Considerando as limitações do diagnóstico convencional da tuberculose (TB) e o avanço das tecnologias de diagnóstico, nosso grupo desenvolveu o ensaio in house TaqMan-IS6110 para a detecção do DNA do complexo Mycobacterium tuberculosis. O objetivo deste estudo foi determinar a acurácia do Detect-TB e do ensaio TaqMan-IS6110 em comparação com os métodos de diagnóstico padrão ouro para a TB e o desfecho clínico. Um total de 216 amostras clínicas de escarro espontâneo de pacientes com suspeita de TB foram incluídas. A sensibilidade (SE) e especificidade (SP) do Detect-TB em comparação com a baciloscopia e/ou cultura (n= 109) foram de 89,4% e 70,4%. A SE e SP do Detect-TB em comparação com o desfecho clínico (n= 197) foram de 86,6% e 66,4%. A SE e SP do ensaio TaqMan-IS6110 em comparação com a baciloscopia e/ou cultura (n= 109) foram 92,1% e 62,0%. A SE e SP do ensaio TaqMan-IS6110 em comparação com o desfecho clínico (n= 197) foram de 93,3% e 55,5%. A concordância entre os testes foi demonstrada pelo índice Kappa de 0,56 (P < 0,001) (n= 197). O Detect-TB e o ensaio TaqMan-IS6110 apresentaram valores de SE consistentes e SP inferiores quando comparados com outros testes moleculares in house e kits comerciais. O ensaio TaqMan-IS6110 deve ser avaliado com um maior número amostral para poder ser validado e para, eventualmente, poder ser implementado comercialmente. / Considering the limitations of conventional tuberculosis (TB) diagnosis and the advancement of diagnostic technologies, our group developed an in house IS6110-TaqMan assay for the detection of Mycobacterium tuberculosis complex DNA. The aim of the study was to determine the accuracy of the commercial molecular diagnostic assay Detect-TB and the IS6110-TaqMan assay compared to the TB gold standard diagnostic methods and the clinical outcome. A total of 216 clinical specimens of spontaneous sputum from TB suspected patients were included. Detect-TB sensitivity (SE) and specificity (SP) compared with the smear microscopy and/or culture (n= 109) were 89.4% and 70.4%. Detect-TB SE and SP compared with the clinical outcome (n= 197) were 86.6% and 66.4%. IS6110-TaqMan assay SE and SP compared with the smear microscopy and/or culture (n= 109) were 92.1% and 62.0%. IS6110-TaqMan assay SE and SP compared with the clinical outcome (n= 197) were 93.3% and 55.5%. The concordance among the tests were demonstrated by the Kappa index of 0.56 (P < 0.001) (n= 197). IS6110-TaqMan assay and Detect-TB showed consistent SE and lower SP when compared with other current molecular in house and commercial kits. IS6110-TaqMan assay should be evaluated with a larger number of samples to be validated and may eventually be implemented commercially.

A enzima -cetoacil-PCA redutase catalisa a redução, dependente de NADPH, de - cetoacil-PCA, a segunda etapa do sistema tipo II de elongação de ácidos graxos em bactérias, plantas e organismos apicomplexos. No presente trabalho, utilizou-se acetoacetil- CoA como substrato para caracterizar cineticamente a reação catalisada pela enzima de Mycobacterium tuberculosis, o agente etiológico da tuberculose. O mecanismo cinético da reação foi investigado pela análise de padrões de velocidade inicial, inibição por produtos e efeitos isotópicos primários cinéticos, e os resultados apontam para um mecanismo aleatório em estado estacionário. Efeitos isotópicos cinéticos primários, a-secundários, de solvente e múltiplos, bem como estudos de pH e temperatura, ressonância magnética nuclear e variação dos efeitos isotópicos primários com o pH foram utilizados para determinar o mecanismo químico da reação, e a análise dos resultados sugere que as transferências de hidreto e próton e a re-hibridização dos substratos ocorrem de modo concertado. A interação entre NADPH e enzima foi estudada tanto em condições de equilíbrio quanto em estado pré-estacionário, monitorando-se o aumento na fluorescência do nucleotídeo ao ligar na proteína. Os dados coletados em equilíbrio sugerem a presença de cooperatividade homotrópica positiva entre as subunidades do dímero, e a análise dos dados cinéticos sugere duas formas de enzima livre em solução como base para a cooperatividade. Diálise em equilíbrio foi empregada para caracterizar a ligação de acetoacetil-CoA à enzima, e os resultados indicam que não há cooperatividade na ligação deste substrato. Mecanismos cinético, químico e cooperativo para a reação catalisada pela -cetoacil-PCA redutase de M. tuberculosis são propostos com base nos dados aqui apresentados. / The -ketoacyl-ACP reductase enzyme catalyzes the NADPH-dependent reduction of -ketoacyl-ACP, the second step of type II fatty acid elongation system of bacteria, plants, and apicomplexan organisms. In the present work, acetoacetyl-CoA was utilized as substrate to kinetically characterize the reaction catalyzed by the enzyme of Mycobacterium tuberculosis, the etiogical agent of tuberculosis. The reaction kinetic mechanism was investigated by analyzing initial velocity and product inhibition patterns, and primary kinetic isotope effects, and the results point to a random steady-state mechanism. Primary, a-secondary, solvent, and multiple kinetic isotope effects, as well as pH and temperature studies, nuclear magnetic resonance, and pH variation of primary isotope effects were utilized to determine the reaction chemical mechanism, and analysis of the results suggests that hydride and proton transfer and substrate re-hybridization occur in a concerted fashion. Interaction between NADPH and enzyme was studied both in equilibrium and pre-steadystate conditions, by monitoring the enhancement in nucleotide fluorescence upon its binding to the enzyme. Data collected at equilibrium suggest the presence of positive homotropic cooperativity between subunits of the dimer, and analysis of kinetic data suggests two forms of free enzyme in solution as the basis for cooperativity. Equilibrium dialysis was employed to characterize the binding of acetoacetyl-CoA to the enzyme, and the results indicate there is no cooperativity in the binding of this substrate. Kinetic, chemical, and cooperaive mechanisms for the M. tuberculosis -ketoacyl-ACP reductasecatalyzed reaction are proposed on the basis of the data presented here.

A tuberculose (TB) permanece como uma doença importante do ponto de vista da saúde pública. Devido ao aumento do número de casos, surgimento de cepas resistentes aos fármacos e a co-infecção pelo HIV, novas estratégias para combater a doença são urgentemente necessárias. Por isso a Organização Mundial da Saúde recomenda investimentos em novas tecnologias e estratégias que possam contribuir para o diagnóstico mais rápido, assim como a aplicação de ferramentas que permitam um melhor entendimento da epidemiologia da TB em diferentes populações. O spoligotyping é uma técnica desenvolvida para detecção e diferenciação simultânea de cepas do complexo Mycobacterium tuberculosis. A oportunidade de combinar informações diagnósticas rápidas e dados de epidemiologia molecular representa um avanço importante no controle da TB. Dados epidemiológicos, caracterização molecular a partir de amostras clínicas e geolocalização dos casos de TB, podem contribuir para o entendimento da distribuição da doença e auxiliar no desenvolvimento de estratégias mais específicas para conter sua disseminação. Para isso foi realizado um estudo prospectivo incluindo pacientes atendidos no ambulatório do Hospital Sanatório Partenon, de agosto de 2005 a abril de 2007. Foram incluídos 202 pacientes, 142 com TB e 60 sem a doença. Entre os pacientes com TB a média de idade foi mais baixa (36,96±12,17 vs 44,54±6,05), com maior frequência eram não-brancos, desempregados, sem renda, utilizavam drogas, tinham histórico de encarceramneto, eram desnutridos e tinham tido contato com paciente com TB, principalmete intradomiciliar e em prisões. Os pacientes não-brancos apresentaram maiores taxas de infecção por HIV e HCV. Alcoolismo estava associado ao abandono do tratamento. A técnica de spoligotyping apresentou um bom rendimento quando aplicada diretamente em amostras clínicas, uma vez que 89% das amostras apresentaram resultados concordantes. Entre os 135 isolados de pacientes genotipados, foram identificados 44 spoligotipos diferentes, sendo 112 isolados (83%) com padrões compartilhados e 23 (17%) com padrões únicos. A família LAM foi a mais frequente englobando 37% dos isolados. Através da geolocalização foi possível observar que há uma grande diversidade genética das cepas circulantes na região estudada, mas também alguns agrupamentos que devem ser melhor caracterizados. A estratégia proposta neste estudo, utilizar o spoligotyping diretamente em amostras clínicas, mostrou-se útil para encurtar o tempo de obtenção de informações sobre as identidades das cepas de M. tuberculosis. Pode ser utilizada em combinação com dados clínicos dos pacientes para gerar informações epidemiológicas muito mais rapidamente e auxiliar no combate à TB. / Tuberculosis (TB) remains as an important public helath issue. Because of the increase in the number of cases, emergence of drug resistant strains and HIV coinfection, new strategies to fight the disease are urgently needed. Thus, the World Health Organization recommends investiments on new approaches and technologies that can be used to fasten the diagnosis of TB, as well as the application of tools that allow a better understanding of the epidemiology of the disease in different populations. Spoligotyping is a technique which was developed for simultaneous detection and differentiation of Mycobacterium tuberculosis complex strains. The opportunity to combine rapid diagnostic information and molecular epidemiology represents an important advance in the epidemiologic control of TB. Epidemiologic data, molecular characterization from clinical samples and spatial localization of TB cases may be used for the understanding of disease distribution and can be useful for the development of more specific strategies to arrest its dissemination. Aiming at this, a prospective study was designed including patients assisted at the outpatient section of Hospital Sanatório Partenon from August 2005 to April 2007. It was included 202 patients from wich 142 had a positive diagnosis for TB and 60 had a negative diagnosis for the disease. Mean age was lower among patients diagnosed with TB (36.96±12.17 vs 44.54±6.05), they were more likely to be non-white, to be unemployed and not to have any income, to use drugs, to have incarceration history, to have malnutrition and have had contact with a patiente with TB, mainly in the household and in prisons. Non-white patients had higher rates of HIV and HCV co-infection. Alcohol abuse was associated to treatment nonadherence. Spoligotyping technique presented good results when applied directly to clinical samples, once 89% of samples presented agreeing results. Among 135 patients isolates genotyped, it was found 44 differnt spoligotypes, 112 (83%) were shared types and 23(17%) were unique. LAM family was the most frequent comprising 37% of all isolates. Spatial localization of cases demonstrated a high genetic diversity of strains circulating in the study area, but also pointed some clusters that should be better characterized. The strategy proposed in this study, applying spoligotyping directly to clinical samples, showed to be useful to shorten time in obtaining information on M. tuberculosis strains identities. It can be used in combination with clinical data of patients to yield epidemiologic inofrmation more rapidly and help to fight TB.

A ocorrência de tuberculose (TB) nas penitenciárias de muitos países tem sido descrita como um problema de saúde pública, especialmente naqueles em fase de desenvolvimento sócio-econômico. No Brasil, a dimensão do problema é pouco conhecida, entretanto a introdução, em 2007, da informação sobre a origem prisional do caso de TB na ficha de notificação do SINAN aumentou a visibilidade do problema e permitiu a primeira avaliação nacional. Em 2011, a população privada de liberdade representou 0,2% da população geral, porém contribuiu com 6,8% dos casos de tuberculose notificados. Somada à alta endemicidade, também é particularmente elevada a frequência de formas resistentes e multirresistentes, relacionadas ao tratamento irregular e à detecção tardia de casos de resistência. Este trabalho teve como objetivo realizar um inquérito entre a população privada de liberdade com sintomas respiratórios de tuberculose, a fim de estimar a incidência da doença, analisar o perfil de sensibilidade aos fármacos e o genótipo dos isolados de Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis), em uma penitenciária, na cidade de Charqueadas, Rio Grande do Sul. Foi aplicado um questionário de triagem entre os 1900 privados de liberdade da penitenciária, a fim de identificar os sintomáticos respiratórios (SR) que apresentavam tosse por mais de três semanas. Os SR identificados e que concordaram em participar do estudo, responderam a questionário epidemiológico, assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido e forneceram duas amostras de escarro em dias consecutivos para a realização dos exames de baciloscopia, cultura e teste de sensibilidade. Essas amostras também foram utilizadas para a extração do DNA e aplicação da técnica de spoligotyping. Com TB, foram identificados 72 pacientes (3,8%). Dezessete (23,6%) tiveram pelo menos um episódio de TB anterior, e neste caso, foram considerados como casos de retratamento. Assim sendo, a incidência de novos casos foi de 2,9% (55/1900 habitantes), o que corresponde a 3789 casos de tuberculose por 100.000 habitantes. Os testes de sensibilidade identificaram, entre os isolados testados, resistência de 15% a pelo menos uma droga, dos quais 89% eram resistentes apenas à isoniazida (INH) ou em combinação com outra droga. A classificação dos genótipos após a análise por spoligotyping mostrou que 40% dos isolados pertencem à família LAM; 22% à família T; 17,5% à família Haarlem, 12,5% à família U; 3% à família X. Os SITs mais frequentemente encontrados foram 729 (27%), 50 (9,5%), 42 (8%), 53 (8%) e 863 (8%). Já relatados em outros estudos, os SITs 729 e 863 podem ter relação com a situação de encarceramento. Além disso, pelo número elevado de genótipos agrupados, podemos concluir que a TB nesta população específica tenha sido causado principalmente, por linhagens que foram transmitidas nos últimos anos (transmissão recente). Além do mais, foi possível identificar grupamentos específicos não relatados na população em geral no mesmo período e na mesma região. / The occurrence of tuberculosis (TB) in prisons in many countries has been described as a public health problem, especially in those in the process of socio-economic development. In Brazil, the dimension of the problem is poorly understood, however by introducing, in 2007, the information about the origin of the prison TB case in the notification form from SINAN, increased the visibility to the issue and allowed the first national evaluation. In 2011, the prison population represented 0.2% of the general population, but contributed with 6.8% of reported cases of tuberculosis. Added to the high endemicity it is also especially high the frequency of multidrug resistant forms and related to the irregular treatment and late detection of cases of resistance. The objective of this work was to conduct a survey among prisoners with TB respiratory symptoms in order to estimate the incidence of the disease, to analyze the drug susceptibility profile and genotype the Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) isolates from a prison of Charqueada City, southern of Brazil. A screening questionnaire was applied to 1900 persons deprived of freedom, in order to identify patients with respiratory symptoms (RS) who had a cough for more than three weeks. The identified patients with RS who agreed to participate in the study answered an epidemiological questionnaire, signed a consent form and provided two sputum samples in consecutive days for the examinations of bacilloscopy, culture and sensitivity test. The samples were also used for DNA extraction spoligotyping analysis. Seventy-two patients (3.8%) were identified as TB positive. Seventeen (23.6%) had at least one episode of TB, and in this case, were considered for retreatment. Thus, the incidence of new cases was 2.9% (55/1900 inhabitants), which corresponds to 3789 cases of tuberculosis per 100,000 inhabitants. The sensitivity tests identified, among the isolates tested, 15% resistant to at least one drug, of which 89% were resistant only to isoniazid (INH) or in combination with another drug. The classification of genotypes after analysis by spoligotyping showed that 40% of the isolates belong to the family LAM, 22% from family T; 17.5% from family Haarlem, 12.5% from family U and 3% from family X. The SITs more frequently found were 729 (27%) 50 (9.5%), 42 (8%), 53 (8%) and 863 (8%). Has already reported in other studies, the SITs 729 and 863 may be related to the situation of incarceration. In addition, with the large number of genotypes grouped, we can conclude that this specific TB population was caused especially by strains that were transmitted in recent years (recent transmission). Furthermore, it was possible to identify specific clusters often not reported in the general population from the same period and the same region.

Tuberculose (TB) Multidroga resistente (MDR) é definida como a doença causada pelo Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis) com resistência ao menos a isoniazida (INH) e rifampicina (RMP), sendo um crescente problema de saúde pública em todo o mundo. A escolha do tratamento da tuberculose multiresistente (MDR-TB) deveria ser baseada em testes de suscetibilidade as drogas. Estes métodos são laboriosos e demorados, sendo comum ter que aguardar até mais de quatro semanas para obtenção do resultado. Por esta razão, a maioria dos pacientes é orientado a realizar o tratamento sem um teste de susceptibilidade. A detecção precoce do bacilo, bem como a detecção de sua resistência, é crucial para um tratamento adequado, evitando a propagação de cepas resistentes na comunidade. Os métodos baseados em biologia molecular, apesar de rápidos, costumam requerer o uso de equipamentos de alto custo, como o, sequenciador ou GeneXpert MTB/RIF o que inviabiliza a sua utilização na rotina dos laboratórios públicos no Brasil. Por estas razões, objetivamos padronizar uma metodologia de hibridização molecular em membranas (LINE-TB/MDR) capaz de detectar as mutações mais frequentemente relacionadas com resistência a RMP e a INH em isolados de M. tuberculosis, as duas principais drogas utilizadas no tratamento da doença. Sondas gênicas com estas mutações, localizadas nos genes katG, rpoB e inhA , foram fixadas em membrana de náilon para hibridizar com o produto de um PCR multiplex, permitindo a detecção rápida das mutações. O método foi validado em um painel de referência de 108 amostras devidamente caracterizadas pelo teste de suscetibilidade aos antimicrobianos (TSA) e sequenciamento gênico. Quando comparado com o TSA a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo (VPP) e valor preditivo negativo, para RMP foi 100% em todas as análises. Considerando a análise de resistência a INH, o teste obteve sensibilidade, especificidade, VPP e VPN de 77%, 100%, 100% e 82% respectivamente. Quando comparado com o sequenciamento a sensibilidade, especificidade, VPP e VPN para RMP foi de 100% para todas as análises. Para resistência a INH a sensibilidade especificidade PPV e NPV foi 94,3%, 100%, 100% e 94,8% respectivamente. O método desenvolvido poderá ser utilizado como uma alternativa para a identificação rápida de cepas multirresistentes, além de permitir a identificação do complexo M. tuberculosis. / Multidrug-resistant (MDR) tuberculosis (TB), defined as the disease caused by a Mycobacterium tuberculosis strain with resistance to at least isoniazid (INH) and rifampicin (RMP), is a growing public health and clinical problem worldwide. The choice of treatment of multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) is often based on drug susceptibility testing (DST). Drug susceptibility testing by conventional methods takes more than 4 weeks. An accurate and early detection of drug resistance in M. tuberculosis isolates is crucial for appropriate treatment, and to prevent the development of further resistance and the spread of resistant strains. Generally, DNA sequencing-based approaches are considered the reference assays for the detection of mutations, but often they have been found to be too cumbersome for routine use. For this reason, the aim of this study was to standardize a molecular hybridization method (LINE-TB/MDR) able to detect the most frequent mutations related to resistance to RMP and INH in M. tuberculosis isolates. Specific mutations found in the genes rpoB, katg and inhA have been reported as a marker for resistance to tuberculosis first line drugs. The assay was validated on a reference panel with 108 samples well-characterized by antimicrobial susceptibility testing (AST) and DNA sequencing. When compared to AST, the sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) of the LINE-TB/MDR, were 100% for all analyses. For INH resistance, the sensitivity, specificity, PPV and NPV were 77%, 100%, 100% and 82% respectively. When compared with sequencing, the sensitivity, specificity, PPV and NPV of the LINE-TB/MDR, for RMP resistance, were 100% for all analyses. For INH resistance the sensitivity, specificity, PPV and NPV were 94,3%, 100%, 100% and 94.8% respectively The developed assay could be used as an alternative for rapid identification of multi drug resistant (MDR) strains, and additionally, allowing the M. tuberculosis complex identification.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-06T11:29:09Z No. of bitstreams: 2 tese Yone-final-20-12-12.pdf: 714270 bytes, checksum: 2a36b003dfa84355204e28d809e01cff (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T11:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tese Yone-final-20-12-12.pdf: 714270 bytes, checksum: 2a36b003dfa84355204e28d809e01cff (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / A tuberculose pulmonar é um problema de saúde pública mundial e apresenta alta incidência no Brasil. Atualmente, o Brasil ocupa o 19º lugar no ranking dos 22 países que concentram 80% dos casos em todo o mundo. A resposta imune humana contra a tuberculose é especialmente mediada pelos linfócitos T CD4+. Entretanto, muitos estudos ainda são necessários para o entendimento exato do papel de cada citocina no mecanismo de cura da doença. A fim de caracterizar a produção das citocinas TNF-a, IFN-g, IL-10, o óxido nítrico (NO) e a expressão do marcador Foxp3, células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de contatos intradomiciliares de indivíduo com tuberculose pulmonar com (CTb) e sem (STb) história prévia de TB foram estimuladas in vitro com antígeno de Mycobacterium tuberculosis (AgTb) e com o mitógeno Concanavalina A por 24 e 48 horas. A dosagem das citocinas foi feita por ELISA de captura e de NO pela quantificação do nitrito (NO2 -). PCR em Tempo Real foi a técnica utilizada para detectar o mRNA para Foxp3. Em 24 horas de cultivo celular com antígeno total de M. tuberculosis (CTb = 10.158,38 ± 7.438,38; STb = 15.083,10 ± 9.292,66), observou-se uma produção significativa de TNF-a (0,05) no grupo STb. Os grupos analisados não apresentaram diferenças na expressão do mRNA do marcador Foxp3. Foi verificado aumento (p= 0,04) entre IL-10 e Foxp3 e correlação negativa (p = 0,009) entre NO (aumento) e Foxp3 (diminuição) após 48h de estímulo com AgTb. Observou-se também no grupo STb em 24 horas de culturas estimuladas com AgTb um resultado semelhante ao grupo CTb (p = 0,03). Portanto, os resultados obtidos sugerem que produção de IL-10, IFN-g e de NO indicam que os indivíduos CTb e STb produziram uma resposta celular específica; porém, sem valores que possam indicar uma maior ou menor susceptibilidade à doença, e que TNF-a, possivelmente funciona como um elemento fundamental para a manutenção do estado de saúde dos comunicantes. A expressão do marcador Foxp3 não está associada diretamente a uma maior predisposição nos indivíduos com história de tuberculose pulmonar.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-06T13:17:24Z No. of bitstreams: 2 versão digital DISSERTAÇÃO LIANY BARROS RIBEIRO.pdf: 876687 bytes, checksum: c28f039fa113b4f7870246ea4b20e689 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T13:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 versão digital DISSERTAÇÃO LIANY BARROS RIBEIRO.pdf: 876687 bytes, checksum: c28f039fa113b4f7870246ea4b20e689 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03-01 / Os dados sobre tuberculose multirresistente são escassos no grupo dos vinte e dois países responsáveis por 80% dos casos de tuberculose no mundo. No Brasil, há poucos dados consolidados sobre a prevalência de multirresistência. Esta pesquisa teve como principal objetivo verificar a resistência primária e adquirida à pirazinamida em isolados de Mycobacterium tuberculosis provenientes de amostras de escarro de pacientes com tuberculose pulmonar, assim como a sensibilidade às outras drogas de primeira linha antituberculose. O estudo foi prospectivo, descritivo, realizado no período de abril a novembro de 2011, em hospital de referência para tratamento de tuberculose no estado de Pernambuco. Utilizou-se formulário próprio da pesquisa. Cultura e testes de sensibilidade para micobactérias e o teste da produção da pirazinamidase foram realizados em laboratório particular de Recife. Para análise dos dados foram utilizadas distribuições absolutas e percentuais uni e bivariadas para as variáveis categóricas e foram utilizados os testes: t-Student com variâncias iguais e Qui-quadrado de Pearson ou o teste Exato de Fisher quando as condições para utilização do teste Qui-quadrado não foram verificadas. Dos 71 pacientes incluídos no estudo, todos (37) do grupo virgem de tratamento (VT) foram sensíveis a pirazinamida, 1/37 (2,7%) foi resistente à isoniazida e 1/37 (2,7%) foi resistente à estreptomicina. No grupo em retratamento (RT), 29/34 (85,3%) eram resistentes à isoniazida, 22/34 (64,7%) à rifampicina, 19/34 (55,9%) ao etambutol, 17/34 (50,0%) à estreptomicina, 14/34 (41,2%) à pirazinamida e 12/14 (85,7%) dos isolados resistentes à Z também apresentavam resistência à H e à R. Todos os isolados pertencentes ao grupo VT e susceptíveis à pirazinamida produziram pirazinamidase. Entre as cepas de M. tuberculosis recuperadas de pacientes do grupo RT, 10 (90,9%) que exibiram PZase inativa apresentaram resistência à Z. Por outra parte, 19 (82,6%) dos isolados PZase positivos eram sensíveis àquela droga. Os resultados do estudo sugerem que a elevada frequência de cepas resistentes à pirazinamida (41,2%) em pacientes com falha terapêutica para tratamento da tuberculose destaca a necessidade de realização de testes de sensibilidade à pirazinamida antes de se escolher novo esquema de resgate.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T15:09:37Z No. of bitstreams: 2 tese Yone-final-20-12-12.pdf: 714270 bytes, checksum: 2a36b003dfa84355204e28d809e01cff (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T15:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tese Yone-final-20-12-12.pdf: 714270 bytes, checksum: 2a36b003dfa84355204e28d809e01cff (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / A tuberculose pulmonar é um problema de saúde pública mundial e apresenta alta incidência no Brasil. Atualmente, o Brasil ocupa o 19º lugar no ranking dos 22 países que concentram 80% dos casos em todo o mundo. A resposta imune humana contra a tuberculose é especialmente mediada pelos linfócitos T CD4+. Entretanto, muitos estudos ainda são necessários para o entendimento exato do papel de cada citocina no mecanismo de cura da doença. A fim de caracterizar a produção das citocinas TNF-a, IFN-g, IL-10, o óxido nítrico (NO) e a expressão do marcador Foxp3, células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de contatos intradomiciliares de indivíduo com tuberculose pulmonar com (CTb) e sem (STb) história prévia de TB foram estimuladas in vitro com antígeno de Mycobacterium tuberculosis (AgTb) e com o mitógeno Concanavalina A por 24 e 48 horas. A dosagem das citocinas foi feita por ELISA de captura e de NO pela quantificação do nitrito (NO2 -). PCR em Tempo Real foi a técnica utilizada para detectar o mRNA para Foxp3. Em 24 horas de cultivo celular com antígeno total de M. tuberculosis (CTb = 10.158,38 ± 7.438,38; STb = 15.083,10 ± 9.292,66), observou-se uma produção significativa de TNF-a (0,05) no grupo STb. Os grupos analisados não apresentaram diferenças na expressão do mRNA do marcador Foxp3. Foi verificado aumento (p= 0,04) entre IL-10 e Foxp3 e correlação negativa (p = 0,009) entre NO (aumento) e Foxp3 (diminuição) após 48h de estímulo com AgTb. Observou-se também no grupo STb em 24 horas de culturas estimuladas com AgTb um resultado semelhante ao grupo CTb (p = 0,03). Portanto, os resultados obtidos sugerem que produção de IL-10, IFN-g e de NO indicam que os indivíduos CTb e STb produziram uma resposta celular específica; porém, sem valores que possam indicar uma maior ou menor susceptibilidade à doença, e que TNF-a, possivelmente funciona como um elemento fundamental para a manutenção do estado de saúde dos comunicantes. A expressão do marcador Foxp3 não está associada diretamente a uma maior predisposição nos indivíduos com história de tuberculose pulmonar.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-13T20:08:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Simone Santos Bezerra.pdf: 2618023 bytes, checksum: 62a61de1a0326ac957e37d062f2f4c21 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-19T18:42:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Simone Santos Bezerra.pdf: 2618023 bytes, checksum: 62a61de1a0326ac957e37d062f2f4c21 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-19T18:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Simone Santos Bezerra.pdf: 2618023 bytes, checksum: 62a61de1a0326ac957e37d062f2f4c21 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / No Brasil, a tuberculose (TB) é um grave problema de saúde pública, com profundas raízes sociais. O presente estudo objetivou propor ações consensuais de melhoria da qualidade para o Programa Controle da Tuberculose em Pernambuco (PECT), com base em avaliação de indicadores. A população pesquisada consistiu de pacientes em tratamento ambulatorial de tuberculose, atendidos nos três níveis de complexidade da rede SUS em Recife, além de profissionais envolvidos com pacientes do programa e gestores locais. A metodologia proposta consistiu de três etapas, denominadas A, B e C. A amostragem foi diferente para cada etapa. A Etapa A consistiu de: avaliação do perfil socioeconômico dos pacientes e levantamento de dados clínicos, com base em dados do SINAN (Sistema Nacional de Agravos de Notificação); obtenção de perfis de cura e abandono através relatórios dos sistemas de gerenciamento estoque das farmácias; avaliação das ações desenvolvidas no PECT por pacientes, profissionais de saúde e gestores locais, através de entrevistas e questionários. A etapa B consistiu em apresentação dos resultados da etapa “A” e realização de avaliação de indicadores em uma oficina com gestores e profissionais da assistência. A etapa C consistiu em propostas de ações de melhoria para o PECT, por especialistas locais em tuberculose, com base na avaliação de indicadores da etapa “B”, seguida de validação destas propostas, através do método Delphi. Com respeito ao perfil dos pacientes, a maioria dos era do sexo masculino (70%), com idade entre 20 e 49 anos (60,5%) e baixo nível de escolaridade (46%). A apresentação clínica mais comum foi a TB pulmonar. A maioria das entradas no SINAN foi de casos novos. Taxas observadas para recorrência e retorno após abandono foram respectivamente 5,9% e 10,9%. Com relação ao teste de HIV, 37,27% dos pacientes eram soronegativos e 33,3% não tinha realizado o teste. Com relação ao perfil de cura/alta e abandono, os valores percentuais obtidos foram inferiores às metas preconizadas pelo Ministério da Saúde. As ações do PECT foram consideradas insatisfatórias por aproximadamente 75% dos pacientes entrevistados. Nos questionários a profissionais obtiveram-se pontuações inferiores a 60% para todas as categorias avaliadas, tendo-se estabelecido como favoráveis pontuações finais iguais ou superiores a 50%. Como resultado do painel Delphi, oitenta e nove ações de melhoria foram propostas para o PECT, com um alto grau de consenso. Dez das ações consensuais atingiram simultaneamente a pontuação mais alta para relevância e viabilidade, por exemplo: "Conduzir treinamento para profissionais de saúde visando oferecer informações sobre TB e seu tratamento aos pacientes, durante visitas domiciliares e busca ativa de sintomáticos respiratórios" e "implementar educação em grupo sobre TB e seu tratamento por equipes multidisciplinares, para os membros da comunidade em geral". Os resultados reforçam que o funcionamento do PECT necessita de mais atenção por parte dos gestores da vigilância epidemiológica e da atenção básica. As propostas obtidas no painel Delphi certamente contribuirão para melhorar a qualidade de atendimento aos pacientes, uma vez aprovadas por formuladores de políticas locais e gerentes do programa e bem conduzidas pela equipe assistencial. / In Brazil, tuberculosis (TB) is a serious public health problem with deep social roots. This study aimed to propose consensual actions to improve the quality of Tuberculosis Control Program in Pernambuco (PECT), based on indicators evaluation. The surveyed population consisted of patients in outpatient treatment of tuberculosis, attending the three levels of complexity of SUS network in Recife, as well as doctors, nurses and pharmacists involved with such patients, as well as local managers. The methodology consisted of three stages, named A, B and C. Sampling was different for each stage. Stage A consisted of: evaluation of socioeconomic profile of patients and collection of clinical data with the epidemiological surveillance team of the sites studied, based on reports of the SINAN (National System of Notifiable Diseases); obtaining cure and abandonment profiles of patients through reports of stock management systems of pharmacies; evaluating actions developed in the PECT by patients, health professionals and local managers, through interviews and questionnaires. Stage B consisted of presenting the data obtained in stage A and proceeding an indicators evaluation in a workshop with health professionals and managers of PECT. Stage C consisted of proposing improvement actions for PECT, based on previous evaluation of indicators (in stage B), and validating such proposals through the Delphi consensus technique (Delphi Panel). Regarding the profile of the patients, most were male (70%), aged between 20 and 49 years (60.5%) and low educational level (46%). The most common clinical presentation was pulmonary TB. Most entries in the SINAN were new cases. Rates observed for recurrence and return after leaving were respectively 5.9% and 10.9%. Regarding the HIV test, 37.27% of patients were seronegative and about 33.3% had not performed the test. Regarding the profile of cure and abandonment, the mean percentage values obtained were lower than the national targets recommended by the Ministry of Health. The actions of the program (PECT) were considered unsatisfactory by approximately 75% of the patients interviewed (evaluations with a final score equal to or greater than 50% were established as satisfactory). In the questionnaires to professionals, scores were lower than 60% for the four categories evaluated. As a result of the indicators evaluation and Delphi panel, eighty-nine improvement actions have been proposed for PECT with a high degree of consensus. Ten of such consensual actions simultaneously reached the highest score for relevance and viability, for example the actions: "Conduct training for health professionals to provide information about TB and its treatment to patients during home visits and active search for respiratory symptomatics" and "implement group education on TB and its treatment by multidisciplinary teams, for members of the community in general.” The results reinforce that the operation of PECT needs more attention from epidemiological surveillance and primary care managers. Improvement actions validated in Delphi panel will certainly contribute to improving the quality of patient care, once approved by local policy makers and program managers and well conducted by the health assistance team.

Orientador: Djalma de Carvalho Moreira Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T12:47:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_HeleniceBoscode_D.pdf: 7178627 bytes, checksum: a62f23ae93ce1161dabc50fe2debb48a (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Foram estudados os indivíduos reingressantes no Sistema de Notificação da Tuberculose, seja por abandono anterior ou recidiva da doença, para a cidade de Campinas-SP, nos anos de 1993 e 1994. Após validação das fichas epidemiológicas dos reingressantes, foi realizado estudo descritivo das características pessoais, de tratamentos prévios e retratamento, em 108 pacientes na categoria de abandonos anteriores e 88 na de recidivas. Estes grupos de pacientes têm se acuTm11ado nas Unidades de Saúde, trazendo sérias dificuldades aos doentes e aos serviços, devido a reingressos repetidos, falências e recidivas ao esquema de cmta duração, propiciando o aparecimento de resistências aos quimioterápicos. Foram também identificados fatores de risco individuais, sociais e institucionais para recidivas em tuberculose, utilizando-se um delineamento tjpo caso-contro1e para variáveis independentes, relacionadas ao paciente, aos medicamentos e aos serviços de saúde. Foram entrevistados 56 recidivas e 105 controles; a recidiva foi definida como novo episódio, após tratamento anterior concluído com sucesso e o controle, indivíduos que tiveram a tuberculose pu1monar curada e não recidivaram. Na análise, utilizou-se modelos de regressão com o objetivo de controlar a ação de variáveis confundidoras ou modificadoras de efeito ~bre as associações de interesse. o estudo caso-contro1e evidenciou como fatores de risco para recidivas:'. os relIlciolUldos flQS medicllmentos (através das reações coJaterais), os relIlcionados à organizaçiúJ dos serviços (tratamentos com dosagens inferiores à preconizada e às falhas no ageMamento dos pacientes) e os fatores Ugados flQ paciente (idade e estresse por evento de vida). O fato do paciente ser informado sobre o tempo de duração do tratamento, protegeu-o da recidiva. O reconhecimento destes fatores deve resultar em acompanhamento mais intensivo e observação mais direta daqueles pacientes que, já no diagnóstico, apresentarem possibilidade de, no futuro, desenvolverem novo episódio de tuberculose.Por outro lado, a seqüência do tratamento dos pacientes com reingresso em 1993 e 1994 por abandono anterior, mostrou reiteração do índice de abandono; foi menor, mas ainda muito elevado, na categoria das recidivas. Esforços devem ser dirigidos para melhorar a eficiência das unidades de atendimento ao tuberculoso, pois várias inadequações foram decorrentes de "falência" da rotina dos serviços de saúde / Abstract: Recurrences to Notification System of Tuberculosis due to patients who had dropped out from treatment or relapsed cases, were studied for Carnpinas-SP, in 1993 and 1994. Mter validation of recurrence files, a descriptive study of personal characteristics, from previous treatment and retreatment, from 108 defaulters and 88 relapses was made. These patients have been congesting Health Centers, causing difficulties to treatment routines to patients and services, due to repeated recurrences both by failures and relapses to short course regimen, favoring drug resistance. Individual and institutional risk factors for relapse were also identified, using a case-control study for independent variables related to patient, antituberculous drugs and health services; 56 cases and 105 controls were interviewed and relapse was defined as a new episode after one has be'en treated with success in the pasto Controls were taken arnongst people treated and cured of pulmonary forms of tuberculosis. Regression models for analysis were proposed, to control the action of confounding or effects modifiers over the studied relationships. This case-control study had showed as risk factors for relapsing: those re/ated to antitubercu/ous drugs (eg. adverse reactions); those related to services organization (eg.insufficient dos age, insufficient arnount) and those patient re/atedfactors (eg. age ,and stress from life events). Recognition of these factors should result in a more intensive follow-up and direct supervision of patients who showing high probability to developing a new episode in . the future, at the time of diagnosis. On the other hand, treatment sequence of recurrences showed the reiteration of default in patients previosly in this category, being smaller, but still high arnong relapses. Efforts should be directed to improving tuberculosis services efficiency because, many inadequacies carne from "failure" of health services routine / Doutorado / Saude Coletiva / Doutor em Medicina