Nous avons voulu évaluer si les gènes CHE2, ATM et TP53, associés à un risque intermédiaire de cancer du sein, étaient soumis à une différence d'expression allélique (DEA). Nous avons étudié des lignées cellulaires lymphoblastiques (LCLs) dérivées de patientes à haut risque, négatives pour des mutations dans CRCA1 et BRCA2. Nous avons développé une méthode basée sur la "fusion haute-résolution" (High-resolution melting curve analysis, HRM) et l'utilisation d'une sonde d'hybridation fluorescente pour détecter de la DEA chez des individus hétérozygotes pour un SNP marqueur exonique. Cette méthode permet de corréler le signal fluorescent à la quantité relative des transcrits alléliques. Nous avons développé un outil d'analyse adapté aux besoins spécifiques de l'étude de la DEA par HRM. Dans nos échantillons, une DEA statistiquement significative a été identifiée pour le gène CHEK2, chez les porteurs de la mutation tronquante 1100delC. En revanche, en combinant les données du criblage mutationnel des gènes candidats et de l'étude de DEA, nous n'avons pas identifié de variant régulateur localisé en cis qui induirait de la DEA significative dans les gènes étudiés, dans le contexte de régulation transcriptionnelle propre aux LCLs proliférant librement. Nos résultats montrent que le HRM est une méthode sensible et précise pour mesurer de la DAE et qui peut être appliquée à d'autres tissus, mammaires ou sanguins. Ces derniers présentent un grand intérêt pour les études de criblage mutationnel à haut-débit cherchant à identifier des variants dysfonctionnels dans les régions régulatrices de gènes candidats. / We aimed to assess whether the breast-cancer intermediate-risk genes CHEK2, ATM ant TP53 were subject to differential allelic expression (DAE) in lymphoblastoid cell lines (LCLs) from high-risk breast cancer patients for whom no mutation in BRCA1 or BRCA2 had been identified.We implemented an assay based on high-resolution melting curve analysis (HRM) of single labeled fluorescent probes to detect allelic expression imbalance. The method relies on the distinction of the two alleles of an exonic marker SNP in heterozygous individuals with a fluorescent signal correlated to the relative abundance of each transcript. We developed an analysis tool for HRM data processing, specifically dedicated to DAE assessment. In our series, we found evidence for DAE for CHEK2, in carriers of the truncating mutation 1100delC. When combining mutation-screening data and assessment of DAE, we did not identify functional regulatory variant located in cis of the studied genes that would lead to DAE, in the transcriptional regulatory milieu of freely proliferating LCLs. Our results support that HRM is a method with high sensitivity and accuracy that can be used for DAE assessment. This approach can be applied to study breast and blood tissue samples. The latter would be of great interest for high-throughput mutation screening projects aiming to identify dysfunctional regulatory variants in candidate genes.

L’entose est une forme de mort cellulaire non apoptotique caractérisée par l’internalisation d’une cellule cible vivante dans une cellule hôte vivante. Ce processus de cannibalisme cellulaire qui est également connu sous le nom de « cellule dans une cellule » est retrouvé dans de nombreux cancers humains. Au cours de mes travaux de thèse, nous avons développé différents modèles d’entose in vitro et avons débuté l’identification des protéines qui répriment l’entose en combinant un criblage de petits ARN interférants à une approche de microscopie confocale. Nous avons découvert que la protéine suppressive de tumeur TP53 ainsi que son isoforme Δ133TP53 bloquent le processus d’internalisation cellulaire et l’entose. La perte de l’expression de la protéine TP53 ou de Δ133TP53 entraîne une libération extracellulaire d’adénosine triphosphate ainsi que l’activation du récepteur purinergique P2Y2, deux évènements cellulaires qui aboutissent à l’internalisation d’une cellule par une autre cellule. De plus, nous avons constaté que les cellules cannibales deviennent énescentes à la suite de l’induction de la protéine p21WAF1.Mes travaux de recherche révèlent l’existence d’une nouvelle modalité d’induction de la sénescence cellulaire. De façon surprenante, nous avons également observé que l’induction de la sénescence par l’oncogène RasV12ou à la suite de stress (réplicatifouoxydatif) déclenchait le cannibalisme cellulaire, suggérant que le cannibalisme cellulaire est une caractéristique des cellules sénescentes. L’ensemble de mes travaux de recherche souligne le lien étroit qui existe entre le cannibalisme cellulaire et la senescence. / Entosis is a non-apoptotic cell death process of live internalized cell inside the host/cannibal cell. In human cancers, commonly "cell-in-cell" cytological features have been observed over the period of time. In this study we have established in vitro models of entosis and initiated the identification of entotic repressors by developing fluorescent confocal microscopy screening of small interfering RNA. We identified that TP53 and one of its isoform 133TP53 specifically inhibits the cell internalization. Loss of TP53 or 133TP53 expression increases extracellular ATP release and the consequent activation of purinergic P2Y2 receptors, which signal for engulfment. Cannibal cells activate a senescence program through p21WAF1 induction, revealing a new modality of induction of cellular senescence that can occur in the absence of TP53 or 133TP53. Senescence induced by oncogenic RasV12 and by replicative or oxidative stresses also results in cellular cannibalism, suggesting that cannibalism is a common feature of senescent cells. Altogether, our results provide evidence that cellular cannibalism and senescence are tightly linked.

O estado de metilação é suscetível a mudanças quando os organismos são expostos a agentes ambientais tais como componentes dos alimentos e medicamentos. Uma dieta rica em metionina (Met) poderia modular a concentração de S-adenosilmetionina (SAM) e S-adenosilhomocisteína (SAH) e alterar o estado de metilação da região promotora de genes supressores de tumores. Tanto a hipometilação global quanto a hipermetilação de genes específicos estão envolvidas na instabilidade genômica e poderiam resultar em dano ao DNA. Este estudo avalia se a dieta suplementada com Met associada a doxorrubicina (DXR), um fármaco antitumoral que induz espécies reativas, resulta em alterações no estado de metilação da região promotora do gene TP53, na razão SAM/SAH, na concentração de glutationa (GSH) e em dano ao DNA. Quarenta ratos machos Wistar foram separados em dois grupos: dieta suplementada com Met (ração comercial acrescida de 2% Met) e dieta controle (ração comercial) por seis semanas. Cada grupo foi subdividido em dois subgrupos que receberam DXR (1mg/Kg) ou solução salina intraperitoneal na terceira e sexta semanas de tratamento. Os rins e fígado foram utilizados para isolamento do DNA, determinação da concentração de SAM, SAH e GSH, e análise da instabilidade genômica. Todos os grupos apresentaram o mesmo estado de metilação da região promotora do gene TP53, determinado pelo método de análise de restrição combinada com bissulfito (COBRA). Este fato poderia ser explicado pelo índice de metilação (razão SAM/SAH) que permaneceu inalterado, possivelmente devido a uma adaptação do ciclo da Met que manteve a concentração de SAM. A depleção de GSH não ocorreu quando DXR foi associada a dieta suplementada com Met. Portanto, a suplementação com Met manteve a concentração de GSH em ratos tratados com DXR. A dieta suplementada com Met não induziu instabilidade genômica e não alterou o dano ao DNA induzido pela DXR. Em conclusão, DXR induz depleção de GSH que é inibida pela suplementação com Met. Entretanto, a mesma suplementação não previne a instabilidade genômica induzida pela DXR. A dieta suplementada com Met aumenta a concentração de SAH renal sem alterar a concentração de SAM e GSH. Tanto a dieta suplementada quanto a DXR não induzem hipermetilação na região promotora do gene TP53. / The DNA methylation status is susceptible to changes when organisms are exposed to environmental agents such as food components and drugs. A methionine-rich (Met) diet may modulate S-adenosylmethionine (SAM) and S-adenosylhomocysteine (SAH) concentrations, which could change the DNA methylation status in the promoter region of tumor suppressor genes. Global hipomethylation and gene-specific hipermethylation are involved in genomic instability and it could result in DNA damage. This study intends to evaluate if a Met-rich diet associated with doxorubicin (DXR), an antitumoral drug that induces reactive species, result in changes in the methylation status of the TP53 gene promoter, in the SAM/SAH ratio, in glutathione levels (GSH) and in DNA damage. Forty male Wistar rats were separated into two groups: Met-rich diet (standard chow plus 2% Met), and control diet (standard chow) for six weeks. Each group was subdivided into another two groups that received DXR (1mg/kg) or saline intraperitoneally in the third and sixth weeks of the experiment. The kidneys and the liver were removed for DNA isolation, SAM, SAH and GSH determination, and genomic instability assay. All groups showed the same unmethylated status in the TP53 promoter according to the Combined Bisulfite Restriction Analysis (COBRA). This could be explained by the fact that the methylation index (SAM/SAH ratio) remained unchanged, possibly because of an adaptive Met pathway that maintains SAM levels. GSH depletion did not occur when DXR was associated with the Met-rich diet. As a matter of fact, the Met-rich diet improved GSH concentration in DXR-treated rats. Met-rich diet did not induce genomic instability, and it did not alter DNA damage induced by DXR. In conclusion, DXR induces GSH depletion which is inhibited by Met supplementation. However, Met-rich diet may not prevent genomic instability induced by DXR. A Met-rich diet increases SAH levels; however, it does not change GSH and SAM levels. Neither Met supplementation nor DXR induced DNA hypermethylation in the TP53 gene promoter.

O inibidor da ligação do DNA 4 (ID4) é membro da família hélice-alça-hélice de fatores de transcrição, presente durante o desenvolvimento embrionário Sistema Nervoso Central, e que tem sido associado à mutações no gene TP53 e a ativação de SOX2. Juntamente com outros fatores de transcrição, ID4 está envolvido no processo de tumorigênese dos astrocitomas, contribuindo para a de-diferenciação celular, a proliferação e a quimiorresistência. Nesse estudo, nosso objetivo foi caracterizar o padrão de expressão de ID4 em astrocitomas humanos difusamente infiltrativos de graus II a IV de malignidade, classificados de acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS); correlacionar os níveis de expressão de ID4 com os de SOX2, SOX4, OCT-4 e NANOG, juntamente com o status mutacional de TP53; e correlacionar os resultados com os dados de sobrevida dos pacientes com GBM. PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) foi realizado em 130 amostras de astrocitomas para obter a expressa relativa de cada gene, mostrando hiperexpressão de todos os fatores de transcrição analisados nas amostras tumorais. Correlação positiva foi encontrada comparando a expressão relativa de ID4 em astrocitomas infiltrativos com a expressão de SOX2 (r=0.50; p<0.005), SOX4 (r=0.43; p<0.005) e OCT-4 (r=0.39; p<0.05). Os resultados da análise mutacional de TP53 permitiu comparações entre os grupos mutado e não-mutado apenas nos casos de astrocitomas de baixo grau (AGII), que demonstraram altos níveis de ID4, SOX2 e SOX4 nos casos mutados (p<0.05). Esse padrão foi mantido em amostras de glioblastoma (GBM) secundário e foi confirmado por imunohistoquímica. A combinação da hiperexpressão de ID4, SOX4 e OCT-4 conferiu uma menor sobrevida (mediana de 6 meses) muito menor aos pacientes de GBM do que a hipoexpressão (mediana de 18 meses). Uma vez que ID4 isoladamente e SOX4 e OCT-4 como um complexo ativam a transcrição de SOX2, é possível que múltiplas vias de ativação de SOX2 prejudiquem o prognóstico dos pacientes de GBM. Esses resultados sugerem uma via comum para esses quatro alvos na tumorigênese dos astrocitomas, com ID4 surgindo como um novo alvo para estudos e terapias futuras / Inhibitor of DNA Binding 4 (ID4) is a member of the helix-loop-helix ID family of transcription factors, mostly present in the central nervous system during embryonic development, that has been associated with TP53 mutation and activation of SOX2. Along with other transcription factors, ID4 has been implicated in the tumorigenic process of astrocytomas, contributing to cell dedifferentiation, proliferation and chemoresistance. In this study, we aimed to characterize the ID4 expression pattern in human diffusely infiltrative astrocytomas of World Health Organization (WHO) grades II to IV of malignancy (AGII-AGIV); to correlate its expression level to that of SOX2, SOX4, OCT-4 and NANOG, along with TP53 mutational status; and to correlate the results with the clinical end-point of overall survival among glioblastoma patients. Quantitative real time PCR (qRT-PCR) was performed in 130 samples of astrocytomas for relative expression, showing up-regulation of all transcription factors in tumor cases. Positive correlation was found when comparing ID4 relative expression of infiltrative astrocytomas with SOX2 (r=0.50; p<0.005), SOX4 (r=0.43; p<0.005) and OCT-4 (r=0.39; p<0.05). The results from TP53 coding exon analysis allowed comparisons between wild-type and mutated status only in AGII cases, demonstrating significantly higher levels of ID4, SOX2 and SOX4 in mutated cases (p<0.05). This pattern was maintained in secondary GBM and further confirmed by immunohistochemistry. Combined hyperexpression of ID4, SOX4 and OCT-4 conferred a much lower (6 months) median survival than did hypoexpression (18 months). Because both ID4 alone and a complex of SOX4 and OCT-4 activate SOX2 transcription, it is possible that multiple activation pathways of SOX2 impair the prognosis of GBM patients. These results imply a similar pathway for these four targets in astrocytoma tumorigenesis, with ID4 appearing to be a new target for further studies and therapies

NTRODUÇÃO: O melanoma é um câncer de alta mortalidade tanto na medicina quanto na veterinária, devido à baixa resposta às terapias utilizadas e à capacidade de evolução metastática da doença. Avanços no campo da oncologia têm mostrado que os agentes que têm como alvo componentes do sistema imunológico, bem como as terapias molecularmente dirigidas, são muito promissores no tratamento do melanoma. Nosso grupo tem desenvolvido vetores virais para a transferência gênica de fatores antitumorais. O aprimoramento no vetor adenoviral inclui a inserção do tripeptídeo RGD, que permite um amplo tropismo de transdução, e o uso de um promotor responsivo a p53 para controlar expressão do gene terapêutico. Visto que o melanoma canino pode ser um modelo experimental por se tratar de um câncer de ocorrência espontânea e de comportamento biológico semelhante ao melanoma humano, procuramos testar nossa abordagem, que chamamos AdRGD-PG, neste modelo. MÉTODOS: Para isso foram estabelecidas linhagens celulares de melanoma canino para a determinação da capacidade de transdução pelos vetores adenovirais. Em seguida foi realizado o sequenciamento dos exons 4 - 8 do gene TP53 e a avaliação da expressão de genes da via de TP53 induzidos por doxorrubicina e Nutlin-3. RESULTADOS: As quatro linhagens de melanoma canino estabelecidas possuem capacidade tumorigênica e de serem transduzidas pelos vetores adenovirais. Não foram identificadas alterações na sequência do TP53 na região avaliada e a doxorrubicina promoveu aumento da expressão dos transgenes dirigidos pelo promotor PG e a ativação de genes da via de TP53. CONCLUSÕES: A funcionalidade desta plataforma adenoviral aprimorada abre oportunidades para estudos da transferência gênica, incluindo da combinação p19ARF/IFN-beta, nas linhagens estabelecidas. Com o sucesso destas análises, teremos um importante modelo experimental a ser utilizado no desenvolvimento de novas terapias para o melanoma / INTRODUCTION: Melanoma is a cancer of high mortality both in human and veterinary medicine due to the poor response to therapies and the metastatic evolution of the disease. Advances in the field of oncology have shown that agents that target immune system components, as well as molecularly targeted therapies, are very promising for the treatment of melanoma. Our group has developed viral vectors for gene transfer of antitumor factors. The improvement in the adenoviral vector includes the insertion of the RGD tripeptide, which allows a broad transduction tropism, and the use of a p53 responsive promoter to control therapeutic gene expression. Canine melanoma may be considered as an experimental model since it is a spontaneous cancer with biological behavior similar to human melanoma, thus we aim to test our approach, which we call AdRGD-PG, in this model. METHODS: For this purpose, canine melanoma cell lines were established before determining the transduction capacity of adenoviral vectors. Next, sequencing of exons 4-8 of the TP53 gene and evaluation of the expression of genes in the TP53 pathway upon induction with doxorubicin and Nutlin-3 were performed. RESULTS: The four established canine melanoma lines have tumorigenic capacity and are transduced by the adenoviral vectors. No changes were identified in the TP53 sequence in the assessed region and doxorubicin promoted increased expression of the transgenes directed by the PG promoter as well as activation of the TP53 pathway genes. CONCLUSIONS: The functionality of this improved adenoviral platform opens up opportunities for gene transfer studies, including the p19ARF / IFN-beta combination, in the established cell lines. With the success of these analyses, we have an important experimental model to be used in the development of new therapies for melanoma

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francisco Pereira Borges Filho.pdf: 377994 bytes, checksum: 8fad9d0fa2eb6d066183d54225e6aeab (MD5) Previous issue date: 2009-05-05 / INTRODUCTION: The polymorphism at codon 72, proline (p53P) or arginine (p53R) is involved in the ability of p53 to interact with cellular proteins. Several authors have shown that the presence of genotype p53RR confers greater risk of developing tumors. OBJETIVE: To assess the allelic frequency of genetic polymorphism in codon 72 in TP53 gene in samples obtained from patients diagnosed with squamous carcinoma of base of the tongue treated at the Hospital Araújo Jorge and Associação de Combate ao Câncer em Goiás (ACCG)between 1990 and 2006. Evaluate the genetic predisposition for Base of Tongue Cancer linked of TP53 polimorphism, by identififyin of the presence or absence of the alleles p53R and/or p53P alleles in patients with this pathology. MATERIALS AND METHODS: This study is a casecontrol retrospective in nature, was conducted at Núcleo de Pesquisas Replicon of the Universidade Católica de Goiás in conjunction with the Hospital Araújo Jorge. We evaluated 54 patients with squamous carcinoma of the base of the tongue and 186 individuals without cancer. These were matched regarding gender, age, and the group of cases was evaluated clinical stage and smoking, alcohol consumption. The genotypes p53R and p53P were determined by PCR, using specific primers. RESULTS: The allele frequencies for p53R in cases and controls were 75.9% and 74.2%, while the p53P were 24.1% and 25.8% respectively. There was no statistically significant difference (p = 0.79) in allele frequencies between the two groups, suggesting that the polymorphism of codon 72 of TP53 is not a risk factor for susceptibility to squamous cell carcinoma of the tongue base. CONCLUSION: The study does not find relationship between p53R and CCO carcinogenesis when compared sex, age and color. / INTRODUÇÃO: O polimorfismo no códon 72, prolina (p53P) ou arginina (p53R) está envolvido na habilidade da p53 em interagir com as proteínas celulares. Vários autores têm demonstrado que a presença do genótipo p53RR confere maior risco de desenvolvimento de tumores. OBJETIVO: Avaliar a freqüência alélica do polimorfismo genético no códon 72 do gene p53 em amostras obtidas de pacientes diagnosticados com Carcinoma Escamoso de Base de Língua atendidos no Hospital Araújo Jorge, da Associação de Combate ao Câncer em Goiás (ACCG), entre os anos de 1999 e 2006. Avaliar a predisposição genética do câncer de base da língua relacionada ao polimorfismo de TP53, através da identificação da presença ou não dos alelos p53R e/ou p53P nos pacientes com esta patologia. MATERIAIS E METODOS: O presente estudo é do tipo caso-controle de caráter retrospectivo, foi realizado no Núcleo de Pesquisas Replicon da Universidade Católica de Goiás em conjunto com o Hospital Araújo Jorge. Foram avaliados 54 pacientes com carcinoma escamoso de base da língua e em 186 indivíduos sem câncer. Estes foram pareados quanto ao sexo, idade e no grupo caso, foram avaliados o estádio clínico e hábitos de etilismo e tabagismo. A genotipagem dos alelos p53R e p53P foi determinada por PCR, utilizando-se primers específicos. RESULTADOS: As freqüências alélicas para p53R nos casos e controles foram de 75,9% e 74,2%, enquanto que de p53P foram de 24,1% e 25,8%, respectivamente. Não houve diferença estatisticamente significativa (p = 0,79) nas freqüências alélicas entre os dois grupos analisados, sugerindo que o polimorfismo do códon 72 de TP53 não seja um fator de risco de susceptibilidade ao carcinoma escamoso de base da língua. CONCLUSÃO: Não foi observada associação entre a variante p53R e o desenvolvimento da carcinogênese de CCO de base da língua, segundo o sexo, idade e etnia.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANA TERRA SILVA CARVALHO.pdf: 3772543 bytes, checksum: 17bcee93b3653febc978c253fa6cba7b (MD5) Previous issue date: 2012-05-18 / In Brazil, cervical cancer is the second most common among women. Radiation therapy is part of its interdisciplinary management, playing an important role in their loco regional control. The major challenge of modern medicine in radiotherapy is to develop predictive methods that can determine the level of radiosensitivity of the patient and the healthy surrounding tissue in order to individualize the prescribed radiation dose, to prevent severe side effects and promoting better local tumor control. This study evaluated the acute and chronic adverse effects on the skin, lower gastrointestinal tract and urinary tract of radiotherapy in 47 cervical cancer patients. Methods and Materials: Biological material was collected and DNA from peripheral blood was extracted of all patients studied. The fragments of TP53 and ATM were amplified to be sequenced, to verify if there are any polymorphisms witch could be responsible to the radiosensitivity of the patients. Results and Discussion: In a univariate analysis, the variable age was strongly associated with a risk of acute toxicity skin (p=0,023). Patients that received a high dose of external beam radiation and patients who have undergone brachytherapy, showed a significantly higher incidence of chronic urinary tract toxicity (p=0,031) and (p=0,019), respectively. The exchange G>A in the position 5557 of the ATM gene was significantly associated with the risk of acute lower gastrointestinal tract (p=0,008). There wasn t association between the other TP53 polymorphisms analyzed and the frequency of side effects (p>0,05). Our data revealed that patients who evolved significant association presented death (p=0,019) with the increase of chronic skin radiossensitivity. Conclusions: These observations corroborate the importance of investigating the genetic profile to predict adverse side effects in cervical cancer patients undergoing radiotherapy. These genes have an important role in DNA repair pathways and probably are capable of modifying the responses of normal tissues to radiotherapy. / No Brasil, o câncer cervical é o segundo mais comum entre as mulheres. A radioterapia faz parte do seu manejo interdisciplinar, desempenhando papel importante em seu controle loco regional. O grande desafio da medicina moderna em radioterapia é desenvolver métodos preditivos que possam determinar o grau de radiossensibilidade da paciente e dos tecidos adjacentes saudáveis, afim de individualizar a dose de radiação prescrita, prevenindo efeitos colaterais severos e promovendo um melhor controle tumoral local. Este estudo avaliou os efeitos adversos agudos e crônicos na pele, trato gastrointestinal inferior e trato urinário durante a radioterapia, em 47 pacientes de câncer do colo do útero. Material e Métodos: O DNA foi extraído do material biológico (sangue periférico) coletado de todas as pacientes estudadas. Os fragmentos de TP53 e ATM foram amplificados e em seguida sequenciados, afim de verificar se há qualquer polimorfismo que poderia ser responsável pela radiossensibilidade das pacientes. Resultados e Discussão: Por meio de uma análise univariada, a variável idade do diagnóstico se associou fortemente ao risco de desenvolvimento de toxicidade aguda da pele (p=0,023). Pacientes que receberam uma dose elevada de teleterapia e pacientes que foram submetidas a braquiterapia, mostraram uma incidência significativa de toxicidade crônica do trato urinário (p=0,031) e (p=0,019), respectivamente. A troca G>A na posição 5557 do gene ATM mostrou uma associação significativa com o risco de toxicidade aguda do trato gastrinstestinal inferior (p=0,008). Não houve associação entre os polimorfismos de TP53 analisados e a frequência de efeitos adversos (p>0,05). Nossos dados revelaram ainda que pacientes que evoluíram a óbito apresentaram associação significativa (p=0,019) com a o aumento de radiossensibilidade crônica da pele. Conclusão: Estas observações corroboram a importância de investigar o perfil genético para prever efeitos adversos em pacientes com câncer cervical submetidas a radioterapia. Esses genes têm um papel importante em vias de reparo de DNA e provavelmente são capazes de modificar as respostas dos tecidos normais para radioterapia.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O câncer de mama é o tipo de câncer mais comum em mulheres brasileiras e o principal responsável pelos óbitos neste grupo. Segundo dados do Instituto Nacional do Câncer, em 2008, na região Sudeste do Brasil, o câncer de mama foi o mais incidente, com um risco estimado de 68,12 casos novos por 100 mil. No Estado do Rio de Janeiro a estimativa foi de 7.680 casos, sendo 4.160 na capital. O presente estudo teve como objetivo determinar, através da metodologia de PCRRFLP, as freqüências alélicas e genotípicas dos polimorfismos PIN3 Ins 16pb e Arg72Pro, do gene TP53, e Arg194Trp e Arg399Gln, do gene XRCC1, em 105 casos de câncer de mama e analisar a relação entre esses polimorfismos e os dados sócio-demográficos das pacientes, a história familiar de câncer de mama e as características clínico-patológicas do tumor. Por esta razão, neste estudo realizamos um estudo do tipo caso-caso, utilizando-se pacientes diagnosticadas com carcinoma ductal infiltrante. Em relação ao papel desses polimorfismos genéticos no prognóstico da doença, foi observada uma associação da variante Arg194Trp de XRCC1 com a agressividade do tumor através de uma correlação positiva com o grau de Elston III (OR = 3,99; IC 95% 1,08 14,66; p = 0,044). Análises subseqüentes contando com um número maior de indivíduos podem auxiliar na confirmação deste achado e na elucidação do papel da variante Trp194 no prognóstico do câncer de mama. / Breast cancer is the most common cancer in Brazilian women and the main responsible for their cancer death. According to data of the National Institute of Cancer, in 2008, in the Southeast region of Brazil, breast cancer had the highest incidence with an estimated risk of 68.12 new cases in one hundred thousand. In the State of Rio de Janeiro, the estimative was of 7.680 cases, 4.160 of them in the capital. The present study aimed to determine, through PCR-RFLP methodology, the alleles and genotypes frequencies of the polymorphisms PIN3 Ins 16pb and Arg72Pro, in the TP53 gene; Arg194Trp and Arg399Gln, in the XRCC1 gene, in 105 cases of breast cancer, and analyze the relationship between these polymorphisms and patients socio-demographic data, family history of breast cancer and tumor clinicopathological characteristics. Hence, in this study we performed a case-case study, using patients diagnosed with infiltrating ductal carcinoma. In respect with the role of these genetic polymorphisms in breast cancer prognosis, it was observed an association with the variant Arg194Trp of XRCC1 and tumor aggressiveness by a positive correlation with Elston grade III (OR = 3.99; CI 95% 1.08 14.66; p = 0.044). Further analyses including a larger group of study can help to confirm this finding and elucidate the role of Trp194 variant in breast cancer prognosis.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O câncer de mama é o tipo de câncer mais comum em mulheres brasileiras e o principal responsável pelos óbitos neste grupo. Segundo dados do Instituto Nacional do Câncer, em 2008, na região Sudeste do Brasil, o câncer de mama foi o mais incidente, com um risco estimado de 68,12 casos novos por 100 mil. No Estado do Rio de Janeiro a estimativa foi de 7.680 casos, sendo 4.160 na capital. O presente estudo teve como objetivo determinar, através da metodologia de PCRRFLP, as freqüências alélicas e genotípicas dos polimorfismos PIN3 Ins 16pb e Arg72Pro, do gene TP53, e Arg194Trp e Arg399Gln, do gene XRCC1, em 105 casos de câncer de mama e analisar a relação entre esses polimorfismos e os dados sócio-demográficos das pacientes, a história familiar de câncer de mama e as características clínico-patológicas do tumor. Por esta razão, neste estudo realizamos um estudo do tipo caso-caso, utilizando-se pacientes diagnosticadas com carcinoma ductal infiltrante. Em relação ao papel desses polimorfismos genéticos no prognóstico da doença, foi observada uma associação da variante Arg194Trp de XRCC1 com a agressividade do tumor através de uma correlação positiva com o grau de Elston III (OR = 3,99; IC 95% 1,08 14,66; p = 0,044). Análises subseqüentes contando com um número maior de indivíduos podem auxiliar na confirmação deste achado e na elucidação do papel da variante Trp194 no prognóstico do câncer de mama. / Breast cancer is the most common cancer in Brazilian women and the main responsible for their cancer death. According to data of the National Institute of Cancer, in 2008, in the Southeast region of Brazil, breast cancer had the highest incidence with an estimated risk of 68.12 new cases in one hundred thousand. In the State of Rio de Janeiro, the estimative was of 7.680 cases, 4.160 of them in the capital. The present study aimed to determine, through PCR-RFLP methodology, the alleles and genotypes frequencies of the polymorphisms PIN3 Ins 16pb and Arg72Pro, in the TP53 gene; Arg194Trp and Arg399Gln, in the XRCC1 gene, in 105 cases of breast cancer, and analyze the relationship between these polymorphisms and patients socio-demographic data, family history of breast cancer and tumor clinicopathological characteristics. Hence, in this study we performed a case-case study, using patients diagnosed with infiltrating ductal carcinoma. In respect with the role of these genetic polymorphisms in breast cancer prognosis, it was observed an association with the variant Arg194Trp of XRCC1 and tumor aggressiveness by a positive correlation with Elston grade III (OR = 3.99; CI 95% 1.08 14.66; p = 0.044). Further analyses including a larger group of study can help to confirm this finding and elucidate the role of Trp194 variant in breast cancer prognosis.

O inibidor da ligação do DNA 4 (ID4) é membro da família hélice-alça-hélice de fatores de transcrição, presente durante o desenvolvimento embrionário Sistema Nervoso Central, e que tem sido associado à mutações no gene TP53 e a ativação de SOX2. Juntamente com outros fatores de transcrição, ID4 está envolvido no processo de tumorigênese dos astrocitomas, contribuindo para a de-diferenciação celular, a proliferação e a quimiorresistência. Nesse estudo, nosso objetivo foi caracterizar o padrão de expressão de ID4 em astrocitomas humanos difusamente infiltrativos de graus II a IV de malignidade, classificados de acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS); correlacionar os níveis de expressão de ID4 com os de SOX2, SOX4, OCT-4 e NANOG, juntamente com o status mutacional de TP53; e correlacionar os resultados com os dados de sobrevida dos pacientes com GBM. PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) foi realizado em 130 amostras de astrocitomas para obter a expressa relativa de cada gene, mostrando hiperexpressão de todos os fatores de transcrição analisados nas amostras tumorais. Correlação positiva foi encontrada comparando a expressão relativa de ID4 em astrocitomas infiltrativos com a expressão de SOX2 (r=0.50; p<0.005), SOX4 (r=0.43; p<0.005) e OCT-4 (r=0.39; p<0.05). Os resultados da análise mutacional de TP53 permitiu comparações entre os grupos mutado e não-mutado apenas nos casos de astrocitomas de baixo grau (AGII), que demonstraram altos níveis de ID4, SOX2 e SOX4 nos casos mutados (p<0.05). Esse padrão foi mantido em amostras de glioblastoma (GBM) secundário e foi confirmado por imunohistoquímica. A combinação da hiperexpressão de ID4, SOX4 e OCT-4 conferiu uma menor sobrevida (mediana de 6 meses) muito menor aos pacientes de GBM do que a hipoexpressão (mediana de 18 meses). Uma vez que ID4 isoladamente e SOX4 e OCT-4 como um complexo ativam a transcrição de SOX2, é possível que múltiplas vias de ativação de SOX2 prejudiquem o prognóstico dos pacientes de GBM. Esses resultados sugerem uma via comum para esses quatro alvos na tumorigênese dos astrocitomas, com ID4 surgindo como um novo alvo para estudos e terapias futuras / Inhibitor of DNA Binding 4 (ID4) is a member of the helix-loop-helix ID family of transcription factors, mostly present in the central nervous system during embryonic development, that has been associated with TP53 mutation and activation of SOX2. Along with other transcription factors, ID4 has been implicated in the tumorigenic process of astrocytomas, contributing to cell dedifferentiation, proliferation and chemoresistance. In this study, we aimed to characterize the ID4 expression pattern in human diffusely infiltrative astrocytomas of World Health Organization (WHO) grades II to IV of malignancy (AGII-AGIV); to correlate its expression level to that of SOX2, SOX4, OCT-4 and NANOG, along with TP53 mutational status; and to correlate the results with the clinical end-point of overall survival among glioblastoma patients. Quantitative real time PCR (qRT-PCR) was performed in 130 samples of astrocytomas for relative expression, showing up-regulation of all transcription factors in tumor cases. Positive correlation was found when comparing ID4 relative expression of infiltrative astrocytomas with SOX2 (r=0.50; p<0.005), SOX4 (r=0.43; p<0.005) and OCT-4 (r=0.39; p<0.05). The results from TP53 coding exon analysis allowed comparisons between wild-type and mutated status only in AGII cases, demonstrating significantly higher levels of ID4, SOX2 and SOX4 in mutated cases (p<0.05). This pattern was maintained in secondary GBM and further confirmed by immunohistochemistry. Combined hyperexpression of ID4, SOX4 and OCT-4 conferred a much lower (6 months) median survival than did hypoexpression (18 months). Because both ID4 alone and a complex of SOX4 and OCT-4 activate SOX2 transcription, it is possible that multiple activation pathways of SOX2 impair the prognosis of GBM patients. These results imply a similar pathway for these four targets in astrocytoma tumorigenesis, with ID4 appearing to be a new target for further studies and therapies