NASCIMENTO, Demétrius Fernandes do. Quantificação de fármacos com atividade antimicrobiana em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massa (LC-MS/MS) : aplicação em estudos de farmacocinética comparada. 2011. 213 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-06T16:35:30Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_dfnascimento.pdf: 4128278 bytes, checksum: 543f6060440b0214fdcc91a986f0fecd (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-11T15:29:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_dfnascimento.pdf: 4128278 bytes, checksum: 543f6060440b0214fdcc91a986f0fecd (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-11T15:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_dfnascimento.pdf: 4128278 bytes, checksum: 543f6060440b0214fdcc91a986f0fecd (MD5) Previous issue date: 2011 / Two robust, fast and sensitive methods for quantification of sulfamethoxazole (SMX), trimethoprim (TMP) and sulfadiazine (SDZ) in plasma using high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS/MS) was developed and validated. The methods involved liquid-liquid extraction with ethyl acetate using metoprolol and sulfamethoxazole as internal standards (PI). The chromatographic separations were performed using Genesis C18 column 100 x 2.1 mm, 4 microns (sulfadiazine) and Genesis C18 150 x 4.6 mm, 4 microns (SMX+TMP), with elution systems consisting of solutions of methanol/water (35/65, v/v) + 0.5% Formic Acid (sulfadiazine) and methanol/water (45/55, v/v) + 0.5% Formic Acid (SMX+TMP). Calibration curves were linear in the range from 0.05 to 25 mg/mL (sulfadiazine); 0.5 to 100 mg/mL (SMX) and 0.02 to 3.5 mg/mL (TMP). The recoveries corresponding to the analysis of quality controls were 66.8, 59 and 63.4% for sulfadiazine; 67.7, 63.3 and 74.4% for SMX; 74.5, 70.5 and 78.1% for TMP. The recovery values relating to internal standards sulfamethoxazole and metoprolol were 66.2% and 76.8% respectively. The validated bioanalytical methods included evaluation of precision and accuracy being the results within the required limits. The methods were successfully applied in studies of comparative bioavailability of formulations containing a combination of sulfamethoxazole-trimethoprim (suspension containing 40mg of SMX and TMP 8mg per milliliter) and formulations containing sulfadiazine (tablets 500 mg) in healthy volunteers of both sexes. / Foram desenvolvidos e validados dois métodos robustos, rápidos e sensíveis para a quantificação de sulfametoxazol (SMX), trimetoprima (TMP) e sulfadazina (SDZ) em plasma, utilizando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massa (LC-MS/MS). Os métodos envolveram extração líquido-líquido, com acetato de etila utilizando metoprolol e sulfametoxazol como padrões internos (PI). As separações cromatográficas foram realizadas utilizando colunas Genesis C18 100 x 2.1 mm, 4µ (sulfadiazina) e Genesis C18 150 x 4,6mm, 4µ (SMX + TMP), com sistemas de eluição constituídos por soluções de Metanol/Água (35/65, v/v) + 0,5 % Ácido Fórmico (sulfadiazina) e Metanol/água (45/55; v/v) + 0,5% Ácido Fórmico (SMX + TMP). As curvas de calibração foram lineares, nas faixas de 0,05 a 25 µg/mL (sulfadiazina), 0,5 a 100 µg/mL (SMX) e 0,02 a 3,5 µg/mL (TMP). As recuperações correspondentes às análises dos controles de qualidade foram de 66,8, 59 e 63,4 % para sulfadiazina; 67,7, 63,3 e 74,4% para SMX; 74,5, 70,5 e 78,1% para TMP. Os valores da recuperação referentes aos padrões internos sulfametoxazol e metoprolol foram de 66,2% e 76,8% respectivamente. As metodologias bioanalíticas validadas incluíram avaliação de precisão e exatidão intra e interlote, assegurando que estas estavam dentro de limites admissíveis. Os métodos foram aplicados com sucesso em estudos de biodisponibilidade comparativa de formulações contendo a associação de sulfametoxazol + trimetoprima (suspensão contendo 40 mg de SMX e 8 mg de TMP por mililitro) e de formulações contendo sulfadiazina (comprimidos de 500 mg) em voluntários sadios de ambos os sexos.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: K. pneumoniae e um importante patogeno no ambiente hospitalar. Os antimicrobianos da classe dos carbapenens tem sido amplamente utilizados para o tratamento das infeccoes causadas por amostras de K. pneumoniae produtoras de β-lactamases de amplo espectro. As metalo-β-Iactamases (MβL) sao enzimas bacterianas com habilidade de hidrolisar os carbapenens e, embora, ainda sejam raras, amostras de K. pneumoniae produtoras de MβL tem sido reportadas com uma frequencia cada vez maior. Objetivo: Avaliar os mecanismos de resistencia a carbapenens em amostras de K. pneumoniae. Metodologia: Nove amostras de K. pneumoniae isoladas ate o momento na cidade de São Paulo foram avaliadas. A relacao genetica entre estas amostras foi estudada utilizando-se a tecnica de PFGE. Os testes de sensibilidade aos antimicrobianos foram realizados pela tecnica de diluicao em agar, segundo as padronizacoes do NCCLS. A tecnica da reacao em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para determinar a presenca dos genes responsaveis pela codificacao das MβL, assim como para 0 contexto genetico que abriga estes genes. A deteccao de outros mecanismos de resistencia, como alteracoes da permeabilidade da membrana externa e a presenca de efluxo, tambem foi realizada em todas as amostras. Resultados: Todas as amostras foram altamente resistentes a ceftazidima (MIC, 128 µg/ml), apresentando tambem resistencia a imipenem (MIC, 128 µg/ml) e a meropenem (MIC, 64 µg/ml). Dentre as nove amostras de K. pneumoniae, todas apresentaram produto de amplificacao de PCR positivo para o gene blaIMP-1. A resistencia aos carbapenens tambem foi correlacionada a ausencia de uma proteina de membrana externa de aproximadamente 36 kDa. A diminuicao da expressao...(au) / Background: The increasing prevalence of multi-drug resistant Klebsiella pneumoniae (KPN) isolates is an emerging problem worldwide. Integrons are common among these bacteria and play an important role in the development, capture and expression of resistance genes. Methods: The genetic context around the blaIMP-1 gene was evaluated in 8 clonally related KPN isolates, recovered from a hospital from the city of Sao Paulo (SP), Brazil. The integron was revealed by a walking sequencing strategy. The plasmid obtained from the index isolate was electroporated into Escherichia coli XL1 Blue. Selection of recipient cells was performed in 5 µg/ml ceftazidime plates. Plasmid size was calculated based on the size of the plasmid restriction fragments. The amplicon of the dfr gene was cloned in TOPO vector and transformed into E. coli host. Trimethoprim MICs were performed by NCCLS agar dilution. Results: PCR and sequence analysis revealed that the strain carried two different class 1 integrons, a copy of the previously described In86 and a new integron, named In87. In86 carried blaIMP-1 in the first position, followed by aacA30 and aadA1 genes. The second integron, In87, carried a single gene cassette closely related to dfr22. The product of dfr23 showed 99% of amino-acid homology with DFR22 (one amino-acid substitution, Ser121-Tyr). Further characterization of the isolates revealed that In86 was likely to be located in a non-transferable 30 Kb plasmid. Conclusions: IMP-1 producing Acinetobacter spp. recently isolated in SP was the likely source of In86 acquisition since they carry an identical integron to those encountered in the studied KPN isolates. The presence of trimethoprim resistance gene cassettes in class 1 integrons which normally harbor sul1 gene at the 3’CS is most likely driven by the use of trimethoprimsulfamethoxazole combination. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo – FAPESP / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Medicamentos veterinários são utilizados para promover a saúde animal, propiciar ganhos econômicos e aumentar aprodutividade da indústria de alimentos. Porém, a ausência de um programa eficiente para fiscalização e o uso de forma inadequada ou excessiva, desses medicamentos, representam uma ameaça ao consumidor, por contribuírem com a presença de resíduos em tecidos animais destinados à produção de alimentos. Esses resíduos, à longo prazo, contribuem para o aparecimento de resistência por parte dos microorganismos a antimicrobianos utilizados na prática clínica humana, além de possibilitar o desenvolvimento de reações alérgicas em indivíduos hipersensíveis. Sendo a segurança alimentar um tema cada vez mais relevante, devido à crescente busca por uma melhor qualidade de vida, e à conscientização dos consumidores quanto ao direito de adquirir produtos seguros à saúde,o objetivo desse estudo foi desenvolver método para a análise simultânea de medicamentos veterinários, que contenham em sua formulação os antimicrobianos sulfametoxazol (SMX) e trimetoprima (TMP), visando seu emprego no controle de qualidade. Além disso, constituiu escopo desse trabalho desenvolver método para determinação das sulfonamidas: sulfadiazina (SDZ), sulfametoxipiridazina (SPZ) e SMX em carne de frango, para ser empregado no controle e fiscalização de alimentos de origem animal, pelos órgãos competentes. Para o método de controle de qualidade não houve a necessidade do desenvolvimento de um preparo de amostras, sendo suficiente a realização de diluições para a quantificação dos analitos por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), com coluna Thermo BDS Hypersil®C18(150 mm x 4,6 mm x 5 µm) e detecção em ultravioleta (UV) a 213 nm. O método apresentou linearidade no intervalo de 5 a 70 µg mL-1para SMX e de 1 a 30 µg mL-1para TMP (r2= 0,99, para ambos compostos). O desvio padrão relativo foi = 5%, e o teste de adição de padrão indicou exatidão. Assim, o método proposto apresentou grande potencial para análise simultânea dos fármacos avaliados e representa uma simples e rápida alternativa para o controle de qualidade de medicamentos veterinários. Já para a análise de sulfonamidas em carne de frango, foi desenvolvido método, constituído pela técnica QuEChERS modificado e posterior detecção/ quantificação dosanalitos por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de arranjode diodos (HPLC-DAD), empregando coluna Lichrospher 60 RP-Select B (250 mmx 4,6 mm x 5 µm) a 40°C,fase móvel constituída por tampão fosfato: acetonitrila (75:25, v/v), na vazão inicial de 0,5 mL min-1, aumentando para 1,2 mL min-1. Os analitos foram detectados a 265 nm. O método apresentou seletividade, assim como linearidade na faixa de 30 a 200 µg kg-1para a SDZ e de 25 a 200 µg kg-1para o SMX e SPZ. A precisão, avaliada pela repetibilidade e pela precisão intermediária, apresentou desvio padrão relativo entre 1,4 a 14%, para os níveis baixo, médio e alto, do intervalo linear. A detectabilidade do método foi satisfatória, uma vez que os limites de detecção e de quantificação obtidos foram 10 e 25 µg kg-1, respectivamente, e o limite máximo de resíduo, preconizado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento do Brasil (MAPA) é igual a 100 µg kg-1. O procedimento de preparo de amostra QuEChERS é simples, rápido e foi empregado com sucesso na matriz estudada. Os resultados obtidos sugerem queo método desenvolvido é útil para o monitoramento de resíduos de SMX, SPZ e SDZ em amostras de peito de frango, uma vez que seu desempenho atende a todos os requisitos e critérios aceitáveis, de acordo com órgãos regulatórios como a Comunidade Européia e o MAPA, para a avaliação de resíduos em alimentos, visando à segurança do consumidor. / Veterinary drugs were used in the worldwide to promote animal health, provide economic gains and increased productivity of the foodstuffs industry of animal origin. However, the absence of an effective monitoring programand the use of excessive or inappropriate these drugs present a threat to consumers, because they contribute with the presence of residues in animal tissues destined for food production. These residues, in long term, contribute to the appearance of microbial resistance by antimicrobials used in human clinicalpractice, beyond to enable the development of allergic reactions in hypersensitive individuals. Being the food safety an issue increasingly relevant due to the increasing search for a better quality of life, and the awareness consumers about the right to purchase insurance products to health, the aim of this study was to develop a technique for quality control simultaneous analysis of veterinary drugs containing the antimicrobial agents sulfamethoxazole (SMX) and trimethoprim (TMP) in their formulations, beyond development of a method for sulfonamides analysis, sulphadiazine(SDZ), sulphamethoxypyridazine (SPZ) e sulphamethoxazole(SMX), in chicken breast, which could be used in a routine laboratory. For the method of quality control there was no need to develop a sample preparation, being sufficient the achievement of dilutions for quantification of analytes by high performance liquid chromatography, with Thermo BDS Hypersil®C18column (150 mm x 4,6 mm x 5 µm) and ultraviolet detection (UV). The quality control method demonstrated linearity in the range of 5 to 70 µg mL-1for SMX and 1 to 30 µg mL-1for TMP (r2=0.99 for both compounds). The relative standard deviation was =5%, and and test of standard addition indicated that the methodwas accurate. The proposed method shows great potential for simultaneous analysis of the drugs evaluated and represents a new alternative approach to quality control of veterinary medicines. For the analysis of sulfonamides in chicken breast, a method was developed, based on the technique QuEChERS modified using high performance liquid chromatography coupled toa diode array detector and LiChrospher 60 RP -Select B®C18 (250mm x 4.6 mm x 5 µm) columnat 40°C,mobile phase constituted by phosphate buffer:acetonitrile (75:25, v/v) at a initial flow rate of 0.5 mL min-1, increased by 1.2 mL min-1(total run time of 20 min) and detection at 265 nm. The QuEChERS method is inexpensive, fast and easy, and the extraction of the analytes of the matrix was successfully employed. In addition, the method presented linearity, in the range of 30 to 200 µg kg-1, for SDZ, and 25 to 200 µg kg-1,for SMX and SPZ. The precision, evaluated by repeatability and intermediate precision, presented relative standard deviation of1.4 to 14% forlow, medium and high levels of the linear range. The detectability of the method was satisfactory, since the limits of detection and quantitation obtained were 10 and 25 mg kg-1, respectively, and the maximum residue limit recommended by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply of Brazil is equal to100 mg kg-1. The procedure of sample preparation QuEChERS is simple, fast and has been successfully used in the matrix studied. The results suggest that the method developed is useful for monitoring residues of SMX, SDZ and SPZ in samples of chicken breast, since its performance meets all the requirements and criteria acceptable in accordance with regulatory guides, including the Community European and Ministry of Agriculture, Livestock and Supply of Brazil, for the evaluation of residues in foods, aiming to consumer safety. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi caracterizar a identificacao, o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos, a similaridade genetica e os mecanismos de resistencia a trimetoprim/sulfametoxazol (SXT) entre os isolados clinicos do complexo Burkholderia cepacia (CBc). Metodologia: Foram avaliados 82 isolados clinicos do CBc recuperados de pacientes atendidos em dois hospitais universitarios localizados na regiao sudeste do Brasil. A identificacao bacteriana foi realizada pelo sequenciamento do gene recA e pela espectrometria de massas MALDI-TOF MS. O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi determinado para ceftazidima, cloranfenicol, levofloxacina, meropenem, minociclina, ticarcilina/acido clavulanico e SXT. Os resultados do perfil de sensibilidade tambem foram comparados entre quatro tecnicas distintas, microdiluicao em caldo, diluicao em agar, Etest e disco difusao, sendo a microdiluicao em caldo considerada a tecnica referencia. A concordancia geral e por categoria de sensibilidade, assim como as taxas de erros, foram calculadas de acordo com as recomendacoes do CLSI M23-A3. Os genes que conferem resistencia aos betalactamicos e ao SXT foram pesquisados por meio das tecnicas de PCR e sequenciamento dos respectivos amplicons. A similaridade genetica entre os isolados que carreavam genes de resistencia foi determinada por PFGE. O DNA plasmidial e cromossomal dos isolados foram extraidos utilizando as tecnicas de Kieser e kits comerciais, respectivamente. A localizacao dos genes de resistencia foi determinada por Southern blot e hibridizacao utilizando sondas especificas. O contexto genetico dos genes de resistencia encontrados entre os isolados do CBc foi determinado por PCR e sequenciamento das regioes conservadas 3ÆCS e 5ÆCS do integron de classe 1. A tecnica de conjugacao foi realizada utilizando como amostra receptora E.coli J53. Resultados: Foram identificadas, pelo sequenciamento do gene recA, B. cenocepacia (n=44), B. multivorans (n=12), B. vietnamiensis (n=10), B. contaminans (n=9) e B. cepacia (n=7). Comparando os resultados obtidos pelo recA com aqueles do MALDI-TOF MS, 100% e 75,6% dos isolados foram concordantes na identificacao ao nivel de genero e especie, respectivamente. Boas taxas de sensibilidade foram encontradas para ceftazidima (86,6%), meropenem (87,8%), minociclina (87,8%) e SXT (97,6%). A concordancia geral entre as tecnicas avaliadas foi maior que 93% entre microdiluicao em caldo e diluicao em agar, exceto para cloranfenicol (89%). Entre a tecnica referencia e os resultados obtidos pelo Etest, a concordancia geral foi maior que 92%, exceto para ceftazidima (78%), SXT (80,4%) e cloranfenicol (85,3%). A concordancia por categoria entre microdiluicao em caldo e disco difusao foi maior que 90% para a maioria dos antimicrobianos testados, exceto para cloranfenicol (52,4%), SXT (74,4%) e levofloxacina (83,3%). Dois isolados (B. cenocepacia e B. cepacia) apresentaram resistencia ao SXT e carreavam o gene dhfr22 inserido em um integron que classe 1. Entre os isolados resistentes a ceftazidima (7,3%), em apenas um (B. cenocepacia) foi detectado o gene blaOXA-10-like, tambem inserido em um integron de classe 1 o qual continha um gene cassete que confere resistencia aos aminoglicosideos, aadA1. De acordo com os resultados da hibridizacao, blaOXA-10-like estava inserido em um plasmideo de ~70 Kb. Entretanto, nao conseguimos realizar a transferencia deste plasmideo pela tecnica de conjugacao. Os dois isolados de B. cenocepacia que carreavam genes de resistencia apresentaram perfil clonal semelhante pelo PFGE. Conclusoes: O MALDI-TOF MS demonstrou ser uma excelente tecnica alternativa para a identificacao dos isolados do CBc. Boas taxas de sensibilidade foram observadas para os antimicrobianos usualmente empregados no tratamento das infeccoes causadas por estes micro-organismos. Em geral, foi observada boa concordancia entre as tecnicas de sensibilidade avaliadas neste estudo, exceto para as metodologias Etest e disco difusao na predicao da sensibilidade ao SXT. O gene dhfr22 demonstrou ser o principal mecanismo entre os isolados resistentes ao SXT. De acordo com os nossos conhecimentos, descrevemos, pela primeira vez, a presenca do gene blaOXA-10-like em um isolado clinico do CBc / FAPESP: 2012/04910-9 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 22.pdf: 1754861 bytes, checksum: 1ffad18e038e83070b6bf0ce1cc6f7d7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O Sulfametoxazol (SMX) é um antibiótico de amplo espectro, pertencente à classe das sulfonamidas. Ele inibe competitivamente a enzima bacteriana diidropteroato-sintetase, enquanto a trimetoprima (TMP) é uma inibidora da diidrofolato-redutase. Ambas as drogas bloqueiam o metabolismo do ácido fólico produzindo uma atividade sinérgica antibacteriana. A associação é utilizada no tratamento de infecções bacterianas urinárias, das vias aéreas e de infecções oportunistas em portadores do vírus da imunodeficiência humana causadas por Pneumocystis jiroveci. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar uma metodologia analítica para a avaliação da associação de SMX e TMP em comprimidos por eletroforese capilar de zona (CZE). Desenvolveu-se e validou-se o método utilizando capilar de sílica de 56 cm de comprimento efetivo e diâmetro de 75 µm, mantido à temperatura de 25 ºC com detecção por arranjo de diodos no comprimento de onda de 221 nm. Utilizou-se como eletrólito de corrida uma solução contendo tampão fosfato 15 mM, pH 6,2 e a diferença de potencial aplicada foi de 25 kV. O tempo de introdução da amostra foi de 15 segundos utilizando-se pressão de 45 mbar. O tempo de corrida foi de 10 minutos, com tempo de migração de aproximadamente 4 minutos para a TMP e 8 minutos para o SMX. A metodologia foi validada avaliando-se os parâmetros de linearidade, seletividade (efeito matriz e degradação acelerada), precisão, exatidão (procedimento de recuperação) e robustez. A faixa linear estabelecida na alíquota de análise para a TMP foi de 17 47 µg/mL e para o SMX foi de 100 220 µg/mL. O estudo do efeito matriz demonstrou que, para comprimidos de SMX e TMP, o método não apresenta efeito matriz. A precisão foi estudada pela repetitividade, precisão intermediária e reprodutibilidade. Os resultados da repetitividade apresentaram um valor HorRat de 0,510 para o SMX e 0,572 para a TMP, sendo o critério de aceitabilidade ≤ 2,0. / Sulfamethoxazole (SMX) is a broad-spectrum antimicrobial that belongs to a class of sulfonamide. It inhibits the bacterial enzyme dihydropteroate synthetase while trimethoprim (TMP) blocks the dihydrofolate reductase. Both drugs act synergistically and have a pronounced antibacterial activity, as they sequentially block two chemical reactions essential to bacterial survival. Clinically, the associated drugs are used to treat many kinds of infection caused by bacteria such as urinary infection, respiratory system infection and opportunistic infections in human immunodeficiency virus patients caused by Pneumocystis jiroveci. The aim of the present work was to develop and validate a capillary zone electrophoresis (CZE) method for the analysis of SMX and TMP in tablets. The CZE method was carried out on a silica capillary (56 cm effective length; 75µm internal diameter), maintained at 25ºC using photodiode array (PDA) detection at 221 nm. The running buffer consisted of 15 mM of phosphate buffer adjusted to pH 6.2 and the applied voltage was 25 kV. The time of sample introduction was 15 seconds using a pressure of 45 mbar. Under these conditions, the running time was 10 min with a migration time of 4 minutes for the TMP and 8 minutes for the SMX. The method was validated by evaluating the following parameters: linearity, selectivity (matrix effect and accelerated degradation), precision, recovery and robustness. The method was linear in the range of 100 - 220 µg/mL for SMX and 17 – 47 µg/mL for TMP, not presenting matrix effect. Precision was studied by repeatability, intermediate precision and reproducibility. Repeatability showed HorRat values of 0.510 for SMX and 0.572 for TMP, considering the acceptability criteria ≤ 2.0. The intermediate precision was evaluated on the basis of CV %, presenting 4,95 % and 5.03% for SMX and TMP, respectively. These values were considered satisfactory based on the acceptance criteria (less than 8%). The reproducibility showed a HorRat value of 1.25 for TMP, which is a value considered suitable based on the acceptance criteria (below 2.0). For SMX, the reproducibility HorRat value was 0.52 and the limit of acceptance was 2.0. Recovery range was 96.7 % to 97.6 % for SMX and 96.5 % to 102.4 % for TMP. The robustness was assessed by small and deliberate changes in the method parameters, observing slight variations in migration times. The proposed method can be applied to the quantitative analysis of SMX and TMP in tablets and can contribute for the improvement of the quality control of pharmaceutical products, reducing the use of organic solvents and waste generation, ensuring the safety and therapeutic efficacy of the formulations.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1911.pdf: 1095367 bytes, checksum: 719fee66f02d6939f843c1b2cf2be7d9 (MD5) Previous issue date: 2007-04-13 / Universidade Federal de Sao Carlos / This work reports the investigation of a series of bovine serum albumin (BSA) restricted access media columns (RAM) for on-line egg samples deproteinization. High exclusion percentage of egg s proteins were obtained with the three RAM BSA columns prepared (C8, C18 and phenyl) using only water as eluent. However, an increase of pressure of the chromatographic system was observed at each injection, which made unfeasible the use of these columns for direct injection of the egg samples. To prolong the life-time of the RAM-BSA columns, acetonitrile was used as a protein precipitate agent. This clean-up procedure allowed the repetitive injection of 300 µL of whole egg samples. For the simultaneous quantification of sulfamethoxazole (SMX) and trimethoprim (TMP) in eggs samples, RAM-BSA columns, in different lengths (10 and 5 cm) sizes and different chromatographic conditions were thoroughly evaluated. A bidimensional higher performance liquid chromatography configuration having a RAM C18 BSA column in the first dimension, and a C18 analytical column in the second dimension were used for simultaneous quantification of these antibiotics. The developed method showed good selectivity, accuracy and precision with limits of quantification 80 ng/mL for both compounds. Thus, the validated method is reliable and sensitive for monitoring residues in whole eggs samples. / Neste trabalho foi preparada e avaliada uma série de colunas de acesso restrito (RAM) de albumina sérica bovina (BSA) para a desproteinização on-line de amostras de ovo. As três colunas preparadas (C8, C18 e fenil) mostraram elevada percentagem de exclusão de proteínas do ovo, usando somente água como eluente. No entanto, foi observado aumento da pressão no sistema cromatográfico, a cada injeção, o que tornou inviável a injeção direta das amostras de ovo, nas condições inicialmente avaliadas. Para prolongar a vida útil das colunas RAM-BSA foi necessário a utilização de um agente de precipitação de proteínas, e dentre os agentes avaliados, acetonitrila mostrou-se o solvente mais eficiente, permitindo a injeção repetitiva de volumes de 300µL de amostras de ovo, sem alteração da pressão no sistema cromatográfico. Para o desenvolvimento do método de análise simultânea dos antibióticos sulfametoxazol (SMX) e trimetoprima (TMP) em ovos, no modo multidimensional, foram também avaliadas colunas RAM-BSA de diferentes comprimentos (10 e 5 cm) e em diferentes condições cromatográficas. O sistema, composto por uma coluna RAM C18-BSA, acoplada a uma coluna analítica C18, permitiu o desenvolvimento do método com excelente precisão, exatidão e com adequada sensibilidade. Os limites de quantificação foram de 80 ng/mL, para ambos compostos. Desta forma, o método desenvolvido poderá ser utilizado para o monitoramento de resíduos destes antibióticos em amostras de ovo.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In this study, it was developed a methodology using liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for the determination of antimicrobials sulphamethoxazole and trimethoprim in hospital effluent and for monitoring the electrocoagulation process applied to synthetic solutions, as well as, to the hospital effluent fortified with the antimicrobials, both at the same concentration of 1 mg L-1. The achieved limits of detection and quantification were 0.25 and 0.5 μg L-1, respectively. The linear range of the method was 0.5 to 100 μg L-1, with a correlation coefficient always greater than <0.9995 for both antimicrobials. The average concentration of sulphamethoxazole and trimethoprim found for the hospital effluent was 27.8 and 6.6 μg L-1, respectively. In order to study the best conditions for conducting the electrocoagulation, factorial design with surface response methodology was used. It was set as variables the distance of the electrodes, the concentration of electrolyte (NaCl) and the applied current (mA). As evaluation parameter it was used the chemical oxygen demand (COD) reduction of the hospital effluent. The best result for the COD reduction (57.9%) was achieved using 500 mg of NaCl, electrode distance of 30 mm and current of 800 mA. By means of the application of the electrocoagulation process to synthetic solutions of the antimicrobials and Soxhlet extraction, it was confirmed the true degradation or the reduction of the antimicrobial concentration by possible adsorption on the generated process sludge. From the average reduction of 84.7% of the initial sulphamethoxazole concentration, 6.0% of which were adsorbed by the sludge, resulting an average reduction 79.3%, at pH 5 and 7. The antimicrobial trimethoprim, at pH 5 and 7, showed an average reduction of 28.7% of the initial concentration by sludge adsorption, and no degradation occurred. The identification of the metabolites in hospital effluent and the degradation products generated by the electrocoagulation of the synthetic solution was performed using liquid chromatography quadrupole linear ion trap mass spectrometry. The metabolites identified were N4-acetylsulphamethoxazole and dihydroxitrimethoprim, and their paths of fragmentation were proposed. The degradation products of sulfamethoxazole identified were dihydroxyl sulphamethoxazole (identified only after 60 minutes treatment) and dehydrogenate sulphamethoxazole. For the electrocoagulation of the hospital effluent fortified with standard solutions of both antimicrobials, it was observed no degradation. Therefore, the degradation products in real effluent samples could not be studied. The electrocoagulation process applied to the hospital effluent was efficient by reducing COD under the conditions evaluated; but, it was not efficient by the degradation of the fortified antimicrobials in the effluent. The developed methodology used as analytical tool, LC-MS/MS_QTrap operating in lineal way, for the determination of the investigated antimicrobials in hospital wastewater, as well as for the efficiency evaluation of the electrocoagulation process by the concentration reduction or the degradation in synthetic solution and hospital wastewater, proved to be fast, sensitive, selective, sparing laborious manipulation of the sample. / Neste estudo, desenvolveu-se método utilizando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas seqüencial para determinação dos antimicrobiais sulfametoxazol e trimetoprima em efluente hospitalar, bem como para avaliar o processo de eletrocoagulação aplicado à solução sintética dos antimicrobiais e ao efluente hospitalar fortificado com os fármacos, ambos na concentração de 1 mg L-1. Os limites de detecção e quantificação alcançados para ambos antimicrobiais foram de 0,25 e 0,5 μg L-1, respectivamente. A faixa linear do método foi de 0,5 a 100 μg L-1, com um coeficiente de correlação sempre superior à 0,9995, para ambos os antimicrobiais. As concentrações de sulfametoxazol e de trimetoprima encontradas no efluente hospitalar ficaram na faixa de 12,5 à 37,3 e 3,65 à 11,30 μg L-1, respectivamente. Para determinação das melhores condições de aplicação do processo de eletrocoagulação ao efluente hospitalar utilizou-se planejamento fatorial com superfície de resposta. Como variáveis foram usadas a distância dos eletrodos, a concentração de eletrólito (NaCl) e a corrente aplicada (mA). Como parâmetro de avaliação usou-se a redução da demanda química de oxigênio (DQO). Os melhores resultados obtidos na redução da DQO (57,9%) foram alcançados utilizando-se 500 mg de NaCl, distância dos eletrodos de 30 mm e corrente de 800 mA. Através da aplicação do processo de eletrocoagulação à solução sintética de ambos os antimicrobiais e por meio da extração Soxhlet pôde-se confirmar a real degradação ou a diminuição da concentração dos antimicrobiais em solução pela possível adsorção destes, no lodo gerado no processo. O sulfametoxazol apresentou uma diminuição média da concentração inicial de 84,7%, sendo que, destes, 6,0% ficaram adsorvidos ao lodo, alcançando, assim, uma degradação média de 79,2%, em pH 5 e 7. A trimetoprima, em pH 5 e 7, apresentou uma redução média da concentração inicial de 28,7% sendo que ocorreu total adsorção ao lodo, não havendo degradação. A identificação dos metabólitos no efluente hospitalar e de produtos de degradação gerados na aplicação de eletrocoagulação à solução sintética foi feita através de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas quadrupolo linear e trapeamento iônico (LC-MS/MS_QTrap). Os metabólitos identificados foram o N4-acetilsulfametoxazol e o dihidroxitrimetoprima. Caminhos de fragmentação foram propostos: os produtos da degradação do sulfametoxazol, identificados, foram o sulfametoxazol dihidroxilado (identificado apenas após 60 minutos de tratamento) e o sulfametoxazol dihidrogenado. Na aplicação da eletrocoagulação ao efluente hospitalar, fortificado com solução padrão de ambos os antimicrobiais, observou-se que não ocorre degradação destes. Assim sendo, não foi possível estudar-se os produtos da degradação em amostras reais de efluente. O processo de eletrocoagulação aplicado ao efluente hospitalar é eficiente na redução da DQO nas condições avaliadas; mas, não é eficiente na degradação dos antimicrobiais no efluente fortificado. O método desenvolvido, utilizando-se como ferramenta analítica LCMS/ MS_QTrap operando em modo linear, para a determinação dos fármacos investigados, em efluente hospitalar, como também, para a avaliação da eficiência do processo de eletrocoagulação na redução da concentração ou na degradação dos antimicrobiais em solução sintética e, em efluente hospitalar, provou ser rápido, sensível, seletivo, dispensando laboriosa manipulação da amostra.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:31:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6191_1.pdf: 1304520 bytes, checksum: a83bab1006e18b1f8f045ccd53a7eb36 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A política nacional de medicamentos genéricos (Lei n° 9.787 de 10 de fevereiro de 1999) é um instrumento que vem ampliando o acesso a medicamentos de qualidade (seguros e eficazes). Para tanto é necessário que métodos de análise em matrizes biológicas com uma maior seletividade e sensibilidade para quantificação de fármacos e/ou metabólitos sejam desenvolvidos e validados para posterior utilização em estudos de farmacocinética comparada (bioequivalência). No Brasil ainda é escasso o número de profissionais com formação acadêmica (Técnico-científica) para a condução de estudos de biodisponibilidade comparada, sobretudo na etapa analítica. Com o intuito de colaborar com a implementação desta política, o presente trabalho tem como objetivo desenvolver e validar métodos de análise de duas classes de antibióticos (Sulfonamidas e Fluoroquinolonas) em plasma humano e posterior aplicação na avaliação biofarmacêutica de diferentes formulações. Durante a formação foi realizado um aumento da complexidade das técnicas utilizadas desde a extração líquido-líquido (ELL) e utilização de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por absorção no ultravioleta (CLAE-UV), extração em fase sólida (EFS) com auxílio de CLAE-UV e EFS seguida de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por espectrometria de massas em tandem (CL-EM/EM). O desenvolvimento e validação de métodos bioanalíticos vai desde a seleção de sistemas cromatográficos e de detecção, técnica de extração e clean-up que gerem cromatogramas de qualidade, avaliação da estabilidade de fármacos na matriz biológica até o cumprimento dos critérios de aceitação das seqüências analíticas contendo amostras dos voluntários. Dentre as fluoroquinolonas o objeto de estudo foi o norfloxacino (NFX) comprimido de 400mg. Para extração e clean-up das amostras em plasma humano utilizou-se o método por ELL seguido de quantificação por CLAE-UV. Em meio às muitas sulfonamidas o objeto de estudo foi composto de duas formulações da associação de sulfametoxazol + trimetoprima (SMZ + TMP). Determinou-se simultaneamente a SMZ + TMP em plasma humano após administração da forma farmacêutica (FF) cápsula (400mg + 80mg) através de método de extração e clean-up em fase sólida off-line com posterior quantificação por CLAE-UV e após a administração da FF suspensão (400mg + 80mg / 10mL) por CL-EM/EM com ionização à pressão atmosférica através da técnica de eletronebulização ( Electrospray, ESI ) em modo positivo. A biodisponibilidade dos fármacos, a parir das formas farmacêuticas, foi avaliada através da análise estatística de parâmetros como Área sob a Curva (ASC), concentração plasmática máxima (Cmáx) segundo as normas (RE 898 de 29 de maio de 2003) da ANVISA. Os métodos analíticos foram desenvolvidos e validados segundo a RE 899 de 29 de maio de 2003 da ANVISA mostrando-se lineares, precisos, exatos e robustos frente ao elevado throughput de amostras. O método EFS-CL-MS/MS mostrou-se mais robusto pela maior limpeza dos interferentes da matriz plasmática e pelo menor tempo de análise (2.5 min) por amostra, diminuindo os resíduos de solventes da fase móvel bem como no procedimento de extração mostrando-se menos tóxico aos analistas e ao meio ambiente. Todos os métodos desenvolvidos se configuraram como ferramentas suficientemente capazes de discriminar a biodisponibilidade comparada dos medicamentos testados

Stenotrophomonas maltophilia é um bacilo Gram-negativo, não fermentador, considerado um microorganismo pouco virulento, relacionado principalmente a infecções associadas à assistência a saúde. A S. maltophilia apresenta um padrão de resistência intrínseca à maioria das classes de antibióticos. A droga de escolha para o tratamento das infecções por S. maltophilia é a sulfametoxazol/ trimetoprima (SMX/TMP). Entretanto, estudos atuais relatam o aumento da resistência a esse antibiótico, o que limita assim as opções para terapia efetiva. Outras opções de tratamento são o levofloxacino e a tigeciclina, porém, faltam estudos clínicos e in vitro dessas drogas. A proposta deste estudo foi avaliar os possíveis mecanismos de resistência a SMX/TMP e as quinolonas em isolados clínicos de pacientes internados no Instituto Central do Hospital das Clínicas e do Hospital A.C. Camargo. Foram avaliadas 106 amostras de S. maltophilia isoladas de pacientes adultos com infecção relacionada à assistência a saúde, internados no Instituto Central do Hospital das Clínicas da FMUSP e no Hospital de Câncer A.C Camargo durante o período de dezembro de 2008 a dezembro de 2010. A sensibilidade à SMX/TMP foi de 78,3%, para levofloxacino de 82% e 14,2% para cirpofloxacino, para minociclina de 100% e tigeciclina 91,6%. Foi realizado PCR para detecção dos genes sul1, sul2 e dfrA1 para avaliar a resistência à SMX/TMP, os genes int1 e iscr2 para avaliação da presença de elementos genéticos móveis e os genes gyrA, qnr, smeD, smeT e aac(6)-Ib-cr para avaliação da resistência as quinolonas. Quatorze amostras (13,2%) foram positivas para o gene sul1. Desses isolados, nove amostras apresentavam resistência ao SMX/TMP com CIM50 de 8 g/mL e CIM90 de 128 g/mL. Cinco amostras positivas para o gene sul1 foram sensíveis a SMX/TMP com CIM50 de 1 g/mL e CIM90 de 1 g/mL. A sequencia do integron1 da amostra com CIM >125 g/mL mostrou um tamanho aproximado de 4000 pb contendo os genes cassetes aac4 e aadA1 e a região qac/sul1. Uma amostra resistente a SMX/TMP foi positiva para o gene sul2 localizado na transposase-like ISCR 2. Observamos a presença de quatro novos qnr em cepas de S. maltophilia e a presença da enzima aac(6)-ib-cr em 4 amostras. 100% das cepas foram positivas para o gene do sistema de efluxo smeDEF e 12/38 amostras tiveram o gene smeT do sistema de efluxo smeDEF, ,porém não foi observada mutação nesse gene. Na sequencia de aminoácidos da girase A de 15 amostras resistentes a levofloxacino não observamos mutações relacionadas à resistência a quinolonas. As cepas resistentes a SMX/TMP apresentaram um padrão policlonal. Dezoito amostras resistentes ao levofloxacino apresentaram 14 perfis clonais, distribuídos em 10 clusters. S. maltophilia exibe múltiplos mecanismos de resistência, nesse estudo observamos um grande número de cepas com elementos genéticos móveis carregando o gene sul1 e outros genes de resistência. A S. maltophilia pode ser um importante reservatório de transmissão de genes de resistência / Stenotrophomonas maltophilia is a gram-negative, non-fermenter, considered a low virulent organism, mainly related to healthcare associated infections. S. maltophilia shows a pattern of intrinsic resistance to many classes of antibiotics. The drug of choice for the treatment of infections caused by S. maltophilia is SMX/TMP, however, current studies have reported increased resistance to this antibiotic, thus limiting the options for effective therapy. Among the treatment options appear tigecycline and levofloxacin, but clinical trials and studies in vitro to such drugs are lacking. The purpose of this study was to evaluate the possible mechanisms of resistance to SMX/TMP and quinolones in clinical isolates from patients admitted to the Institute\'s Central Clinical Hospital and the Hospital A.C Camargo. We evaluated 106 strains of S. maltophilia isolated from adult patients with healthcare associated infections, at the Instituto Central do Hospital das Clínicas and the Cancer Hospital AC Camargo in the period of December 2008 to December 2010. The sensitivity to SMX/TMP was 78.3%, 82% for levofloxacin, 14,2% for ciprofloxacin, minocycline 100% and for tigecycline 91.6%. PCR was performed for detection of gene sul1, sul2 and dfrA1 to evaluate the resistance to SMX/TMP, genes iscr2 int1 was performed to evaluate the presence of mobile genetic elements and genes gyrA, qnr, smeD , smeT and aac (6 \')-Ib-cr for evaluation of resistance to quinolones. Fourteen samples (13.2%) were positive for the gene sul1. In these isolates, nine samples showed resistance to SMX/TMP with MIC50 of 8 g/ml and MIC90 of 128 g/mL. Five strains were positive for sul1 gene and were susceptible to SMX/TMP with MIC50 of 1 g/ml and MIC90 of 1 g/mL. The sequence of the integron class 1 strain with an MIC> 125 g/mL showed an approximate size of 4000 bp containing the gene cassettes aadA1, aac4 and qac/sul1. A strain resistant to SMX/TMP was positive for the gene sul2 located on ISCR2 a transposase-like. We observed the presence of four new qnr in strains of S. maltophilia and the presence of the enzyme aac (6 \')-ib-cr in 4 samples. 100% of the strains were positive for the gene of the efflux system smeDEF and 12/38 samples had the gene smeT repressor of smeDEF efflux system, however there was no mutation in this gene. In the amino acid sequence of gyrase A of 15 strains resistant to levofloxacin did not observe mutations related to resistance to quinolones. Strains resistant to SMX/TMP had a polyclonal PFGE pattern. Eighteen strains resistant to levofloxacin showed 14 clonal profiles 14 divided into 10 clusters S. maltophilia displays multiple mechanisms of resistance. In this study, we observed a large number of strains with mobile genetic elements carrying the sul1 gene and other resistance genes. S. maltophilia is may be an important source for transmission of genes of resistance

Stenotrophomonas maltophilia é um bacilo Gram-negativo, não fermentador, considerado um microorganismo pouco virulento, relacionado principalmente a infecções associadas à assistência a saúde. A S. maltophilia apresenta um padrão de resistência intrínseca à maioria das classes de antibióticos. A droga de escolha para o tratamento das infecções por S. maltophilia é a sulfametoxazol/ trimetoprima (SMX/TMP). Entretanto, estudos atuais relatam o aumento da resistência a esse antibiótico, o que limita assim as opções para terapia efetiva. Outras opções de tratamento são o levofloxacino e a tigeciclina, porém, faltam estudos clínicos e in vitro dessas drogas. A proposta deste estudo foi avaliar os possíveis mecanismos de resistência a SMX/TMP e as quinolonas em isolados clínicos de pacientes internados no Instituto Central do Hospital das Clínicas e do Hospital A.C. Camargo. Foram avaliadas 106 amostras de S. maltophilia isoladas de pacientes adultos com infecção relacionada à assistência a saúde, internados no Instituto Central do Hospital das Clínicas da FMUSP e no Hospital de Câncer A.C Camargo durante o período de dezembro de 2008 a dezembro de 2010. A sensibilidade à SMX/TMP foi de 78,3%, para levofloxacino de 82% e 14,2% para cirpofloxacino, para minociclina de 100% e tigeciclina 91,6%. Foi realizado PCR para detecção dos genes sul1, sul2 e dfrA1 para avaliar a resistência à SMX/TMP, os genes int1 e iscr2 para avaliação da presença de elementos genéticos móveis e os genes gyrA, qnr, smeD, smeT e aac(6)-Ib-cr para avaliação da resistência as quinolonas. Quatorze amostras (13,2%) foram positivas para o gene sul1. Desses isolados, nove amostras apresentavam resistência ao SMX/TMP com CIM50 de 8 g/mL e CIM90 de 128 g/mL. Cinco amostras positivas para o gene sul1 foram sensíveis a SMX/TMP com CIM50 de 1 g/mL e CIM90 de 1 g/mL. A sequencia do integron1 da amostra com CIM >125 g/mL mostrou um tamanho aproximado de 4000 pb contendo os genes cassetes aac4 e aadA1 e a região qac/sul1. Uma amostra resistente a SMX/TMP foi positiva para o gene sul2 localizado na transposase-like ISCR 2. Observamos a presença de quatro novos qnr em cepas de S. maltophilia e a presença da enzima aac(6)-ib-cr em 4 amostras. 100% das cepas foram positivas para o gene do sistema de efluxo smeDEF e 12/38 amostras tiveram o gene smeT do sistema de efluxo smeDEF, ,porém não foi observada mutação nesse gene. Na sequencia de aminoácidos da girase A de 15 amostras resistentes a levofloxacino não observamos mutações relacionadas à resistência a quinolonas. As cepas resistentes a SMX/TMP apresentaram um padrão policlonal. Dezoito amostras resistentes ao levofloxacino apresentaram 14 perfis clonais, distribuídos em 10 clusters. S. maltophilia exibe múltiplos mecanismos de resistência, nesse estudo observamos um grande número de cepas com elementos genéticos móveis carregando o gene sul1 e outros genes de resistência. A S. maltophilia pode ser um importante reservatório de transmissão de genes de resistência / Stenotrophomonas maltophilia is a gram-negative, non-fermenter, considered a low virulent organism, mainly related to healthcare associated infections. S. maltophilia shows a pattern of intrinsic resistance to many classes of antibiotics. The drug of choice for the treatment of infections caused by S. maltophilia is SMX/TMP, however, current studies have reported increased resistance to this antibiotic, thus limiting the options for effective therapy. Among the treatment options appear tigecycline and levofloxacin, but clinical trials and studies in vitro to such drugs are lacking. The purpose of this study was to evaluate the possible mechanisms of resistance to SMX/TMP and quinolones in clinical isolates from patients admitted to the Institute\'s Central Clinical Hospital and the Hospital A.C Camargo. We evaluated 106 strains of S. maltophilia isolated from adult patients with healthcare associated infections, at the Instituto Central do Hospital das Clínicas and the Cancer Hospital AC Camargo in the period of December 2008 to December 2010. The sensitivity to SMX/TMP was 78.3%, 82% for levofloxacin, 14,2% for ciprofloxacin, minocycline 100% and for tigecycline 91.6%. PCR was performed for detection of gene sul1, sul2 and dfrA1 to evaluate the resistance to SMX/TMP, genes iscr2 int1 was performed to evaluate the presence of mobile genetic elements and genes gyrA, qnr, smeD , smeT and aac (6 \')-Ib-cr for evaluation of resistance to quinolones. Fourteen samples (13.2%) were positive for the gene sul1. In these isolates, nine samples showed resistance to SMX/TMP with MIC50 of 8 g/ml and MIC90 of 128 g/mL. Five strains were positive for sul1 gene and were susceptible to SMX/TMP with MIC50 of 1 g/ml and MIC90 of 1 g/mL. The sequence of the integron class 1 strain with an MIC> 125 g/mL showed an approximate size of 4000 bp containing the gene cassettes aadA1, aac4 and qac/sul1. A strain resistant to SMX/TMP was positive for the gene sul2 located on ISCR2 a transposase-like. We observed the presence of four new qnr in strains of S. maltophilia and the presence of the enzyme aac (6 \')-ib-cr in 4 samples. 100% of the strains were positive for the gene of the efflux system smeDEF and 12/38 samples had the gene smeT repressor of smeDEF efflux system, however there was no mutation in this gene. In the amino acid sequence of gyrase A of 15 strains resistant to levofloxacin did not observe mutations related to resistance to quinolones. Strains resistant to SMX/TMP had a polyclonal PFGE pattern. Eighteen strains resistant to levofloxacin showed 14 clonal profiles 14 divided into 10 clusters S. maltophilia displays multiple mechanisms of resistance. In this study, we observed a large number of strains with mobile genetic elements carrying the sul1 gene and other resistance genes. S. maltophilia is may be an important source for transmission of genes of resistance