O uso de células-tronco mesenquimais (CTMs) na medicina regenerativa, principalmente quando associado ao sistema nervoso, requer alternativas em relação à via de aplicação. A associação da terapia celular com a nanotecnologia para uso em neurociências, desenvolvida nesse trabalho, é uma abordagem inovadora no Brasil. Dessa forma, as matrizes de nanofibras, produzidas pela técnica de electrospinning (ES), funcionam como suportes para a proliferação e diferenciação celular proporcionando uma alternativa para a reconstituição do tecido lesado. O processo de regeneração do tecido neural pode ser aperfeiçoado com a liberação controlada de fatores neurotróficos, através do uso dessas matrizes. Entre esses fatores, encontra-se o NGF (Nerve Growth Factor – fator de crescimento neural), o qual exerce um papel central no desenvolvimento, manutenção e sobrevivência dos neurônios. Além disso, características de superfície das matrizes, como o alinhamento de nanofibras, podem estimular a diferencição neural. O objetivo principal deste trabalho foi desenvolver matrizes de nanofibras alinhadas e não alinhadas com e sem o NGF incorporado, através da técnica ES de emulsão. Além disso, objetivou-se avaliar o comportamento celular, bem como a capacidade de diferenciação neural das CTMs, sobre as estruturas tridimensionais desenvolvidas. As CTMs foram extraídas da polpa de dentes decíduos esfoliados humanos. Quatro grupos de scaffolds foram desenvolvidos, caracterizados e avaliados: scaffolds com fibras randomizadas e com fibras alinhadas, sendo cada tipo com e sem o NGF incorporado. As análises físico-químicas realizadas foram morfologia, diâmetro das fibras e degradabilidade do biomaterial. Os parâmetros biológicos avaliados foram morfologia, adesão, viabilidade e proliferação celular, bem como a citotoxicidade frente ao biomaterial. A diferenciação neural foi quantificada através da expressão dos genes neurais nestina, β- III tubulina e NSE (enolase específica para neurônios). As matrizes de nanofibras produzidas mostraram-se satisfatórias para o cultivo de CTMs, mimetizando a estrutura física da matriz extracelular (MEC). Além disso, a técnica utilizada permitiu a obtenção de estruturas com nanofibras alinhadas e randomizadas. As CTMs cultivadas nas matrizes foram capazes de aderir e proliferar com vantagens para adesão nas matrizes alinhadas contendo o NGF, em relação às matrizes alinhadas controle. As estruturas produzidas não apresentaram características tóxicas permitindo que as CTMs mantivessem a viabilidade ao longo do tempo. A avaliação da diferenciação neural das CTMs indicou que todos os grupos de matrizes foram capazes de promover o aumento da expressão de genes neurais. Tal capacidade foi observada tanto para CTMs cultivadas sobre as matrizes com o meio controle quanto com o meio de indução neural. Esses achados mostram a possível influência das características químicas e topográficas providas pelos substratos produzidos. As características da matriz artificial permitem que as CTMs respondam adequadamente ao microambiente e expressem genes neurais, podendo auxiliar na regeneração tecidual quando aplicada em lesões do sistema nervoso. / The use of mesenchymal stem cells (MSCs) in regenerative medicine, particularly when associated with the nervous system, requires alternatives with respect to cell application methods. The association of cellular therapy with nanotechnology for use in neuroscience, developed with this work, is an innovative approach in Brazil. Scaffolds produced by electrospinning (ES) technique act as supports for cell proliferation and differentiation, providing an alternative to reconstitute the damaged tissue. The process of neural tissue regeneration can be improved through the controlled release of neurotrophic factors from the scaffolds. Among these factors, NGF (Nerve Growth Factor) plays a central role in the development, maintenance and survival of neurons. Furthermore, surface characteristics of nanofibers, such as alignment, can stimulate neural differentiation. The main objective of this study was to develop aligned nanofiber scaffolds and random nanofiber scaffolds with and without NGF incorporated through emulsion ES. In addition it was aimed to characterize the physico-chemical properties of the scaffolds, related to the extracellular matrix (ECM) and evaluate the cell behavior, as well as the neural differentiation on these three-dimensional devices. The MSCs were extracted from the dental pulp of human exfoliated deciduous teeth. Four groups of scaffolds were developed, characterized and evaluated: scaffolds with randomized fibers and with aligned fibers, each type with and without NGF incorporated. The physico-chemical analyzes performed were morphology, fiber diameter and degradability of the biomaterial. The biological parameters evaluated were cell morphology, adhesion, proliferation and viability, as well as cytotoxicity by the biomaterial. The neural differentiation was quantified by measuring gene expression for the neural genes nestin, β-III tubulin and NSE (neuron-specific enolase). The scaffolds produced demonstrated a satisfactory environment for MSC growth, mimicking the ECM physical structure. Furthermore, the technique allowed for the production of scaffolds with aligned and with randomized nanofibers. MSCs cultured on scaffolds were able to adhere and proliferate, with better adhesion performance on aligned nanofiber scaffolds with NGF incorporated, when compared to aligned nanofiber scaffolds control. The devices produced showed nontoxic characteristics permitting MSCs to maintain their viability over time. The evaluation of MSC neural differentiation indicated that all groups of scaffolds were able to upregulate neural genes expression. Such ability was observed for both MSCs cultured on scaffolds with control medium as on scaffolds under neural induction medium. These features provided by this artificial ECM permit proper MSC response to microenvironment, leading to neuronal genes expression, which could improve tissue regeneration when applied to nerve lesions.

Os avanços relacionados à ciência dos biomateriais e engenharia tecidual buscam esclarecer os mecanismos envolvidos na resposta biológica associada ao uso desses dispositivos e sua interação com o sistema imune. Neste estudo, avaliou-se a resposta imune e inflamatória desenvolvida em camundongos frente à implantação de membrana de cortical óssea bovina no tecido subcutâneo, em implantação única e sequencial de duas membranas, assim como os possíveis mecanismos envolvidos no processo de reconhecimento e reabsorção desse biomaterial, de acordo com análise histomorfométrica, enzimática e molecular. Após a implantação da membrana, sinais de reabsorção que antes eram notados em pontos isolados, aos poucos se unem até sua completa degradação, observada somente após 15 dias. Todo o processo de reabsorção da membrana é acompanhado por uma reação inflamatória de magnitude moderada, seguida pelo declínio do número de leucócitos, surgimento de células gigantes multinucleadas e formação de uma cápsula de tecido conjuntivo fibroso. A cinética de TNF- e MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 apresentou um padrão de produção decrescente, entretanto os níveis dos inibidores de metaloproteinases (TIMPs) e TGF- parecem atuar de forma inversa. A velocidade de reabsorção após duas implantações consecutivas da membrana foi maior quando comparada ao grupo de animais que sofreu apenas uma implantação, porém os resultados do teste de hipersensibilidade do tipo tardia (DTH) demonstraram que a membrana é biocompatível, pois não elicitou resposta imunológica exacerbada após uma segunda implantação, confirmando então a natureza não imunogênica desse biomaterial. Finalmente, os animais CD14KO e MyD88KO apresentaram uma reabsorção mais lenta da membrana implantada, quando comparados aos animais C57Bl/6 (WT), demonstrando que as moléculas CD14 e MyD88 estão envolvidas no reconhecimento do biomaterial e desempenham importante papel no processo de reabsorção da membrana de cortical óssea bovina, indicando a participação de PAMPs e/ou DAMPs na resposta biológica gerada por esse biomaterial. / Advances related to the biomaterials science and tissue engineering seek to clarify the mechanisms involved in the biological response associated with the use of those devices and their interaction with the immune system. This study evaluated the inflammatory and immune response developed in mice after implantation bovine bone cortical membrane in subcutaneous tissue, in both, unique and sequential implantation of 2 membranes, as the mechanisms involved in this biomaterial recognition and resorption process, on regards to histomorphometric, enzymatic and molecular analysis. After membrane implantation, previously observed signs of resorption in isolated spots, gradually unite until their complete degradation after 15 days. The whole membrane resorption process is accompanied by a moderate inflammatory reaction, followed by a decline in the leukocytes number, appearance of multinucleated giant cells and formation of a capsule of fibrous connective tissue. The kinetics of TNF-, MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 showed a pattern of decreasing production, however, levels of metalloproteinases inhibitors (TIMPs) and TGF- seem to act in reverse way. The resorption rate after two successive membrane implantations was higher when compared to the group which suffered only one implantation, however, the results of delayed test hypersensity (DTH) demonstrated that the membrane is biocompatible, that is, it does not elicited too high immune response after a second position, confirming the non immunogenic nature of this biomaterial. Eventually, CD14KO and MyD88KO strains showed a slower membrane resorption when compared to animals C57Bl/6, demonstrating that the CD14 and MyD88 molecules are involved in biomaterial recognition and play an important role in bovine cortical bone membrane resorption process, indicating that PAMPs and/or DAMPs are involved in biological response generated by this biomaterial.

The interface between tendon/ligament and bone tissue is a complex transition of biochemical, cellular, and mechanical properties. Investigating computational and tissue engineering models that imitate aspects of this interface may supply critical design parameters for designing future tissue replacements to promote increased biochemical and mechanical integration between tendon/ligament and bone. Strategies for modeling this tissue have typically focused on the development of heterogeneous structures to create gradients or multiphasic materials that mimic aspects of the transition. However, further work is required to elucidate the role of specific mechanical and material stimuli in recapitulating features of the tendon/ligament-bone insertion. In particular, in constructs that exhibit variation in both mechanical and biochemical properties, the interplay of mechanical, material, and chemical signals can complicate understanding of the particular factors at work in interface formation. Thus, the overall goal of this dissertation was to provide insight into the role of mechanical strain and scaffold degradability on cell behavior within heterogeneous biomaterials. Specifically, a method for determining cell vertical position within a degradable gel through a laminated interface was developed. A computational model was created to examine possible variation in local mechanical strain due to heterogeneity in mechanical properties and different interface geometries. Finally, the influence of biomaterial degradability on changes in encapsulated human mesenchymal stem cell morphology under response to cyclic mechanical strain was explored. Together, these studies provide insight into mechanical and material design considerations when devising tissue engineering strategies to regenerate the tendon/ligament-bone interface.

O uso de células-tronco mesenquimais (CTMs) na medicina regenerativa, principalmente quando associado ao sistema nervoso, requer alternativas em relação à via de aplicação. A associação da terapia celular com a nanotecnologia para uso em neurociências, desenvolvida nesse trabalho, é uma abordagem inovadora no Brasil. Dessa forma, as matrizes de nanofibras, produzidas pela técnica de electrospinning (ES), funcionam como suportes para a proliferação e diferenciação celular proporcionando uma alternativa para a reconstituição do tecido lesado. O processo de regeneração do tecido neural pode ser aperfeiçoado com a liberação controlada de fatores neurotróficos, através do uso dessas matrizes. Entre esses fatores, encontra-se o NGF (Nerve Growth Factor – fator de crescimento neural), o qual exerce um papel central no desenvolvimento, manutenção e sobrevivência dos neurônios. Além disso, características de superfície das matrizes, como o alinhamento de nanofibras, podem estimular a diferencição neural. O objetivo principal deste trabalho foi desenvolver matrizes de nanofibras alinhadas e não alinhadas com e sem o NGF incorporado, através da técnica ES de emulsão. Além disso, objetivou-se avaliar o comportamento celular, bem como a capacidade de diferenciação neural das CTMs, sobre as estruturas tridimensionais desenvolvidas. As CTMs foram extraídas da polpa de dentes decíduos esfoliados humanos. Quatro grupos de scaffolds foram desenvolvidos, caracterizados e avaliados: scaffolds com fibras randomizadas e com fibras alinhadas, sendo cada tipo com e sem o NGF incorporado. As análises físico-químicas realizadas foram morfologia, diâmetro das fibras e degradabilidade do biomaterial. Os parâmetros biológicos avaliados foram morfologia, adesão, viabilidade e proliferação celular, bem como a citotoxicidade frente ao biomaterial. A diferenciação neural foi quantificada através da expressão dos genes neurais nestina, β- III tubulina e NSE (enolase específica para neurônios). As matrizes de nanofibras produzidas mostraram-se satisfatórias para o cultivo de CTMs, mimetizando a estrutura física da matriz extracelular (MEC). Além disso, a técnica utilizada permitiu a obtenção de estruturas com nanofibras alinhadas e randomizadas. As CTMs cultivadas nas matrizes foram capazes de aderir e proliferar com vantagens para adesão nas matrizes alinhadas contendo o NGF, em relação às matrizes alinhadas controle. As estruturas produzidas não apresentaram características tóxicas permitindo que as CTMs mantivessem a viabilidade ao longo do tempo. A avaliação da diferenciação neural das CTMs indicou que todos os grupos de matrizes foram capazes de promover o aumento da expressão de genes neurais. Tal capacidade foi observada tanto para CTMs cultivadas sobre as matrizes com o meio controle quanto com o meio de indução neural. Esses achados mostram a possível influência das características químicas e topográficas providas pelos substratos produzidos. As características da matriz artificial permitem que as CTMs respondam adequadamente ao microambiente e expressem genes neurais, podendo auxiliar na regeneração tecidual quando aplicada em lesões do sistema nervoso. / The use of mesenchymal stem cells (MSCs) in regenerative medicine, particularly when associated with the nervous system, requires alternatives with respect to cell application methods. The association of cellular therapy with nanotechnology for use in neuroscience, developed with this work, is an innovative approach in Brazil. Scaffolds produced by electrospinning (ES) technique act as supports for cell proliferation and differentiation, providing an alternative to reconstitute the damaged tissue. The process of neural tissue regeneration can be improved through the controlled release of neurotrophic factors from the scaffolds. Among these factors, NGF (Nerve Growth Factor) plays a central role in the development, maintenance and survival of neurons. Furthermore, surface characteristics of nanofibers, such as alignment, can stimulate neural differentiation. The main objective of this study was to develop aligned nanofiber scaffolds and random nanofiber scaffolds with and without NGF incorporated through emulsion ES. In addition it was aimed to characterize the physico-chemical properties of the scaffolds, related to the extracellular matrix (ECM) and evaluate the cell behavior, as well as the neural differentiation on these three-dimensional devices. The MSCs were extracted from the dental pulp of human exfoliated deciduous teeth. Four groups of scaffolds were developed, characterized and evaluated: scaffolds with randomized fibers and with aligned fibers, each type with and without NGF incorporated. The physico-chemical analyzes performed were morphology, fiber diameter and degradability of the biomaterial. The biological parameters evaluated were cell morphology, adhesion, proliferation and viability, as well as cytotoxicity by the biomaterial. The neural differentiation was quantified by measuring gene expression for the neural genes nestin, β-III tubulin and NSE (neuron-specific enolase). The scaffolds produced demonstrated a satisfactory environment for MSC growth, mimicking the ECM physical structure. Furthermore, the technique allowed for the production of scaffolds with aligned and with randomized nanofibers. MSCs cultured on scaffolds were able to adhere and proliferate, with better adhesion performance on aligned nanofiber scaffolds with NGF incorporated, when compared to aligned nanofiber scaffolds control. The devices produced showed nontoxic characteristics permitting MSCs to maintain their viability over time. The evaluation of MSC neural differentiation indicated that all groups of scaffolds were able to upregulate neural genes expression. Such ability was observed for both MSCs cultured on scaffolds with control medium as on scaffolds under neural induction medium. These features provided by this artificial ECM permit proper MSC response to microenvironment, leading to neuronal genes expression, which could improve tissue regeneration when applied to nerve lesions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:05:24Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_jma_dr_arafo.pdf: 1627813 bytes, checksum: c33f2da49d4d220b69231200c1a3f0c1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do presente estudo foi avaliar histomorfometricamente o efeito do plasma rico em plaquetas (PRP), associado a enxerto ósseo autógeno e a membrana absorvível (Resolut®), no tratamento de lesões de furca grau III. Foram criados defeitos cirúrgicos nos 3os pré-molares inferiores (P3) de cinco cães, de ambos os lados, totalizando 10 dentes. Após um período de três meses de cronificação, as lesões foram divididas aleatoriamente em dois grupos de tratamento. (1) Grupo teste: PRP + enxerto ósseo autógeno + membrana; (2) Grupo controle: enxerto ósseo autógeno + membrana. Após um período de cicatrização de 90 dias, os animais foram sacrificados. A análise histológica, a partir da marcação, mostrou formação de novo cemento celular, mínima quantidade de novo osso e ligamento periodontal, em ambos os grupos. Nenhuma diferença estatisticamente significante foi observada entre os grupos teste e controle. A associação do PRP ao enxerto ósseo autógeno e membrana, ou somente, do enxerto ósseo autógeno e membrana, não apresentou vantagens estatisticamente significantes no tratamento das lesões, resultando em preenchimento parcial das furcas e regeneração periodontal limitada à marca experimental das lesões. / The objective of this study was to evaluate histomorphometrically the platelet-rich plasma (PRP) effects, associated with autogenous bone graft and absorbable membrane (Resolut®), for the treatment of Class III furcation defects, in 5 dogs. Surgical defects were created in the 3nd mandibular premolars (P3) on both sides, of each dog, totaling 10 teeth. After a period of three months of chronified, the defects were randomly divided in two treatment groups. (1) Group Tests: PRP + graft bone autogenous + membrane; (2) Group Control: graft bone autogenous + membrane. Animals were sacrificed after 90 days healing. Histologic evaluation revealed new cellular cementum, low amount of bone and periodontal ligament formation in both groups, starting from the demarcation. No statistically significant difference was observed between Groups Test and Control. PRP + autogenous bone graft + membrane or autogenous bone graft + membrane no present statistically significant advantages on the lesions treatment, resulting in furcation partial filling and periodontal regeneration limited to the experimental mark of the lesions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-06-06Bitstream added on 2014-06-13T19:23:26Z : No. of bitstreams: 1 ruiz_kgs_dr_arafo.pdf: 357284 bytes, checksum: 93541a495590ca3b701f6cf9ef876131 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da combinação do fator de crescimento de fibroblastos básico (b-FGF) e fator de transformação de crescimento beta (TGF- beta) na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases -1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, e na síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos. A avaliação da proliferação celular foi realizada após os períodos de 24 e 48h na presença dos fatores de crescimento, através da mensuração do nível de MTS reduzido a formazan pelas células viáveis, e a síntese de b-FGF e TGF-b pelo teste ELISA empregando a técnica sandwich. Conclui-se que as associações do bFGF e do TGF-b atuaram de maneira dose-dependente no estímulo à proliferação celular, o aumento na expressão de genes para colágeno e TIMPs e redução para as metalproteases e modulação da síntese deles próprios. / The aim of this study was to evaluate the effect of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, and on the modulation of the syntheses oh these growth factors by humans periodontal ligament cells. The cellular proliferation was evaluated to 24 and 48 hours of incubation by the colorimetric method. The synthese of bFGF and TGF-ß was verificated by ELISA method, using a sandwich techinique, and mRNA expression by Real Time - PCR. In conlusion, the associations of bFGF e TGF-ß influenced of dose-dependent manner on the cellular proliferation, on the increasing of the expression to collagen and TIMPs, and on the reduction to metaloproteinases and, the modulation of these own synthesis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:15:54Z : No. of bitstreams: 1 deliberador_tm_me_araca.pdf: 2630912 bytes, checksum: a0347c4bc88ad360bdf74a6658873848 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente em cães e tratados com enxerto de osso autógeno (OA) associado ou não à barreira de sulfato de cálcio (SC). Os segundos, terceiros e quartos pré-molares mandibulares de 6 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo; Grupo OA (osso autógeno): o defeito foi preenchido com enxerto de OA; Grupo OA/SC (osso autógeno/sulfato de cálcio): o defeito foi preenchido com enxerto de OA e coberto com barreira de SC. Os retalhos foram suturados de forma a cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pós-operatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com HE ou Tricrômico de Masson. Cinco cortes de cada dente foram selecionados para análises histológica e histométrica. Foram avaliadas medidas lineares e medidas de área da cicatrização periodontal. Esses parâmetros foram apresentados como porcentagem do defeito original e transformados em arcoseno para análise estatística (ANOVA, p < 0,05). A regeneração periodontal ocorreu de forma similar nos três grupos, não sendo observada completa neoformação óssea e de tecido conjuntivo na maioria dos espécimes. Diferenças estatisticamente significativas não foram constatadas entre os três grupos em nenhum dos parâmetros avaliados. A cicatrização periodontal foi similar após o tratamento de defeitos de furca Classe II com enxerto de OA, enxerto de OA com barreira de SC ou debridamento cirúrgico somente. / The purpose of this study was to histologically analyze the healing of surgically created Class II furcation defects treated using an autogenous bone (AB) graft with or without a calcium sulfate (CS) barrier. The second, third and fourth mandibular premolars of 6 mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Teeth were randomly divided into 3 groups: Group C (control): the defect was filled with blood clot; Group AB: the defect was filled with AB graft; Group AB/CS: the defect was filled with AB graft and covered by a CS barrier. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized at 90 days postoperative. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either H&E or Masson's Trichrome. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (ANOVA, p<0.05). Periodontal regeneration in the 3 groups was similar. Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Statistically significant differences were not found in any of the evaluated parameters among the groups. Periodontal healing was similar wheter using surgical debridement alone, AB graft, or AB graft with a CS barrier in the treatment of Class II furcation defects.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-27Bitstream added on 2014-06-13T19:57:15Z : No. of bitstreams: 1 esper_la_me_araca.pdf: 415604 bytes, checksum: 36bcb3441620df6465aef668552a719f (MD5) / Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães. / This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs.

Submitted by MILAGROS DEL VALLE EL ABRAS ANKHA (doc_elabras@hotmail.com) on 2018-04-19T00:51:40Z No. of bitstreams: 1 Milagros Abras Ankha-tese final 2018 com ficha catolográfica.pdf: 3661703 bytes, checksum: 64be3370b9106d7afd83981f08a49a3e (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-04-25T22:49:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 elabrasankha_mdv_dr_sjc.pdf: 3661703 bytes, checksum: 64be3370b9106d7afd83981f08a49a3e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-25T22:49:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 elabrasankha_mdv_dr_sjc.pdf: 3661703 bytes, checksum: 64be3370b9106d7afd83981f08a49a3e (MD5) Previous issue date: 2018-02-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos anteriores sugerem que o ácido hialurônico (AH) e o plasma rico em plaquetas (PRP) têm potencial para melhorar o processo de cicatrização da cartilagem e diminuir a progressão da osteoartrite. No entanto, poucas pesquisas avaliam seu efeito sinérgico. Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito do AH associado ao PRP na regeneração do disco articular e da superfície osteocondral da articulação temporomandibular (ATM). A osteoartrite será induzida por meio da perfuração bilateral do disco articular de coelhos. Quarenta coelhos foram divididos em 4 grupos, conforme o procedimento: sem lesão(SL)/sem tratamento(ST) (n=4), lesão(L)/sem tratamento (ST) (n=12), L/AH (n=12), L/AH+PRP (n=12). Quatro coelhos do grupo SL/ST foram eutanasiados no tempo zero. Após 8 e 24 semanas da perfuração dos discos articulares, seis coelhos dos grupos L/ST, L/AH e L/AH+PRP foram eutanasiados. O disco articular foi avaliado radiograficamente para visualizar possíveis calcificações. Foi realizada análise macroscópica e histológica do disco e do côndilo mandibular. Foi utilizada a análise histoquímica por Picrosirius Red para avaliar a presença de colágeno I e III e a análise imuno-histoquímica do colágeno I e II. As porcentagens de marcação obtidas nas análises histoquímica e imuno-histoquímica foram avaliadas estatisticamente, adotando-se o nível de significância de 5%. Macroscopicamente, o disco articular nos grupos tratados apresentou, na maioria dos espécimes, preenchimento parcial ou total do defeito criado. Os côndilos apresentaram, na maioria dos espécimes, irregularidade da superfície osteocondral. Radiograficamente, após 24 semanas da perfuração do disco, focos de radiopacidade foram observados nos grupos não tratados e em alguns dos espécimes dos tratados. Na análise histológica foi confirmada a presença de material mineralizado, próximo e distante da perfuração, além de diminuição da celularidade e fibrose. Na análise histoquímica, a porcentagem de colágeno I prevaleceu com relação ao colágeno III, tanto no disco quanto no côndilo, independentemente do grupo e período avaliado. Entretanto, no disco não houve diferença estatística significativa. No côndilo, L/AH e L/AH+PRP nos períodos de 8 e 24 semanas apresentaram uma porcentagem de colágeno I significativamente maior que L/ST (p<0,05). A expressão imuno-histoquímica de colágeno I e II no disco não apresentou diferença estatística significante. No côndilo, a expressão do colágeno I apresentou diferença significativa entre os 9 grupos (p=0,00) e os períodos (p=0,05). O grupo L/AH+PRP de 24 semanas apresentou maior porcentagem de marcação positiva para colágeno I, que era diferente dos grupos SL/ST e L/ST, porém sem diferença estatística com relação ao L/AH. Em conclusão, os tratamentos da osteoartrite com AH ou PRP associado ao AH mostram resultados promissores, ajudando na redução do defeito criado no disco, porém, sem resultados satisfatórios como protetores da superfície osteocondral, na presença de perfuração discal. / Previous studies have suggested that hyaluronic acid (HA) and platelet-rich plasma (PRP) have the potential to improve the healing process of cartilage and decrease the progression of osteoarthritis. However, few studies have evaluated their synergistic effect. This study aims at evaluating the effect of HA associated with PRP on the regeneration of the articular disc and the osteochondral surface of the temporomandibular joint (TMJ). Osteoarthritis was induced by means of bilateral perforation of the articular disc of rabbits. Forty rabbits were divided into 4 groups, according to the procedure: without lesion (WL)/without treatment (WT) (n = 4), lesion (L)/without treatment (WT) (n = 12), L/HA (n = 12), L/ HA+PRP (n = 12). Four rabbits from group G1 were euthanized at time zero. After 8 and 24 weeks of joint disc perforation, six rabbits from groups L/WT, L/HA and L/HA+PRP were euthanized. The articular disc was evaluated radiographically to visualize possible calcifications. Macroscopic and histological analysis of the disc and the mandibular condyle were performed. The histochemical analysis by Picrosirius Red was used to evaluate the presence of collagen I and III, as well as the immunohistochemical analysis was used to evaluate the expression of collagen I and II. The percentages of staining obtained from the histochemical and immunohistochemical analysis were statistically evaluated, adopting the significance level of 5%. Macroscopically, the articular disc in the treated groups presented in most of the specimens partial or total filling of the defect created. The condyles presented, in most of the specimens, degeneration of the osteochondral surface. Radiographically, after 24 weeks of disc perforation, foci of radiopacity were observed in the untreated and in some of the specimens of treated groups. Histological analysis confirmed the presence of mineralized material, close and distant to perforation, as well as decreased cellularity and fibrosis. In the histochemical analysis, the percentage of collagen I prevailed in both disc and condyle, independently of the group and period evaluated. However, in the disc there was not statistical difference. In the condyle, L/HA and L/HA+PRP in the periods of 8 and 24 weeks presented a percentage of collagen I significantly higher than L/WT (p <0.05). The expression of collagen I and II in the disc did not present significant statistical difference. In the condyle, the expression of collagen I was statistically different between the groups (p = 0.00) and the periods (p = 0.05). The 24-week L/HA+PRP group had a higher percentage of positive marking for collagen I, which was different from the WL/WT and L/WT groups, but with no statistical difference with respect to L/HA. In conclusion, the treatment of osteoarthritis with HA or PRP associated with HA shows promising results, helping to reduce the defect created in the disc, but without satisfactory results as protectors of the osteochondral surface, in the presence of perforation of the disc. / 2016/23446-2

Orientador: Ricardo Samih Georges Abi Rached / Banca: Silvana Regina Perez Orrico / Banca: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Francisco Humberto Nociti Junior / Banca: Márcio Zafallon Casati / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da combinação do fator de crescimento de fibroblastos básico (b-FGF) e fator de transformação de crescimento beta (TGF- beta) na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases -1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, e na síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos. A avaliação da proliferação celular foi realizada após os períodos de 24 e 48h na presença dos fatores de crescimento, através da mensuração do nível de MTS reduzido a formazan pelas células viáveis, e a síntese de b-FGF e TGF-b pelo teste ELISA empregando a técnica "sandwich". Conclui-se que as associações do bFGF e do TGF-b atuaram de maneira dose-dependente no estímulo à proliferação celular, o aumento na expressão de genes para colágeno e TIMPs e redução para as metalproteases e modulação da síntese deles próprios. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, and on the modulation of the syntheses oh these growth factors by humans periodontal ligament cells. The cellular proliferation was evaluated to 24 and 48 hours of incubation by the colorimetric method. The synthese of bFGF and TGF-ß was verificated by ELISA method, using a "sandwich" techinique, and mRNA expression by Real Time - PCR. In conlusion, the associations of bFGF e TGF-ß influenced of dose-dependent manner on the cellular proliferation, on the increasing of the expression to collagen and TIMPs, and on the reduction to metaloproteinases and, the modulation of these own synthesis. / Doutor