected in WNT4, SOX9 and its cisregulatory regions. Whole exome sequencing of the affected individuals revealed, in turn, that the LGR5 rs17109924 polymorphism associates with a protacted DSD phenotype in the fertile woman with normal hormonal profile. Despite this evidence, future studies are nedded to address causality and biological impact between RSPO1 p.Cys102Tyr and LGR5 rs17109924 variants

Nos mamíferos, a determinação sexual é governada pelo equilíbrio entre duas vias de sinalização paralelas e antagônicas: a via masculina SOX9/FGF9 e a via feminina RSPO1/beta-catenina/WNT4. A R-spondina 1 é uma importante reguladora do processo de diferenciação ovariana e atua modulando a via de sinalização Wnt canônica (Wnt/beta-catenina). Em humanos, mutações em RSPO1 causam uma rara síndrome genética autossômica recessiva caracterizada por Distúrbios do Desenvolvimento Sexual (DDS) 46,XX Testicular ou Ovotesticular, hiperceratose palmoplantar (HPP) e predisposição para o desenvolvimento de carcinoma de células escamosas (MIM 610644). Identificamos um paciente brasileiro, proveniente de uma grande família consanguínea, que apresentava a associação de HPP e DDS 46,XX Testicular SRY negativo. A avaliação da região codificadora do gene RSPO1 identificou a nova variante alélica c.305G>A (p.Cys102Tyr). O estudo de segregação realizado em 67 familiares demonstrou que a variante c.305G>A segrega em perfeita concordância com o fenótipo de HPP, exibindo um padrão de herança autossômico recessivo. Na família foram identificados 10 indivíduos afetados pelo fenótipo de HPP. As avaliações clínica e hormonal e os estudos molecular e citogenético nesses indivíduos resultou na caracterização de: (a) quatro indivíduos do sexo masculino 46,XX e/ou SRY negativo, com ambiguidade genital e perfil hormonal alterado; (b) cinco indivíduos do sexo masculino 46,XY e/ou SRY positivo, sem ambiguidade genital, com perfil hormonal normal e (c) uma mulher 46,XX, fértil. Experimentos de transfecção transitória in vitro demostraram que a proteína mutante tem menor capacidade de transativação do plasmídio reporter da via Wnt. As simulações de dinâmica molecular constataram que a troca p.Cys102Tyr aumenta a flexibilidade do backbone da R-spondina-1, diminuindo a energia de ligação da proteína ao complexo de receptores, LGR5 e RNF43. Em conjunto, nossos achados demonstram que a variante c.305G > A é patogênica, sendo responsável pela síndrome genética diagnosticada na família brasileira. As análises de expressão gênica e os estudos de imuno-histoquímica, por sua vez, detectaram um aumento da expressão do gene SOX9 e maior imonorreatividade para a proteína Sox9 no tecido testicular do caso índice. Esses resultados sugerem que o processo de reversão sexual nos indivíduos XX ocorra por uma hiperexpressão de SOX9 secundária à menor ativação da via Wnt/beta-catenina na gônada durante a embriogênese. No presente estudo também relatamos o primeiro caso de indivíduo de cariótipo 46,XX portador de mutação em homozigose no gene RSPO1 que não desenvolveu DDS. A variabilidade do fenótipo sexual não está associada com alterações no número de cópias dos genes WNT4 ou do SOX9 e região cis-regulatória. No entanto, a avaliação do exoma da família encontrou uma associação entre o polimorfismo do receptor LGR5 rs17109924 e a atenuação do fenótipo de DDS. Todavia, serão necessários estudos funcionais para esclarecer o impacto biológico da interação das variantes RSPO1 p.Cys102Tyr e LGR5 rs171099 / In mammals, sex determination is governed by the balance between two parallel and antagonic signaling pathways: the male SOX9/FGF9 and the female, RSPO1/beta-catenin/WNT4 pathways. R-spondin 1 regulates the ovarian differentiation process by its modulating action through the canonic Wnt pathway (Wnt/beta-catenin). In humans, patogenic mutations in RSPO1 cause a rare, autosomic recessive syndrome characterized by 46,XX Testicular or Ovotesticular disorders of sexual development (DSD), palmoplantar keratosis (PPK) and predisposition to squamous cell carcinoma (MIM 610644). We identified and studied a SRY-negative 46,XX DSD patient with PPK from a large, consaguineous, brazillian family. Through a \"candidate gene\" approach we identified in the proband a new allelic variant in the coding region of RSPO1, c.305G > A. This variant presented full concordance with the PPK phenotype by segregation analyses in 10 of 67 members of this family. Clinical, hormonal, cytogenetic and molecular genetic studies characterized three patterns in individuals with this variant: (a) four 46,XX and/or SRY-negative males with ambiguous genitalia and altered hormonal profile; (b) five 46,XY and/or SRY-positive males without ambiguous genitalia with normal hormonal profile; (c) one 46,XX fertile woman. In vitro experiments demonstrated that transient transfection of the mutant protein resulted in lower transactivation of the Wnt pathway-reporter plasmid. Moreover, molecular dinamic studies showed that p.Cys102Tyr increased the R-spondin-1 backbone flexibility, thus decreasing the interaction between this protein and its receptors, LGR5 and RNF43. Thus, both in vitro and in silico analysis demonstrate the pathogenicity of the RSPO1 variant c.305G > A. In addition, in the index case, a higher expression of SOX9, corroborated by a reactive immunohistochemistry in testicular tissue, suggested that the process of sexual reversal in the XX individual is driven by a higher SOX9 expression possibly due to a lower Wnt/beta-catenin signaling pathway activation during embriogenesis. In this study, we also reported the first 46,XX individual with RSPO1 mutation without DSD, in which no copy number abnormality was detected in WNT4, SOX9 and its cisregulatory regions. Whole exome sequencing of the affected individuals revealed, in turn, that the LGR5 rs17109924 polymorphism associates with a protacted DSD phenotype in the fertile woman with normal hormonal profile. Despite this evidence, future studies are nedded to address causality and biological impact between RSPO1 p.Cys102Tyr and LGR5 rs17109924 variants