Thesis (MCurr)--Stellenbosch University, 2013. / ENGLISH ABSTRACT: Haematopoietic stem cell transplantation has become an increasingly popular treatment option for persons with life-threatening blood related diseases such as leukemia, lymphoma, myeloma and certain forms of anaemia. Due to this new therapy the use of bone marrow from a healthy individual also called a living donor for transplantation is inevitable. These living donors can experience psychological and economic issues and these components needs to be addressed in the transplant protocol. The researcher described the psychosocial factors that influenced sibling donors during allogeneic bone marrow transplantation at a public sector hospital in Cape Town, whether the transplant team members explained the administrative process of the transplant in an understandable manner and language and the effect of the psychosocial factors and administrative process of the allogeneic bone marrow transplantation on the sibling donors. A quantitative research approach with a descriptive design was used in this study. The sample was selected by means of full population sampling. The final sample size of (n=64) stem cell sibling donors over 18 years of age participated in the study. A self-reporting questionnaire was used to gather data, inclusive of four open-ended questions to establish an in depth sense of what the donor experiences during the bone marrow donation process. Descriptive statistics used to describe the variables included frequency distributions in the form of histograms and frequency tables. The Pearson chi-square statistical analysis test was used to test for relationships amongst groups. The study drew on the Roy Adaptation Model (RAM) as the theoretical framework to explain the phenomena surrounding the psychosocial and administrative effect of the transplantation process on the sibling donor. Based on the findings the haematopoietic stem cell donors coped with the psychosocial impact of the donation process by making use of their coping mechanism to adapt to their situation according to the Roy Adaptation Model. This model also offers guidance to the nurses to apply this model to nursing practice. Results revealed that sibling donors developed feelings of anxiety in relation to the invasive procedures that cause them to experience physical pain. Most respondents claimed that they were not psychologically affected by the donation process. The moral obligation the sibling donor has towards his sister or brother outweighed the physical pain or discomfort experienced during the donation process. Results revealed that the responding donors claimed they were well informed regarding the donation process and understood the treatment plan of the recipient. However, results revealed that there was a lack in visual donor information such as books, pamphlets as well as internet information. Results concerning the demographics revealed that (n=29) respondents had no schooling and some respondents had some schooling which can give an indication of how to bridge the knowledge and information gap between them and the donor in terms of language. Statistical significance results regarding the emotional state and economic situation of the donors was found. Some of the respondents were responsible for their own transport and their own accommodation, some of those that are employed were responsible for leave without pay. An organ donation policy needs to be developed to prevent live organ donors from losing valuable working hours that could result in loss of salary and should provide other financial incentives. Furthermore, a lack in a post-donation follow-up medical to alleviate and detect post-donation complications was identified. Further nursing research can help nurses to understand living donation for transplantation, also how the nurses that practice in organ transplant units experience and deal with the psychosocial factors that influence them particularly. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Hematopoïetiese stamseloorplanting het ’n toenemend gewilde-behandelingsopsie vir persone met lewensgevaarlike bloedverwante siektes soos leukemie, limfoom, miëloom en sekere soorte anemie geword. Vir hierdie tipe terapie word die beenmurg van ’n gesonde individu, ook bekend as ’n lewende skenker, vir oorplanting gebruik. Lewende skenkers kan sielkundige en ekonomiese probleme ervaar en hierdie kwessies moet in die oorplantingsprotokol hanteer word. In hierdie studie is ondersoek ingestel na die psigososiale faktore wat bloedverwante skenkers tydens allogeneïese beenmurgoorplanting by ’n openbare hospitaal in Kaapstad beïnvloed, of die oorplantingspan die administratiewe proses van die oorplanting op ’n verstaanbare manier en in verstaanbare taal verduidelik het, en wat die uitwerking wat die psigososiale faktore en administratiewe proses is op die bloedverwante skenkers tydens allogeneïese beenmurgoorplanting. ’n Kwantitatiewe benadering met ’n beskrywende navorsingsontwerp is in hierdie studie gebruik. Die steekproef is op grond van volledige populasiesteekproefneming gekies. ’n Finale steekproefgrootte van stamselskenkers (n=64) ouer as 18 jaar het aan die navorsing deelgeneem. ’n Selfverslaggewende vraelys is gebruik om data in te samel, wat vier oop vrae ingesluit het om grondige begrip te verkry van wat die skenker tydens die beenmurgskenkingsproses ervaar. Beskrywende statistiek wat gebruik is om die veranderlikes te beskryf, sluit in frekwensie-verspreidings in die vorm van histogramme en frekwensie-tabelle. Die Pearson chi-kwadraat- statistieseanalise is gebruik om die verwantskappe onder groepe te toets. Die Roy Adaptation Model (RAM) is as die teoretiese raamwerk vir die studie gebruik om die verskynsels betrokke by die psigososiale en administratiewe ervaring van die oorplantingsproses vir die bloedverwante skenker te verklaar. Op grond van die bevindinge het die hematopoïetiese stamselskenkers die psigososiale impak van die skenkingsproses hanteer deur gebruik te maak van hulle hanteringsmeganisme om by hulle situasie aan te pas, wat met die RAM ooreenstem. Hierdie model bied ook leiding aan verpleegkundiges om dit in die verplegingspraktyk toe te pas. Resultate het getoon dat bloedverwante skenkers gevoelens van angs ontwikkel het vanweë die indringende prosedures, wat fisiese pyn veroorsaak het. Die meeste deelnemers het aangedui dat hulle nie sielkundig deur die skenkingsproses geraak is nie. Die morele verpligting wat die bloedverwante skenker het teenoor sy of haar broer of suster het die fisiese pyn of ongemak gedurende die skenkingsproses oortref. Resultate het getoon dat die deelnemende skenkers aangedui het dat hulle goed ingelig was oor die skenkingsproses en die behandelingsplan van die ontvanger verstaan het. Die resultate dui egter daarop dat daar ’n gebrek was aan visuele skenkersinligting soos boeke, pamflette en internet-inligting. Resultate rakende die demografie het bewys dat van die deelnemers (n=29) ongeskoold en sommige deelnemers laag geskoold is, wat ’n aanduiding kan gee van hoe die kennis- en inligtingsgaping tussen hulle en die skenker ten opsigte van taal oorbrug kan word. Statisties beduidende resultate rakende die emosionele toestand en ekonomiese situasie van die skenkers is gevind. Sommige deelnemers was verantwoordelik vir hulle eie vervoer en verblyf. Diegene wat werk, het verlof sonder betaling geneem. ’n Orgaanskenkingsbeleid moet ontwikkel word om te verhoed dat lewende orgaanskenkers kosbare werksure verloor, wat kan lei tot ’n verlies aan salaris. Ander finansiële aansporings behoort ook gegee te word. Voorts is ’n gebrek aan opvolg mediese behandeling vir skenkers om skenkingskomplikasies vas te stel en te verlig, geïdentifiseer. Voortgesette navorsing kan verpleegkundiges help om begrip te verkry van die implikasies van lewende orgaanskenking. Verpleegkundiges wat in hierdie orgaanoorplantings- eenhede werksaam is, kan ‘n beter begrip kry van die psigososiale faktore wat hierdie skenkers spesifiek beïnvloed.

Dissertation (PhD)--University of Stellenbosch, 2007. / ENGLISH ABSTRACT: Male fertility has for many years been defined in vitro as the ability of sperm to fertilize oocytes and to obtain early cleavage-stage embryos. Spermatozoa comprise of an extraordinary high percentage of polyunsaturated fatty acids in their plasma membrane. Due to an extremely low content of cytoplasm, sperm cells have a particularly low potential to scavenge reactive oxygen species (ROS), and are therefore highly sensitive to oxidative processes, which lead to sperm nucleus DNA damage/fragmentation. Normally, DNA fragmentation occurs in every ejaculate and can be induced by an excessive ROS production of active leukocytes or the spermatozoa themselves. Under distressed conditions, DNA fragmentation may also occur in the testis as a result of oxidative processes in the apoptotic cascade. These DNA fragmentations can be regarded as late signs of programmed cell death (apoptosis). Clinically, DNA fragmentation in spermatozoa results in significantly decreased implantation and pregnancy rates especially in patients with oligo- and/or teratozoospermia. The p-pattern normal sperm morphology has been shown to give poorer fertilization rates in vitro than the g- and n-patterns. In this study there is reported on the significant correlation found between the p-pattern normal sperm morphology and sperm DNA fragmentation as measured with the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP-biotin end labeling (TUNEL) assay. This finding further explains the lower fertility potential of patients presenting with p-pattern normal sperm morphology. In addition, this study explores the intricate relations between ROS in the semen, DNA fragmentation of the spermatozoa, as measured with the TUNEL assay and the sperm chromatin structure assay (SCSA ), spermatozoa apoptotic status and sperm parameters as measured with a standard semen analysis. Positive correlations were found between ROS and the apoptotic status of the sperm, as well as between sperm with non-fragmented DNA and sperm concentration and percentage motility. The results emphasize the importance of sperm selection especially when the treatment of choice is intracytoplasmic sperm injection (ICSI). An early sign of programmed cell death, also known as apoptosis, is the externalization of phosphatidylserine (PS) from the inner membrane leaflet to the outer leaflet. PS shows a high affinity to Annexin V. Apoptotic spermatozoa are able to fertilize oocytes, but embryo senescence may occur at the time when the paternal genes are activated. In this study there is reported on a novel method whereby spermatozoa can be separated on the basis of their apoptotic status through flow cytometry. Results showed that the normal sperm morphology, according to strict criteria, of the resultant nonapoptotic sperm fraction is significantly higher than that of the apoptotic counterpart. With refinement of this technique, it will be possible in future to use these separated non-apoptotic sperm cells during ICSI for fertilization. From the above it is apparent that the spermatozoon has to play a vital role in the development of the embryo from fertilization to implantation and pregnancy. It is, however, important to note that besides the gametes, there are other critical factors which contribute to a successful in vitro fertilization (IVF) cycle, among these are the in vitro culture conditions. In this regard, this study compared two sequential embryo culture systems. It was found that the more complex medium resulted in better day three embryo quality and a better blastocyst formation rate and pregnancy rate. These findings highlight the importance of a holistic perspective towards the complexity of the factors involved in affecting embryo quality and pregnancy outcome. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Manlike fertiliteit is vir baie jare gedefinieer as die in vitro vermoë van ‘n spermsel om ‘n eiersel te bevrug om sodoende embrios te verkry. Die spermsel se plasmamembraan bestaan uit ‘n hoë persentasie poli-onversadigde vetsure. As gevolg van die klein hoeveelhede sitoplasma van die spermsel het dit ‘n beperkte weerstand teen reaktiewe suurstof spesies (ROS) en is gevolglik baie sensitief vir oksidasie. Oksidasie lei tot DNS skade/fragmentasie. DNS fragmentasie kom in spermselle van alle ejakulate voor en is gewoonlik die gevolg van ROS produksie deur die leukosiete in die semen of vanaf die spermselle self. Onder sekere omstandighede kan DNS fragmentasie ook voorkom in die testis waar dit deel vorm van apoptose. Hierdie tipe DNS skade word gesien as laat tekens van geprogrammeerde seldood (apoptose). In oligo- en/of teratozoospermiese mans lei DNS fragmentasie tot verlaagde implantasie- en swangerskapssyfers. Die p-patroon normale sperm morfologie groep gee laer in vitro bevrugting en swangerskapsyfers as die g- en n-patrone. In hierdie studie doen ons verslag oor die statisties betekenisvolle korrelasie wat gevind is tussen die p-patroon normale sperm morfologie en DNS fragmentasie soos gemeet met die ‘terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP-biotin end labeling’ of te wel TUNEL toets. Hierdie bevinding is ‘n verdere verklaring vir die laer fertiliteits potensiaal van pasiënte wat voordoen met p-patroon sperm morfologie. ‘n Verdere doel van die studie was om die moontlike verband tussen ROS in die semen, spermatozoa DNS fragmentasie, apoptotiese status van die sperms en die motiliteits parameters van die spermatozoa te bepaal. ‘n Positiewe korrelasie is gevind tussen ROS en sperm apoptotiese status. Sperms met ongeframenteerde DNS is ook positief gekorreleer met sperm konsentrasie en motiliteit. Die resultate beklemtoon die belangrikheid van spermseleksie veral in pasiënte waar die keuse van behandeling intrasitoplasmiese sperm inspuiting (ICSI) is. ‘n Vroeë teken van apoptose is die eksternalisering van ‘phosphatidylserine’ (PS) vanaf die interne oppervlakte van die plasmamembraan na die eksterne oppervlak. PS het ‘n hoë affiniteit vir Annexin V. Apoptotiese sperms het die vermoë om ‘n oösiet te bevrug, maar kan lei tot die staking van embrio deling wanneer die vaderlike gene ‘n rol begin speel in embrio ontwikkeling. In hierdie studie het ons ‘n nuwe metode ontwikkel waarvolgens die spermatozoa in die ejakulaat op grond van hul apoptotiese status geskei kan word in apoptotiese en nie-apoptotiese fraksies. Die normale sperm morfologie van die nie-apoptotiese fraksie is betekenisvol beter as dié van die apoptotiese fraksie. Verdere verfyning van die tegniek kan daartoe lei dat dit in die toekoms toegepas kan word om vir nie-apoptotiese sperms te selekteer veral voor die uitvoering van ICSI. Uit die bogenoemde is dit duidelik dat die spermsel ‘n baie belangrike rol in die ontwikkeling van ‘n embrio, vanaf bevrugting tot implantasie en swangerskap, speel. Dit is egter ook belangrik om in gedagte te hou dat daar ander bydraende faktore tot ‘n suksesvolle in vitro swangerskap is, soos laboratorium toestande en embrio kultuursisteem. Om hierdie rede is daar ook twee kultuurmedia in hierdie studie vergelyk. Daar is bevind dat die meer komplekse medium beter kwaliteit embrios op dag drie lewer, asook meer blastosiste en ‘n hoër swangerskapsyfer. Dit is dus duidelik dat dit uiters belangrik is om ‘n holistiese perspektief te hê op die komplekse faktore wat ‘n invloed mag hê op bevrugting, embrio kwaliteit asook die swangerskapsyfer.

Dissertation (PhD)--Stellenbosch University, 2004. / ENGLISH ABSTRACT: Introduction Despite advances in insulin therapy, the side effects associated with diabetes mellitus still remain. Pancreas transplantation has benefited diabetics with end-stage renal failure by reversing the diabetic state and preventing or reversing the progression of diabetes associated diseases. Currently the side effects associated with lifelong immunosuppression preclude pancreas transplantation as a viable treatment option for both type I and II diabetics. In the laboratory, transplanted rat foetal pancreata have been shown to be able to reverse the clinical signs of streptozotocin-induced diabetes in an isogeneic model. Reversal of diabetes by allogeneic foetal rat pancreas transplantation, although possible has proved to be more difficult due to fierce rejection of the grafts and the diabetogenic effects of conventional immunosuppressants. Aims One of the goals, focus and intentions of this laboratory study in rodents, is to contribute new information to the scientific literature. The potential to “reverse” the diabetic state by allogeneic foetal pancreatic transplantation, was the main stimulus for this study. Methods Foetal pancreata of 16-18 days gestation were transplanted into a surgically prepared renal subcapsular space. Immunosuppressive protocols used to prevent rejection of the allogeneic foetal rat pancreata included donor specific transfusion (DST), cyclosporine [a calcineurin inhibitor (CsA)], mycophenolate mofetil [a purine syntase inhibitor (MMF)], and a mouse anti-rat CD4 monoclonal antibody (W3/25). Immunosuppressants were used as monotherapies and in combination. Results Isogeneic foetal rat pancreas transplantation resulted in the growth and development of mature insulin producing islets of Langerhans at the site of engraftment. Allogeneic foetal pancreatic transplantation without immunosuppression resulted in complete rejection of the grafts at 14 days post-transplantation. Histological assessment of allografts at 14 and 30 days post-transplantation showed that CsA was able to prevent acute rejection in our rat models although graft scores and survival were improved if CsA was combined with MMF. Intraperitoneal anti-CD4 monoclonal injections were well tolerated, and if given daily effectively prolonged graft survival up to 30 days. Combining DST with anti-CD4 and CsA induction therapy provided long-term graft survival without daily immunosuppression. This combination, together with allogeneic foetal rat pancreas transplantation, was effective in reversing the clinical signs of experimentally induced diabetes. To my knowledge these are the first published results in which reversal of streptozotocin induced diabetes was achieved by fully MHC mismatched foetal rat pancreatic transplantation. Conclusion Foetal rat pancreatic transplantation is a potential source of endocrine replacement, which, with effective immunosuppression allows for the development of functional islets able to reverse the clinical signs of experimentally induced diabetes in an allogeneic rat model. An unique immunosuppressive protocol, with potential clinical relevance in the human, combines anti-CD4 mAb, CsA and DST induction therapy, which alleviates the burden of daily immunosuppression and associated side effects. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Inleiding Ten spyte van die vordering met modeme insulienterapie bly die newe-effekte, waarmee diabetes mellitus geassosieer is, steeds ‘n probleem vir diabete. Diabetiese pasiente met eindstadium nierversaking trek geweldig voordeel uit nier-pankreasoorplantings wat die diabetes omkeer en die progressie van diabetesverwantesiektes voorkom of selfs omkeer. Die newe-effekte van lewenslange immuunonderdrukking skakel pankreasoorplanting uit as ‘n lewensvatbare behandelingsopsie vir tipe I of II diabete. In ‘n streptozotosien-gei'nduseerde diabetiese rotmodel kan isogenei'ese fetale pankreasoorplanting die kliniese tekens van diabetes omkeer. Die omkering van streptozotosien-gei'nduseerde diabetes deur allogeneiese fetale pankreasoorplanting behoort moontlik te wees indien verwerping en die diabetogeniese newe-effekte van konvensionele immuunonderdrukkers oorkom word. Doelstellings Een van die mikpunte, fokusse en oogmerke van hierdie laboratorium studie in knaagdiere, is om ‘n betekenisvolle bydrae tot nuwe kennis in die wetenskaplike literatuur, te maak. Die potensiaal om die diabetiese toestand deur allogeneiese fetale pankeasoorplanting om te keer, was die hoof stimulus vir die studie. Metodes Fetale rotpankreata van 16-18 dae gestasie was in ‘n chirurgies voorbereide spasie onder die nierkapsel oorgeplant. Immuunonderdrukkende protokolle, vir die voorkomming van verwerping van die allogeneiese fetale pankreasoorplantings, het donorspesifiekeoortappings (DST), siklosporien [‘n kalsineurien inhibitor (CsA)], mikofenolaat mofetiel [‘n purien sintase inhibitor (MMF)] en ‘n anti-rot CD4 monoklonale antiliggaam (W3/25) ingesluit. Die immuunonderdrukkers is as mono- of as kombinasieterapie gebruik. Resultate IsogeneTese fetale rotpankreasoorplanting het tot die ontwikkeling van volwasse insulienproduseerende eilande van Langerhans gelei, wat die kliniese tekens van streptozotosien-gei'nduseerde diabetes kon omkeer. Allogenei'ese fetale rotpankreasoorplanting sonder immuunonderdrukking het tot algehele verwerping van die oorplanting binnel4 dae na oorplanting gelei. Histologiese beoordeling van die oorplantings 14 en 30 dae na oorplanting het getoon dat CsA akute verwerping van fetale pankreasoorplantings in die rotmodelle voorkom. Indien CsA met MMF gekombineer word, word die oorplantings-telling en oorlewing verbeter. Intraperitoneale anti-CD4 monoklonale inspuitings was goed verdra, en indien daagliks toegedien, het dit die oorlewing van die pankreasoorplantings effektief tot 30 dae verleng. Die kombinasie van DST, anti-CD4 en CsA induksieterapie het tot langtermyn oorlewing van die pankreasoorplantings gelei sonder verdere daaglikse immuunonderdrukking. Die induksieterapie in kombinasie met allogenei'ese fetale pankreasoorplanting was effektief in die omkering van die kliniese tekens van streptozotosien-gei'nduseerde diabetes in die rot. Hierdie is, sover ek weet, die eerste keer dat omkering van streptozotosien-gei'nduseerde diabetes suksesvol met ‘n volledige MHC onverenigbare allogenei'ese fetale pankreasoorplanting behaal is. Gevolgtrekkings Fetale rotpankreasoorplanting is ‘n potensiele bron vir endokrien vervangingsterapie, wat met effektiewe immuunonderdrukking tot die ontwikkeling van funksionele eilande van Langerhans lei, wat die vermoe het om die kliniese tekens van experimenteel-ge'induseerde diabetes in ‘n allogeneiese rotmodel om te keer. ‘n Unieke immuunonderdrukkingsprotokol, met kliniese relevansie, kombineer DST met anti-CD4 mAb en CsA induksieterapie wat die las van daaglikse immuunonderdrukking en die geassosieerde newe-effekte van konvensionele immuunonderdrukking verlig.

published_or_final_version / abstract / Surgery / Doctoral / Doctor of Philosophy

published_or_final_version / Orthopaedics and Traumatology / Master / Master of Philosophy

published_or_final_version / Surgery / Doctoral / Doctor of Philosophy

Parkinson's disease is characterized by progressive degeneration of substantia nigra (SN) and subsequently loss of the nigrostriatal circuit. Many strategies have attempted to reconstruct this circuit but failed to satisfy clinical trials. The inhibitory environment of the adult CNS and the long distance between the SN and the striatum make true reconstruction difficult. To reconstruct this circuit, we used a transplant-pathway targeting model. Several putative pathway targeting molecules were examined for their ability to direct the growth of axons from a dopaminergic transplant. For a proof-of-principle study, adenoviral and lentiviral encoded glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF), GDNF-receptor alpha1 (GFRa1 ), or netrin-1 were injected along the corpus callosum individually or in combination. Treatment with individual factors leads to modest growth with few axons extending the entire length of the pathway. Combined treatment with either GDNF/GFRa1 or GDNF/netrin-1 induced the most robust growth towards the contralateral striatum. GDNF/netrin-1 showed the most consistent growth, with about 80% of the axons growing to the farthest injection site on the contralateral side. To determine if this combination of guidance molecules could be used to reconstruct the nigrostriatal pathway, we examined axon outgrowth from transplants placed within the SN in the 6-0HDA-Iesioned hemiparkinsonian animal model. A pathway from the SN to the striatum was made by injecting lentivirus encoding either GDNF and netrin-1 or GDNF and GFRa1, along the internal capsule, from the SN to the striatum. In another cohort of animals lentivirus encoding GFP was used as a control. A piece of embryonic VM tissue was transplanted into the SN two weeks after lentivirus injections. Compare to the GFP control group, a significantly greater number of dopaminergic axons grew from the transplants towards the striatum ten weeks after transplantation. Retrograde tract tracing showed the dopaminergic axons were from A9 cells in the transplant. Behavioral studies showed a significant reduction in number of amphetamine-induced rotations in GDNF/netrin-1 treated animals. Functional recovery strongly correlated with the number of dopaminergic fibers growing out from the transplant. This study shows that a functional nigrostriatal pathway can be reconstructed by guiding axonal growth from the dopaminergic neurons transplanted in the SN along a preformed growth-supportive pathway extending into the striatum. Refinement of this technique could be beneficial for PD patients in the future.

Autologous chondrocyte implantation (ACI) is a cell based therapy for the treatment of articular cartilage defects. Numerous studies have reported outcomes following ACI using a variety of patient reported outcomes (PROs), but no clear recommendations exist regarding which PRO is the most responsive to changes following ACI. Few studies have documented changes in performance based assessments (PBAs) following ACI. Response shift theory proposes that residual changes in self-report measures occur over time. Failing to account for response shift may result in over or under reporting of outcomes from which clinical decisions are made. The purposes of this dissertation were 1) review the literature concerning ACI outcomes to determine the responsiveness of PROs to changes in self-reported function following ACI, 2) evaluate the reliability of PBAs among ACI patients, 3) develop a descriptive timeline for the return of function 1 year following ACI using both PROs and PBAs, and 4) utilize PROs and PBAs to evaluate patients undergoing ACI for evidence of response shift. All PRO and PBA measures were collected preoperatively and 3, 6, and 12 months postoperatively. A retrospective then-test PRO evaluation of function prior to surgery was completed at 6 and 12 months. Response shift was calculated by subtracting the original pre-test score from the then-test score. A systematic review and meta-analyses of existing ACI outcome studies resulted in the recommendation of the International Knee Documentation Committee Subjective Knee Form (IKDC) and Lysholm Knee Scale as highly responsive PROs among ACI patients of varying activity levels. Despite significant increases in PRO scores as early as 6 months following ACI, improvement in PBAs at 12 months following ACI were limited to stride length, walking speed, and step-up force. Finally, no evidence of a group level effect for response shift was observed. These results support the validity of traditional pre-test/post-test research designs with no need to account for response shift when evaluating treatment effects of ACI on the group level. However, the Western Ontario and McMasters University Osteoarthritis Index (WOMAC) did show evidence of a measurable response shift on a patient by patient basis.

Le rejet d’allogreffe dépend de la reconnaissance d’antigènes d’histocompatibilité étrangers par le système immunitaire du receveur. En l'absence de thérapies immunosuppressives, la réaction inflammatoire éventuelle conduit à la destruction rapide du tissu transplanté. Le rôle critique joué par les lymphocytes T CD4+ dans le rejet aigu d'allogreffe est bien établi. Cependant, les contributions respectives des lymphocytes CD4+ Th1 et Th2 dans la réaction de rejet sont controversées. Alors que le rôle des cellules Th1 dans la pathogénèse du rejet est bien établi, l'hypothèse que les cellules Th2 favorisent l'acceptation de la greffe est invalide puisque ces cellules sont capables de déclencher des voies alternatives de rejet. En effet, la fonction effectrice des lymphocytes Th2 a été démontrée dans beaucoup de modèles de rejet de greffe ou de tumeur, et dans la maladie du greffon contre l'hôte. Les caractéristiques principales du rejet de type Th2 sont sa dépendance envers la production d'IL-4 et d'IL-5, le recrutement d'éosinophiles au site du rejet, et son inhibition par les lymphocytes T CD8+ alloréactifs. Les éosinophiles activés exercent leur activité cytotoxique par la libération de plusieurs molécules cytotoxiques comme l’EDN, l’ECP, la MBP et l’EPO. Ces molécules sont probablement responsables de la capacité des éosinophies à affecter la perméabilité vasculaire et à induire des dégâts tissulaires dans les organes rejetés. L'interleukine 9 (IL-9) est une cytokine produite par les lymphocytes T qui joue un rôle important dans les voies effectrices Th2. Dans la littérature, l’IL-9 est fortement associée au développement de l’éosinophilie tissulaire. Dans notre première étude, nous avons analysé le rôle joué par l'IL-9 dans le rejet d'allogreffe bm12 par des souris B6 (pour C57BL/6), un modèle dans le lequel une simple disparité au niveau de la molécule du CMH de classe II favorise une réaction inflammatoire de type Th2. Dans ce modèle, de faible alloantigénicité, les greffes cardiaques bm12 survivent presque indéfiniment dans les receveurs B6 (>60 jours). Nos expériences ont été conçues afin de savoir si l’expression de l’IL-9 au niveau de la greffe pouvait modifier la survie de greffes cardiaques exprimant les alloantigènes bm12. Nous avons ainsi montré que la production locale d’IL-9 induit le rejet des allogreffes cardiaques exprimant l’alloantigène I-Abm12 (survie <30jours). Aucun des organes transgéniques pour l’IL-9 n’a survécu plus de 30 jours alors que des greffes non transgéniques ne furent pas rejetées (>50 jours). L’analyse histologique des allogreffes cardiaques transgéniques pour l’IL-9 montre une infiltration cellulaire dense du myocarde. La composante principale de cet infiltrat est la présence de nombreux éosinophiles. Pour étudier la contribution des cytokines de type Th2, comme l’IL-4 et l’IL-5, dans le rejet des cœurs transgéniques pour l’IL-9, nous avons sélectivement bloqué ces cytokines lors du processus de rejet. Le traitement avec des anticorps neutralisant l’IL-4 bloque complètement le rejet induit par l’IL-9 et permet la survie à long terme des allogreffes cardiaques. Au point de vue de l’histologie ces greffes ne montrent ni infiltration leucocytaire ni artériopathie. Afin de déterminer si l’infiltration éosinophilique induite par l’IL-9 provient de l’activité directe de l’IL-9 ou est le résultat de la sécrétion d’IL-5, un traitement avec un anticorps anti-IL-5 a été appliqué aux receveurs d'allogreffe cardiaque. Ce traitement augmente la survie de la majorité des allogreffes et modifie de manière marquée la composition de l’infiltrat cellulaire en prévenant le recrutement des éosinophiles. De manière intéressante, les cœurs transgéniques pour l’IL-9 qui survivent indéfiniment après le traitement anti-IL-5 arborent une importante fibrose. A la différence du cœur bm12, la peau bm12 greffée sur un receveur B6 subit un rejet rapide et l'histologie des greffes rejetées révèle la présence d'infiltrats denses à éosinophiles. Notre laboratoire a montré que ce processus de rejet est dirigé par les lymphocytes T CD4+ alloréactifs et que les souris B6 déficientes pour l'IL-5 et la voie de cytotoxicité Fas/Fas-L sont incapables de rejeter des peaux bm12. Nos premiers résultats laissaient supposer un rôle pour l'IL-9 dans notre modèle de rejet de greffes en disparité des molécules du CMH de classe II: premièrement, nous avions observé la production d'IL-9 par les lymphocytes T de type Th2 alloréactifs et deuxièmement, l'ARNm d'IL-9 était fortement exprimé au niveau des allogreffes de peaux rejetées. C’est pourquoi, la survie de peaux bm12, déficientes pour la molécule Fas, greffées sur des receveurs B6 déficients pour l'IL-9 (B6.IL-9-/-) a été comparée avec celle de peaux transplantées sur des receveurs B6. Nous avons montré que, comme les souris B6 normales, les animaux B6.IL-9-/- rejettent leur greffe dans les 15 jours. Donc, contrairement à l'IL-5, l'IL-9 n'est pas essentielle pour le rejet de peau dirigé par les cellules T CD4+ de type Th2 dans notre modèle de disparité des molécules du CMH de classe II. Néanmoins, les allogreffes de peaux, dans notre modèle de disparité des molécules du CMH de classe II, contiennent moins d’éosinophiles lorsqu’elles sont rejetées par des receveurs déficients pour la synthèse d’IL-9 (IL-9-/-). En plus du modèle bm12, nous avons également observé un rôle de l’IL-9 dans un autre modèle de rejet Th2. Il a été montré par notre laboratoire que le rejet d’allogreffes cardiaques Balb/c complètement incompatibles par des souris receveuses B6.CD8-/- est caractérisé par le recrutement d’éosinophiles dans l’organe rejeté (106). Dans celui-ci, l’ARNm de l’IL-9 est présent pendant le rejet, de même que l’IL-4 et l’IL-5 et les greffes rejetées par des receveurs IL-9-/- contiennent moins d’éosinophiles par rapport à des receveurs contrôles. Les mécanismes par lesquels l’IL-9 induit le recrutement des éosinophiles ne sont pas complètement connus. L’IL-5 est considérée comme la cytokine clé pour le développement de l’éosinophilie. De plus, le rejet aigu des cœurs transgéniques pour l’IL-9 est caractérisé par une infiltration massive d'éosinophiles et est inhibé lors de la neutralisation de l'IL-5. Nous avons entrepris la seconde étude pour investiguer le lien fonctionnel entre l’IL-9 et l’IL-5 dans le rejet d’allogreffe, ce qui permettra de mieux comprendre le recrutement des éosinophiles par l’IL-9. Bien que le rejet ne soit pas inhibé par le manque d’IL-9, les allogreffes rejetées par les souris déficientes en IL-9 contiennent moins d’éosinophiles par rapport à des souris contrôles et présentent une production plus faible d’IL-5 par les cellules T alloréactives. De manière intéressante, la production optimale d’IL-5 après une stimulation allogénique requiert un récepteur à l’IL-9 (IL-9R) fonctionnel sur les cellules répondeuses. De plus, l’infiltration d’éosinophiles induite par l’IL-9 est absente dans des peaux transplantées sur des receveurs déficients pour le récepteur de l’IL-9. Finalement, la production d’IL-5 par des cellules T CD4+ stimulées par l’anti-CD3 est abolie par la neutralisation de l’IL-9. En conclusion, nous pouvons dire que l'IL-9 est capable d'induire un rejet de type Th2, caractérisé par une forte infiltration d’éosinophiles et une dépendance à l'IL-5 et à l'IL-4. Notre étude montre également que l’IL-9 peut agir directement sur les cellules T CD4+ pour induire leur capacité à sécréter de l’IL-5. Cependant, l’IL-9 n’est pas indispensable au processus de rejet Th2 et il est probable que lorsque l’IL-9 est bloquée d'autres cytokines soient capables de compenser son absence. Notre étude permet une meilleure compréhension des voies complexes du recrutement des éosinophiles.

The purpose of this study was to generate a grounded theory explaining the social and psychological processes used by spouses during the waiting period prior to heart transplantation. Theory discovery was accomplished using the grounded theory methodology. Life on Hold was identified as the basic social psychological process generated from the data that explains the responses of spouses during the waiting period prior to heart transplantation. Life on Hold is the process of "tabling" life's activities for an indefinite period of time in order to devote one's life to another person(s) or event. Spouses of heart transplant candidates set aside life's activities and focus all thoughts, actions, and energy on maintaining the life of the candidate until a donor heart is obtained. The process consists of two stages: Freeing Self and Making Life the Transplant. The theory provides a basis for the development of relevant interventions to assist family members to cope with the uncertainty and stress of the transplant experience.