Orientador: Joyce Annichino-Bizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T06:24:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bittar_LuisFernando_D.pdf: 2765667 bytes, checksum: 034770d407c1c68eebc65646b23b7cc9 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: Aumento dos níveis de fator VIII (FVIII) é um fator de risco prevalente e independente para tromboembolismo venoso (TEV). Síndrome pós-trombótica (SPT) é uma complicação a longo prazo da trombose venosa profunda (TVP) de membros inferiores, que está presente em 20% -50% dos pacientes, e podem ser associados a um processo inflamatório crônico. O receptor low density lipoprotein receptor-related protein 1 (LRP1) tem sido associado ao catabolismo do FVIII. Metodologia: Após uma mediana de 10 anos do primeiro episódio trombótico, avaliamos os níveis de FVIII em 68 pacientes com TEV e níveis elevados prévios deste fator, e 67 controles saudáveis. Posteriormente, foi analisada a presença de SPT em pacientes e sua relação com os níveis plasmáticos de FVIII. Além disso, foram avaliadas as regiões dos genes do FVIII e do LRP1 que codificam as regiões de afinidade entre eles, com o objetivo de verificar se essas alterações moleculares estão associadas aos níveis plasmáticos de FVIII, e com o TEV. Por último, foi avaliada a expressão proteica de LRP1 no fígado de 20 pacientes cirúrgicos. Resultados: Após 10 anos do primeiro episódio de TEV, os níveis de FVIII foram significativamente maiores em pacientes quando comparados aos controles (158,0 UI / dL vs 126,1 UI / dL, p <0,001]. Pacientes com SPT grave apresentaram níveis aumentados de FVIII (182,0 UI / dL) quando comparados aos pacientes com SPT moderada (155,5 UI / dL, p <0,001) ou sem PTS (154,0 UI / dL, p <0,001). Apesar de encontrarmos 14 alterações moleculares nos genes do FVIII e do LRP1, não foi encontrada nenhuma relação entre essas alterações moleculares e os níveis plasmáticos de FVIII ou com o TEV. Além disso, não foi observada correlação entre a expressão do LRP1 nas células hepáticas e os níveis plasmáticos de FVIII. Conclusões: Nós demonstramos um aumento persistente dos níveis de FVIII em um subgrupo de pacientes com TEV, mas de uma magnitude muito menor após 10 anos do primeiro episódio de TEV. Além disso, observamos uma associação significativa entre o aumento dos níveis plasmáticos de FVIII e SPT grave / Abstract: Introduction: Increased levels of factor VIII (FVIII) are a prevalent and independent risk factor for venous thromboembolism (VTE). Post-thrombotic syndrome (PTS) is a long-term complication of deep venous thrombosis (DVT) of the lower limbs that is present in 20%-50% of patients and can be associated to a chronic inflammatory process. The low density lipoprotein receptor-related protein 1 (LRP1) has been associated with FVIII catabolism. Methodology: After a median of 10 years of the first thrombotic episode, we evaluated FVIII coagulation levels in 68 patients with VTE and previous high levels of FVIII and in 67 healthy controls. Subsequently, we analyzed the presence of PTS in patients and its relationship with plasma levels of FVIII. Moreover, we evaluated the regions of FVIII and LRP1 genes encoding regions of affinity between these proteins, with the objective of determining whether these molecular changes are associated with plasma levels of FVIII and VTE. Finally, we evaluated the protein expression of LRP1 in the liver of 20 surgical patients. Results: After 10-years median of the first VTE episode, FVIII levels were significantly higher in patients when compared to controls (158.0 IU/dL vs. 126.1 IU/dL; p<0.001]. Patients with severe PTS showed increased levels of FVIII (182.0 IU/dL) when compared to patients with moderate PTS (155.5 IU/dL; p<0.001) or no PTS (154.0 IU/dL; p<0.001). Despite we have found 14 molecular changes in the FVIII and LRP1 genes, no relationship was found between these molecular alterations and FVIII levels or VTE. Moreover, no correlation was observed between LRP1 expression in the liver cells and plasma FVIII levels. Conclusions: We demonstrated a persistent increase of FVIII levels in a subset of patients with VTE, but in a much lower magnitude after 10 years of the first VTE episode. Moreover, we observed a significant association between increased plasma FVIII levels and severe PTS / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

INTRODUÇÃO: A fibrilação atrial (FA) é a arritmia cardíaca mais comum e está associada a uma significativa morbidade e mortalidade. A sua prevalência aumenta marcadamente com a idade. A terapia com anticoagulantes orais tem sido a base de tratamento e prevenção de eventos tromboembólicos em pacientes com FA. Entretanto, a anticoagulação oral em idosos pode ser desafiadora devido à vários fatores, como alterações orgânicas funcionais, risco aumentado de sangramento e eventos isquêmicos, presença de comorbidades, polifarmácia e uma menor aderência ao tratamento. OBJETIVOS: Avaliar a frequência de tromboembolismo e complicações hemorrágicas em pacientes muito idosos (idade >= 85 anos) em uso de varfarina; avaliar tempo na faixa terapêutica (TTR), causas do INR fora da faixa, escores de CHADS2 e CHA2DS2 - VASc, comorbidades associadas e causas de mortalidade. METODOS: análise retrospectiva de pacientes que iniciaram o tratamento com varfarina com uma idade >= 85 anos, entre abril de 1999 e setembro de 2013, controlados em uma clínica de anticoagulação oral. RESULTADOS: foram incluídos 164 pacientes; 51% eram do sexo masculino e a idade média de início e fim do tratamento com varfarina foram de 86,8 e 89,7 anos, respectivamente. A indicação mais comum para o uso de ACo foi a fibrilação atrial (86%). O seguimento médio foi de 34,6 ± 23 meses. O CHADS2 e CHA2DS2 - VASc médio dos pacientes foi 2,78 e 4,7, respectivamente. O tempo na faixa terapêutica (TTR) foi de 58,6%. A polifarmácia esteve presente em 78% dos pacientes. De acordo com as estimativas de Kaplan-Meier, a probabilidade livre de TE e sangramento grave foi de 93,5% e 90,5% em três anos, respectivamente. Quando analisados esses dois desfechos combinados, a probabilidade livre de tromboembolismo e sangramento grave foi de 83,4% em três anos. CONCLUSÃO: nesse estudo, o uso de um antagonista da vitamina k (varfarina) em pacientes com idade >= 85 anos esteve associado a um baixo risco de tromboembolismo e sangramento grave durante o período de seguimento. / INTRODUCTION: Atrial fibrillation (AF) is the most common cardiac arrhythmia and is associated to a significant morbidity and mortality. Its prevalence strongly increases with aging. Therapy with oral anticoagulants (OAC) has been the basis of treatment and prevention of thromboembolic events in patients with AF. However, oral anticoagulation in the elderly can be challenging due to various factors such as the alteration of organic functions, greater risk of bleeding and ischemic events, presence of comorbidity, polypharmacy and a lower adherence to treatment. OBJECTIVES: Evaluate the frequency of thromboembolism and hemorrhagic complications in very elderly patients (aged >= 85 years) in use of warfarin; evaluate time in therapeutic range (TTR), causes of INR outside the range, scores of CHADS2 and CHA2DS2 - VASc, associated comorbidities and cause of death. METHODS: Retrospective analysis of patients who initiated treatment with warfarin at aged >=85 years, between April of 1999 and September of 2013, controlled in an oral anticoagulation clinic. RESULTS: A total of 164 patients were included in the study; 51% were males and the mean ages at the start and end of the treatment with warfarin were of 86,8 and 89,7 years, respectively. The most common indication for the use of OAC was atrial fibrillation (86%). The mean follow-up was of 34,6 ± 23 months. The mean CHADS2 and CHA2DS2 - VASc of patients was 2,78 and 4,7, respectively. The time in therapeutic range (TTR) was of 58,6%. Polypharmacy was present in 78% of patients. According to the Kaplan-Meier estimates, the survival curve of TE and severe bleeding was of 93,5% and 90,5% in three years, respectively. When these two combined outcomes are analyzed, the survival curve of thromboembolism and severe bleeding was of 83,4% in three years. CONCLUSION: In this study, the use of one vitamin K antagonist (warfarin) in patients aged >= 85 years was associated to a low risk of thromboembolism and severe bleeding during the follow-up period.

Submitted by Silvana Teresinha Dornelles Studzinski (sstudzinski) on 2015-10-26T14:23:08Z No. of bitstreams: 1 Daniela Lopes Jardim.pdf: 816363 bytes, checksum: b7a8c78372004043d222796dbc02face (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T14:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniela Lopes Jardim.pdf: 816363 bytes, checksum: b7a8c78372004043d222796dbc02face (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / UNISINOS - Universidade do Vale do Rio dos Sinos / O tromboembolismo venoso é responsável por um grande número de complicações hospitalares, ocasionando aumento na média de permanência hospitalar dos pacientes. São duas as condições mais frequentes de tromboembolia venosa, a trombose venosa profunda e o tromboembolismo pulmonar, sendo esta a causa de morte evitável mais comum no paciente hospitalizado. OBJETIVO: Elaborar um protocolo assistencial de enfermagem para a prevenção de tromboembolismo venoso profundo em pacientes cirúrgicos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo exploratório de revisão sistemática, com busca em banco de dados da Cochrane, Medical Literature Analysis and Retrieval Sistem Online, Literatura Latino-Americana e do Caribe em Ciências da Saúde e da Scientific Electronic Library Online. Foram utilizados para a busca os descritores e MESH: Venous Thromboembolism, Risk Factores, Guideline, cirurgic patient, surgery, cardiologic surgery e vascular surgery. Para a sistematização das informações foi utilizado o método PICO (Paciente, Intervenção, Comparação e desfechos) e para a análise dos dados o sistema de classificação de Nível de Evidência do Oxford Center for Evidence Based Medicine e a Classificação do Grading of Recommendations Assessment, Development and Evaluation. RESULTADOS: Dos 9.727 artigos, foram selecionados 6.111 da Cochrane, 3.535 do MEDLINE, 55 LILACS e um artigo do Scielo. Após a leitura dos títulos e resumos, 123 artigos encontrados, sendo selecionados 27 artigos da Cochrane, 73 artigos do MEDLINE, um artigo do Scielo e 22 artigos do LILACS. Após aplicar os critérios de inclusão e exclusão, foram selecionados para o estudo 25 artigos. CONCLUSÃO: a construção deste protocolo assegurará qualidade e padronização da avaliação e procedimentos de enfermagem na sistematização do tromboembolismo venoso. Sua efetivação se dará após sua validação e implantação. / Venous thromboembolism is accountable for a large number of hospital complications, while implicating an increased average hospital stay of patients. There are two most common conditions of venous thromboembolism: deep vein thrombosis, and pulmonary embolism, being such thromboembolisms the most common cause of preventable death in hospital patients. PURPOSE: Prepare a clinical protocol of nursing for the prevention of deep venous thromboembolism in surgical patients. MATERIALS AND METHODS: Exploratory study of systematic review, with search in databases as Cochrane, Medical Literature Analysis and Retrieval Sistem Online, Literatura Latino-Americana e do Caribe em Ciências da Saúde e da Scientific Electronic Library Online. For the searching were used the MeSH descriptors Venous Thromboembolism, Risk Factors, Guideline, Surgical Patient, Surgery, Cardiac Surgery, and Vascular Surgery. For the systematization of the data was used the PICO-method (P-patient, I-intervention, C-comparation, O-outcomes), and, for the data analysis, the classification system of the Oxford Centre for Evidence-based Medicine/Levels of Evidence, and the Grading of Recommendations Assessment, Development and Evaluation. RESULTS: Among 9,727 articles, 6,111 were selected from Cochrane, 3,535 from MEDLINE, 55 from LILACS, and 1 from SciELO. After the reading of titles and summaries, 123 articles were taken into account, 27 being selected from Cochrane, 73 from MEDLINE, 1 from SciELO, and 22 from LILACS. Having applied the inclusion and exclusion criteria, 25 articles were selected for the study. CONCLUSION: The construction of this protocol will ensure quality and standardization of the assessment and nursing procedures in the systematization of venous thromboembolism. Its effectiveness will take place after its validation and implementation.

INTRODUÇÃO: A fibrilação atrial (FA) é a arritmia cardíaca mais comum e está associada a uma significativa morbidade e mortalidade. A sua prevalência aumenta marcadamente com a idade. A terapia com anticoagulantes orais tem sido a base de tratamento e prevenção de eventos tromboembólicos em pacientes com FA. Entretanto, a anticoagulação oral em idosos pode ser desafiadora devido à vários fatores, como alterações orgânicas funcionais, risco aumentado de sangramento e eventos isquêmicos, presença de comorbidades, polifarmácia e uma menor aderência ao tratamento. OBJETIVOS: Avaliar a frequência de tromboembolismo e complicações hemorrágicas em pacientes muito idosos (idade >= 85 anos) em uso de varfarina; avaliar tempo na faixa terapêutica (TTR), causas do INR fora da faixa, escores de CHADS2 e CHA2DS2 - VASc, comorbidades associadas e causas de mortalidade. METODOS: análise retrospectiva de pacientes que iniciaram o tratamento com varfarina com uma idade >= 85 anos, entre abril de 1999 e setembro de 2013, controlados em uma clínica de anticoagulação oral. RESULTADOS: foram incluídos 164 pacientes; 51% eram do sexo masculino e a idade média de início e fim do tratamento com varfarina foram de 86,8 e 89,7 anos, respectivamente. A indicação mais comum para o uso de ACo foi a fibrilação atrial (86%). O seguimento médio foi de 34,6 ± 23 meses. O CHADS2 e CHA2DS2 - VASc médio dos pacientes foi 2,78 e 4,7, respectivamente. O tempo na faixa terapêutica (TTR) foi de 58,6%. A polifarmácia esteve presente em 78% dos pacientes. De acordo com as estimativas de Kaplan-Meier, a probabilidade livre de TE e sangramento grave foi de 93,5% e 90,5% em três anos, respectivamente. Quando analisados esses dois desfechos combinados, a probabilidade livre de tromboembolismo e sangramento grave foi de 83,4% em três anos. CONCLUSÃO: nesse estudo, o uso de um antagonista da vitamina k (varfarina) em pacientes com idade >= 85 anos esteve associado a um baixo risco de tromboembolismo e sangramento grave durante o período de seguimento. / INTRODUCTION: Atrial fibrillation (AF) is the most common cardiac arrhythmia and is associated to a significant morbidity and mortality. Its prevalence strongly increases with aging. Therapy with oral anticoagulants (OAC) has been the basis of treatment and prevention of thromboembolic events in patients with AF. However, oral anticoagulation in the elderly can be challenging due to various factors such as the alteration of organic functions, greater risk of bleeding and ischemic events, presence of comorbidity, polypharmacy and a lower adherence to treatment. OBJECTIVES: Evaluate the frequency of thromboembolism and hemorrhagic complications in very elderly patients (aged >= 85 years) in use of warfarin; evaluate time in therapeutic range (TTR), causes of INR outside the range, scores of CHADS2 and CHA2DS2 - VASc, associated comorbidities and cause of death. METHODS: Retrospective analysis of patients who initiated treatment with warfarin at aged >=85 years, between April of 1999 and September of 2013, controlled in an oral anticoagulation clinic. RESULTS: A total of 164 patients were included in the study; 51% were males and the mean ages at the start and end of the treatment with warfarin were of 86,8 and 89,7 years, respectively. The most common indication for the use of OAC was atrial fibrillation (86%). The mean follow-up was of 34,6 ± 23 months. The mean CHADS2 and CHA2DS2 - VASc of patients was 2,78 and 4,7, respectively. The time in therapeutic range (TTR) was of 58,6%. Polypharmacy was present in 78% of patients. According to the Kaplan-Meier estimates, the survival curve of TE and severe bleeding was of 93,5% and 90,5% in three years, respectively. When these two combined outcomes are analyzed, the survival curve of thromboembolism and severe bleeding was of 83,4% in three years. CONCLUSION: In this study, the use of one vitamin K antagonist (warfarin) in patients aged >= 85 years was associated to a low risk of thromboembolism and severe bleeding during the follow-up period.

Introdução: A doença tromboembólica é um distúrbio complexo multicausal com sinais e sintomas inespecíficos, confundindo-se com outras enfermidades. Devido à sua gravidade buscam-se estratégias objetivando obter um diagnóstico precoce. O teste de dosagem do dímero - D plasmático parece ser uma alternativa para exclusão do diagnóstico de tromboembolismo venoso agudo. Objetivo: Avaliar o valor do teste de dosagem de dímero - D plasmático, utilizando o método Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA), na rotina diagnóstica de tromboembolismo venoso agudo. Métodos: Em 89 pacientes com sinais e sintomas sugestivos de tromboembolismo pulmonar e/ou trombose venosa profunda foram realizadas dosagens do dímero - D pela técnica ELFA no equipamento VIDAS® - BioMérieux. Foram calculados os valores da sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo e negativo e acurácia do teste, bem como a curva ROC da amostra estudada. Todos os pacientes foram submetidos a exame por imagem para confirmação do evento tromboembólico agudo. Foi calculado o índice kappa para analisar o resultado do teste dímero - D versus resultados de exames por imagem. Resultados: Entre os 89 pacientes estudados (média de idade 54,3 anos; 51 mulheres), 36 (40,4%) apresentaram TEV e 53 não apresentaram trombose aguda (59,6%). Entre os pacientes sem trombose aguda 15 (28,3%) apresentaram resultado de dímero - D negativo. Todos pacientes com trombose apresentaram resultado de dímero - D positivo. O teste apresentou sensibilidade de 100%; especificidade de 28,3%; valor preditivo positivo de 48,6%; valor preditivo negativo de 100% e exatidão de 57,3%. A ASC para a amostra total estudada foi igual a 0,734, indicando que o teste é um bom preditor de trombose aguda. O valor do índice kappa para a amostra total foi igual a 0,24 (p<0,001), indicando uma concordância fraca entre dímero - D e diagnóstico confirmatório de trombose. Conclusão: A dosagem do dímero - D pelo método ELFA foi capaz de excluir o diagnóstico de tromboembolismo venoso agudo nessa amostra estudada. Os resultados obtidos nessa amostra estudada permitiram concluir que o uso do teste dímero - D em pacientes com suspeita de tromboembolismo venoso revelou alta sensibilidade no diagnóstico dessa enfermidade. / Introduction: The thromboembolic disease is a multicausal complex disturb with signals and symptoms that confusing itself with other diseases. Because its gravity strategies search objecting to get a faster diagnosis. The measure plasmatic D dimer test seems to be an alternative for exclusion of the diagnostic of acute venous thromboembolism. Objectives: To evaluate the value of the measure plasmatic D dimer test, using the method Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA), in the diagnostic of acute venous thromboembolism. Methods: In 89 patients with signals and symptoms suggestive of pulmonary thromboembolism and/or deep vein thrombosis had been carried through measure D dimer by technique ELFA equipment VIDAS® - BioMérieux. The values of sensibility, accuracy specificity, predictive values positive and negative and of the test had been calculated, as well as curve ROC of the sample studied. All the patients had been submitted the image exams for the confirmation of the acute thromboembolism event. It was calculated kappa ratio to compare D dimer test results with image exams results. Results: Between 89 studied patients (mean of age 54.3 years; 51 women), 36 (40.4%) they had presented and 53 had not presented acute thrombosis (59.6%). It enters the patients without acute thromboembolism 15 (28.3%) had presented resulted negative of D dimer. All patients with thrombosis had presented resulted positive of D dimer. The test presented 100% sensibility; 28.3% of specificity; positive predictive value was 48.6%; 100% of negative predictive value and accuracy value was 57.3%. The area under the curve (AUC) to total sample studied was 0.734, it was showed that the test have a good prediction to acute thrombosis. The kappa ratio value was 0.24 (p<0.001) showing a bad concordat n to thrombosis diagnostic. Conclusion: The measure of D dimer by method ELFA was able to exclude the diagnostic of acute venous thromboembolism in this sample studied. The results obtained in this sample studied let to conclude that the D dimer test in patients with suspected of acute thromboembolism presented high sensibility to diagnostic of this disease.

Introdução: A doença tromboembólica é um distúrbio complexo multicausal com sinais e sintomas inespecíficos, confundindo-se com outras enfermidades. Devido à sua gravidade buscam-se estratégias objetivando obter um diagnóstico precoce. O teste de dosagem do dímero - D plasmático parece ser uma alternativa para exclusão do diagnóstico de tromboembolismo venoso agudo. Objetivo: Avaliar o valor do teste de dosagem de dímero - D plasmático, utilizando o método Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA), na rotina diagnóstica de tromboembolismo venoso agudo. Métodos: Em 89 pacientes com sinais e sintomas sugestivos de tromboembolismo pulmonar e/ou trombose venosa profunda foram realizadas dosagens do dímero - D pela técnica ELFA no equipamento VIDAS® - BioMérieux. Foram calculados os valores da sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo e negativo e acurácia do teste, bem como a curva ROC da amostra estudada. Todos os pacientes foram submetidos a exame por imagem para confirmação do evento tromboembólico agudo. Foi calculado o índice kappa para analisar o resultado do teste dímero - D versus resultados de exames por imagem. Resultados: Entre os 89 pacientes estudados (média de idade 54,3 anos; 51 mulheres), 36 (40,4%) apresentaram TEV e 53 não apresentaram trombose aguda (59,6%). Entre os pacientes sem trombose aguda 15 (28,3%) apresentaram resultado de dímero - D negativo. Todos pacientes com trombose apresentaram resultado de dímero - D positivo. O teste apresentou sensibilidade de 100%; especificidade de 28,3%; valor preditivo positivo de 48,6%; valor preditivo negativo de 100% e exatidão de 57,3%. A ASC para a amostra total estudada foi igual a 0,734, indicando que o teste é um bom preditor de trombose aguda. O valor do índice kappa para a amostra total foi igual a 0,24 (p<0,001), indicando uma concordância fraca entre dímero - D e diagnóstico confirmatório de trombose. Conclusão: A dosagem do dímero - D pelo método ELFA foi capaz de excluir o diagnóstico de tromboembolismo venoso agudo nessa amostra estudada. Os resultados obtidos nessa amostra estudada permitiram concluir que o uso do teste dímero - D em pacientes com suspeita de tromboembolismo venoso revelou alta sensibilidade no diagnóstico dessa enfermidade. / Introduction: The thromboembolic disease is a multicausal complex disturb with signals and symptoms that confusing itself with other diseases. Because its gravity strategies search objecting to get a faster diagnosis. The measure plasmatic D dimer test seems to be an alternative for exclusion of the diagnostic of acute venous thromboembolism. Objectives: To evaluate the value of the measure plasmatic D dimer test, using the method Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA), in the diagnostic of acute venous thromboembolism. Methods: In 89 patients with signals and symptoms suggestive of pulmonary thromboembolism and/or deep vein thrombosis had been carried through measure D dimer by technique ELFA equipment VIDAS® - BioMérieux. The values of sensibility, accuracy specificity, predictive values positive and negative and of the test had been calculated, as well as curve ROC of the sample studied. All the patients had been submitted the image exams for the confirmation of the acute thromboembolism event. It was calculated kappa ratio to compare D dimer test results with image exams results. Results: Between 89 studied patients (mean of age 54.3 years; 51 women), 36 (40.4%) they had presented and 53 had not presented acute thrombosis (59.6%). It enters the patients without acute thromboembolism 15 (28.3%) had presented resulted negative of D dimer. All patients with thrombosis had presented resulted positive of D dimer. The test presented 100% sensibility; 28.3% of specificity; positive predictive value was 48.6%; 100% of negative predictive value and accuracy value was 57.3%. The area under the curve (AUC) to total sample studied was 0.734, it was showed that the test have a good prediction to acute thrombosis. The kappa ratio value was 0.24 (p<0.001) showing a bad concordat n to thrombosis diagnostic. Conclusion: The measure of D dimer by method ELFA was able to exclude the diagnostic of acute venous thromboembolism in this sample studied. The results obtained in this sample studied let to conclude that the D dimer test in patients with suspected of acute thromboembolism presented high sensibility to diagnostic of this disease.