Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-10-30Bitstream added on 2014-06-13T21:05:10Z : No. of bitstreams: 1 prette_n_dr_jabo.pdf: 397603 bytes, checksum: f2f29adeabc306b7b382c01f4d6b99d5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve como objetivo avaliar “in vitro”, a ação de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, para larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas não alimentadas de Rhipicephalus sanguineus e para onde as mesmas fases do ciclo de vida do ácaro mantidas alimentadas em cães por meio de câmaras de alimentação coladas no dorso do animal. A ação no ambiente habitado pelo cão foi avaliada por meio de infestações naturais em boxes com todos os estádios do ácaro. Foram usadas suspensões contendo 108 conídios mL-1 de cada isolado. Nos ensaios com as fases não alimentadas os estádios foram imersos nas suspensões dos fungos e no ensaio com de alimentação no cão os diversos estádios do ciclo biológico do carrapato foram imersos ou pulverizados com as suspensões de conídios, e no ensaio do ambiente do cão as suspensões foram pulverizadas em todo o canil. Nos ensaios “in vitro” foram avaliadas a mortalidade de larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas, e no ensaio com alimentação no cão avaliou-se a mortalidade de cada estádio e os indivíduos sobreviventes foram colocados para ingurgitar em coelhos, para avaliação dos estádios subseqüentes do ciclo do carrapato, até se obter novamente a mesma fase em que iniciaram o ciclo. No ensaio do ambiente do cão foi avaliada diariamente a infestação dos animais com as diversas fases do ciclo de vida do ácaro. B. bassiana e M. anisopliae promoveram significativa redução da sobrevivência de todos os estádios não alimentados, deixando claro a atividade patogênica para a fase não alimentada de R. sanguineus. No experimento com a alimentação em cães, B. bassiana promoveu mortalidade de fêmea, mas não houve mortalidade de larvas e ninfas, fato este também observado para M. anisopliae... / This work aimed to assess the in vitro” action of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, for unfed larvae, nymphs and adult male and female of Rhipicephalus sanguineus and for the same stadiums the tick life cycle maintained fed on dogs through feeding cameras fixed on dog’s dorsal region. The action on the ambient where the dog lives was also evaluated through natural infestations with all of the stadiums of the acarid. Suspensions containing 108 conidia mL-1 of each isolated were used. In every assay with the unfed phase, the stadiums were immersed in the suspensions of the fungus and in the assays with feeding cameras, all the phases of the biological cycle of the tick were immersed or powdered with the conidial suspension and in the assay in the ambient suspensions were spread powdered in the whole box. In the in vitro assays it was evaluated the larvae, nymphs and adult male and female mortality. In the feeding cameras assay, the mortality of each stadium was evaluated and the surviving individuals were put for engorged in rabbits, to evaluate subsequent stadiums of the cycle of the tick, until obtain the same stadium wich was attained at the moment they began the cycle. In the environmental assay it was daily evaluated the infestation of the animals with all the phases of the life cycle of the acarid. B. bassiana and M. anisopliae promoted a significant reduction of the survival rate of all unfed stadiums of the tick what brings a strong evidence of pathogenicicity to unfed phases of R. sanguineus. In the experiment with feeding cameras, B. bassiana promoted female mortality, but mortality of larvae and nymphs were not observed fact this also observed for M. anisopliae. In the environment of the dog naturally infested with the stadiums of R. sanguineus was possible to observe that B. bassiana reduced the number of unfed and engorged larvae in the first week after treatment ...(Complete abstract click electronic access below)

Os carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus e Haemaphysalis longicornis são ectoparasitas hematófagos que infestam bovinos. O uso de vacinas anticarrapato tem mostrado ser uma estratégia alternativa promissora para o controle desses parasitos. As glutationa-S-transferases (GSTs) pertencem a uma família de enzimas multifuncionais presentes em organismos animais e vegetais, e, entre suas funções, pode-se destacar o transporte intracelular, a participação em processos digestivos, a síntese de prostaglandinas, a detoxificação de substâncias tóxicas e a proteção contra o estresse oxidativo. Em trabalhos anteriores, verificou-se em camundongos que a GST de H. longicornis (rGST-Hl) é mais imunogênica que a GST de R. microplus (rGST-Bm). O objetivo do presente estudo foi investigar a proteção cruzada conferida pela imunização de bovinos com a rGST-Hl frente a uma infestação de R. microplus. Por Western blot, verificou-se que os bovinos vacinados com a rGST-Hl apresentaram um aumento nos níveis de anticorpos anti-rGST-Hl, os quais foram capazes de reconhecer a GST-Bm nativa de extratos de larva, ovário e glândula salivar. Posteriormente, os bovinos foram infestados com 20.000 larvas de R. microplus. O percentual de proteção conferido foi calculado em função da variação entre os grupos tratados e controle, em relação ao número e peso de carrapatos que terminaram a alimentação, a capacidade de postura e a fertilidade dos ovos. O grupo dos bovinos vacinados com rGST-Hl mostrou uma redução de 53% e 52% no número e no peso de teleóginas, respectivamente. A postura de ovos e a eclodibilidade apresentaram uma redução no grupo vacinado de 0,6% e 8%, respectivamente. A eficácia total contra a infestação de R. microplus foi de 57%, quando comparado ao grupo controle. / The ticks Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Haemaphysalis longicornis are hematophagous ectoparasites that infest bovines. Vaccine has been considered one of the most promising methods for the control of these parasites. Glutathione Stransferases (GSTs) enzymes are present in animal and vegetal organisms and are important in intracellular transport, digestive process, synthesis of prostaglandins, detoxification and protection against oxidative stress. In a previous study with mice we showed that H. longicornis GST (rGST-Hl) is more immunogenic than R. microplus GST (rGST-Bm). The objective of the present study was to investigate the crossprotection against R. microplus infestation in bovine vaccinated with rGST-Hl. By Western blot, the immunized bovines showed an increase in antibodies anti-rGST-Hl. The native GST-Bm in larvae, ovary and salivary gland were recognized by sera of bovines immunized with rGST-Hl, indicating that the antibodies induced by rGST-Hl immunization recognize native R. microplus GSTs. The bovines were challenged with 20,000 larvae of R. microplus. Protection was calculated by variation in number and weight of fully engorged ticks, egg laying capacity and egg fertility. The bovines vaccinated with rGST-Hl showed a reduction of 53% and 52% in number and weight of engorged ticks, respectively. Egg laying capacity and egg fertility of ticks from vaccinated bovines were respectively 0.6% and 8% lower, as compared to ticks from control animals. The overall efficacy ratio against R. microplus was 57.03%, as compared with the control group.

O carrapato bovino Boophilus microplus está presente em áreas tropicais e subtropicais no mundo e é um ectoparasito hematófago que causa inúmeras perdas à bovinocultura, através da espoliação ao bovino ou das doenças que transmite como vetor. Atualmente, o principal método de controle empregado baseia-se em produtos químicos, que são onerosos e contaminam o ambiente. Estudos a respeito da ecologia, comportamento e fisiologia de B. microplus são importantes para o desenvolvimento de novos métodos de controle do carrapato. A resposta ao estresse oxidadivo e a morte celular programada, examinadas neste estudo, permitem compreender melhor os mecanismos fisiológicos usados pelo carrapato adulto e seus ovos e larvas para sobreviver no ambiente. A resposta a estresse oxidativo foi analisada em ovos e larvas. A atividade de GST e outras moléculas envolvidas em mecanismos de proteção contra estresse oxidativo variaram dependendo do tempo transcorrido após a postura e eclosão. A cinética do consumo de oxigênio apresentou correlação positiva com o aumento na atividade de GST durante a embriogênese. Um alto conteúdo de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico foi observado em extratos de ovos e larvas, indicando que carrapatos apresentam alto estresse oxidativo durante a embriogênese e desenvolvimento larval. Além disso, a atividade de GST apresentou forte correlação com peroxidação de lipídeos, uma indicação de seu papel na defesa antioxidante em ovos. Com o objetivo de melhor caracterizar o processo de morte celular, que elimina tecidos não mais necessários e leva à degeneração de glândulas salivares, ovários e singânglios, foi feita uma investigação usando ensaios de visualização de fragmentação de DNA em gel de agarose, teste cometa e TUNEL e a ativação da via apoptótica foi analisada usando ensaio de caspase. A fragmentação de DNA e a atividade enzimática de caspase-3 foram observadas em glândulas salivares e ovários 48 e 72 h após a remoção do carrapato do hospedeiro; em singânglios estes parâmetros foram mantidos em baixos níveis após 48 h. Estes resultados obtidos sugerem que há um controle refinado de manutenção de tecido através de apoptose. / The cattle tick Boophilus microplus is present in tropical and subtropical areas in the world and it is a haematophagous ectoparasite that causes several losses to cattle breeding, through the bovine exploiting and diseases transmitted. Currently, the main control method is based on chemicals, which are expensive and contaminate the environment. Studies about ecology, behavior and physiology of B. microplus are important to develop new methods for the tick control. The data examined in this study allow understanding the physiologic mechanisms used by the tick, eggs and larvae to survive in the environment. For this, the oxidative stress response in eggs and larvae and the cell death in different tissues of adult tick females during the pre-oviposition period were analyzed. The oxidative stress response was analyzed in eggs and larvae and the results showed that the GST activity and other molecules involved in mechanism of protection against oxidative stress varied depending on the time elapsed after oviposition and eclosion. A positive correlation was observed between the oxygen consumption kinetics and the increase in GST activity during embryogenesis. A high content of thiobarbituric acid reactive substances were observed in egg and larva extracts, indicating that ticks face high oxidative stress during embryogenesis and aging. In addition, GST activity presented strong positive correlation with lipid peroxidation, an indication that it plays a role in oxidant defences in eggs. In order to better characterize the cell death process that eliminates unnecessary tissues, the degeneration of salivary glands, ovaries and synganglia was investigated using DNA fragmentation in agarose gel, comet and TUNEL assays, and apoptosis activation pathway by the caspase assay. DNA fragmentation and enzymatic activity of caspase-3 were observed in salivary glands and ovaries at 48 and 72 h after tick removal from the host; in synganglia these parameters were maintained at low levels upon 48 h. These results obtained suggest that there is a refined control of tissue maintenance through apoptosis.

O carrapato bovino Boophilus microplus está presente em áreas tropicais e subtropicais no mundo e é um ectoparasito hematófago que causa inúmeras perdas à bovinocultura, através da espoliação ao bovino ou das doenças que transmite como vetor. Atualmente, o principal método de controle empregado baseia-se em produtos químicos, que são onerosos e contaminam o ambiente. Estudos a respeito da ecologia, comportamento e fisiologia de B. microplus são importantes para o desenvolvimento de novos métodos de controle do carrapato. A resposta ao estresse oxidadivo e a morte celular programada, examinadas neste estudo, permitem compreender melhor os mecanismos fisiológicos usados pelo carrapato adulto e seus ovos e larvas para sobreviver no ambiente. A resposta a estresse oxidativo foi analisada em ovos e larvas. A atividade de GST e outras moléculas envolvidas em mecanismos de proteção contra estresse oxidativo variaram dependendo do tempo transcorrido após a postura e eclosão. A cinética do consumo de oxigênio apresentou correlação positiva com o aumento na atividade de GST durante a embriogênese. Um alto conteúdo de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico foi observado em extratos de ovos e larvas, indicando que carrapatos apresentam alto estresse oxidativo durante a embriogênese e desenvolvimento larval. Além disso, a atividade de GST apresentou forte correlação com peroxidação de lipídeos, uma indicação de seu papel na defesa antioxidante em ovos. Com o objetivo de melhor caracterizar o processo de morte celular, que elimina tecidos não mais necessários e leva à degeneração de glândulas salivares, ovários e singânglios, foi feita uma investigação usando ensaios de visualização de fragmentação de DNA em gel de agarose, teste cometa e TUNEL e a ativação da via apoptótica foi analisada usando ensaio de caspase. A fragmentação de DNA e a atividade enzimática de caspase-3 foram observadas em glândulas salivares e ovários 48 e 72 h após a remoção do carrapato do hospedeiro; em singânglios estes parâmetros foram mantidos em baixos níveis após 48 h. Estes resultados obtidos sugerem que há um controle refinado de manutenção de tecido através de apoptose. / The cattle tick Boophilus microplus is present in tropical and subtropical areas in the world and it is a haematophagous ectoparasite that causes several losses to cattle breeding, through the bovine exploiting and diseases transmitted. Currently, the main control method is based on chemicals, which are expensive and contaminate the environment. Studies about ecology, behavior and physiology of B. microplus are important to develop new methods for the tick control. The data examined in this study allow understanding the physiologic mechanisms used by the tick, eggs and larvae to survive in the environment. For this, the oxidative stress response in eggs and larvae and the cell death in different tissues of adult tick females during the pre-oviposition period were analyzed. The oxidative stress response was analyzed in eggs and larvae and the results showed that the GST activity and other molecules involved in mechanism of protection against oxidative stress varied depending on the time elapsed after oviposition and eclosion. A positive correlation was observed between the oxygen consumption kinetics and the increase in GST activity during embryogenesis. A high content of thiobarbituric acid reactive substances were observed in egg and larva extracts, indicating that ticks face high oxidative stress during embryogenesis and aging. In addition, GST activity presented strong positive correlation with lipid peroxidation, an indication that it plays a role in oxidant defences in eggs. In order to better characterize the cell death process that eliminates unnecessary tissues, the degeneration of salivary glands, ovaries and synganglia was investigated using DNA fragmentation in agarose gel, comet and TUNEL assays, and apoptosis activation pathway by the caspase assay. DNA fragmentation and enzymatic activity of caspase-3 were observed in salivary glands and ovaries at 48 and 72 h after tick removal from the host; in synganglia these parameters were maintained at low levels upon 48 h. These results obtained suggest that there is a refined control of tissue maintenance through apoptosis.

O carrapato Riphicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grandes prejuízos à pecuária. O principal método de controle baseia-se nos acaricidas. No entanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle alternativo. A calreticulina (CRT) é uma proteína multifuncional presente em quase todas as células de animais. A secreção da CRT durante a alimentação pode estar relacionada a modulação da interação parasita hospedeiro. No presente estudo, as CRTs de R. microplus (rBmCRT) e do Haemophisalis longicornis (rHlCRT) foram expressas em Escherichia coli e purificadas por cromatografia. As propriedades imunogênicas e antigênicas da BmCRT e HlCRT foram analisadas por diferentes métodos. In silico, foram comparandos os epítopos das CRTs pelo índice de Jamerson-Wolf, que mostrou 6 regiões com potenciais epítopos antigênicos diferentes entre as CRTs. Enquanto, a análise in silico, da rBmCRT e rHlCRT mostraram 6 regiões que podem interagir com a proteína C1q. In vitro, por Western blot, a rBmCRT, mas não a rHlCRT, foi reconhecida pelo soro de bovino infestado experimentalmente com R. microplus. Em Western blot de extrato de larvas, os soros do coelho imunizado com rBmCRT e bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT reconheceram a BmCRT, sugerindo que os anticorpos direcionados às proteínas recombinantes também reconhecem a proteína nativa BmCRT. Também a rBmCRT mostrou um efeito anticoagulante no teste de recalcificação plasmática. In vivo, a rBmCRT e rHlCRT induziram reações de hipersensibilidade cutânea imediata em bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT, mas não foi possível detectar alterações na análise histopatológica. Juntos, estes resultados sugerem, que a rBmCRT e rHlCRT são imunogênicas e pode ter funções imunomoduladoras sobre o sistema imune do hospedeiro, mas não suficiente para prevenir o desenvolvimento da imunidade humoral. / The tick Riphicephalus (Boophilus) microplus is a blood-sucking ectoparasite of bovines from tropical and subtropical regions, causing serious damages to the livestock production. The main method of control is based on the acaricides. However, the use of vaccines has been studied as a promising control method. The calretirulin (CRT) is a multifunctional protein present in almost all cells of animals. The secretion of CRT during feeding might be linked to the modulation of the parasite-host interaction. In the present study, recombinant CRTs of R. microplus (rBmCRT) and of Haemaphysalis longicornis (rHlCRT) were expressed in Escherichia coli and purified by ion exchange chromatography. The immunogenic and antigenic capacities of BmCRT e HlCRT were analyzed by different methods. In silico, were comparisons of the CRTs epitopes, identified by Jameson-Wolf antigenic index, indicates that there are three different regions between the tick CRTs. While, in silico analysis showed 6 regions in rBmCRT and in rHlCRT that could interact with C1q protein. In vitro, by Western blot, rBmCRT, but not rHlCRT, was recognized by the serum of bovine experimentally infested with R. microplus. In Western blot with extracts of larvae, the sera of a rabbit immunized with rBmCRT and bovines immunized with rBmCRT or rHlCRT recognized BmCRT; this suggests that antibodies directed to recombinant proteins also recognize native BmCRT. Also, the rBmCRT showed an anticoagulant effect in recalcification time. In vivo, the rBmCRT and rHlCRT induced reactions of immediate cutaneous hypersensitivity in bovines immunized with rBmCRT and rHlCRT, but it was not possible to detect alterations in histopathologic test. Together, these results suggest that the rBmCRT and rHlCRT are immunogenic and could have immunomodulatory functions on the immunity system of the host, but not enough to prevent the development of humoral immunity.

O objetivo geral deste trabalho é testar se a informação contida em dados de microestrutura de mercado contribui para uma melhor explicação do comportamento dos preços dos títulos negociados na BMF&BOVESPA. O primeiro ensaio testa a hipótese de que o volume gera informação sobre o movimento dos preços quando os traders possuem informações diferentes sobre o comportamento dessa variável. Em uma abordagem de microestrutura de mercado, os traders não informados observam apenas as estatísticas diárias de preço e volume, e os traders informados conhecem o comportamento dos preços e volumes tick-by-tick. Aplicando o algoritmo do tick-test, os traders informados observam o volume de ordens de compras e vendas diárias. O teste empírico é feito utilizando modelos markov-switching, e os resultados revelam que os traders informados apresentam estimações melhores. No segundo ensaio, buscam-se evidências de que traders informados preferem atuar no mercado de opções pela possibilidade de alavancar seus ganhos. O objetivo é identificar se o volume no mercado de opções revela o comportamento dos preços das ações. Os resultados obtidos, utilizando opções de PETR4 e VALE5, corroboram a hipótese que o volume no mercado de opções não transmite informação sobre o comportamento do preço da ação. O terceiro ensaio utiliza dados tick-by-tick para estimar a probabilidade de informação privilegiada (PIN) para ações do IBRX. O PIN é uma proxy para informação privada e é incorporado ao método de Fama e French (1993) para separar os portfolios e explicar seus retornos. A combinação do PIN com as variáveis valor de mercado e índice book-to-market possibilita, para alguns portfolios, aumento do retorno e diminuição do risco. A significância das variáveis na explicação dos retornos é testada utilizando modelos de markov-switching. Os resultados permitem concluir que o PIN é um fator importante na explicação dos retornos dos portfolios. / The general objective is to test whether the information contained in data of microstructure market contributes to a better explanation of the behavior of stock prices negotiated in BMF&BOVESPA. The first essay tests the hypothesis that volume generates information on price movements when traders have different information on the behavior of this variable. In a model of market microstructure, non-informed traders observe only the daily statistics on price and volume, while informed traders know the behavior of tick-by-tick prices and volumes. Applying the tick-test algorithm, informed traders observe the volume of buy orders and daily sales. The empirical test is carried out by using markov-switching models, and the results reveal that informed traders show better estimates. In the second essay, we look for evidence that informed traders prefer to trade in options market due to its possibility of leveraging their revenue. The objective is to identify whether volume in the options market is revealing of the behavior of stock prices. The results obtained using options from PETR4 and VALE5 concur to the hypothesis that volume in options market does not transmit information on the behavior of stock price. The third essay makes use of tick-by-tick data to estimate the probability of privileged information (PIN) to IBRX stocks. PIN is a proxy to privilege information and is incorporated to Fama French (1993) method to separate portfolios and explain their returns. The combination of PIN with variables of market value and book-to-market index allows some portfolios to increase return and diminish risk. The significance of these variables in explaining returns is tested using markov-switching methods. The results demonstrate that PIN is an important factor in explaining portfolio returns.

O carrapato Rhipicephalus microplus é o principal ectoparasita de bovinos. O controle de R. microplus baseia-se principalmente no uso de acaricidas químicos, o que contribuiu para o problema emergente da seleção de populações de carrapatos resistentes. Portanto, há a necessidade do desenvolvimento de métodos mais eficientes/sustentáveis de controle, como o controle biológico utilizando fungos acaropatogênicos. A eficácia do fungo Metarhizium anisopliae de forma isolada ou em associação com acaricida químico para controle do carrapato bovino já foi evidenciada em condições de campo utilizando uma cepa de carrapatos resistente à acaricidas. No entanto, pouco se sabe sobre os mecanismos moleculares de R. microplus envolvidos na sua interação com M. anisopliae e com acaricidas. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta de larvas de R. microplus expostas ao fungo, ao acaricida e à associação de ambos. Primeiramente foi realizado um estudo para determinar a metodologia mais indicada para avaliar o efeito in vitro do fungo M. anisopliae sobre larvas de R. microplus. Para isso, comparamos o Teste de Pacote de Larvas modificado (TPL) e o Teste de Imersão de Larvas (TIL). Os valores de tempo letal mediano (TL50) obtido na maior concentração de M. anisopliae (108conídios/mL) foram 24,8 e 9,2 dias para o TPL e TIL, respectivamente. A mortalidade após 21 dias foi de 38% e 98% para o TPL e TIL respectivamente, na mesma concentração. O TIL demonstrou ser o teste mais indicado a ser utilizado, sendo, portanto, escolhido para realização dos experimentos futuros. Em seguida foi realizado um estudo para comparar a suscetibilidade de diferentes isolados de R. microplus ao fungo M. anisopliae. Foram avaliados 67 isolados de campo. Para tanto, as larvas de R. microplus foram imersas em uma suspensão de M. anisopliae (108conídios/mL) durante 5 min. Os tempos letais medianos (TL50) variaram de 2,6 a 24,9 dias A mortalidade observada no 15º dia após o tratamento variou de 26,3 a 100% nas amostras testadas. Esses resultados demonstraram que as populações de campo de R. microplus apresentam uma alta variação em sua suscetibilidade a M. anisopliae. Por fim, foi realizada uma análise transcricional (RNAseq) de larvas de R. microplus expostas a M. anisopliae, cipermetrina, associação de ambos e do controle (não-tratado). A análise dos transcritos dos quatro grupos gerou um total de 507.792 sequências com um tamanho total de 303.160.891 pb. Foram encontrados 31 genes diferencialmente expressos no grupo controle quando comparado com M. anisopliae, 39 com cipermetrina e 73 com M. anisopliae + cipermetrina. M. anisopliae e o grupo da associação apresentaram 81 genes diferencialmente expressos e M. anisopliae e cipermetrina, 46. Houve 177 genes diferencialmente expressos ao comparar M. anisopliae + cipermetrina com larvas expostas à cipermetrina Os resultados deste estudo demonstraram que a associação M. anisopliae + cipermetrina aumentou a expressão de genes relacionados a resposta à agressão, provavelmente pelo fato da associação provocar uma agressão maior ao carrapato e este responder de forma mais rápida, levando à superexpressão de genes de defesa. As descobertas deste estudo fornecem informações sobre as vias e mecanismos moleculares de R. microplus ativados em resposta à interação de M. anisopliae e a acaricida. Além disso, esses estudos estabelecem as bases para pesquisas futuras sobre genes-chave que controlam a suscetibilidade de R. microplus a M. anisopliae. O sinergismo evidenciado em nossos estudos comprova a ideia de que o controle integrado, utilizando o controle biológico com o controle químico é uma opção tanto para o controle de cepas de carrapatos resistentes à acaricidas, quanto para um controle mais rápido de cepas de carrapatos que não apresentam resistência ou que apresentem resistência intermediária. / The tick Rhipicephalus microplus is the major cattle ectoparasite. The control of R. microplus is based mainly on the use of chemical acaricides, which contributed to the emerging problem of the selection of tick populations resistant to acaricides. Therefore, there is a need for the development of more efficient/sustainable methods of control, such as biological control using acari pathogenic fungi. The effectiveness of the fungus Metarhizium anisopliae alone or in association with chemical acaricide to control the bovine tick has already been evidenced under field conditions using an acaricide resistant tick strain. However, to date, little is known about the molecular pathways of R. microplus involved with its interaction with M. anisopliae and with acaricides. Thus, the aim of the present study is to evaluate the response of R. microplus larvae exposed to the fungus, the acaricide and the association of both. Firstly, a study was carried out to determine the most appropriate methodology to evaluate the in vitro effect of the fungus M. anisopliae on larvae of R. microplus tick. For this, we compared the Modified Larval Packet Test (LPT) and the Larval Immersion Test (LIT). The values of lethal time (LT50) obtained in the highest concentration of M. anisopliae (108conidia / mL) were 24.8 and 9.2 days for LPT and LIT, respectively. Mortality after 21 days was 38% and 98% for LPT and LIT, respectively, at the same concentration. The LIT proved to be the most indicated test to be used and was therefore chosen to carry out the following experiments Then, a study was performed to compare the susceptibility of different R. microplus isolates to M. anisopliae fungus. Sixty-seven field isolates were evaluated. For this, R. microplus larvae were immersed in a suspension of M. anisopliae (108conidia/mL) for 5 min. Lethal times (LT50) ranged from 2.6 to 24.9 days. Mortality observed on the 15th day after treatment ranged from 26.3 to 100% in the tested samples. These results demonstrated that R. microplus field populations showed a high variation in their susceptibility to M. anisopliae. Finally, a RNAseq analysis of R. microplus larvae exposed to M. anisopliae, cypermethrin, association of both or untreated (control) was performed. Analysis of the transcripts of the four groups generated a total of 507,792 sequences with a total length of 303,160,891 bp. We found 31 differentially expressed genes in the control group when compared to M. anisopliae, 39 with cypermethrin and 73 with M. anisopliae + cypermethrin. M. anisopliae and the association group had 81 differentially expressed genes and M. anisopliae and cypermethrin, 46 There were 177 differentially expressed genes when comparing M. anisopliae + cypermethrin with cypermethrin exposed larvae. The results of this study demonstrated that the association of M. anisopliae + cypermethrin increased the expression of genes related to response to aggression, possibly because the M. anisopliae + cypermethrin association causes a greater aggression to the tick and, then it could respond quickly, leading to overexpression of defense genes. The findings of this study provide information on the pathways and molecular mechanisms of R. microplus in response to the interaction of M. anisopliae and acaricides. In addition, these studies establish the basis for future research on key genes that control the susceptibility of R. microplus to M. anisopliae. The synergism evidenced in our studies confirms the idea that integrated control using biological control and chemical control is an option both for the control of acaricide resistant tick strains and for a faster control of tick strains that do not show resistance or exhibit intermediate resistance.

This study was focused on vector-pathogen-host interaction. Questing ticks from field were tested for presence of Borrelia burgdorferi s.l. and host DNA. Small rodents were trapped, ticks were collected from them, infestation patterns were estimated regarding the species and stage of ticks and species, sex and body weight of the host. Ticks aquired from hosts were tested for presence of Borrellia burgdorferi s.l. and tick-borne encephalitis virus. Both results from identification of hosts and from detection of pathogens were compared to be able to investigate interactions between host, vector and pathogen.

Os carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus e Haemaphysalis longicornis são ectoparasitas hematófagos que infestam bovinos. O uso de vacinas anticarrapato tem mostrado ser uma estratégia alternativa promissora para o controle desses parasitos. As glutationa-S-transferases (GSTs) pertencem a uma família de enzimas multifuncionais presentes em organismos animais e vegetais, e, entre suas funções, pode-se destacar o transporte intracelular, a participação em processos digestivos, a síntese de prostaglandinas, a detoxificação de substâncias tóxicas e a proteção contra o estresse oxidativo. Em trabalhos anteriores, verificou-se em camundongos que a GST de H. longicornis (rGST-Hl) é mais imunogênica que a GST de R. microplus (rGST-Bm). O objetivo do presente estudo foi investigar a proteção cruzada conferida pela imunização de bovinos com a rGST-Hl frente a uma infestação de R. microplus. Por Western blot, verificou-se que os bovinos vacinados com a rGST-Hl apresentaram um aumento nos níveis de anticorpos anti-rGST-Hl, os quais foram capazes de reconhecer a GST-Bm nativa de extratos de larva, ovário e glândula salivar. Posteriormente, os bovinos foram infestados com 20.000 larvas de R. microplus. O percentual de proteção conferido foi calculado em função da variação entre os grupos tratados e controle, em relação ao número e peso de carrapatos que terminaram a alimentação, a capacidade de postura e a fertilidade dos ovos. O grupo dos bovinos vacinados com rGST-Hl mostrou uma redução de 53% e 52% no número e no peso de teleóginas, respectivamente. A postura de ovos e a eclodibilidade apresentaram uma redução no grupo vacinado de 0,6% e 8%, respectivamente. A eficácia total contra a infestação de R. microplus foi de 57%, quando comparado ao grupo controle. / The ticks Rhipicephalus (Boophilus) microplus and Haemaphysalis longicornis are hematophagous ectoparasites that infest bovines. Vaccine has been considered one of the most promising methods for the control of these parasites. Glutathione Stransferases (GSTs) enzymes are present in animal and vegetal organisms and are important in intracellular transport, digestive process, synthesis of prostaglandins, detoxification and protection against oxidative stress. In a previous study with mice we showed that H. longicornis GST (rGST-Hl) is more immunogenic than R. microplus GST (rGST-Bm). The objective of the present study was to investigate the crossprotection against R. microplus infestation in bovine vaccinated with rGST-Hl. By Western blot, the immunized bovines showed an increase in antibodies anti-rGST-Hl. The native GST-Bm in larvae, ovary and salivary gland were recognized by sera of bovines immunized with rGST-Hl, indicating that the antibodies induced by rGST-Hl immunization recognize native R. microplus GSTs. The bovines were challenged with 20,000 larvae of R. microplus. Protection was calculated by variation in number and weight of fully engorged ticks, egg laying capacity and egg fertility. The bovines vaccinated with rGST-Hl showed a reduction of 53% and 52% in number and weight of engorged ticks, respectively. Egg laying capacity and egg fertility of ticks from vaccinated bovines were respectively 0.6% and 8% lower, as compared to ticks from control animals. The overall efficacy ratio against R. microplus was 57.03%, as compared with the control group.

Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-03-13T14:24:56Z No. of bitstreams: 1 PGCA14MA204.pdf: 193153 bytes, checksum: 775a55b56bd27e5412d5e2e42810041c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-13T14:24:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA204.pdf: 193153 bytes, checksum: 775a55b56bd27e5412d5e2e42810041c (MD5) Previous issue date: 2014-02-11 / PROMOP / CAPES / Anaplasma marginale (THEILER, 1910), Babesia bovis (BABES, 1888) and B. bigemina (SMITH & KILBORN, 1893) are obligatory intraerythrocytic microorganisms that are responsible for high mortality and morbidity rates in several regions of Brazil. The goal of this project was to investigate the infections dynamics and the pathogens prevalence in cattle located in the mountain region of Santa Catarina, Brazil. For this purpose, 257 blood samples from animals with age between four months and eleven years were collected from March 2012 to July 2013, in sixteen cities of the region. The samples were grouped in five classes according to age, Group A were compounds of the animals with six months or less; Group B animals from 7 to 12 months, Group C animals from 13 to 24 months, Group D animals from 25 to 36 months and Group E animals with more than 36 months. Blood samples were submitted to hematological analysis, conducted at Laboratório Clínico Veterinário – Centro de Ciências Agroveterinárias (CAV), and pathogen investigation was examined by Multiplex-PCR, in Laboratório de Bioquímica de Hemoparasitas e Vetores – LABHEV (CAV). Erythrogram and WBC were performed on electronic counter (CELM CC-530), and differential leukocyte counts by cytological analysis in optical microscope. The DNA extraction was performed by the phenol-chloroform method. Using the Multiplex-PCR technique, we were able to detect Anaplasma marginale prevalence in about 27.24%, B. bovis in 29.57% and B. bigemina in 16.73% of the animals. Statistical analysis showed correlation between the presence of the microorganisms and the animals groups age. The hematological modifications most significant were found on WBC, where leukocytosis was founded in the overall average of animals. However, infections were delivered in healthy animals, which shows sub-clinical infections in animals studies. The study area was characterized in enzootic instability, since the prevalence of microorganisms occurred in less than 75% of the population, situation that requires care in vector control and parasites to be conducive to outbreaks of disease / Anaplasma marginale (THEILER, 1910), Babesia bovis (BABES, 1888) e B. bigemina (SMITH & KILBORN, 1893) são microorganismos intra-eritrocitários obrigatórios responsáveis por causar prejuízos ligados a alta morbidade e mortalidade em várias regiões do Brasil. Com intuito de avaliar a dinâmica de infecção e prevalência desses parasitas em bovinos da região serrana de Santa Catarina, 257 amostras de sangue de animais com idade entre três meses e onze anos, foram coletadas entre março de 2012 e julho de 2013, em dezesseis municípios da região. As amostras foram divididas em cinco classes de acordo com a idade, onde o grupo (A) foi composto de animais de 4 a 6 meses, o grupo (B) animais entre 7 e 12 meses, o grupo (C) de 13 a 24 meses, o grupo (D) de 25 e 36 meses e no grupo (E) com mais de 36 meses. As amostras foram utilizadas para análises hematológicas, processadas no Laboratório Clínico Veterinário do Centro de Ciências Agroveterinárias (CAV) e para pesquisa dos agentes parasitários pela Multiplex-PCR, no Laboratório de Bioquímica de Hemoparasitas e Vetores - LABHEV. Eritrograma e leucograma foram realizados em contador eletrônico (CELM CC-530) e contagem diferencial de leucócitos por análise citológica em microscopia óptica. A extração de DNA foi realizada pelo método de fenol e clorofórmio. Com o uso da técnica Multiplex-PCR, foram detectadas prevalência de A. marginale em 27,24% dos bovinos, B. bovis em 29,57% e B. bigemina em 16,73% dos animais. Através da análise estatística verificou-se associação entre presença dos microorganismos e as classes etárias. A alteração hematológica mais relevante encontrada foi na porção leucocitária, onde a leucocitose foi observada na média geral dos animais amostrados. Contudo, as infecções foram apresentadas em animais saudáveis, o que demonstra infecções sub-clínicas nos bovinos estudados. A região estudada foi caracterizada em estado de instabilidade enzoótica, já que a prevalência dos microrganismos se deu em menos de 75% da população estudada, situação que requer cuidados no controle de vetor e parasitos por ser propícia à ocorrência de surtos da doença