Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-10T20:41:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lidiane Vasconcelos do Nascimento Carvalho.pdf: 2054421 bytes, checksum: b5dd34d7bb0e55942b8e39b404d70b3c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-10T20:41:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Lidiane Vasconcelos do Nascimento Carvalho.pdf: 2054421 bytes, checksum: b5dd34d7bb0e55942b8e39b404d70b3c (MD5) Previous issue date: 2016-08-12 / FACEPE / O câncer é uma doença que representa um grave problema de saúde pública em todas as nações do mundo, sua incidência tem aumentado devido à crescente exposição da população a fatores de risco e ao aumento da expectativa de vida. A quimioterapia é a modalidade de tratamento mais empregada, pois possui a vantagem de atuar de forma sistêmica. No entanto, sabe-se que a grande maioria dos agentes quimioterápicos não age exclusivamente em células tumorais, podendo levar a diferentes graus de toxicidade em células normais. Ademais, células neoplásicas adquirem a capacidade de se tornarem resistentes a vários quimioterápicos diminuindo a eficácia do tratamento, a qualidade de vida e a perspectiva de cura dos pacientes. Nesse sentido, a presente proposta teve como finalidade a elucidação do mecanismo de ação de um novo agente antineoplásico por meio da análise proteômica na linhagem leucêmica resistente, HL60/MX1. As oxazolidinas e seus derivados já possuem diversas atividades descritas na literatura entre elas potencial ação antineoplásica. No estudo foi utilizado o derivado oxazolidinico LPSF-NB-3 que em um estudo anterior do grupo apresentou ação na referida linhagem. Inicialmente buscou-se confirmar a toxicidade do novo derivado em células saudáveis e na linhagem resistente. LPSF-NB-3 não foi tóxico em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) na maior dose testada (100 μM) e apresentou valor de IC₅₀ de 56,33 μM na linhagem HL60/MX1. Diante dos resultados, foi realizada cultura celular para elucidação do mecanismo de ação pela análise proteômica. Após 48 horas de tratamento, foi realizada a extração de proteínas com tampão de lise celular e inibidor de proteases e a amostra foi submetida à abordagem proteômica gel free e label free utilizando cromatografia bidimensional acoplada à espectrometria de massas (nanoUPLC). Após o processamento dos dados brutos utilizando o programa Protein Lynks Global Sever, foi possível identificar um total de 2.650 proteínas. Em nossa análise somente foram consideradas as proteínas identificadas em todas as replicatas experimentais, bem como as que apresentaram modulação de mais que duas vezes. Com isso, após utilizarmos este filtro, 634 proteínas, de fato, foram analisadas com a ferramenta Expression ᴱ. Dentro do universo de proteínas consideradas para a análise quantitativa com os critérios estabelecidos, 262 estavam diferencialmente expressas, sendo 146 com expressão aumentada e 116 com expressão diminuída na amostra tratada com o derivado quando comparadas com o controle. As proteínas identificadas foram analisadas no programa MetaCore™ para que as principais funções e vias de sinalização alteradas pudessem ser identificadas. Dentre os principais processos biológicos diferencialmente expressos, destacam-se processos envolvendo regulação do citoesqueleto, dano ao DNA, transdução de sinais celulares e processos envolvendo crescimento celular e sua manutenção. Duas vias moduladas receberam destaque em nossa análise, são elas: a via de sinalização AKT e vias do sistema imune. Essa última pôde ser validada pela técnica de ELISA que evidenciou a capacidade do derivado em diminuir a expressão de IFN- γ de forma significativa (p <0.01) nas doses de 50 e 100 μM e de outras citocinas inflamatórias importantes no contexto tumoral, indicando assim seu provável mecanismo de ação. / Cancer represents a serious public health problem in every nation of the world. Its incidence has increased due growing population exposure to risk factors and life expectancy. Chemotherapy is more used as treatment because it acts systemically. However, it is known that most chemotherapeutic agents don‘t kill only tumor cells, leading to different degrees of normal cells toxicity. In addition, neoplastic cells can become resistant to chemotherapy reducing treatment success, quality of life and chance of cure. Therefore, this proposal aimed to elucidate the mechanism of action of a new antineoplastic agent in resistant leukemic strain (HL60 / MX1) by proteomic analysis. Oxazolidines and their derivatives have several activities described on literature including antineoplastic potential. LPSF-NB-3 is an oxazolidine derivative that presented antineoplastic activity on HL-60 / MX1 cells in an earlier study. Initially we aimed to confirm toxicity in healthy cells and in this resistant strain. LPSF-NB-3 was non-toxic in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) at the highest tested dose (100 μM) and presented IC50 value of 56.33 μM in HL60 / MX1 strain. Cell culture was performed to elucidate the mechanism of action by proteomic analysis. After 48 hours of treatment, a protein extraction with cellular lysis buffer and protease inhibitor was performed and sample was applied to proteomic approach gel free and label free using two-dimensional chromatography coupled to mass spectrometry (nanoUPLC). Protein Lynks Global Sever program processed data and identified 2,650 proteins. In this analysis were only considered proteins identified in all experimental replicates, such as those modulated more than two times. After using this filter, 634 proteins were analyzed by Expression E tool. Within the universe of proteins considered by quantitative analysis with the established criteria, 262 were differentially expressed, being 146 increased and 116 decreased in the sample treated with the derivative when compared to control. The identified proteins were analyzed by MetaCore™ to identify changes in main functions and signaling pathways. Among the biological processes differentially expressed are those involving cytoskeletal regulation, DNA damage, cell signal transduction and cell growth and its maintenance. Two modulated pathways were highlighted in our analysis: an AKT signaling pathway and immune system pathways. The last one was validated by ELISA showing derivative capacity to reduce important inflammatory cytokines in tumor context IFN-g decreasing was statistically significant (P <0.01) at 50 and 100 μM doses] indicating its probable mechanism of action.

Avui en dia, els clínics no disposen de cap marcador tumoral eficaç per a realitzar el seguiment de pacients amb càncers de cap i coll (CCC). Objectius: Analitzar les característiques operatives de la prealbúmina (PRB) com a marcador d’activitat tumoral a pacients amb CCC en comparació amb altres marcadors utilitzats habitualment a pràctica clínica. Métodes: Es va dissenyar un estudi observacional prospectiu amb pacients atesos a l’ Hospital Universitari Arnau de Vilanova de Lleida amb diagnòstic principal de CCC. Durant el temps a estudi es varen recollir les principals característiques demogràfiques, clíniques i analítiques (inclosa la PRB) dels malalts a 3 fases diferents: al diagnòstic de la malaltia, al finalitzar el tractament i 12 mesos després. Resultats: Es van realitzar 174 determinacions de 138 pacients des de l’1 de gener del 2007 fins l’1 de febrer del 2010, l’edat mitja fou de 62,48(29-89) anys i 121 (88%) eren homes. Els diagnòstics histològics foren majoritàriament carcinomes escamosos 87 (63%).La mortalitat acumulada fou de 14,5% durant el període de seguiment. La sensibilitat, especificitat, així com els valors predictius positiu i negatiu foren 63,2%, 100%, 87% y 100% respectivament per a identificar activitat tumoral. Es va obtenir un àrea sota la curva ROC per a la PRB de 0,82 (interval de confiança de 0,74 a 0,90) que va ser superior a altres variables analitzades. Conclusions: La PRB és eficaç per a identificar activitat tumoral a pacients amb CCC i podria constituir una eina útil per a el clínic al seguiment de dits pacients. / Actualmente los clínicos no disponen de un marcador tumoral eficaz para realizar el seguimento de pacientes con cáncer de cabeza y cuello (CCC). Objetivos: Analizar las características operativas de la prealbúmina(PRB) como marcador de actividad tumoral en pacientes con CCC en comparación con otros marcadores habitualmente utilizados en la práctica clínica. Métodos: Se diseñó un estudio observacional prospectivo en pacientes atendidos en el Hospital Universitario Arnau de Vilanova de Lleida con diagnóstico principal de CCC. Durante el tiempo en estudio se recogieron las principales características demográficas, clínicas y analíticas (incluida la PRB) de los enfermos en 3 fases diferentes: al diagnóstico de la enfermedad, al finalizar el tratamiento y 12 meses después. Resultados. Se realizaron 174 determinaciones en 138 pacientes con CCC desde el 1 de enero del 2007 hasta el 1 de febrero del 2010. La edad media fue de 62,4 (29-89) años y 121 (88%) eran varones. El tipo histológico más frecuente fue el carcinoma escamoso (63%). La mortalidad acumulada fue del 14,5%. La sensibilidad, especificidad así como los valores predictivos positivo y negativo de la PRB para identificar actividad tumoral fue del 63,2%, 100%, 87% y 100%, respectivamente. Se obtuvo un área bajo la curva ROC para la PRB de 0,82 (IC 95%, 0,74 - 0,90), que fue superior a otras variables analizadas. Conclusiones: PRB es eficaz para identificar actividad tumoral en pacientes con CCC y podría constituir una herramienta útil para el clínico en el seguimiento de éstos enfermos. / Nowadays clinicians don’t have a useful tumoral marker to perform the follow up of patients affected of head and neck cancers (H&NC). Objectives: To Analize the operative characteristics of prealbumin (PRB) as a tumoral activity marker in those affected of head and neck cancer compared to other tumoral markers with common use in clinical practice. Methods: It was performed an observational prospective study with patiens visited in Hospital Universitari Arnau de Vilanova de Lleida with the main diagnosis of H&NC. During study time main epidemiological, clinical and analytical (including PRB) characteristics were collected in 3 times: at diagnosis, after finishing the treatment and 12 months later. Results: 174 blood samples were obertained from 138 patients from the 1st January 2007 till the 1st February 2010. Mean age was 62,48 (29-89) years and 121 (88%) were males. Most frequent histological diagnosis was scamous carcinoma 87 cases (63%). 19 patients (14,5) died during that time. Sensitivity, Specificity, positive and negative predictive values were 63,2%, 100%, 100%, 87% respectively. The area under the curve ROC was 0,82 (CI 0,74-0,90), that was better than other parameters studied. Conclussions: Prealbumin is a useful tumoral activity marker in those affected of head and neck cancer and It could be a useful tool in these patients follow up

MILHOME, Marcus Vinicius Liberato. Interação da frutalina com neoplasias de tireóide. Estudo comparativo com marcadores tumorais em uso. 2008. 112 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2008. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T17:58:10Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_mvlmilhome.pdf: 9609801 bytes, checksum: c941b15b38e13278f721f7bd633a3802 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-26T20:27:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_mvlmilhome.pdf: 9609801 bytes, checksum: c941b15b38e13278f721f7bd633a3802 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T20:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_mvlmilhome.pdf: 9609801 bytes, checksum: c941b15b38e13278f721f7bd633a3802 (MD5) Previous issue date: 2008 / Increased interest has been devoted to cell surface carbohydrates, since they are related to cell differentiation and maturation. Cell transformation in malignant tumors is associated to altered surface membranes, particularly with an abnormal composition of glycoconjugates, determining characteristics of neoplastic cells as invasive behavior and metastasis. Lectins, proteins widely distributed in the plant and animal kingdom, have the distinctive property of binding to carbohydrates of specific structure and configuration. Lectins have been used as tools in many areas of diagnostic investigation especially related to changes in the expression of membrane and cytoplasmatic carbohydrates. The aim of this work was to compare the binding pattern of the biotinilated frutalin, Artocarpus incisa α-galatose binding lectin (FTL-B), with the markers usually available (CK19, HBME-1, GAL3) and the new papillary thyroid carcinoma marker 373-E1 in various thyroid lesions and normal thyroid tissue. FTL-B was obtained by affinity chromatography and biotinilated. CK19, GAL3 and HBME-1 were obtained from Novocastra Laboratories, Ltd., UK and 373-E1 from Labvision, UK. Formalin-fixed, paraffin-embedded thyroid tissues were used to build tissue macro-arrays that were cut at 2 µm and stained using FTL-B, CK19, GAL3, HBME-1 and 373-E1 by strepABC-HRP method. The cases included papillary carcinoma (90), follicular carcinoma (6), Hürthle cell carcinoma (2), anaplastic carcinoma (4), nodal metastasis of papillary carcinoma (6), Hürthle cell adenoma (2), follicular adenoma (3), goiter (4) and Hashimoto’s thyroiditis (3). There was no staining on benign thyroid lesions or normal thyroid tissue using FTL-B or the usual markers. Papillary carcinoma and metastasis from papillary carcinoma showed strong membranar stain using FTL-B. FTL-B and the usual markers showed similar binding pattern suggesting that FTL-B could be used as a thyroid tumoral marker similar to GAL3, CK19, HBME-1 and 373-E1. / O interesse nos carboidratos de superfície celular tem aumentado devido ao fato de estarem relacionados a diferenciação e maturação celular. A transformação celular em neoplasias malignas está associado a alterações na superfície de membranas celulares, particularmente na composição dos glicoconjugados, determinando sua capacidade em relação a invasividade e potencial metastático. Lectinas, proteinas amplamente distribuidas nos reinos animal e vegetal, tem a capacidade de ligarem-se a carboidratos de estrutura e configuração específicas. Tem sido utilizadas como ferramentas em muitas áreas de investigação diagnóstica especialmente naquelas relacionadas a mudanças na expressão de carboidratos no citoplasma e na membrana celulares. O objetivo deste trabalho foi comparar o padrão de ligação da frutalina, lectina α-galactose ligante de Artocarpus incisa, biotinilada (FTL-B) com os marcadores usuais (CK19, GAL3, HBME-1) e o novo marcador para carcinomas papilares da tireóide, 373-E1, em várias lesões malignas e benignas da tireóide e em tecido tireoidiano normal. FTL-B foi obtida por cromatografia de afinidade e biotinilada. CK19, GAL3 e HBME-1 foram obtidos de Novocastra Laboratories, Ltd., UK e 373-E1 de Labvision, UK. Lesões tireoidianas e tecido tireoidiano normal em parafina foram utilizados para a construção de tissue micro-arrays os quais foram cortados a 2 µm e marcados com CK19, GAL3, HBME-1 e 373-E1 pelo método imuno-histoquímico da estreptoavidina-biotina-peroxidase e com FTL-B por método lectino-histoquímico. As lesões incluíam carcinomas papilares (90 casos), carcinomas foliculares (6 casos), carcinoma de células de Hürthle (2 casos), carcinoma anaplásico (4 casos), metástases linfonodais de carcinomas papilares (6 casos), adenoma de células de Hürthle (2 casos), adenomas foliculares (3 casos), bócio (4 casos) e tireoidite de Hashimoto (3 casos). Não houve marcação em tecido tireoidiano normal ou nas lesões benignas usando FTL-B ou os marcadores usuais. Carcinomas papilares e metástases de carcinomas papilares marcaram fortemente a membrana celular com FTL-B. Os marcadores usuais e FTL-B mostraram padrões de marcação semelhantes, sugerindo que FTL-B poderia ser usada como um marcador tumoral da mesma forma que CK19, GAL3, HBME-1 e 373-E1.

FIGUEIREDO, Aline Almeida. Efeito do anticorpo anti-TNF-α, infliximabe, sobre a mucosite intestinal experimental induzida por irinotecano. 2011. 78 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-17T15:11:23Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-17T15:11:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-17T15:11:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) Previous issue date: 2011 / Introduction: Intestinal mucositis (IM) is a common limiting side effect of anticancer therapy with irinotecan. Previous studies have reported the involvement of cytokines, such as TNF-α, IL-1β e IL-18 in the pathogenesis of irinotecan-induced IM, besides demonstrating that nonselective inhibitors of cytokines such as pentoxifylline, attenuate chemotherapy-induced IM. The role of cytokines is well established in the context of inflammatory bowel disease. It is used in clinical practice treatments that target inflammatory cascade components, for example, the anti-TNF monoclonal antibody, infliximab, which has a beneficial effect in the treatment of Crohn’s disease, rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis. There is a lack of information regarding the effect of selective cytokine target therapy on anticancer drug toxicity. Aims: To investigate the protective role of a selective TNF-α inhibitor, infliximab, on irinotecan-induced IM. Methods: C57BL6 mice were divided into groups (n=5-9) and treated for 4 days with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan (75 mg/kg/4 days, i.p) or were given infliximabe (5 mg/kg, e.v, single dose) 1 hour before the first irinotecan injection. Body weight and mortality were assessed daily. On the 5th day the diarrhea was evaluated using scores and the blood was collected for white blood cell count (WBC). After euthanasia, samples of duodenum was collected for myeloperoxydase assay, tissue IL-1β dosage, western blot (WB) of the inducible nitric oxide synthase, morphometric analysis and in vitro evaluation of duodenal contractility. Results: Irinotecan induced IM demonstrated by the significant (p<0,05) increase in diarrhea, decrease in length and area of the villi increased MPO activity, increased IL-1β dosage and expression of iNOS and intestinal smooth muscle over-contractility when compared with saline treated group. The group treated with irinotecan also presented leucopenia, when compared with control group. The group treated with infliximab previously to irinotecan showed a significant improvement of inflammatory parameters (MPO activity, IL-1β, expression of iNOS), when compared withn irinotecan-treated group. However, animal weight loss, mortality and gut disfunction (diarrhea and intestinal contractility) were not affected by infliximab treatment (p>0,05). Conclusion: The results suggest for the first time the proeminent anti-inflammatory effect of the target therapy anti-TNF-α with infliximab on irinotecan-induced IM. However, such treatment did not alter the survival and did not protect against intestinal dysfunction in irinotecan-induced IM. Additionally accentuated leukopenia induced by irinotecan, which can increase the risk of infections. / Introdução: A mucosite intestinal (MI) é um efeito colateral comum e limitante da quimioterapia com irinotecano. Estudos sugerem a participação de citocinas, como TNF-α, IL-1β e IL-18 na fisiopatologia da MI, além de demonstrar que inibidores não seletivos de citocinas, como pentoxifilina, atenuam a MI por irinotecano. O papel das citocinas está bem estabelecido no âmbito das doenças inflamatórias intestinais, inclusive com utilização de tratamentos visando inibir seletivamente componentes da casacata inflamatória, como, por exemplo, o anticorpo monoclonal anti-TNFα, infliximabe, que tem um efeito benéfico comprovado no tratamento da doença de Crohn, artrite reumatóide e espondilite anquilosante. Há escassos estudos na literatura de terapia alvo anti-citocinas inflamatórias no contexto da mucosite intestinal induzida por quimioterápico. Objetivo: Avaliar o papel do Infliximabe sobre as alterações inflamatórias e disfunção intestinal associados à MI induzida por Irinotecano. Métodos: Camundongos C57BL6 foram divididos em grupos (n=5-9) e tratados por 4 dias com salina (5 mlkg, i.p) ou irinotecano (75 mgkg, i.p) ou pré-tratados com infliximabe (5 mgkg, e.v, dose única) 1 hora antes da primeira injeção de irinotecano. O peso e mortalidade foram avaliados diariamente. No 5o dia avaliou-se a diarréia por escores, o leucograma e, após sacrifício, coletou-se o duodeno para dosagem da atividade de mieloperoxidase (MPO) e de IL-1β, expressão de óxido nítrico sintase induzida (iNOS), análise de escores histopatológicos, morfometria e contratilidade in vitro ao carbacol. Resultados: Os animais tratados com irinotecano apresentaram mucosite intestinal, evidenciada por aumento significativo (p<0,05) nos escores de diarréia, diminuição do comprimento e área do vilo, aumento da atividade de MPO, aumento no nível tecidual de IL-1β e de expressão de iNOS e hipercontratilidade da musculatura lisa duodenal, além de terem apresentado leucopenia, quando comparado com o grupo tratado com salina. O grupo de animais que recebeu infliximabe previamente ao tratamento com irinotecano apresentou melhora significativa (p<0,05) nos parâmetros inflamatórios avaliados (atividade de MPO, nível tecidual de IL-1β, expressão de iNOS), comparado com o grupo tratado apenas com irinotecano. Contudo, a perda ponderal, a mortalidade e a disfunção intestinal (diarréia e contratilidade intestinal in vitro) não foram afetadas pelo tratamento com infliximabe (p>0,05). Conclusões: Os resultados mostram o proeminente efeito antiinflamatório da terapia anti TNF-α com infliximabe na MI induzida por irinotecano. Tal droga, no entanto, não foi capaz de alterar a sobrevida e de proteger contra a disfunção na MI experimental por irinotecano. Adicionalmente, acentuou a leucopenia induzida pelo irinotecano, o que pode aumentar o risco de complicações infecciosas.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-16T21:08:19Z No. of bitstreams: 1 2016_JulianoCoelhodeOliveiraZakir.pdf: 2644036 bytes, checksum: 22458c760d745c99929170bb13f921be (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-27T20:18:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JulianoCoelhodeOliveiraZakir.pdf: 2644036 bytes, checksum: 22458c760d745c99929170bb13f921be (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-27T20:18:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JulianoCoelhodeOliveiraZakir.pdf: 2644036 bytes, checksum: 22458c760d745c99929170bb13f921be (MD5) / A grande maioria dos tumores hipofisários são benignos, no entanto, alguns adenomas podem apresentar comportamento agressivo. Ainda há controvérsias sobre fatores que possam predizer o comportamento biológico desses tumores específicos. Este estudo avaliou potenciais marcadores de invasão e proliferação em comparação com os sistemas de classificação vigentes e parâmetros epidemiogeográficos. Foram incluídos no presente estudo 50 pacientes submetidos, previamente, a tratamento cirúrgico, por tumores hipofisários maiores que 30 mm, com tempo médio de seguimento pós-operatório de 15,2 ± 4,8 anos. Parâmetros anatômicos, como invasão e extensão para estruturas adjacentes, e recrescimento/recorrência tumoral foram avaliados por meio de ressonância nuclear magnética de sela túrcica. Três biomarcadores teciduais de proliferação foram analisados: p53, Ki-67, e c-erbB2. Os tumores foram classificados de acordo com uma combinação de características histológicas e radiológicas, variando de não-invasivos e não-proliferativos (grau 1A) até invasivo-proliferativos (grau 2B). Os tumores classificados como graus 2A e 2B representaram 42% e 52% da amostra, respectivamente. Ki-67 (p-valor = 0,23) e c-erbB2 (p-valor = 0,71) não mostraram relação significativa com o status de progressão tumoral. O biomarcador p53 (p-valor = 0,003), invasão para-selar (p-valor = 0,03), e a classificação clínico-patológica, grau 2B (p-valor = 0,01), estiveram associados com o desfecho clínico desfavorável. Invasão para-selar prevalece como forte fator preditivo de recorrência tumoral. Extensão supra-selar avançada deve ser considerada como parâmetro adicional de invasão e pode ter impacto no prognóstico. Não houve fatores ambientais ou agrupamentos geográficos associados ao comportamento evolutivo tumoral. / Although some pituitary adenomas may have an aggressive behavior, the vast majority are benign. There are still controversies about predictive factors regarding the biological behavior of these particular tumors. This study evaluated potential markers of invasion and proliferation compared to current classification patterns and epidemiogeographical parameters. The study included 50 patients, operated on for tumors greater than 30 mm, with a mean postoperative follow-up of 15.2 ± 4.8 years. Pituitary magnetic resonance was used to evaluate regrowth/recurrence, invasion, and extension to adjacent tissue. Three tissue proliferation biomarkers were analyzed: p53, Ki-67, and c-erbB2. Tumors were classified according to a combination of histological and radiological features, ranging from noninvasive and nonproliferative (grade 1A) to invasive-proliferative (grade 2B). Tumors grades 2A and 2B represented 42% and 52%, respectively. Ki-67 (p-value = 0.23) and c-erbB2 (p-value = 0.71) had no significant relation to tumor progression status. The biomarker p53 (p-value = 0.003), parasellar invasion (p-value = 0.03), and clinicopathological classification, grade 2B (p-value = 0.01), were associated with worse clinical outcome. Parasellar invasion prevails as strong predictive factor of tumor recurrence. Severe suprasellar extension should be considered as additional invasion parameter and could impact prognosis. No environmental factors or geographical cluster were associated with tumor behavior.

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Entre los receptores de muerte celular, se describe al receptor Fas en células linfoides como un receptor que activa tanto apoptosis como necrosis. Recientemente se ha asociado la inducción de apoptosis con la salida de ATP vía hemicanales formados por panexina-1 en linfocitos. Por otra parte, muchas evidencias señalan al ATP extracelular como mediador de muerte celular, tanto por necrosis como por apoptosis, identificándose al receptor purinérgico P2X7 como receptor de muerte, el que tiene como único ligando biológico al ATP. En este contexto, en esta Tesis, se determinó que las células A20 (derivadas de linfocitos B de ratón) y Jurkat (derivadas de linfocitos T humanos), pero no Ramos, Raji (derivadas de linfocitos B humanos) y A20R (derivadas de linfocitos B de ratón) son sensibles a FasL. En células Jurkat el tipo de muerte celular que predominó fue la apoptosis, en cambio en A20 fue la necrosis. Solo las células Jurkat liberaron ATP en forma significativa de manera tiempo dependiente en respuesta a estimulación con FasL y no se obtuvo evidencia de daño en la membrana plasmática. En estas células la liberación de ATP fue inhibida por zVAD (inhibidor general de caspasas) y z-IETD (inhibidor de caspasa 8), pero no por zDEVD (inhibidor de caspasa 3). Además, la pre-incubación con inhibidores de hemicanales formados por panexinas (carbenoxolona y probenecid), pero no de hemicanales formados por conexinas (heptanol) también inhibió la liberación de ATP en respuesta a FasL. Por otra parte, en las células Jurkat los inhibidores de los receptores P2X7, oATP y BBG, inhibieron la muerte celular por apoptosis, en cambio los inhibidores de esfingomielinasas (miriocina, imipramina y GW4869) no protegieron a estas células al estimularlas con FasL. En células A20, oATP y el inhibidor de esfingomielinasa neutra (GW4869) mostraron un efecto protector al inhibir la muerte por necrosis inducida por FasL. Además, se apreció un efecto protector en la muerte por apoptosis al pre-tratar estas células con suramina. En ambos tipos celulares el tratamiento con N-acetilcisteína bloqueó la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) inducidas por FasL. Estos resultados representan la primera evidencia de que se produce una cooperación entre dos receptores de muerte celular, Fas y P2X7, en la ejecución de la muerte celular en células linfoides. Frente al mismo estímulo en células A20 y Jurkat, el tipo de muerte celular y los mecanismos involucrados son en parte distintos. En células A20, FasL gatilla muerte celular por necrosis, que podría involucrar la participación de otros receptores P2X distintos a P2X7. En cambio, en las células Jurkat la activación del receptor Fas por FasL lleva, por una parte a la activación de caspasa-8 y posteriormente, a la activación de la caspasa-3. Por otro lado, la liberación de ATP activada por caspasa-8 sería mediada por hemicanales formados por panexina-1. Esto a su vez llevaría a la activación del receptor P2X7, que gatillaría la muerte celular por apoptosis en un mecanismo que podría involucrar la participación de ROS. Esto es un hallazgo importante, ya que en las células Jurkat, que son células tipo II, además de tBID, liberan ATP vía hemicanales formados por panexina-1 lo que también contribuiría a la amplificación de la vía intrínseca de la apoptosis mediante la activación del receptor P2X7.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Luis Felipe Souza (luis_felas@globo.com) on 2009-01-07T12:27:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_2007_GustavoTakano.pdf: 1537047 bytes, checksum: 3781d8b3c88622c41722e039be32970e (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-27T15:33:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_2007_GustavoTakano.pdf: 1537047 bytes, checksum: 3781d8b3c88622c41722e039be32970e (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-27T15:33:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_2007_GustavoTakano.pdf: 1537047 bytes, checksum: 3781d8b3c88622c41722e039be32970e (MD5) / Os tumores neuroendócrinos são um conjunto de neoplasias agrupadas por características morfofuncionais em comum porém de grande variabilidade de sítios de acometimento, histogênese, apresentação clínica e prognóstico. O presente estudo afere o perfil de imunomarcação, com o objetivo de caracterização da histogênese e correlação com fatores determinantes de seu comportamento biológico. Foram selecionados 20 casos de peças cirúrgicas com o diagnóstico histopatológico de neoplasias neuroendócrinas. Reações imunoistoquímicas com anticorpos específicos para identificar as proteínas Sinaptofisina, Cromogranina, Ki67, p53, c- kit, VEGF, e- caderina, 34βE12, CD99, e S100 foram empregadas. A expressão foi medida em escalas em dois e quatro níveis, e suas frequências foram comparadas às médias ou freqüências das demais variáveis do estudo – idade, sexo, localização tumoral, classificação conforme a OMS, e classificação em dois níveis prognósticos. A avaliação dos resultados demonstra que para a Cromogranina a imunoexpressão moderada a forte foi observada em 95% dos casos, enquanto que CD99 e 34βE12 foi observada em apenas em 5% dos casos. A marcação do ki67 foi mais intensa nos tumores malignos. A expressão da proteína E-caderina foi mais frequentemente observada nas neoplasias não pertencentes aos tratos digestório e respiratório. Os tumores neuroendócrinos do aparelho digestório apresentam, respectivamente, pouca expressão para a proteína S100 e elevada expressão para Sinaptofisina. As demais variáveis não mostraram diferenças estatisticamente significativas. Estes resultados estabelecem correlação com a histogênese. Verifica-se aparente especificidade das neoplasias com a Cromogranina, e Sinaptofisina, e ki-67, além da inespecificidade para 34βE12. Verifica-se ainda que algumas destas proteínas são mais observadas em tumores de sítios específicos, como S100, e a E-caderina. VEGF, CD99, p53 e c-kit são expressos em pequenos subconjuntos destes tumores, não correlatos às variáveis estudadas. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Neuroendocrine tumours are a group of neoplasias that share morfofuncional characteristics but have a great variety of location, histogenesis, clinical presentation and prognosis. This study tests the immunohistochemistry profile of immunostaining to determine histogenetic characteristics and correlations with biological behavior determining factors. Twenty retrospective neuroendocrine tumors cases were selected and submitted to immunohistochemistry reaction with specific antibodies against synaptophysin, chromogranin, Ki67, p53, c- kit, VEGF, E-cadherin, 34βE12, CD99, e S-100. The immunoreactivity was scaled into a two and four-levels scale, and its frequencies were compared to the other variables – age, sex, location, classification according to WHO and classification in two prognostic levels. Chromogranin was the most frequent marker, with moderate to strong immunoexpression in 95% of the cases, and the least frequent markers were CD99 and 34βE12, in 5%. Ki67 reaction was stronger in malignant tumors. E-cadherin was more frequently observed in tumours outside digestive and respiratory sites. The neuroendocrine tumours of the digestive tract had, respectively, S100 low expression and synaptophysin high expression. All the other variables tested were not statistically significant. This results made a histogenetic correlation. There is apparently specificity with chromogranin, synaptophysin and ki-67, and there is not with 34βE12. Some of this proteins are more frequent in specifical sites, as S100 and E-cadherin. VEGF, CD99, p53 and c-kit are expressed in small and not correlated to the studied variables subgroups of tumours.

Ecteinascidina 743 (ET-743) é uma nova droga isolada de um tunicado marinho, a Ecteinascidia turbinata, que está na fase III dos estudos clínicos por sua marcada atividade anticâncer. Apesar de seu mecanismo de ação não estar completamente elucidado, tem sido demonstrado que a ET-743 se liga ao DNA formando adutos covalentes com o N2 da guanina. Além disso, a ET-743 tem sido relatada como potente inibidora da transcrição. No presente estudo, utilizou-se como modelo para a investigação dos efeitos antiproliferativos deste composto a linhagem celular derivada de glioblastoma humano, U-251 MG. Uma vez que o foco principal de atenção nos estudos sobre o mecanismo de ação da ET-743 esteja concentrado em suas interações com o DNA, a autora buscou avaliar outros aspectos de sua atividade antiproliferativa, quais sejam, o seu efeito sobre a distribuição das células no ciclo celular, sobre a atividade de enzimas associadas ao processo de apoptose, bem como sobre o conteúdo celular da proteína Hsp70. Em incubações de 0,5 nM por 48 h, a ET-743 causou um significante acúmulo das células na fase G2M do ciclo celular, o mesmo ocorrendo com doses mais elevadas (1,0 e 1,5) e incubações mais prolongadas (72 h). A ET-743 induziu morte celular dose-dependente e este efeito foi significativamente prevenido pelo inibidor de caspases z-VAD-fmk. Contudo, não foi observado aumento significativo nos níveis de Hsp70 após tratamento com ET-743. Considerando que alta expressão de Hsp70 é um dos principais mecanismos de proteção das células em condições de estresse, incluindo-se o tratamento com drogas citotóxicas, a não elevação de seus níveis na presença da ET-374 pode estar, ao menos em parte, relacionada à citotoxicidade produzida por este agente na linhagem estudada.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000010.pdf: 9541333 bytes, checksum: 72069107f24734738e743c5d0bc4e1a7 (MD5) Previous issue date: 2008 / Com a introdução dos Inibidores do Fator de Necrose Tumoral (anti-TNF's) na prática reumatológica, a identificação de casos de infecção tuberculosa latente (ITBL) passou a ser obrigatória antes do início da terapêutica. O teste cutâneo da tuberculina (PPD) não é um teste de screening ideal neste grupo de pacientes, pois apresentam uma resposta inadequada de hipersensibilidade tardia, fundamental para que se produza uma resposta ao antígeno inoculado. Ensaios baseados na detecção da produção de IFN gama in-vitro por células mononucleares periféricas estimuladas por antígenos específicos (ESAT-6 e CFP-10) são mais específicos do que o PPD na detecção de ITBL. O objetivo do nosso estudo foi avaliar o desempenho do T-SPOT.TB no diagnóstico de ITBL em pacientes portadores de artrite reumatóide (AR). Foi realizado um estudo transversal, para avaliação de teste diagnóstico, onde foram incluídos 96 pacientes, divididos em dois grupos - 48 portadores de AR (grupo AR) e 48 pessoas saudáveis, que constituíram o grupo de comparação (grupo COMP). Todos os voluntários foram submetidos a uma entrevista, coleta de sangue para realização do T-SPOT.TB seguida da inoculação da PPD. O T-SPOT.TB foi realizado de acordo com as orientações do fabricante e a leitura do PPD foi realizada após 72 horas da inoculação. Foram calculados a sensibilidade e a especificidade do T-SPOT.TB comparado com o padrão ouro. Uma vez que o PPD é considerado como padrão ouro imperfeito, foram criados quatro modelos para o estudo: PPD isolado; PPD e alterações radiográficas compatíveis com ITBL; PPD e história contato intra-domiciliar e PPD, alterações radiográficas e contato intradomiciliar. A especificidade do T-SPOT.TB variou entre 87 e 90 por cento e o valor preditivo negativo (VPN), entre 94,4 e 100 por cento. A sensibilidade foi 100 por cento nos modelos que não incluíram o RX, caindo para 77,8 e 89,5 por cento nos dois outros. No grupo AR a freqüência de infecção latente diagnosticada pelo PPD foi inferior (14,6 por cento) à encontrada no grupo de comparação (33,3 por cento), com uma diferença estatisticamente significante (p=0,034), o que não ocorreu no grupo COMP. Esta diferença pode ser explicada pelo comprometimento da hipersensibilidade tardia em pacientes com AR. Concluindo, podemos dizer que o T-SPOT.TB apresenta uma especificidade e VPN elevados, sendo capaz de identificar os casos de PPD falso negativos, aumentando a segurança para o uso do anti-TNF