Orientador: Antonio de Goes / Coorientador: Marcelo Augusto Boechat Morandi / Coorientador: Káthia Fernandes Lopes Pivetta / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Banca: Edson Luiz Furtado / Banca: Adelmo Golynski / Banca: Helson Martins do Vale / Resumo: As espécies de Trichoderma spp. e Clonostachys rosea são bastante estudadas atualmente para o controle biológico de doenças de plantas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial dos antagonistas, Trichoderma asperellum (LQC96) e Clonostachys rosea (LQC62), no controle biológico das principais doenças fúngicas de begônia (mofo cinzento, mancha de Mirotécio e podridão do colo). A etiologia da podridão do colo em begônias foi estudada por meio das análises de suas características morfológicas e moleculares. Foram realizados ensaios in vitro a fim de verificar os mecanismos envolvidos no controle biológico dessas doenças, avaliados por meio da produção de compostos voláteis e compostos solúveis com ação inibitória aos patógenos, além da capacidade hiperparasítica dos antagonistas. A metodologia para avaliar os compostos voláteis consistiu em posicionar dois fundos de placas de Petri sobrepostas, contendo em uma delas cultura do antagonista e em outra, do patógeno. Para avaliar os compostos solúveis, foram utilizadas duas metodologias, o método em cultivo sobre o papel celofane para LQC96 e o método do filtrado da cultura líquida para LQC62. O hiperparasitismo foi avaliado por meio de culturas pareadas. Verificou-se a colonização e a supressão da esporulação em discos e em hastes de begônias. Após a análise do potencial in vitro, foram realizadas ensaios em casa de vegetação, a fim de verificar o controle dessas doenças em cultivo comercial de begônia. Nos ensaios in vitro, verificou-se que os antagonistas tiveram atividade antagônica contra esses patógenos, com a produção de compostos voláteis e solúveis, além de demonstrar a capacidade hiperparasítica de ambos antagonistas. Ambos agentes de controle biológico avaliados foram capazes de colonizar os discos e hastes de begônia e a aplicação preventiva na concentração de ... / Abstract: Currently the species of Trichoderma spp. and Clonostachys rosea are widely studied for biological control of plant diseases. The aim of this study was to evaluate the potential of these isolates these antagonists (T. asperellum LQC96 and C. rosea LQC62) in the biological control of major fungal diseases of begonia (gray mold, Myrothecium leaf spot and stem rot). The etiology of stem rot was studied using morphological and molecular analysis. In vitro assays were performed to verify the mechanisms involved in the biological control of these diseases, measured by the production of volatile and soluble compounds with an inhibitory effect on pathogens and the ability of antagonist hyperparasitism. The methodology for assessing the volatiles consisted of placing two Petri dishes superimposed on one culture containing the antagonist and another pathogen. To evaluate soluble compounds, two methods were used, the cultivation on cellophane for LQC96 and and the culture liquid filtrate method for LQC62. The hyperparasitism was assessed using paired cultures. There colonization and suppression of sporulation was evaluate on leaf disks and stem of begonias. After analysis of the potential in vitro assays, were performed in a greenhouse in order to verify the control of these diseases in commercial cultivation of begonia. In vitro assays was found that the antagonists were antagonistic activity against these pathogens, producing volatile and soluble compounds, and demonstrate the ability of hyperparasitism. Both biocontrol agents evaluated were able to colonize the leaf discs and stem of begonia and preventive application in concentration of 1x107 conidia mL-1 proved to be the most effective in suppressing pathogen sporulation on leaf discs and stem of begonia. The essay on commercial cultivation decreased the incidence of diseases with weekly application of antagonists. For control of gray mold and ... / Doutor

Resumo: A β-D-galactopiranosídeo hidrolase é uma enzima com ampla aplicação tecnológica, clínica e experimental. A enzima possui um íon de metal bivalente coordenado. Para se obter informações a respeito do centro metálico da enzima, algumas espécies de fungos filamentosos foram testadas para a produção de β−galactosidase, ente as quais, a linhagem de Trichoderma reesei FTKO foi selecionada. O extrato enzimático, ao passar pelo processo de purificação, revelou ao menos duas isoformas de β- galactosidase identificadas como BGT I e BGT II. As enzimas são termofílicas e termotolerantes. A dependência do pH para a atividade, os valores de medidas cinéticas e a atividade revelada em gel de poliacrilamida distinguem as isozimas. Para avaliar a necessidade de metais bivalentes foi padronizada uma metodologia de desativação da enzima, apoiado na competição entre o agente seqüestrante e a enzima pelos metais. A metodologia foi aplicada ao o extrato comercial Lactozym 3000 (Novozyme Latin America Ltd.) revelou a necessidade de metal para a sua atividade com a desativação seguida de reativação pelos íons Mg2+, Mn2+, Co 2+, Ni2+, mas não por Zn2+ e Eu3+. A enzima BGT I (pH ótimo de 4,5) mostrou-se, contudo, resistente à desativação, pois se mantém ativa mesmo em altas concentrações de EDTA. / Abstract: The β-D-galactopiranosyde-hidrolase is an enzyme with large technological, clinic, and scientific application. The enzyme coordinates a bivalent metal ion. In order to investigate the metal center of the enzyme of moulds, some strains were tested for β−galactosidase production. Among then, Trichoderma reesei FTKO were selected. The partially purified enzymatic extract reveals the production of two isoforms of β-galactosidase, at least. This enzymes are identified as BGT I e BGT II. Both are termophylic and thermotolerant. The pH dependence, the measured kinetic values and the activity revealed in polyacrylamide electrophoresis gels distinguished the isozymes. The metal assistance of enzymatic activity was evaluated in a standard deactivation methodology of enzyme by competition for the metal by chelating agent and metal site of enzyme. When this methodology was applied in the deactivation of commercial extract Lactozym 3000 (Novozyme Latin America Ltd.), revealed the metal importance for activity. The deactivation was reverted by metals ions as Mg2+, Mn2+, Co2+, Ni2+, but not by Zn2+ or Eu3+. On the other hand BGT I enzyme (optimal pH of 4,5) maintained the activity, even in high concentration of EDTA. / Orientador: Antonio Carlos Massabni. / Coorientador: Rubens Monti. / Doutor

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A malária é um grave problema de saúde pública. Os medicamentos de escolha para tratar a doença são as terapias baseadas em combinações de artemisininas. Porém, uma crescente resistência à estas drogas tem sido reportada. A presente investigação teve como objetivo avaliar o papel do extrato etanólico bruto de Trichoderma stromaticum (Ext-Ts) em camundongos C57BL/6 infectados com Plasmodium berghei ANKA, um conhecido modelo experimental de malária cerebral experimental. Foram monitoradas as manifestações clinicas, histológicas, imunológicas e bioquímicas características da infecção. Observou-se que o tratamento com Ext-Ts foi capaz de prevenir as alterações neurológicas associadas à malária cerebral experimental, diminuir os níveis de parasitemia e aumentar significativamente a sobrevivência de animais infectados. Além disso, foi observado que em camundongos tratados com Ext-Ts houve diminuição dos níveis de colesterol total, triglicerídeos e TGP no soro, menor deposição de hemozoína no fígado, atenuação da intensidade do edema pulmonar, proteção da integridade da barreira hematoencefálica, assim como menor citoaderência e achados histopatológicos nos tecidos avaliados, quando comparado com camundongos infectados não tratados. Esta proteção foi associada com uma diminuição na expressão de IFN-γ e ICAM-1 no cérebro dos animais tratados em relação a animais não tratados. Estes resultados sugerem que o Ext-Ts é uma potencial fonte de compostos antimaláricos e/ou imunomoduladores que poderiam melhorar o tratamento atual no contexto do aumento da resistência aos derivados da artemisinina. / Malaria is a severe health problem. The first-line treatment against the disease are the artemisinin-based combination therapies. However, increased resistance to these drugs has been reported. The aim of this study was to evaluate the role of crude etanolic extracts of Trichoderma stromaticum (Ext-Ts) in C57BL/6 mice infected with Plasmodium berghei ANKA, a well-known model of experimental cerebral malaria. Clinical, histological, immunological and biochemical features of the infection were monitored. It was found that Ext-Ts treatment was able to prevent neurological alterations associated with experimental cerebral malaria, decreased parasitemia levels and significantly improved survival of infected animals. Furthermore, it was observed that in Ext-Ts-treated mice a reduction of total serum cholesterol, triglycerides and TGP, lower hemozoin deposition into the liver, attenuation of pulmonary edema intensity, integrity of the blood-brain barrier as well as fewer cytoadherence and histopathological findings in assessed tissues in comparison with untreated infected mice. This protection was associated with decreased IFN-γ and ICAM-1 mRNA expression in brain of treated animals compared with untreated animals. These results suggest that Ext-Ts is a potential source of antimalarial and immunomodulatory compounds that could improve the current treatment in the context of resistance to artemisinin derivatives. / Dissertação (Mestrado)

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas / Conteúdo não liberado pelo autor.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-05-15Bitstream added on 2014-06-13T21:00:07Z : No. of bitstreams: 1 andrade_mcn_me_ilha.pdf: 261991 bytes, checksum: 006fec132b03beb5f46f5030a336fa9b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A ocorrência de fungos contaminantes e competidores é comum durante o cultivo de shiitake em toros. No Brasil, poucos são os trabalhos que identificam e analisam os efeitos destes microrganismos na produção de shiitake. No entanto, sabe-se que a incidência destes fungos em grandes proporções pode levar à improdutividade dos toros. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo testar o efeito da cal hidratada e do fungicida benomyl no controle de fungos contaminantes e sua resposta na produção de shiitake em toros. Para tanto, testou-se anteriormente in vitro o efeito do benomyl nas concentrações 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,0 e 16,0 mg/mL no crescimento micelial das linhagens de shiitake JAB-L; JAB-K; LE-96/17; LE-95/01 e LE-96/22, de modo a selecionar a linhagem mais tolerante as concentrações de benomyl propostas, comparando com o crescimento das mesmas sem a presença deste fungicida (testemunha). O delineamento deste experimento foi inteiramente casualizado em fatorial 5X7, tendo no total trinta e cinco tratamentos, cada qual com três repetições, sendo cada repetição correspondente a uma placa de Petri. Observou-se que a única linhagem de shiitake a não sofrer qualquer efeito do benomyl nas concentrações propostas foi a LE-96/17, sendo a escolhida para ser utilizada no experimento em toros, a qual foi submetida a maior concentração de benomyl (16,0 mg/mL). O delineamento do experimento em toros foi inteiramente casualizado, com três tratamentos: testemunha; cal (8 kg de cal/ 60 litros de água) aplicados nos toros de produção logo após a inoculação e após cada choque de indução; e benomyl (16,0 mg/mL) aplicados quinzenalmente a partir da inoculação dos toros. Cada tratamento conteve 60 repetições, sendo a unidade experimental correspondente a um toro. Os toros utilizados foram de Eucalyptus urophylla, os quais foram inoculados... .

For oat protection was used Trichoderma harzianum as a bioagent. The fungus that antagonizes other fungi causing diseases on corn. It was applied in two doses on glumed oat allotment with the acreage 8m2 . The grown oat varieties were Neklan and Atego. The first application of the fungus was made shortly after the oat emergence in the form of granula together with the NPK 11-7-7 (in 2005) and NPK 15-10-10 (in 2006) fertilizer , the second application was made in the form of solution of Supresivit S2. The crop was yield by the special harvester and from the threshing the samples for next analyse were taken. The final apprasial was made. in VÚRV Ruzyně.

This paper deals with evaluation of presence of pathogenic fungi in oats, in 4 strains and their variants, ways of treatment during growing season. As well, presence rate of studied phytopathogenic fungi, strategy of loss estimate and evalution of intensity of disease are determined. Furhermore, infection of pathogenes of Fusarium fungi is monitored, including evaluation of yield-forming elements. The purpose of in vitro experiments is to observe surficial microflora on oat seed.

Apesar do intenso interesse na regulação metabólica e evolução das vias produtoras de ATP, o porquê de a maioria dos microorganismos multicelulares metabolizarem glicose através de respiração, ao invés da fermentação, ainda permanece sem resposta. Um desses microorganismos é o fungo celulolítico Trichoderma reesei (Hypocrea jecorina. Usando análise EST e microarrays de cDNA, foi estabelecido, em T. reesei, que a expressão dos genes que codificam as enzimas do ciclo de TCA é programada de tal modo a favorecer a oxidação de piruvato pelo ciclo de TCA, ao invés de sua redução a etanol, através da fermentação. Além disso, os resultados indicam que acetaldeído pode ser convertido a acetato, e não a etanol, prevenindo a regeneração de NAD+, um produto chave requerido para o metabolismo anaeróbico. Os estudos também mostram que a maquinaria de controle regulatório por glicose, foi, provavelmente, objeto de pressão evolutiva, a qual dirigiu o fluxo metabólico à respiração, e não à fermentação. / Despite the intense interest in the metabolic regulation and evolution of the ATP-producing pathways, the long-standing question of why most multicellular microorganisms metabolize glucose by respiration rather than fermentation remains unanswered. One such microorganism is the cellulolytic fungus Trichoderma reesei (Hypocrea jecorina). Using EST analysis and cDNA microarrays, we find that in T. reesei expression of the genes encoding the enzymes of the TCA is programmed in a way that favors the oxidation of pyruvate via the TCA cycle rather than its reduction to ethanol by fermentation. Moreover, the results indicate that acetaldehyde may be channeled into acetate rather than ethanol, thus preventing the regeneration of NAD+, a pivotal product required for anaerobic metabolism. The studies also point out that the regulatory machinery controlled by glucose was most probably the target of evolutionary pressure that directed the flow of metabolites into respiratory metabolism rather than fermentation.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-04-18T13:46:37Z No. of bitstreams: 1 Jessica Morais da Silva.pdf: 1089549 bytes, checksum: d1e717e2066bd3fd9f3853ff0b4f184e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T13:46:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Morais da Silva.pdf: 1089549 bytes, checksum: d1e717e2066bd3fd9f3853ff0b4f184e (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / The cowpea is a major source of income in the North/Northeast of Brazil. But the same can be affected by a wide range of plant pathogens can damage production and productivity. Currently it is common to use resistance inducers as a means to combat the pathogens attack. This work aimed to evaluate resistance inducers, as well as the biochemical mechanisms in controlling anthracnose of cowpea (Vigna unguiculata L. Walp.). We conducted an antagonistic test with various strains of Trichoderma URM front of Colletotrichum lidemuthianum URM3149, the greenhouse was applied four abiotic inducers (salicylic acid, chitosan, amino butyric acid, acibenzolar-S-methyl) and biotic (Trichoderma) in cowpea plants. The severity of the disease, as well as enzymatic activities performed leaves was evaluated (catalase, peroxidase, polyphenol oxidase, β-1,3-glucanase and protease). Trichoderma aureorivide URM5158 showed a high rate of antagonism as well as the activity of chitinase was high. Among all the inductors in the end of the experiment only acibenzolar-S-methyl severity showed high rate and did not differ from control. Salicylic acid stood out among the abiotic inducers and T. aureorivide URM5158. The Trichoderma aureoviride URM5158 species has the potential antagonistic to Colletotrichum lindemuthianum URM3149; show potential inducers against severity of bean anthracnose. / O feijão caupi é uma das principais fontes de renda do Norte/Nordeste. Porém o mesmo pode ser afetado por uma diversidade de fitopatógenos podendo prejudicar na produção e produtividade. Atualmente, é comum o uso de indutores de resistência como meio de combater esse ataque de micro-organismos. Este trabalho teve como objetivo avaliar indutores de resistência, assim como os mecanismos bioquímicos no controle da antracnose do feijão caupi (Vigna unguiculata L. Walp.). Foi realizado um teste antagônico com diversas espécies de Trichoderma URM frente ao Colletotrichum lidemuthianum URM3149. Em casa de vegetação foi aplicado quatro indutores abióticos (ácido salicílico, quitosana, ácido amino butírico, acibenzolar-S-metil) e um biótico (Trichoderma) em plantas de feijão caupi. Foi avaliado a severidade da doença, assim como também realizado atividades enzimáticas das folhas (catalase, peroxidase, polifenoloxidase, β-1,3-glucanase e protease). Trichoderma aureorivide URM5158 apresentou uma alta taxa de antagonismo assim como a atividade da quitinase foi elevada, sendo este selecionado para os testes in vivo. Entre os indutores avaliados apenas o acibenzolar-S-metil apresentou alta taxa de severidade não diferindo do controle. O ácido salicílico se destacou entre os indutores abióticos, assim como T. aureorivide URM5158. A espécie Trichoderma aureoviride URM5158 apresenta potencial antagônico ao Colletotrichum lindemuthianum URM3149; os indutores mostram potencial contra a severidade da antracnose do feijão.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4542_1.pdf: 1133484 bytes, checksum: 03b12c365166ce3194891b4f41966c86 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Dentre as doenças que afetam a cultura do feijão, o mofo branco causado por Sclerotinia sclerotiorum é uma das mais importantes, principalmente em sistemas de cultivo que adotam a agricultura irrigada. Quatro isolados de Sclerotinia sclerotiorum, sendo três provenientes de plantas cultivadas com sintomas do mofo branco (Ss11-feijão; Ss17-alface e Ss5-soja) e um de solo (806), foram avaliados quanto a patogenicidade a plantas de feijão, variedade IPA-10. Todos os isolados testados revelaram-se patogênicos e apenas o isolado Ss5 foi estatisticamente inferior aos demais. Também foi avaliado o controle biológico in vitro pelo método de pareamento em placas de Petri utilizando-se oito isolados de Trichoderma e um de Ulocladium atrum, além do controle químico in vitro, por meio do crescimento micelial dos isolados de S. sclerotiorum em meio BDA, acrescido dos fungicidas Cercobin (Tiofanato metílico), Rovral (Iprodione) e Derosal (Carbendazim) em quatro concentrações distintas do ingrediente ativo (1, 10, 50 e 100 ppm). Com exceção de U. atrum, todos os isolados de Trichoderma revelaram potencial antagônico contra S. sclerotiorum, destacando-se T. harzianum (3601) como o de melhor desempenho. Quanto ao controle químico, Cercobin (Tiofanato metílico) foi o mais eficiente inibindo de forma satisfatória o crescimento micelial do patógeno, sendo este fungicida e o isolado 3601 selecionados para a comparação entre os controles químico e biológico in vivo de S. sclerotiorum em plantas de feijão, variedade IPA-10, em casa-de-vegetação. O antagonista foi aplicado ao solo veiculado em arroz autoclavado, numa concentração de 2 g/Kg de solo em diferentes períodos (antes do patógeno, juntamente com o patógeno e após o patógeno), enquanto o fungicida foi aplicado de acordo com as recomendações do fabricante. Houve diferença estatística entre os tratamentos, sendo a aplicação do fungicida e do antagonista realizadas antes do patógeno os mais eficientes, reduzindo o percentual de patogenicidade em 32,94% e 37,04%, respectivamente