Bromeliaceae é uma família importante entre as monocotiledôneas devido ao seu elevado número de espécies distribuídas no Neotrópico, e por uma riqueza de caracteres adaptativos a diferentes habitats. Flores de bromélias possuem uma grande variação morfológica, frequentemente negligenciada em estudos de morfoanatomia e de filogenia. Para uma melhor compreensão dos mecanismos de desenvolvimento que levam a essas variações, foram analisados aspectos moleculares e evolutivos do fator de transcrição MADS-box PISTILLATA (PI), a partir de sequências de transcritos isolados de inflorescências de bromélias nativas brasileiras. Sequências PI de Bromeliaceae foram comparadas com outras monocotiledôneas, com verificação de expressão em inflorescências de Tillandsia aeranthos (Loisel.) LB Sm. com o uso de hibridação in situ. Sequências de PI mostraram alta conservação, inclusive em um sítio de deleção encontrado para todos os membros analisados da família. Todos os membros da família se agruparam em um único clado em reconstruções filogenéticas. Entretanto, devido a características de taxas de mutações rápidas e divergência antiga do gene, não foi possível obter uma relação precisa entre diferentes famílias ou ordens. Todavia, PI mostrou ter potencial como ferramenta de análise filogenética para espécies proximamente relacionadas. Os transcritos de PI foram localizados principalmente em tecidos meristemáticos de regiões menos desenvolvidas de inflorescências de Tillandsia aeranthos. Flores mais desenvolvidas presentes nas inflorescências mostraram um padrão de acúmulo preferencial de transcritos PI em pétalas e sépalas, assim como esperado para flores com perianto diferenciado em sépalas e pétalas. De qualquer forma, Tillandsia aeranthos se mostrou eficiente para estudos morfoanatômicos com enfoque em desenvolvimento evolutivo. / Bromeliaceae is an important monocotyledon family due to its high number of species in the Neotropic, and a wealth of adaptive characters to different habitats. Bromeliad flowers have large morphological variations, often neglected in morpho-anatomy, floral development and phylogeny studies. For a better understanding of its floral developmental mechanisms that lead to morphological variations, molecular and evolutionary aspects of the transcription factor MADS-box PISTILLATA (PI) encoding gene isolated had been investigated in native bromeliad inflorescences. Bromeliaceae PI sequences were compared with other monocots, and the expression of these transcripts was detected in Tillandsia aeranthos (Loisel.) LB Sm. inflorescences using in situ hybridization. The PI sequences display high conservation, including a specific deletion site found in all family members. Likewise, all Bromeliaceae members grouped into a single clade in phylogeny reconstruction. However, due to rapid mutation rate and ancient divergence in PI, it was not possible to obtain a precise relationship between different monocot families and orders. Nevertheless, PI showed potential as a phylogenetic tool for analysis between closely related species. PI transcripts were located mainly in meristematic tissues from less developed regions of the inflorescences. More developed flowers showed a preferential PI transcripts accumulation in petals and stamens as expected for differentiated perianth, found in Bromeliaceae flowers. Anyway, Tillandsia aeranthos showed good potential skills for morpho-anatomy focused in evolutionary development.

Bromeliaceae é uma família importante entre as monocotiledôneas devido ao seu elevado número de espécies distribuídas no Neotrópico, e por uma riqueza de caracteres adaptativos a diferentes habitats. Flores de bromélias possuem uma grande variação morfológica, frequentemente negligenciada em estudos de morfoanatomia e de filogenia. Para uma melhor compreensão dos mecanismos de desenvolvimento que levam a essas variações, foram analisados aspectos moleculares e evolutivos do fator de transcrição MADS-box PISTILLATA (PI), a partir de sequências de transcritos isolados de inflorescências de bromélias nativas brasileiras. Sequências PI de Bromeliaceae foram comparadas com outras monocotiledôneas, com verificação de expressão em inflorescências de Tillandsia aeranthos (Loisel.) LB Sm. com o uso de hibridação in situ. Sequências de PI mostraram alta conservação, inclusive em um sítio de deleção encontrado para todos os membros analisados da família. Todos os membros da família se agruparam em um único clado em reconstruções filogenéticas. Entretanto, devido a características de taxas de mutações rápidas e divergência antiga do gene, não foi possível obter uma relação precisa entre diferentes famílias ou ordens. Todavia, PI mostrou ter potencial como ferramenta de análise filogenética para espécies proximamente relacionadas. Os transcritos de PI foram localizados principalmente em tecidos meristemáticos de regiões menos desenvolvidas de inflorescências de Tillandsia aeranthos. Flores mais desenvolvidas presentes nas inflorescências mostraram um padrão de acúmulo preferencial de transcritos PI em pétalas e sépalas, assim como esperado para flores com perianto diferenciado em sépalas e pétalas. De qualquer forma, Tillandsia aeranthos se mostrou eficiente para estudos morfoanatômicos com enfoque em desenvolvimento evolutivo. / Bromeliaceae is an important monocotyledon family due to its high number of species in the Neotropic, and a wealth of adaptive characters to different habitats. Bromeliad flowers have large morphological variations, often neglected in morpho-anatomy, floral development and phylogeny studies. For a better understanding of its floral developmental mechanisms that lead to morphological variations, molecular and evolutionary aspects of the transcription factor MADS-box PISTILLATA (PI) encoding gene isolated had been investigated in native bromeliad inflorescences. Bromeliaceae PI sequences were compared with other monocots, and the expression of these transcripts was detected in Tillandsia aeranthos (Loisel.) LB Sm. inflorescences using in situ hybridization. The PI sequences display high conservation, including a specific deletion site found in all family members. Likewise, all Bromeliaceae members grouped into a single clade in phylogeny reconstruction. However, due to rapid mutation rate and ancient divergence in PI, it was not possible to obtain a precise relationship between different monocot families and orders. Nevertheless, PI showed potential as a phylogenetic tool for analysis between closely related species. PI transcripts were located mainly in meristematic tissues from less developed regions of the inflorescences. More developed flowers showed a preferential PI transcripts accumulation in petals and stamens as expected for differentiated perianth, found in Bromeliaceae flowers. Anyway, Tillandsia aeranthos showed good potential skills for morpho-anatomy focused in evolutionary development.

Bromeliaceae é uma família importante entre as monocotiledôneas devido ao seu elevado número de espécies distribuídas no Neotrópico, e por uma riqueza de caracteres adaptativos a diferentes habitats. Flores de bromélias possuem uma grande variação morfológica, frequentemente negligenciada em estudos de morfoanatomia e de filogenia. Para uma melhor compreensão dos mecanismos de desenvolvimento que levam a essas variações, foram analisados aspectos moleculares e evolutivos do fator de transcrição MADS-box PISTILLATA (PI), a partir de sequências de transcritos isolados de inflorescências de bromélias nativas brasileiras. Sequências PI de Bromeliaceae foram comparadas com outras monocotiledôneas, com verificação de expressão em inflorescências de Tillandsia aeranthos (Loisel.) LB Sm. com o uso de hibridação in situ. Sequências de PI mostraram alta conservação, inclusive em um sítio de deleção encontrado para todos os membros analisados da família. Todos os membros da família se agruparam em um único clado em reconstruções filogenéticas. Entretanto, devido a características de taxas de mutações rápidas e divergência antiga do gene, não foi possível obter uma relação precisa entre diferentes famílias ou ordens. Todavia, PI mostrou ter potencial como ferramenta de análise filogenética para espécies proximamente relacionadas. Os transcritos de PI foram localizados principalmente em tecidos meristemáticos de regiões menos desenvolvidas de inflorescências de Tillandsia aeranthos. Flores mais desenvolvidas presentes nas inflorescências mostraram um padrão de acúmulo preferencial de transcritos PI em pétalas e sépalas, assim como esperado para flores com perianto diferenciado em sépalas e pétalas. De qualquer forma, Tillandsia aeranthos se mostrou eficiente para estudos morfoanatômicos com enfoque em desenvolvimento evolutivo. / Bromeliaceae is an important monocotyledon family due to its high number of species in the Neotropic, and a wealth of adaptive characters to different habitats. Bromeliad flowers have large morphological variations, often neglected in morpho-anatomy, floral development and phylogeny studies. For a better understanding of its floral developmental mechanisms that lead to morphological variations, molecular and evolutionary aspects of the transcription factor MADS-box PISTILLATA (PI) encoding gene isolated had been investigated in native bromeliad inflorescences. Bromeliaceae PI sequences were compared with other monocots, and the expression of these transcripts was detected in Tillandsia aeranthos (Loisel.) LB Sm. inflorescences using in situ hybridization. The PI sequences display high conservation, including a specific deletion site found in all family members. Likewise, all Bromeliaceae members grouped into a single clade in phylogeny reconstruction. However, due to rapid mutation rate and ancient divergence in PI, it was not possible to obtain a precise relationship between different monocot families and orders. Nevertheless, PI showed potential as a phylogenetic tool for analysis between closely related species. PI transcripts were located mainly in meristematic tissues from less developed regions of the inflorescences. More developed flowers showed a preferential PI transcripts accumulation in petals and stamens as expected for differentiated perianth, found in Bromeliaceae flowers. Anyway, Tillandsia aeranthos showed good potential skills for morpho-anatomy focused in evolutionary development.

Phacelia purshii Buckley and P. fimbriata Micheaux are two species that are nearly morphologically indistinguishable. Seed germination experiments showed that the high elevation endemic, P. fimbriata requires lower temperatures to trigger germination. Following interspecific crosses, pollen tubes enter ovules and maternal tissue of the gynoecium matures but hybrid diploid and triploid organs fail to develop. DNA sequences from the ribosomal DNA internal transcribed region showed that P. fimbriata and P. purshii comprise a monophyletic clade but that P. fimbriata is more differentiated from related species. In contrast, P. purshii supported significantly higher levels of intraspecific polymorphism. Phacelia fimbriata and P. purshii are sister species with similar morphology but they are unable to hybridize, they are differentiated in physiological characteristics related to environment, and they inhabit different elevations. This pattern of relationship and differentiation suggests P. fimbriata may be the product of ecological speciation.

Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Resultados anteriores sugerem que existem diferenças biológicas entre espécimens de Anopheles oswaldoi capturados no Estado do Acre e os do Estado de Rondônia, Brasil. Esta espécie tem sido apontada como um importante vetor de malária em localidades do Peru e Acre. Entretanto, em Rondônia, somente um número pequeno de A. oswaldoi alimentados em pacientes com malária desenvolveram infecção nas glândulas salivares. Além disso, há suspeita de que espécimens identificados como A. oswaldoi, capturados em áreas abertas em Costa Marques, Rondônia, são na verdade A. konderi, e que A. oswaldoi sensu stricto estaria restrito a áreas de florestas. Estes dados, juntamente com as dificuldades encontradas na identificação de anofelinos do grupo Oswaldoi, baseadas em critérios morfológicos, sugerem que espécimens de A. oswaldoi são membros de um complexo de espécies crípticas. A distinção de espécies crípticas de insetos vetores é de grande importância, já que diferentes membros em um complexo podem exibir diferenças na ecologia, capacidade vetorial e resposta a medidas de controle. Análise de sequências de DNA, particularmente da região do ITS2 do cistron do DNA ribossômico, tem sido usada como um caracter diagnóstico em alguns grupos de espécies crípticas, tornando-se um instrumento para estudos taxonômicos e filogenéticos. A primeira parte deste estudo teve o objetivo de determinar as diferenças encontradas nas sequências de ITS2 de espécimens de A. oswaldoi capturados em várias localidades da América do Sul. As regiões dos ITS2 destes anofelinos foram amplificadas usando oligonucleotídeos iniciadores conservados das regiões 5.8S e 28S e os produtos de PCR foram clonados e sequenciados. Os ITS2 de todos os mosquitos capturados tiveram tamanho aproximado de 350 nucleotídeos, com aproximadamente 53% de conteúdo de GC. Análise do alinhamento destas sequências, mostrou similaridade variando entre 87% e 100%, e a análise de uma árvore de similaridade, neighbor-joining, produzida com p-distance usando as diferenças nas sequências de ITS2, separou estes espécimens em quatro grupos. Um deles está provavelmente relacionado ao A. oswaldoi sensu stricto, e um outro pode estar relacionado à espécie A. konderi. Os outros dois grupos podem corresponder a espécies cuja identificação morfológica permanece para ser esclarecida no complexo A. oswaldoi. Estes dados são evidências de que espécimens de A. oswaldoi estão incluídos em um complexo de espécies crípticas e que identificação por DNA pode resolver estas questões taxonômicas. A. konderi tem sido considerado uma sinonímia de A. oswaldoi. Embora estágios adultos e imaturos destas espécies de anofelinos apresentem características morfológicas idênticas, aspectos encontrados na genitália masculina podem distinguir estes taxa. A segunda parte deste estudo foi conduzida com o objetivo de comparar a susceptibilidade de A. oswaldoi s.s. e de A. konderi à infecção com Plasmodium vivax. A susceptibilidade foi baseada na proporção de mosquitos com oocistos e esporozoítos. Os anofelinos foram capturados no Acre e em Rondônia para obtenção de progênies F1. Após a emergência dos adultos, as genitálias masculinas dos mosquitos de cada progênie foram dissecadas e examinadas. Todas progênies originadas dos mosquitos capturados em Rondônia corresponderam a A. konderi, enquanto que cerca de 85,0% das progênies do Acre eram A. oswaldoi s.s.. Estas progênies F1 de A. oswaldoi s.s., A. konderi e A. darlingi foram alimentadas simultaneamente com sangue infectado com P. vivax. Estes mosquitos foram dissecados 10-12 dias após infecção e examinados para verificação da presença de oocistos e esporozoítos. Tanto A. oswaldoi s.s. como A. konderi apresentaram oocistos nos tratos digestivos, entretanto, a porcentagem de tratos digestivos positivos para oocistos foi maior em A. oswaldoi s.s. (13,8%) do que em A. konderi (3,3%). Esporozoítos foram encontrados somente nas glândulas salivares de A. oswaldoi s.s., com 6,9% de positividade. As taxas de infecção nos controles A. darlingi foram de 22,5% a 30,0%, para ambos oocistos e esporozoítos. Estes resultados indicam que A. oswaldoi s.s. pode transmitir P. vivax e sugerem que esta espécie é mais susceptível que A. konderi. Embora A. oswaldoi s.s. seja uma espécie exofílica e zoofílica, este anofelino pode estar envolvido na transmissão da malária humana como parece estar ocorrendo no Estado do Acre. / Previous results have suggested that biological differences could exist between specimens of Anopheles oswaldoi captured in the State of Acre and those from the State of Rondônia, Brazil. This species has been appointed as an important malaria vector in localities of Peru and Acre. However, in Rondônia, only a very low percentage of A. oswaldoi fed on malaria patients developed salivary gland infections. In addition, it was suspected that specimens identified as A. oswaldoi captured in open clearings in Costa Marques, Rondônia, were actually A. konderi, and that A. oswaldoi sensu stricto would be restricted to forested areas. These data, together with the difficulties found to identify anophelines of the Oswaldoi group based on morphologic criteria suggest that specimens of A. oswaldoi are members of a complex of cryptic species. The distinction of cryptic species of insects is of critical importance, since different members in a Complex could exhibit differences in ecology, vectorial capacity and response to control measures. DNA sequence analysis and particularly that of the ITS2 region of the rDNA cistron has provided diagnostic characters in some groups of cryptic species becoming a general tool for taxonomic and phylogenetic studies. The first part of the present study was undertaken to determine the extent of differences over the ITS2 sequence of specimens of A. oswaldoi s.l. captured in several localities of South America. The ITS2 of these anophelines were amplified using conserved primers of the 5.8S and 28S regions, cloned and sequenced. The lengths of ITS2 of all mosquitoes captured were about 350 nucleotides, with about 53% GC content. Analysis of the alignment of the sequences, which showed that the similarity varied between 87% and 100%, and analysis of a neighbor-joining tree produced with p-distance using the ITS2 sequences, separated these specimens in four groups. One of them is probably related to A. oswaldoi sensu stricto, and another one can possibly be related to A. konderi. The other two groups may correspond to species the morphologycal identification of which remains to be clarified in the A. oswaldoi complex. These data are evidences that specimens of A. oswaldoi are included in a complex of cryptic species and that the DNA identification could solve some taxonomic questions. A. konderi has been currently considered to be a synonym of A. oswaldoi. Although adults and immature stages of both these anopheline species have identical morphological characters, features of the male genitalia can distinguish these taxa. The second part of this study was conducted in order to compare the susceptibility of A. oswaldoi s.s. and of A. konderi to infection by Plasmodium vivax. The susceptibility was based on the proportion of mosquitoes with oocysts and sporozoites. Anophelines were captured in the State of Acre and Rondônia and used to obtain F1 progenies. After emergency of adults, male genitalia of mosquitoes of each family were dissected. All families originated from mosquitoes captured in Rondônia corresponded to A. konderi, while about 85.0% of the families from Acre were A. oswaldoi s.s.. F1 progeny of field-captured A. oswaldoi s.s., A. konderi and A. darlingi were fed simultaneously on P. vivax infected blood. Mosquitoes were dissected on day 10-12 after infection and examined for the presence of oocysts and sporozoites. Both A. oswaldoi s.s. and A. konderi developed oocysts in midguts, however, the percentage of oocyst-positives in A. oswaldoi s.s. (13.8%) was higher than in A. konderi (3.3%), and only A. oswaldoi s.s. developed salivary infection with sporozoites (6.9% of positivity). Infection rates in A. darlingi ranged from 22.5% to 30.0% for both oocysts and sporozoites. These results indicate that A. oswaldoi s.s. can transmit P. vivax and suggest that it is more susceptible than A. konderi. Although A. oswaldoi s.s. is an exophilic and zoophilic species, it may be involved in human malaria transmission as it seems to be occuring in the State of Acre.

<p>DNA sequences from the <i>rps16</i> intron and the <i>psbE-petL</i> spacer from the chloroplast genome, the ribosomal nuclear ITS region, and introns from the low copy nuclear genes <i>RPA2</i>, <i>RPB2</i>, <i>RPD2a</i> and <i>RPD2b</i>, are in different combinations used to infer phylogenetic relationships in <i>Sileneae</i> (<i>Caryophyllaceae</i>). Used in concert, the biparentally inherited nuclear regions are useful to distinguish between paralogy due to allopolyploidy and single gene duplications, respectively, because the latter are not expected to give rise to repeated phylogenetic patterns in potentially unlinked sequence regions. In addition, the sequences resolve previously poorly known relationships in the tribe <i>Sileneae</i>. Several independent losses and incomplete concerted evolution are inferred between the two <i>RPD2</i> paralogues in a subgroup of <i>Silene</i>.</p><p>An allopolyploid origin is suggested for the tetraploid <i>S. aegaea</i>, with the maternal ancestor from the diploid <i>S. pentelica</i> lineage, and the paternal contributor from the diploid <i>S. sedoides</i> lineage.</p><p><i>Silene involucrata</i> originated as an allotetraploid with the diploid lineage of Arctic <i>S. uralensis</i> as cytoplasmic donor and the diploid Siberian/Northeast Asian <i>S. ajanensis</i> lineage as pollen donor. A subsequent allopolyploidization with the <i>S. ajanensis</i> lineage as pollen donor and the tetraploid <i>S. involucrata</i> lineage as cytoplasmic donor resulted in the hexaploid lineage of <i>S. sorensenis sensu lato</i>.</p><p>A monophyletic origin of the North American polyploids is rejected. One lineage consists of tetraploid <i>S. menziesii</i> and its diploid allies. A separate lineage leads to a clade consisting of both diploid and polyploid Arctic, European and Asian taxa in addition to the majority of the North American polyploids. The tetraploid <i>S. californica</i> and the hexaploid <i>S. hookeri</i> are derived from separate allopolyploidization events between these two lineages.</p>

DNA sequences from the rps16 intron and the psbE-petL spacer from the chloroplast genome, the ribosomal nuclear ITS region, and introns from the low copy nuclear genes RPA2, RPB2, RPD2a and RPD2b, are in different combinations used to infer phylogenetic relationships in Sileneae (Caryophyllaceae). Used in concert, the biparentally inherited nuclear regions are useful to distinguish between paralogy due to allopolyploidy and single gene duplications, respectively, because the latter are not expected to give rise to repeated phylogenetic patterns in potentially unlinked sequence regions. In addition, the sequences resolve previously poorly known relationships in the tribe Sileneae. Several independent losses and incomplete concerted evolution are inferred between the two RPD2 paralogues in a subgroup of Silene. An allopolyploid origin is suggested for the tetraploid S. aegaea, with the maternal ancestor from the diploid S. pentelica lineage, and the paternal contributor from the diploid S. sedoides lineage. Silene involucrata originated as an allotetraploid with the diploid lineage of Arctic S. uralensis as cytoplasmic donor and the diploid Siberian/Northeast Asian S. ajanensis lineage as pollen donor. A subsequent allopolyploidization with the S. ajanensis lineage as pollen donor and the tetraploid S. involucrata lineage as cytoplasmic donor resulted in the hexaploid lineage of S. sorensenis sensu lato. A monophyletic origin of the North American polyploids is rejected. One lineage consists of tetraploid S. menziesii and its diploid allies. A separate lineage leads to a clade consisting of both diploid and polyploid Arctic, European and Asian taxa in addition to the majority of the North American polyploids. The tetraploid S. californica and the hexaploid S. hookeri are derived from separate allopolyploidization events between these two lineages.

Trichoderma spp. is one of the most researched fungi as biocontrole agent of diseases, being antagonistic to several phytopathogens in different crops. The soilborne pathogen Fusarium oxysporum causes wilt in several crops, including chrysanthemum, is of difficult control, due mainly to its survival capacity in the soil for long periods, even without the presence of the host. Studies about the population dynamics of Trichoderma spp. and Fusarium spp. and of the associated native microbiota they necessary, especially, to observe the impact of the biocontrols addition in the soil. Ornamental plants, such chrysanthemum, are cultivated in Rio Grande do Sul, but they are susceptible to several diseases, among them, the wilt of Fusarium oxysporum, mainly in protected environment. Aiming at the biocontrol of the wilt caused by F. oxysporum in chrysanthemum, as well as the understanding of the population dynamics of the microbiota in this patossystem, this work had for objectives: to study the dynamics of the fungic population present in soil used in the chrysanthemum cultivation in greenhouse in presence and ausence of wilt symptoms; to select and identify isolates of Fusarium pathogenic to chrysanthemum; to isolate and select antagonists, of the gender Trichoderma, effective in the biocontrol of Fusarium oxysporum in vitro; to verify, in vivo, the effectiveness of the antagonists tested in vitro in control of F. oxysporum; to evaluate the survival of Trichoderma sp. in substract with the incorporation of biological products of the fungus; to analyze the population dynamics of Fusarium sp. and Trichoderma sp. in sterilized soil and with addition of bioprotector; to identify the isolates of Trichoderma sp. used in the biocontrol of the pathogen; to evaluate the effect of administrations of Trichoderma sp. in non-target organisms. The soil sampling cultivated with chrysanthemum in greenhouse showed variation in the fungic populations of Trichoderma sp. and Fusarium sp. as a function of the occurrence of wilt symptoms in plants. Of the isolates of Fusarium sp. inoculated, 25,3% were pathogenic to chrysanthemum, which were found at points with visible symptoms of the disease on the plants. The biological products of Trichoderma sp. used varied in their effectiveness in the control of the wilt of chrysanthemum, being able to reach 100% of biocontrol as in the case of isolate UFSMT15.1. The desinfestation of the soil with methyl bromide reduced the population of Trichoderma, Fusarium and other fungi. The incorporation of the biological products in the soil promoted population growth of Trichoderma sp. and inhibited the growth of Fusarium sp. The molecular characterization of the isolates of Trichoderma indicated that the region of ITS of isolates UFSMT15.1, UFSMT16 and UFSMT17 of Trichoderma sp. it presents a simple band with a fragment of approximately 600 bp and the isolate UFSMT17 present high phylogenetic similarity with the specie Trichoderma aureoviride. In the rats treated with biological product of active Trichoderma sp., no viable spores of the fungus werw found in the sampled tissues after a hour of the administration of the bioproduct. / Trichoderma spp. Persson é um dos fungos mais pesquisados como agente de biocontrole de doenças, sendo antagonista a vários fitopatógenos em diferentes culturas. O patógeno de solo Fusarium oxysporum Link causador de murcha vascular em várias culturas, inclusive em crisântemo, é de difícil controle, devido principalmente à sua capacidade de sobrevivência no solo por longos períodos, mesmo sem a presença do hospedeiro. Estudos sobre a dinâmica populacional de Trichoderma spp. e de Fusarium spp. e da microbiota nativa associada são necessários, em especial, para observar-se o impacto da adição de biocontroladores no solo. Plantas ornamentais, como o crisântemo, são cultivadas no Rio Grande do Sul, mas são suscetíveis a várias doenças, dentre as quais, a murcha por Fusarium tem se destacado, principalmente, em ambiente protegido. Visando o biocontrole da murcha vascular causada por F. oxysporum em crisântemo, bem como, o entendimento da dinâmica populacional da microbiota nesse patossistema, este trabalho teve por objetivos: estudar a dinâmica da população fúngica presente em solo utilizado no cultivo de crisântemo em estufa na presença e ausência de sintomas de murcha; selecionar e identificar isolados de Fusarium patogênicos ao crisântemo; isolar e selecionar antagonistas, do gênero Trichoderma, eficazes no biocontrole de Fusarium oxysporum em teste in vitro; verificar a eficácia in vivo dos antagonistas testados no controle in vitro de F. oxysporum; avaliar a sobrevivência de Trichoderma sp. em substrato com incorporação de biopreparados desse fungo; analisar a dinâmica populacional de Fusarium sp. e Trichoderma sp. presentes em solo esterilizado e povoado com bioprotetores utilizados no cultivo de crisântemo em ambiente protegido; caracterizar molecularmente os isolados de Trichoderma sp. utilizados no biocontrole do patógeno; avaliar o efeito de administrações de Trichoderma sp. em organismos não-alvo. A amostragem de solo cultivado com crisântemo em estufa mostrou variação nas populações fúngicas de Trichoderma sp. e de Fusarium sp., em função da ocorrência de sintomas de murcha nas plantas. Dos isolados de Fusarium sp. inoculados, 25,3% foram patogênicos ao crisântemo, os quais foram amostrados em pontos com sintomas visíveis da doença nas plantas. Os biopreparados de Trichoderma sp. utilizados variaram em sua eficácia no controle da murcha do crisântemo, podendo atingir 100% de biocontrole como no caso do isolado UFSMT15.1. A desinfestação do solo com brometo de metila reduziu a população de Trichoderma, Fusarium e outros gêneros fúngicos. A incorporação do biopreparado no solo promoveu crescimento populacional de Trichoderma sp. e inibiu o crescimento de Fusarium sp. A caracterização molecular dos isolados de Trichoderma indicou que a região do ITS dos isolados UFSMT15.1, UFSMT16 e UFSMT17 de Trichoderma sp. apresenta uma banda simples com um fragmento de aproximadamente 600 pares de bases e o isolado UFSMT17 possui alta similaridade filogenética com a espécie Trichoderma aureoviride. Nos ratos tratados com o biopreparado de Trichoderma sp. ativo, não foram encontrados conídios viáveis do fungo nos tecidos amostrados após uma hora da administração do bioproduto.

Resultados anteriores sugerem que existem diferenças biológicas entre espécimens de Anopheles oswaldoi capturados no Estado do Acre e os do Estado de Rondônia, Brasil. Esta espécie tem sido apontada como um importante vetor de malária em localidades do Peru e Acre. Entretanto, em Rondônia, somente um número pequeno de A. oswaldoi alimentados em pacientes com malária desenvolveram infecção nas glândulas salivares. Além disso, há suspeita de que espécimens identificados como A. oswaldoi, capturados em áreas abertas em Costa Marques, Rondônia, são na verdade A. konderi, e que A. oswaldoi sensu stricto estaria restrito a áreas de florestas. Estes dados, juntamente com as dificuldades encontradas na identificação de anofelinos do grupo Oswaldoi, baseadas em critérios morfológicos, sugerem que espécimens de A. oswaldoi são membros de um complexo de espécies crípticas. A distinção de espécies crípticas de insetos vetores é de grande importância, já que diferentes membros em um complexo podem exibir diferenças na ecologia, capacidade vetorial e resposta a medidas de controle. Análise de sequências de DNA, particularmente da região do ITS2 do cistron do DNA ribossômico, tem sido usada como um caracter diagnóstico em alguns grupos de espécies crípticas, tornando-se um instrumento para estudos taxonômicos e filogenéticos. A primeira parte deste estudo teve o objetivo de determinar as diferenças encontradas nas sequências de ITS2 de espécimens de A. oswaldoi capturados em várias localidades da América do Sul. As regiões dos ITS2 destes anofelinos foram amplificadas usando oligonucleotídeos iniciadores conservados das regiões 5.8S e 28S e os produtos de PCR foram clonados e sequenciados. Os ITS2 de todos os mosquitos capturados tiveram tamanho aproximado de 350 nucleotídeos, com aproximadamente 53% de conteúdo de GC. Análise do alinhamento destas sequências, mostrou similaridade variando entre 87% e 100%, e a análise de uma árvore de similaridade, neighbor-joining, produzida com p-distance usando as diferenças nas sequências de ITS2, separou estes espécimens em quatro grupos. Um deles está provavelmente relacionado ao A. oswaldoi sensu stricto, e um outro pode estar relacionado à espécie A. konderi. Os outros dois grupos podem corresponder a espécies cuja identificação morfológica permanece para ser esclarecida no complexo A. oswaldoi. Estes dados são evidências de que espécimens de A. oswaldoi estão incluídos em um complexo de espécies crípticas e que identificação por DNA pode resolver estas questões taxonômicas. A. konderi tem sido considerado uma sinonímia de A. oswaldoi. Embora estágios adultos e imaturos destas espécies de anofelinos apresentem características morfológicas idênticas, aspectos encontrados na genitália masculina podem distinguir estes taxa. A segunda parte deste estudo foi conduzida com o objetivo de comparar a susceptibilidade de A. oswaldoi s.s. e de A. konderi à infecção com Plasmodium vivax. A susceptibilidade foi baseada na proporção de mosquitos com oocistos e esporozoítos. Os anofelinos foram capturados no Acre e em Rondônia para obtenção de progênies F1. Após a emergência dos adultos, as genitálias masculinas dos mosquitos de cada progênie foram dissecadas e examinadas. Todas progênies originadas dos mosquitos capturados em Rondônia corresponderam a A. konderi, enquanto que cerca de 85,0% das progênies do Acre eram A. oswaldoi s.s.. Estas progênies F1 de A. oswaldoi s.s., A. konderi e A. darlingi foram alimentadas simultaneamente com sangue infectado com P. vivax. Estes mosquitos foram dissecados 10-12 dias após infecção e examinados para verificação da presença de oocistos e esporozoítos. Tanto A. oswaldoi s.s. como A. konderi apresentaram oocistos nos tratos digestivos, entretanto, a porcentagem de tratos digestivos positivos para oocistos foi maior em A. oswaldoi s.s. (13,8%) do que em A. konderi (3,3%). Esporozoítos foram encontrados somente nas glândulas salivares de A. oswaldoi s.s., com 6,9% de positividade. As taxas de infecção nos controles A. darlingi foram de 22,5% a 30,0%, para ambos oocistos e esporozoítos. Estes resultados indicam que A. oswaldoi s.s. pode transmitir P. vivax e sugerem que esta espécie é mais susceptível que A. konderi. Embora A. oswaldoi s.s. seja uma espécie exofílica e zoofílica, este anofelino pode estar envolvido na transmissão da malária humana como parece estar ocorrendo no Estado do Acre. / Previous results have suggested that biological differences could exist between specimens of Anopheles oswaldoi captured in the State of Acre and those from the State of Rondônia, Brazil. This species has been appointed as an important malaria vector in localities of Peru and Acre. However, in Rondônia, only a very low percentage of A. oswaldoi fed on malaria patients developed salivary gland infections. In addition, it was suspected that specimens identified as A. oswaldoi captured in open clearings in Costa Marques, Rondônia, were actually A. konderi, and that A. oswaldoi sensu stricto would be restricted to forested areas. These data, together with the difficulties found to identify anophelines of the Oswaldoi group based on morphologic criteria suggest that specimens of A. oswaldoi are members of a complex of cryptic species. The distinction of cryptic species of insects is of critical importance, since different members in a Complex could exhibit differences in ecology, vectorial capacity and response to control measures. DNA sequence analysis and particularly that of the ITS2 region of the rDNA cistron has provided diagnostic characters in some groups of cryptic species becoming a general tool for taxonomic and phylogenetic studies. The first part of the present study was undertaken to determine the extent of differences over the ITS2 sequence of specimens of A. oswaldoi s.l. captured in several localities of South America. The ITS2 of these anophelines were amplified using conserved primers of the 5.8S and 28S regions, cloned and sequenced. The lengths of ITS2 of all mosquitoes captured were about 350 nucleotides, with about 53% GC content. Analysis of the alignment of the sequences, which showed that the similarity varied between 87% and 100%, and analysis of a neighbor-joining tree produced with p-distance using the ITS2 sequences, separated these specimens in four groups. One of them is probably related to A. oswaldoi sensu stricto, and another one can possibly be related to A. konderi. The other two groups may correspond to species the morphologycal identification of which remains to be clarified in the A. oswaldoi complex. These data are evidences that specimens of A. oswaldoi are included in a complex of cryptic species and that the DNA identification could solve some taxonomic questions. A. konderi has been currently considered to be a synonym of A. oswaldoi. Although adults and immature stages of both these anopheline species have identical morphological characters, features of the male genitalia can distinguish these taxa. The second part of this study was conducted in order to compare the susceptibility of A. oswaldoi s.s. and of A. konderi to infection by Plasmodium vivax. The susceptibility was based on the proportion of mosquitoes with oocysts and sporozoites. Anophelines were captured in the State of Acre and Rondônia and used to obtain F1 progenies. After emergency of adults, male genitalia of mosquitoes of each family were dissected. All families originated from mosquitoes captured in Rondônia corresponded to A. konderi, while about 85.0% of the families from Acre were A. oswaldoi s.s.. F1 progeny of field-captured A. oswaldoi s.s., A. konderi and A. darlingi were fed simultaneously on P. vivax infected blood. Mosquitoes were dissected on day 10-12 after infection and examined for the presence of oocysts and sporozoites. Both A. oswaldoi s.s. and A. konderi developed oocysts in midguts, however, the percentage of oocyst-positives in A. oswaldoi s.s. (13.8%) was higher than in A. konderi (3.3%), and only A. oswaldoi s.s. developed salivary infection with sporozoites (6.9% of positivity). Infection rates in A. darlingi ranged from 22.5% to 30.0% for both oocysts and sporozoites. These results indicate that A. oswaldoi s.s. can transmit P. vivax and suggest that it is more susceptible than A. konderi. Although A. oswaldoi s.s. is an exophilic and zoophilic species, it may be involved in human malaria transmission as it seems to be occuring in the State of Acre.