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Bacterial adherence to various GTR membranes an in vivo study : thesis submitted in partial fulfillment ... for the degree of Master of Science in Periodontics ... /Chen, Yen-Ting. January 1995 (has links)
Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1995. / Includes bibliographical references.
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Barrier membranes for ridge augmentation is there an optimal pore size? /Gutta, Rajesh. January 2007 (has links) (PDF)
Thesis (M.S.)--University of Alabama at Birmingham, 2007. / Title from first page of PDF file (viewed Oct. 30, 2007). Includes bibliographical references (p. 45-56).
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O efeito do fator de crescimento de fibroblastos básico aplicado em superfícies radiculares condicionadas com cloridrato de tetraciclina ou EDTA na morfologia e densidade de fibroblastos. Estudo in vitro /Silvério, Karina Gonzales. January 2002 (has links)
Orientador: Carlos Rossa Júnior / Banca: José Eduardo Cezar Sampaio / Banca: Ana Paula Vieira Colombo / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito do condicionamento radicular com fator de crescimento de fibroblastos básico (b-FGF) sobre a morfologia e densidade de fibroblastos. Para tal, blocos de dentina com 4 mm2 de área de superfície foram obtidos de raízes de dentes humanos extraídos devido severo envolvimento periodontal, sendo instrumentados manualmente e autoclavados. Noventa amostras foram selecionadas aleatoriamente e distribuídas em 3 grupos segundo o tratamento de superfície prévio ao condicionamento com o b-FGF: sem tratamento - controle; 50 mg/mL de cloridrato de tetraciclina e EDTA a 24%. As 30 amostras de cada um destes 3 grupos foram distribuídas em 3 subgrupos quanto à dose de b-FGF: 0 æg/mL - controle; 50 æg/mL e 125 æg/mL. Após os tratamentos, as amostras foram incubadas a 37º C e 98% de umidade com 2mL de meio Eagle, sendo 1mL com fibroblastos de linhagem contínua (células McCoy) na concentração de 1 x 105 células/mL e 1mL meio sem células, por 24 h. Após as 24 h, as amostras foram submetidas a preparo de rotina para MEV e então, fotomicrografadas nos aumentos de 500X (densidade celular) e 1000X (morfologia celular). Em seguida, as fotomicrografias foram avaliadas por 3 examinadores treinados, calibrados, independentes e cegos, os quais verificaram morfologia e densidade celular segundo os escores propostos por Gamal et al. (1998) e Jenkins et al. (1988), respectivamente. A aplicação da Análise de Regressão pela Técnica da Árvore demonstrou haver diferenças estatisticamente significantes para a densidade celular (p<0,0001) entre os grupos EDTA, tetraciclina e controle, sendo que também houve diferenças entre as doses de 0/50 æg e 125 æg de b-FGF nas amostras condicionadas com EDTA (p<0,0001) e entre as doses de 0 e 50/125 æg de b-FGF nas amostras condicionadas com tetraciclina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The aim of this study was to evaluate in vitro the effect of the root surface conditioning with basic fibroblast growth factor (b-FGF) about morphology and density of fibroblasts. Dentin slices of with 4 mm2 of surface area were obtained from roots of teeth extracted due to severe periodontal involvment. These were scaled and sterilized. Ninety samples were randomly distributed into 3 groups according to treatment before application of b-FGF: non-treated - control; 50mg/mL of tetracycline HCl and EDTA 24%. The thirty samples of each group were distributed into 3 subgroups according to the concentration of b-FGF: 0 æg/mL - control; 50 æg/mL and 125 æg/mL. After treatments, the samples were incubated at 37ºC and 98% humidity with 1mL of Eagle Medium with 1 x 105 cells/mL of fibroblast from continuos lineage (McCoy Cells) plus 1mL this solution without cells during 24 hours. The samples were submitted to routine preparation for SEM and photographed at 500x (density celular) and 1000x (morphology celular). Three independent and blind examiners evaluated the fibroblast's morphology and density, according to Gamam et al. (1998) and Jenkins et al. (1998), respectively. Classification and Regression Trees test results indicated significant differences on the density (p<0,0001) among EDTA, tetracycline and control groups with also differences between concentrations of 0/50æg and 125æg of b-FGF at the samples conditioning with EDTA (p<0,0001) and between concentrations of 0 and 50/125 æg of b-FGF at the samples conditioning with tetracycline(p<0,0001). The results of this test to morphology indicated significant differences between treatment or non-treatment with b-FGF, and that concentration of 125 æg demonstrated to be more favorable than the concentration of 50 æg. In conclusion, the treatment of root surfaces with b-FGF influenced the density... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre
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Análise histológica da utilização da matriz dérmica acelular e da matriz de pericárdio bovino, associados ao retalho reposicionado coronariamente, no tratamento de deiscências ósseas criadas cirurgicamente em cãesOliveira, Cristiane Aparecida de [UNESP] 14 February 2005 (has links) (PDF)
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oliveira_ca_dr_arafo.pdf: 373237 bytes, checksum: 63181781c60cf9cb130f5b53b34e9b3d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O propósito deste estudo foi avaliar histológica e histometricamente o resultado da utilização das matrizes de colágeno de Pericárdio Bovino (MPB) e Dérmica Acelular (MAD) no tratamento de deiscências ósseas criadas cirurgicamente em cães. Foram criados defeitos periodontais do tipo deiscência óssea na superfície vestibular dos 2os, 3os e 4os pré-molares inferiores de seis cães. Estes dentes foram divididos em 3 grupos: grupo I: MAD; grupo II: controle e grupo III: MPB, ambos com reposição coronária do retalho. Após 70 dias os animais foram sacrificados, os dentes retirados em bloco e processados histologicamente. Realizou-se análise histológica descritiva e histométrica, medindo-se a extensão do tecido epitelial, neoformação óssea e cementária e nível gengival para os grupos I, II e III. Os resultados demonstraram valores estatisticamente iguais para as medianas (em mm) dos valores de epitélio: 1,49, 1,91 e 1,82; cemento: 3,18, 3,09 e 3,31 respectivamente para os grupos I, II e III. Foi encontrada diferença estatisticamente significante em relação à neoformação óssea, com medianas (em mm) de 1,23, 1,82 e 1,62, respectivamente para os grupos I, II e III. Foi observado escasso infiltrado inflamatório. Com isso, pudemos concluir que as matrizes de MPB e MAD são materiais que permitem a reparação dos tecidos periodontais. / The goal of this investigation was to compare, histologically and histometrically, the healing process of dehiscence-type defects treated by acellular dermal matrix (AD) and bovine pericardium matrix (PB). Six mongrel dogs were used. Buccal osseous deiscences were surgically created on mesial roots of the mandibular second, third and fourth premolars. The defects were randomly assigned to one of the treatments: AD, control and PB. After 70 days of healing, the dogs were sacrificed and the blocks were processed. The histometric parameters evaluated included: gingival level, epithelial length, new cementum and new bone. No statistically significant differences were found between PB, AD and control groups for epithelial length and new cementum parameters (p<0,05). Statistically significant differences were found between PB, AD and control groups for new bone (minor for AD). The presence of a slight inflammation was observed. Withim the limits of this study, it can be concluded that PB and AD showed good biocompatibility, but did not bring a complete periodontal tissue regeneration.
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Utilização de membrana biossintética de celulose em trocleoplastia experimental em cães /Iamaguti, Luciana Santini. January 2007 (has links)
Orientador: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Banca: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Nilza Maria Freres Mascarenhaz / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicação de membrana biossintética de celulose (MBC) nacional, após a realização de trocleoplastia experimental em cães, com intuito de verificar se o uso desta poderia favorecer a migração de células com potencial condrogênico, assim como ocorre no tecido ósseo. A evolução pós-operatória dos cães foi analisada com especial interesse nos processos de reparação frente ao defeito osteocondral, estabelecendo as vantagens e desvantagens do uso do biomaterial. Foram utilizados 12 cães (Canis familiaris) adultos, sadios e sem alterações no aparelho locomotor. Todos os animais foram submetidos ao procedimento de trocleoplastia bilateral, sendo que a MBC foi aplicada no membro esquerdo. Os animais foram avaliados clínica e radiograficamente aos 15, 30, 60 e 90 dias de pós-operatório. A função locomotora do membro foi avaliada em escores pré-definidos, nos referidos momentos. A avaliação macroscópica da articulação foi realizada, nos momentos pré-estabelecidos, seguida da artrotomia exploratória, bem como da coleta de biópsia para o exame microscópico. Todos os animais apresentaram função normal dos membros nos momentos avaliados. Não houve diferença clínica e radiográfica entre os grupos controle (GC) e tratado (GT). Na avaliação histopatológica, aos 30 dias, notou-se intensa celularidade em ambos os grupos, sendo que no GC esta era constituída por fibroblastos ativos e no GT por condrócitos imaturos, formando um tecido conjuntivo mais organizado. O GC apresentava fibrose e muitos fibroblastos aos 60 dias, enquanto o GT apresentava maior número de condrócitos. Aos 90 dias, constatou-se formação de tecido do tipo fibrocartilaginoso maduro em ambos os grupos. Histomorfometricamente, o GT apresentou melhor resposta ao processo de reparação nos momentos iniciais quanto ao número de células e espessura do tecido...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the application of national biosynthetic cellulose membrane after experimental trochleoplasty, to verify if its utilization could support chondrogenic cells migration like occurs in osseous tissue. The advantages and disadvantages of the use of this biomaterial were evaluated through the observation of the reparative process of the osteochondral injury. Twelve adult healthy dogs (Canis familiaris) were used. All dogs were submitted to trochleoplasty in both pelvic limbs and the biosynthetic cellulose membrane was applied in the left limb. Clinical and radiographic evaluation was performed at 15, 30, 60 and 90 postoperatively. The locomotor function of the limb was evaluated in scores on the differents moments. The joint macroscopic evaluation was performed before exploratory arthrotomy and biopsy for microscopic exam. All dogs showed normal function of the limbs in all differents moments. Radiographic results showed no difference in control (CG) and treated groups (TG). Microscopic results showed at 30 days an increase of the celularity in both groups was observed. In the CG it was constituted by active fibroblasts and in TG by immatures condrocytes forming a more organized connective tissue. In the CG a fibrous tissue and many fibroblasts appear at 60 days and in the TG more condrocytes appear. A mature fibrocartilaginous tissue formed in both groups at 90 days. Histomorphometrically, TG presents better response of repair process in the fist moments as the number of cells and the tissue thickness. The biosynthetic cellulose membrane didn't cause deleterious effects showing good adaptation in intrarticular environment...(Complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Mestre
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Adesivo de fibrina derivado de veneno de serpente como promotor da cicatrização tendínea em cães: estudo histopatológico e biomecânicoFerraro, Gisela Cristiane [UNESP] 24 June 2003 (has links) (PDF)
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ferraro_gc_me_jabo_prot.pdf: 1566804 bytes, checksum: 525d350b3b6ff2ea3d93042d8ad26fac (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar as condições clínicas do deslizamento tendíneo, a cinética celular do processo inflamatório e cicatricial e a força na regeneração do tendão do músculo f1exor profundo dos dedos do membro torácico de cães, quando se utiliza cola derivada da associação de veneno de serpente e fibrinogênio bubalino em substituição da tenorrafia convencional. Os tendões de 30 membros foram seccionados parcialmente para a aplicação da cola de fibrina. Aos 7,15 e 30 dias do pós-operatório foram realizadas biopsias para o estudo anátomopatológico e biomecânico dos tendões. A análise dos resultados demonstrou que 71,7% dos tendões estudados apresentaram retração dos cotos e 21,7% aderência com grau moderado a excessivo, comprometendo o deslizamento. Houve diferença significativa para o número de células inflamatórias entre os três tempos estudados (P<0,05), e o infiltrado inflamatório foi máximo aos 15 dias. Os resultados histopatológicos revelaram processo inflamatório característico do tendão aos 7, 15 e 30 dias, com menor grau de inflamação na fase aguda, facilitando a fase de maturação cicatricial. Pela avaliação biomecânica, a cicatrização tendínea ganhou, com o tempo, resistência progressiva para a força de tração máxima e deformações permanentes, possuindo aos 15 dias resultados satisfatórios para a rigidez e resistência, quando comparados com os outros dois tempos estudados. Assim, o adesivo de fibrina derivado de veneno de serpente pode ser usado como substância alternativa em tenorrafias para rupturas completas, ou na substituição dessas para rupturas parciais de tendões de cães. / The aim of this research was to evaluate the c1ínical conditions of the tendineous sliding, the cellular kinetics of the inflammatory and healing process and the force in the regeneration of the digital deep f1exor tendon in the thoracic limb of dogs, when glue derived from the association of snake venom and buffalo fibrinogen was used instead of conventional tenorraphy. Tendons of 30 limbs were partially sectioned for fibrina glue application. Biopsies were performed at 7, 15 and 30 days after surgery so the anatomopathological and biomechanical studies of the tendons were conducted. The results analysis demonstrated that 71.7% of the tendons presented stumps retraction and 21.7% moderate to excessive adherence, what affected the sliding. There was significant difference as for the number of inflammatory cells in all studied times (P<0.05) and the inflammatory infiltration was (P<0.05) and the maximum at 15 days. The histopatological typical inflammatory process of results demonstrated the tendon at 7, 15 and 30 days after surgery, occurring a lower inflammation level in the acute phase, what made easier the healing maturation phase. In the biomechanical evaluation, as time went by the tendineous healing got progressive resistance for the maximum traction force and permanent deformations and demonstrated satisfactory results for rigidity and resilience at 15 days, when compared to the other two analyzed times. Therefore, the fibrina glue derived from snake venom can be used as an alternative substance in tenorraphies of complete ruptures or in substitution of these for partial ruptures of dogs tendons.
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Efeito da movimentação ortodôntica sobre lesão de furca grau II tratada com matriz mineral óssea bovina e membrana absorvível: estudo histológico e histométrico em cãesSilva, Vanessa Camila da [UNESP] 09 February 2004 (has links) (PDF)
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silva_vc_me_arafo.pdf: 1730174 bytes, checksum: ce33d44b50196aca4d9f0d95f23a7f81 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho teve como objetivo determinar as reações teciduais em lesões de furca Grau II em 2ºs pré-molares de cães após tratamento com matriz mineral óssea bovina e membrana absorvível e movimentação ortodôntica de translação para mesial. Foram criadas lesões de furca Grau II nos 2º pré-molares superiores de 4 cães, totalizando 8 lesões. Após 75 dias, estas foram tratadas pela técnica de Regeneração Tecidual Guiada com membrana absorvível associada ao preenchimento com matriz mineral óssea bovina. Deu-se início ao controle de placa com gel de clorexidina 0,2% 5 vezes por semana até o final do estudo. Após 2 meses do tratamento, os 2ºs pré-molares foram divididos aleatoriamente em dois grupos (teste e controle) e foi instalado aparelho ortodôntico em ambos os lados, sendo os 3ºs pré-molares e caninos superiores usados como ancoragem. No lado teste a movimentação ortodôntica foi realizada durante 3 meses. Os animais foram sacrificados, e os 2ºs pré-molares removidos em bloco e processados para análise histológica. Não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos em relação a área total de preenchimento ósseo, de biomaterial e extensão linear de regeneração periodontal na superfície radicular. Porém, houve uma tendência do grupo teste apresentar maior quantidade óssea e menor quantidade de biomaterial, além de deslocamento do biomaterial para o lado de pressão na região de furca, no grupo teste. / The aim of this study was to establish the tissue reactions on Degree II furcation lesions in the 2nd premolars of dogs after treatment with bovine osseous mineral source, absorbable membrane and orthodontic movement of translation to mesial and also evaluate the effect of movement on the grafting material used. It was produced Degree II furcation lesions in upper second premolars of 4 dogs, resulting in 8 lesions. After75 days, they were treated by the method of Guided Tissue Regeneration with absorbable membrane associated with bovine osseous mineral source. The plaque control was started with 0,2% chlorhexidine gel, 5 times a week until the end of the study. After 2 months of treatment, the second premolars were randomly divided in two groups (test and control) and it was installed orthodontic appliance in both sides, using the third premolars and upper canine as anchorage. The orthodontic movement was achieved only in the test side, during 3 months. The animals were sacrificed and the second premolars were removed in block and processed for histological analysis. There weren't any differences that were statistically significant among the groups with relation to the total area of osseous filling, biomaterial and linear periodontal regeneration. However, there was a trend of the group to present more osseous amount and less biomaterial amount, besides the dislocation of the biomaterial for the furcation pressure side. The orthodontic movement could be done without intercurrences. Key- words: Periodontics; Guided tissue regeneration; Biocompatible materials; Orthodontic.
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Adesivo de fibrina derivado de veneno de serpente como promotor da cicatrização tendínea em cães : estudo histopatológico e biomecânico /Ferraro, Gisela Cristiane. January 2003 (has links)
Orientador: Julieta Rodini Engracia de Moraes / Banca: Silvia Regina Catharino Satori Barraviera / Banca: Antonio Carlos Shimano / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as condições clínicas do deslizamento tendíneo, a cinética celular do processo inflamatório e cicatricial e a força na regeneração do tendão do músculo f1exor profundo dos dedos do membro torácico de cães, quando se utiliza cola derivada da associação de veneno de serpente e fibrinogênio bubalino em substituição da tenorrafia convencional. Os tendões de 30 membros foram seccionados parcialmente para a aplicação da cola de fibrina. Aos 7,15 e 30 dias do pós-operatório foram realizadas biopsias para o estudo anátomopatológico e biomecânico dos tendões. A análise dos resultados demonstrou que 71,7% dos tendões estudados apresentaram retração dos cotos e 21,7% aderência com grau moderado a excessivo, comprometendo o deslizamento. Houve diferença significativa para o número de células inflamatórias entre os três tempos estudados (P<0,05), e o infiltrado inflamatório foi máximo aos 15 dias. Os resultados histopatológicos revelaram processo inflamatório característico do tendão aos 7, 15 e 30 dias, com menor grau de inflamação na fase aguda, facilitando a fase de maturação cicatricial. Pela avaliação biomecânica, a cicatrização tendínea ganhou, com o tempo, resistência progressiva para a força de tração máxima e deformações permanentes, possuindo aos 15 dias resultados satisfatórios para a rigidez e resistência, quando comparados com os outros dois tempos estudados. Assim, o adesivo de fibrina derivado de veneno de serpente pode ser usado como substância alternativa em tenorrafias para rupturas completas, ou na substituição dessas para rupturas parciais de tendões de cães. / Abstract: The aim of this research was to evaluate the c1ínical conditions of the tendineous sliding, the cellular kinetics of the inflammatory and healing process and the force in the regeneration of the digital deep f1exor tendon in the thoracic limb of dogs, when glue derived from the association of snake venom and buffalo fibrinogen was used instead of conventional tenorraphy. Tendons of 30 limbs were partially sectioned for fibrina glue application. Biopsies were performed at 7, 15 and 30 days after surgery so the anatomopathological and biomechanical studies of the tendons were conducted. The results analysis demonstrated that 71.7% of the tendons presented stumps retraction and 21.7% moderate to excessive adherence, what affected the sliding. There was significant difference as for the number of inflammatory cells in all studied times (P<0.05) and the inflammatory infiltration was (P<0.05) and the maximum at 15 days. The histopatological typical inflammatory process of results demonstrated the tendon at 7, 15 and 30 days after surgery, occurring a lower inflammation level in the acute phase, what made easier the healing maturation phase. In the biomechanical evaluation, as time went by the tendineous healing got progressive resistance for the maximum traction force and permanent deformations and demonstrated satisfactory results for rigidity and resilience at 15 days, when compared to the other two analyzed times. Therefore, the fibrina glue derived from snake venom can be used as an alternative substance in tenorraphies of complete ruptures or in substitution of these for partial ruptures of dogs tendons. / Mestre
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Influência do plasma rico em plaquetas associado ou não à regeneração tecidual guiada na cicatrização de defeitos de fenestração periodontal em cães : estudo histológico e histométrico /Esper, Luis Augusto. January 2009 (has links)
Orientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Sonia Regina Panzarini Barioni / Resumo: Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães. / Abstract: This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs. / Mestre
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Regeneração tecidual guiada: estudo da biocompatibilidade in vitro da membrana do compósito de poli(vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário / Guided tissue regeneration: in vitro biocompatibility of the membrane of poly(vinylidene-trifluoroethylene)/barium titanate compositeLucas Novaes Teixeira 13 April 2009 (has links)
O princípio da regeneração tecidual guiada (RTG) baseia-se na utilização de membranas biocompatíveis com a finalidade de impedir a migração dos tecidos conjuntivo e epitelial para a ferida, permitindo que células do ligamento periodontal repovoem a superfície radicular e regenerem o aparato de inserção do dente. A RTG tem sido utilizada em diversas situações clínicas para facilitar o reparo de defeitos ósseos e periodontais, sendo as membranas de politetrafluoretileno expandido (e-PTFE) as mais utilizadas. O objetivo deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade in vitro de uma nova membrana do compósito de poli(vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário (P(VDF-TrFE)/BT). Para isso, osteoblastos, fibroblastos e queratinócitos, células com as quais a membrana entrará em contato durante o processo de RTG, foram cultivados sobre membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE (controle). Os seguintes parâmetros foram avaliados: 1) adesão celular por contagem em hemocitômetro; 2) proliferação celular por MTT e 3) adesão e morfologia celular por fluorescência, para as linhagens osteoblástica, fibroblástica e de queratinócitos; 1) medida do conteúdo de proteína total; 2) medida da atividade de fosfatase alcalina (ALP) e 3) formação de matriz mineralizada, para as linhagens osteoblástica e fibroblástica; 1) imunolocalização de ALP por fluorescência; 2) detecção histoquímica in situ da atividade de ALP e 3) expressão dos genes Runx2, Colágeno I (COL I), Ostepontina (OPN), ALP, Sialoproteína óssea (BSP), Osteocalcina (OC), Bax, Bcl-2 e Survivina (SUR) por PCR em tempo real, para a linhagem osteoblástica; 1) expressão dos genes Periostin (PRT), Periodontal Ligament Specific 17 (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulina (FBM), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem fibroblástica e 1) expressão dos genes Involucrina (IVL), Queratina 1 (QRT-1), Queratina 10 (QRT-10), Queratina 14 (QRT-14), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem de queratinócitos. Os dados quantitativos foram submetidos ao teste estatístico Mann-Whitney (nível de significância: 5%). A adesão de células osteoblásticas foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de células osteoblásticas foi maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1, 7 e 10 dias (p<0,05). A epifluorescência indicou que as células osteoblásticas estavam aderidas e mais espraiadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 4 e 24 h. A imunofluorescência revelou presença de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias. O conteúdo de proteína total foi semelhante entre as duas membranas em 10 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve diferença estatisticamente significante para atividade de ALP em 7 dias (p>0,05), entretanto em 10 e 14 dias (p<0,05) a atividade de ALP foi maior em culturas sobre o P(VDFTrFE)/ BT. A detecção histoquímica in situ revelou atividade de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT, tanto aos 7 quanto aos 14 dias. A formação de matriz mineralizada ocorreu apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. A expressão dos genes Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax e SUR foi maior em células cultivadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve expressão de Bcl-2 em culturas sobre as duas membranas. A adesão de células fibroblásticas foi semelhante entre P(VDFTrFE)/ BT e PTFE em 30 min (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 2 e 4 h (p<0,05). A proliferação de células fibroblásticas foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 3 dias (p>0,05) e maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1 e 7 dias (p<0,05). Os ensaios de fluorescência direta revelaram que as células fibroblásticas estavam aderidas sobre as duas membranas, porém em estágios mais avançados de espraiamento sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 2 e 4 h. O conteúdo de proteína total foi maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 10, 14 e 21 dias (p<0,05). Não se observou atividade de ALP em culturas fibroblásticas sobre as membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE aos 7 dias. Contudo, em 14 dias (p>0,05) a atividade de ALP foi semelhante entre as duas membranas e em 21 dias (p<0,05) foi estatisticamente significante em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. Aos 21 dias não se notou formação de matriz mineralizada em ambas as membranas. A expressão dos genes PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax e SUR foi maior em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em células fibroblásticas cultivadas sobre o PTFE em 7 e 14 dias (p<0,05). A adesão de queratinócitos foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de queratinócitos foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 4, 7, 10 e 14 dias (p>0,05) e maior sobre culturas crescidas sobre P(VDF-TrFE)/BT em 1, 17 e 21 dias (p<0,05). Por fluorescência direta notou-se que células cultivadas sobre ambas as membranas exibiam morfologia predominantemente arredondada em 30 min, 4 e 24 h. A expressão do gene IVL foi semelhante em culturas crescidas sobre as duas membranas em 7 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 14 dias (p<0,05). Os genes QRT-1, QRT -10 e QRT -14, Bax e SUR estavam mais expressos em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em queratinócitos crescidos sobre o PTFE em 7 dias (p<0,05) e semelhante entre as duas membranas em 14 dias (p>0,05). Por favorecer eventos relacionados ao desenvolvimento tecidual, como a adesão, proliferação e diferenciação celular, a membrana de P(VDF-TrFE)/BT pode representar uma boa alternativa ao PTFE para procedimentos de RTG. / The principle of guided tissue regeneration (GTR) is based on the use of physical barrier to isolate periodontal defects of the gingival connective and epithelial tissues so that bone, periodontal ligament, and cementum can be regenerated from their own cells. RTG procedure has been used in many clinical situations to promote bone and periodontal regeneration. Membranes of expanded polytetrafluoroethylene (e-PTFE) are the most commonly used material for GTR. However, several membranes have been tested to be applied in GTR. The purpose of this study was to evaluate the in vitro biocompatibility of the membrane of poly(vinylidene-trifluoroethylene/barium titanate (P(VDF-TrFE)/BT) composite. For that, osteoblasts, fibroblasts and keratinocytes, cells that will interact with the membrane during RTG, were culture P(VDF-TrFE)/BT and PTFE (control) membranes for up to 21 days. The following parameters were evaluated: 1) cell adhesion by counting in hemocytometer, 2) cell proliferation and 3) cell morphology by fluorescent labeling, for osteoblastic, fibroblastic and keratinocyte lineages; 1) total protein content; 2) alkaline phosphatase (ALP) activity and 3) mineralized bone-like nodule formation, for osteblastic and fibroblastic lineages; 1) immunolocalization of ALP by fluorescent labeling; 2) histochemistry detection in situ of ALP activity and 3) gene expression of Runx2, Collagen I (COL I), Ostepontin (OPN), ALP, Bone Sialoprotein (BSP), Osteocalcin (OC), Bax, Bcl-2 and Survivin (SUR) by real-time PCR, for osteoblastic lineage; 1) gene expression of Periostin (PRT), Periodontal ligament specific (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulin (FBM), Bax, Bcl-2 and SUR by real-time PCR, for fibroblastic lineage; 1) gene expression of Involucrin (IVL), Keratin-1 (QRT-1), Keratin-10 (QRT-10), Keratin-14 (QRT- 14), Bax, Bcl-2 and SUR days by real-time PCR, for keratinocyte lineage. Data were submitted to Mann-Whitney test (level of significance: 5%). The adhesion of osteoblastic cells was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Cell proliferation was higher in ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 7 and 10 days (p<0.05). Epifluorescence showed that osteoblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Immunofluorescence revealed the presence of ALP only in osteogenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days. Total protein content was similar between the membranes at 10 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no differences in ALP activity at 7 days (p>0.05). However, ALP activity was higher in osteogenic cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 10 and 14 days (p<0.05). The histochemistry reveals that only ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT had ALP activity in situ at 7 and 14 days. Bone-like nodule formation occurred only in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 21 days. Gene expression of Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax and SUR was higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no expression of Bcl-2 in cultures on both membranes. The adhesion of fibroblastic cells was similar between P(VDFTrFE)/ BT and PTFE at 30 min (p>0.05) and greater in fibroblastic cultures on P(VDFTrFE)/ BT at 2 and 4 h (p<0.05). Cell proliferation was similar in fibroblastic cultures grown on both membranes at 3 days (p>0.05) and higher in cultures on P(VDF-TrFE)/BT at 1 and 7 days (p<0.05). Epifluorescence showed that fibroblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and more spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Total protein content was greater on P(VDF-TrFE)/BT at 10, 14 and 21 days (p<0.05). There was no ALP activity in fibroblastic cultures grown on both membranes at 7 days. The ALP activity was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 14 day (p>0.05) and higher on P(VDFTrFE)/ BT at 21 days (p<0.05). Bone-like nodule formation was not observed in fibroblastic cultures on both membranes at 21 days. Gene expression of PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax and SUR was higher in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl- 2 expression was higher in fibroblastic cultures on the PTFE at 7 and 14 days (p<0.05). Keratinocyte adhesion was similar for P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Keratinocyte proliferation was statistically similar on both membranes at 4, 7, 10 and 14 days (p>0.05) and higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 17 and 21 days (p<0.05). Keratinocytes displayed a round morphology and was not observed any evidence of cell spreading at 30 min, 4 and 24 h. The gene expression of IVL was similar in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 7 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 14 days (p<0.05). Genes expression of QRT-1, QRT-10, QRT-14, Bax and SUR was greater in keratinocytes grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl-2 expression was higher in keratinocytes cultured on PTFE at 7 days (p<0.05) and similar on both membranes at 14 days (p>0.05). Our study indicates that P(VDF-TrFE)/BT membrane promote events related to tissue development/regeneration, such as cell adhesion, proliferation and differentiation. Thus, the membrane of P(VDF-TrFE)/BT could be used as an advantageous alternative to PTFE in GTR procedures.
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