Introdução: A terapêutica da psoríase foi modificada pela introdução dos imunobiológicos, que permitem melhor controle da doença e melhor qualidade de vida aos pacientes, mas promovem aumento do risco de tuberculose latente, exigindo diagnóstico antecedendo seu início. Objetivo: Avaliar o desempenho do teste T-SPOT.TB no diagnóstico de infecção tuberculosa latente em pacientes com psoríase. Métodos: Em estudo experimental, prospectivo, analítico, com comparação de grupos,de prevenção primária, para validade de teste diagnóstico, 33 pacientes com psoríase (grupo psoríase) e 30 pacientes com outras doenças dermatológicas (grupo base), atendidos nos Ambulatório de Dermatologia Geral ou de Psoríase do Centro de Estudos Dermatológicos do Recife, da Santa Casa de Misericórdia, entre fevereiro e novembro de 2009, foram submetidos aos testes do PPD e T-SPOT.TB. Para ambos os grupos, admitiu-se inclusão com idade mínima de 18 anos e critérios de exclusão doenças ou condições fisiológicas que comprometessem a competência imunológica, exceto psoríase, para o grupo psoríase. Adotou-se a técnica de Mantoux para o teste do PPD e uma variante simplificada da técnica Enzyme-Linked Immunospot para a determinação de células T efetoras, secretoras de IFN-g em resposta à estimulação pelos antígenos específicos do M. tuberculosis para o teste T-SPOT.TB. As variáveis dependentes foram os resultados do teste T-SPOT.TB contra antígenos ESAT-6, CFP-10, e os resultados do teste do PPD, considerando enduração de 0-4 mm: não reator; 5-9 mm: reator fraco; ≥ 10 mm: reator forte. As variáveis independentes foram: idade, sexo, cor da pele, tempo de evolução da psoríase, ocupação, história de contato intradomiciliar e renda, alcoolismo e gravidade da doença. Foram submetidos a teste Qui quadrado ou exato de Fisher, em nível de significância de 0, 05, assim como ao teste de Mantel-Haenszel, três modelos comparando o teste T-SPOT.TB com teste do PPD, contato intradomiciliar e associação teste do PPD e contato intradomiciliar. A pesquisa foi aprovada pelos Comitês de Ética da Universidade Federal de Pernambuco e Universidade de São Paulo. Resultados: O grupo psoríase diferiu do grupo base quanto a razão de sexo com predomino do masculino (razão=0,7:1; p=0,047); maior idade média 42,1±1,9 anos (contra 34,1±1,4 anos no grupo base, p=0,023); fototipos I e II (p=0,020); menor nível de instrução e renda média mensal e contato intradomiciliar com tuberculose menos freqüente (p=0,001). Os grupos também diferiram quanto à positividade do teste do PPD (maior no grupo base; p=0,001). O teste T-SPOT.TB apresentou sensibilidade e especificidade de 9,1% e 95,5%, no modelo 1, 27,3% e 60%, no modelo 2, e valores de 60% e 53,3%, respectivamente no modelo 3. Foi no modelo 1 do grupo psoríase que o teste TSPOT. TB mostrou a maior concordância e o maior valor de Odds Ratio ponderado pelo teste de Mantel-Haenszel, tendo esses dois parâmetros significância estatística, quando comparados aos outros dois modelos. Conclusões: O teste T-SPOT.TB apresentou maior capacidade de diagnosticar casos negativos para tuberculose latente, constituindo-se numa opção para triagem de pacientes na instituição de terapêutica com imunobiológicos. / Introduction: The therapy for psoriasis was modified by the introduction of immunebiological products that allow better disease control and better quality of life for patients, but promotes increased risk forf latent tuberculosis, requiring diagnosis shortly before its establishment. Purpose: To assess the performance of T-SPOT.TB test for the diagnosis of latent tuberculosis infection in patients with psoriasis. Methods: Within a experimental, prospective, analytic, clinical assay type study, with comparison of groups, to validate a diagnostic test, 33 patients with psoriasis (psoriasis group) and 30 patients with other dermatological diseases (basis group), attempted at General Dermatology and Psoriasis Out-patients Departments of Recife\'s Dermatological Studies Center of Santa Casa de Misericórdia, from February to November 2009, were submitted to PPD and TSPOT. TB tests. For both groups, we admitted 18 years as minimal age for inclusion. The exclusion criteria included disease ou physiological conditions that compromised immunological competence, except psoriasis to psoriasis group. We used Mantoux technique for PPD test and a simplified variant of Enzyme-Linked Immunospot technique to determine effector T cells, secretors of IFN-g in response to M. tuberculosis specific antigens, to T-SPOT.TB test. Dependent variables were the results of T-SPOT.TB test against ESAT-6 and CPF-10 antigens, and the results to PPD test, considering enduration of 0-4 mm as non reactor; 5-10 mm weak reactor and ≥ 10 mm, strong reactor. Independent variables were age, sex, skin color, psoriasis evolution time, occupation, history of intradomiciliar contact and income, alcoolism and disease grade. Three models, comparing T-SPOT.TB test to PPD test, intradomiciliar contact and both, were submitted to Qui Squared test or Exact Fisher Test, at significance level of 0.05, as well as to Mantel- Haenszel test. The research has been approved by Ethics Committee of Universidade Federal de Pernambuco e Universidade de São Paulo. Results: Psoriasis group differed from base group on sex ratio with predominance of male gender (rate=0.7:1; p=0,047), major mean age (42,1 ± 1.9 years against 34,1 ± 1.4 years in basic group, p = 0,023) phototypes I and II (p = 0,020); lower scholarship, income and less frequent intradomiciliar contact with tuberculosis (p = 0,001). The groups also differed on the positivity of PPD test (greater in base group; p = 0,001). T-SPOT.TB test had sensibility and specificity of 9,1% and 95.5%, in model 1; 27,3% and 60%, in model 2, and values of 60% and 53,3% respectively in model 3. Model 1 showed greater concordance and highest value of Odds Ratio test weighted by Mantel-Haenszel test, having these two parameters statistical significance when compared to the other two models. Conclusions: T-SPOT.TB test had great ability to diagnose negative cases for latent tuberculosis, and constitutes an option for screening patients to immunobiological therapy administration.

Introdução: A terapêutica da psoríase foi modificada pela introdução dos imunobiológicos, que permitem melhor controle da doença e melhor qualidade de vida aos pacientes, mas promovem aumento do risco de tuberculose latente, exigindo diagnóstico antecedendo seu início. Objetivo: Avaliar o desempenho do teste T-SPOT.TB no diagnóstico de infecção tuberculosa latente em pacientes com psoríase. Métodos: Em estudo experimental, prospectivo, analítico, com comparação de grupos,de prevenção primária, para validade de teste diagnóstico, 33 pacientes com psoríase (grupo psoríase) e 30 pacientes com outras doenças dermatológicas (grupo base), atendidos nos Ambulatório de Dermatologia Geral ou de Psoríase do Centro de Estudos Dermatológicos do Recife, da Santa Casa de Misericórdia, entre fevereiro e novembro de 2009, foram submetidos aos testes do PPD e T-SPOT.TB. Para ambos os grupos, admitiu-se inclusão com idade mínima de 18 anos e critérios de exclusão doenças ou condições fisiológicas que comprometessem a competência imunológica, exceto psoríase, para o grupo psoríase. Adotou-se a técnica de Mantoux para o teste do PPD e uma variante simplificada da técnica Enzyme-Linked Immunospot para a determinação de células T efetoras, secretoras de IFN-g em resposta à estimulação pelos antígenos específicos do M. tuberculosis para o teste T-SPOT.TB. As variáveis dependentes foram os resultados do teste T-SPOT.TB contra antígenos ESAT-6, CFP-10, e os resultados do teste do PPD, considerando enduração de 0-4 mm: não reator; 5-9 mm: reator fraco; ≥ 10 mm: reator forte. As variáveis independentes foram: idade, sexo, cor da pele, tempo de evolução da psoríase, ocupação, história de contato intradomiciliar e renda, alcoolismo e gravidade da doença. Foram submetidos a teste Qui quadrado ou exato de Fisher, em nível de significância de 0, 05, assim como ao teste de Mantel-Haenszel, três modelos comparando o teste T-SPOT.TB com teste do PPD, contato intradomiciliar e associação teste do PPD e contato intradomiciliar. A pesquisa foi aprovada pelos Comitês de Ética da Universidade Federal de Pernambuco e Universidade de São Paulo. Resultados: O grupo psoríase diferiu do grupo base quanto a razão de sexo com predomino do masculino (razão=0,7:1; p=0,047); maior idade média 42,1±1,9 anos (contra 34,1±1,4 anos no grupo base, p=0,023); fototipos I e II (p=0,020); menor nível de instrução e renda média mensal e contato intradomiciliar com tuberculose menos freqüente (p=0,001). Os grupos também diferiram quanto à positividade do teste do PPD (maior no grupo base; p=0,001). O teste T-SPOT.TB apresentou sensibilidade e especificidade de 9,1% e 95,5%, no modelo 1, 27,3% e 60%, no modelo 2, e valores de 60% e 53,3%, respectivamente no modelo 3. Foi no modelo 1 do grupo psoríase que o teste TSPOT. TB mostrou a maior concordância e o maior valor de Odds Ratio ponderado pelo teste de Mantel-Haenszel, tendo esses dois parâmetros significância estatística, quando comparados aos outros dois modelos. Conclusões: O teste T-SPOT.TB apresentou maior capacidade de diagnosticar casos negativos para tuberculose latente, constituindo-se numa opção para triagem de pacientes na instituição de terapêutica com imunobiológicos. / Introduction: The therapy for psoriasis was modified by the introduction of immunebiological products that allow better disease control and better quality of life for patients, but promotes increased risk forf latent tuberculosis, requiring diagnosis shortly before its establishment. Purpose: To assess the performance of T-SPOT.TB test for the diagnosis of latent tuberculosis infection in patients with psoriasis. Methods: Within a experimental, prospective, analytic, clinical assay type study, with comparison of groups, to validate a diagnostic test, 33 patients with psoriasis (psoriasis group) and 30 patients with other dermatological diseases (basis group), attempted at General Dermatology and Psoriasis Out-patients Departments of Recife\'s Dermatological Studies Center of Santa Casa de Misericórdia, from February to November 2009, were submitted to PPD and TSPOT. TB tests. For both groups, we admitted 18 years as minimal age for inclusion. The exclusion criteria included disease ou physiological conditions that compromised immunological competence, except psoriasis to psoriasis group. We used Mantoux technique for PPD test and a simplified variant of Enzyme-Linked Immunospot technique to determine effector T cells, secretors of IFN-g in response to M. tuberculosis specific antigens, to T-SPOT.TB test. Dependent variables were the results of T-SPOT.TB test against ESAT-6 and CPF-10 antigens, and the results to PPD test, considering enduration of 0-4 mm as non reactor; 5-10 mm weak reactor and ≥ 10 mm, strong reactor. Independent variables were age, sex, skin color, psoriasis evolution time, occupation, history of intradomiciliar contact and income, alcoolism and disease grade. Three models, comparing T-SPOT.TB test to PPD test, intradomiciliar contact and both, were submitted to Qui Squared test or Exact Fisher Test, at significance level of 0.05, as well as to Mantel- Haenszel test. The research has been approved by Ethics Committee of Universidade Federal de Pernambuco e Universidade de São Paulo. Results: Psoriasis group differed from base group on sex ratio with predominance of male gender (rate=0.7:1; p=0,047), major mean age (42,1 ± 1.9 years against 34,1 ± 1.4 years in basic group, p = 0,023) phototypes I and II (p = 0,020); lower scholarship, income and less frequent intradomiciliar contact with tuberculosis (p = 0,001). The groups also differed on the positivity of PPD test (greater in base group; p = 0,001). T-SPOT.TB test had sensibility and specificity of 9,1% and 95.5%, in model 1; 27,3% and 60%, in model 2, and values of 60% and 53,3% respectively in model 3. Model 1 showed greater concordance and highest value of Odds Ratio test weighted by Mantel-Haenszel test, having these two parameters statistical significance when compared to the other two models. Conclusions: T-SPOT.TB test had great ability to diagnose negative cases for latent tuberculosis, and constitutes an option for screening patients to immunobiological therapy administration.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A dor neuropÃtica possui mecanismos de difÃcil compreensÃo que se modificam com a sua evoluÃÃo dificultando a terapÃutica. O modelo por constriÃÃo crÃnica do nervo ciÃtico (CCNC) simula esta condiÃÃo. A gabapentina (GBP) à um anticonvulsivo muito utilizado como analgÃsico na dor neuropÃtica e existem poucos relatos sobre seus efeitos na atividade inflamatÃria e regenerativa do nervo. As citocinas TNF-&#945; e IL-1&#946; estÃo relacionadas à dor, inflamaÃÃo e regeneraÃÃo neural. à objetivo deste estudo avaliar os efeitos antinociceptivos, inflamatÃrios e regenerativos do tratamento preventivo e contÃnuo (80 min antes da CCNC e depois ao longo de 5 dias de 12 em 12h) com a GBP (30, 60, 120 mg/kg, via oral) atravÃs da observaÃÃo (antes, no 3 dia e no 5 dia apÃs a CCNC) dos seguintes comportamentos: (1) espontÃneos sugestivos de dor crÃnica: Scrathing (coÃar-se) e Biting(morder-se) (2) relacionados à motriciadade e exploraÃÃo: Climbing(escalar), Rearing(empinar-se), Walking(andando) (3) de dor induzida: alodÃnia mecÃnica (von Frey eletrÃnico) e alodÃnia ao frio (10Â) em ratos machos Wistar (250-300g) com CCNC. Animais com CCNC tratados com salina e animais pseudo-operados foram utilizados como controles. Para avaliar os efeitos anti ou prÃ-inflamatÃrios da GBP (60, 120mg/kg, via oral) utilizou-se o modelo de edema de pata induzido por carragenina em animais sem CCNC e a dosagem de mieloperoxidase no nervo sob constriÃÃo crÃnica. Os efeitos neuro-regenerativos da GBP foram avaliados indiretamente atravÃs da expressÃo de TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-10, e da proteÃna bÃsica de mielina (PBM) no mesmo protocolo, sendo que no 5 dia de tratamento apÃs CCNC, foram feitas coletas dos nervos para dosagem destas citocinas atravÃs de ELISA e imunohistoquÃmica, e no 5 e 15 dia para expressÃo de PBM atravÃs de Western Blot e imunohistoquÃmica. Resultados: No 5 dia, as doses de GBP 30, 60 e 120mg provocaram reduÃÃo de 86,76%*; 83,82%*; 80,09%* (*p < 0,01) no tempo de Scratching da pata ipslateral e uma inibiÃÃo de 56,27%; 90,53%*; 65,06% (*p < 0,01) no tempo do Biting lado direito em relaÃÃo ao grupo salina. Aliviaram a alodÃnia mecÃnica provocando aumentos do limiar de retirada da pata de 225,42%*, 246,01%*, 309,20%* (*p <0,001) e provocaram reduÃÃo do escore de dor na alodÃnia ao frio em 18,19%; 21,29%; 42,26%* (*p < 0,01) em relaÃÃo ao grupo salina. As doses de GBP 60 e 120mg provocaram aumentos significativos na motricidade espontÃnea de animais com CCNC e intactos sugerindo efeitos estimulantes e nÃo sedativos. A GBP 60mg/kg tambÃm provocou efeitos relevantes (p<0,001) na migraÃÃo de cÃlulas visto pelo aumento de 982,16% na expressÃo da mieloperoxidase no nervo e pelo aumento de 53% no edema de pata em relaÃÃo ao controle salina. Quanto à expressÃo do TNF-&#945; no nervo as doses de 60 e 120mg provocaram aumentos de 120,95 % e de 91,99% em relaÃÃo ao grupo salina (P< 0,01). Na expressÃo de IL-1&#946; a dose de 60mg/kg provocou aumento de 59,26% em relaÃÃo ao grupo salina (P< 0,05). No Western Blot ocorreu um aumento significativo de 158,06% da expressÃo de PBM (0,298 + 0,069 PBM/Act.) no nervo no 15 dia de tratamento com GBP em relaÃÃo ao grupo salina (0,116 + 0,034 PBM/Act). ConclusÃes: O tratamento com GBP ao longo de cinco dias, apesar de seus efeitos prÃ-inflamatÃrios, demonstrou no 5 dia efeitos analgÃsicos significativos ao reduzir comportamentos espontÃneos de dor crÃnica e aliviar a alodÃnia mecÃnica e tÃrmica em estÃgio precoce da neuropatia. Considerando-se os efeitos relevantes da GBP no 5 dia de neuropatia no aumento da migraÃÃo de cÃlulas para o local da lesÃo, no aumento da expressÃo de TNF e IL-1&#946; no nervo, o que levaria a maior ativaÃÃo das cÃlulas de Schwann, macrÃfagos, e maior liberaÃÃo de fator de crescimento do nervo, e no aumento da expressÃo de PBM indicando uma ativa fragmentaÃÃo da mielina, sugere-se que a GBP pode acelerar o processo de remoÃÃo dos fragmentos de mielina e axÃnios contribuindo assim para o posterior alongamento dos axÃnios e remielinizaÃÃo. / Neurophatic pain conveys mechanisms of difficult understanding, which changes with the disease progress, jeopardizing the therapeutics. The chronic constriction of the sciatic nerve (CCSN) model mimics this condition. Gabapentin (GBP) is an anti-convulsive drug often used as analgesics to control neurophatic pain. Few reports exist on their effects in the inflammatory and regenerative activity of the nerve. TNF-&#945; and IL-1&#946; cytokines, although related to pain and inflammation, are also associated with early myelin and axonal fragmentos removal after nerve injury and thus contribute to nerve regeneration. This study aimed at evaluating the analgesics early treatment (80 min prior to CCSN and along 5-day treatment, 12h/12h) effects of GBP (30, 60, 120 mg/kg, given orally) by monitoring (before surgery, on the 3rd day and 5th day of post-surgery treatment, 12h to12h) the following behaviors (1) spontaneous behavior, suggestive of chronic pain: Scratching and Biting (2) motor and exploratory-related behaviors: Climbing, Rearing, and Walking, (3) induced-pain behaviors: mechanical allodynia (electronic von Frey) and cold allodynia (10ÂC) in Wistar male rats (250-300g) with CCSN. CCSN animals treated with saline and pseudo-operated were used as controls. Another aim of this study was to evaluate the pro and anti-inflammatory effects of GBP (60 and 120mg/kg, given orally) by carragenin-induced paw edema in CCSN-free animals and yet nerve myeloperoxidase measurements under chronic constriction. The neural regenerative effects of GBP were indirectly evaluated by measuring TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-10, and myelin basic protein (PBM) expressions in the same protocol, as follows: 5th day of treatment following CCSN to draw nerves in order to quantify cytokines by ELISA and immunohistochemistry, and for MPB expression detected by Western blot and immunohistochemistry on the 5th and 15th. Results: On the 5th day, GBP, at doses of 30, 60 and 120mg, reduced the scratching time in the ipslateral paw of 86.76%*; 83.82%*; 80.09%* (*p<0.01) and an inhibition of the biting time of 56.27%; 90.53%*; 65.06% (*p<0.01) in the right side in comparison with the saline group. In addition, GBP alleviated mechanical allodynia causing increase paw retrieval thresholds of 225.42%*, 246.01%*, 309.20%* (*p <0.001) and the reduction of the pain scores for cold allodynia in the range of 18.19%; 21.29%; 42.26%* (*p < 0.01) in comparison with the saline group. GBP, at doses of 60 and 120mg, significantly increased spontaneous motricity in CCSN animals and controls suggesting excitatory effects rather than sedation. GBP (60 mg/kg) also caused relevant effects (p<0.001) in peritoneal cell migration, and a 982.16% increase in nerve myeloperoxidase expression and 53% increase in paw edema, as opposed to the saline control. Regarding nerve TNF-&#945; expression, doses of 60 and 120mg caused significant increase of 120.95 % and 91.99% in comparison with the saline group (p<0.01). A dose of 60mg/kg caused 59.26% increase in IL-1&#946; expression compared with the saline group (p<0.05). We found a 158% significant increase in PBM expression by western blots (0.298  0.069 PBM/Act) on the 15th treatment-day with GPB in comparison with the saline control (0.116  0.034 PBM/Act). Conclusions: 5-day GBP treatment, although with pro-inflammatory effects, was found to have significant pain killing effects by reducing chronic spontaneous pain behaviors and by alleviating mechanical and thermal allodynia in the early neuropathy course. By taking our relevant findings of increasing migration cell rates to the nerve injury site on the 5th day of the neuropathy and the nerve TNF and IL-1&#946; expression with more macrophage and Schwann cell activation and supposedly more nerve growth factor release, along with higher PBM expression, altogether suggest that GBP may hasten the myelin and axonal fragmentos withdrawn, therefore contributing to axonal outgrowth and ultimately remyelinization.

Orientadores: Desanka Dragosavac, Luis Alberto Magna / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kosour_Carolina_D.pdf: 5835134 bytes, checksum: f6d1efdf0f5f0705f3ba5432ea02cab5 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Introdução: A operação cardíaca com utilização da circulação extracorpórea (CEC) está associada ao desenvolvimento da resposta inflamatória sistêmica e, como conseqüência, à disfunção pulmonar. O uso de ultrafiltração no intra-operatório tem sido proposto para remoção dos mediadores inflamatórios liberados durante a CEC, na tentativa de minimizar a resposta inflamatória. Objetivo: Avaliar o efeito da ultrafiltração nos níveis séricos de interleucinas, fator de necrose tumoral-alfa e na função pulmonar de pacientes submetidos à revascularização do miocárdio. Método: Foi realizado um estudo clínico, prospectivo, randomizado, com 40 pacientes, divididos em dois grupos, em um hospital terciário. Um grupo foi submetido à ultrafiltração (UF) durante a CEC e outro grupo (controle), não. Foram mensurados interleucinas (IL-ip, IL-6, IL-8), fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), índices de troca gasosa pulmonar [PaO2/FiO2, D(A-a)O2 e VD/VT] e mecânica ventilatória (Cst e Raw) nos períodos pré-operatório, intra-operatório e dois dias de pós-operatório. As interleucinas e TNF-a foram analisadas também no perfusato, no grupo teste. Resultados: Houve aumento de IL-ip (30 minutos após a CEC e 12 horas após a operação) e IL-6 (24 e 36 horas após a operação) no grupo UF comparado ao grupo controle. Houve aumento de IL-6 em todos os tempos comparados ao tempo inicial, em ambos os grupos. Foi observada diminuição da IL-8 cinco minutos antes da CEC e aumento seis, i2, 24, e 36 horas após operação, além de aumento de TNF-a nos tempos 30 minutos após CEC, 24, 36 e 48 horas após operação. Na análise do líquido ultrafiltrado foi identificada a presença de TNF-a e das demais IL-ip, IL-6, IL-8, somente em traços. Na função pulmonar, houve piora da PaO2/FiO2, D(A-a)O2, VD/VT, cinco minutos antes da CEC, além da diminuição da D(A-a)O2 30 minutos após CEC, seis,i2, 24 e 36 horas após operação. Houve aumento da complacência estática pulmonar (Cst) e queda da resistência de vias aéreas (Raw) cinco minutos antes da CEC, além da queda da Raw seis horas após a operação nos dois grupos. Conclusão: A utilização de ultrafiltração aumentou o nível sérico das IL-i e IL-6, não interferindo na troca gasosa e na mecânica pulmonar de pacientes submetidos à revascularização do miocárdio / Abstract: Introduction: Cardiac surgery with cardiopulmonary bypass (CPB) is associated with the development of systemic inflammatory response and, in consequence, pulmonary dysfunction. The use of ultrafiltration intraoperatively has been proposed to remove inflammatory mediators released during CPB in an attempt to minimize the inflammatory response. Objective: Evaluating the effect of ultrafiltration on the serum levels of interleukin, tumor necrosis factor alpha and pulmonary function in patients undergoing myocardial revascularization. Methods: It was carried out a prospective randomized clinical trial on 40 patients divided into two groups, in a tertiary hospital. One group was submitted to ultrafiltration (UF) during CPB whereas the other group (control), was not. It were mensured interleukins (IL-ip, IL-6, IL-8), tumor necrosis factor alpha (TNF-a), pulmonary gas exchange indexes [PaO2/FiO2, D(A-a)O2 and VD/VT] as well as respiratory mechanics (Cst e Raw) in the preoperative and intraoperative periods and postoperatively. The interleukins and TNF-a were also analyzed in the perfusate in the test group. Results: There was an increase in IL-ip (30 minutes after CPB and 12 hours after surgery) and in IL-6 (24 and 36 hours after surgery) in the UF group by comparison with the control one. There was also an increase in IL-6 at all schedulled times compared to the initial period in both groups. It was noticed a decrease in IL-8 five minutes before CPB and an increase six, i2, 24 and 36 hours after surgery in addition to an increase in TNF- a at the times 30 minutes after CPB, 24, 36 and 48 hours after surgery. On analyzing the ultrafiltrated fluid it was identified the presence of TNF-a and the other IL-ip, IL-6, IL-8 only in traces. Regarding pulmonary function, there was a worsening of PaO2/FiO2, D(A-a)O2, and VD/VT five minutes prior to CPB in addition to a decrease in D(A-a)O2 30 minutes after CPB, six, 12, 24 and 36 hours after surgery. There was an increase in the pulmonary static compliance, and a fall of the airway resistance five minutes before CPB. Also, there was a fall of the airway resistance six hours after surgery in both groups. Conclusion: The use of ultrafiltration has increased the serum levels of IL-1 and IL-6 without interfering with the pulmonary gas exchange and respiratory mechanics in patients undergoing myocardial revascularization / Doutorado / Pesquisa Experimental / Doutor em Cirurgia

Orientador: Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T19:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_RafaelVentura_D.pdf: 18399994 bytes, checksum: 2db06c9364e5b215f2cf4f91753c4d19 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Na distrofia muscular de Duchenne e no camundongo mdx a proteína distrofina está ausente ou é expressa de forma não funcional. Com isso, o complexo distrofina-glicoproteínas se desorganiza, a fibra muscular se torna frágil durante os ciclos de contração e relaxamento muscular, as concentrações intracelulares de cálcio e radicais livres se elevam, resultando em necrose da célula. A inflamação mediada por células do sistema imunológico e citocinas pró-inflamatórias, como o TNF-alfa, é um evento importante diretamente relacionado com a progressão da doença. O ácido eicosapentaenóico (EPA) é um ácido graxo poli-insaturado ômega-3 que promove benefícios em doenças inflamatórias em humanos. No presente trabalho analisamos os efeitos do EPA no estágio inicial da distrofinopatia do camundongo mdx. Camundongos mdx com 14 dias de idade receberam 300 mg/kg/dia de EPA por 16 dias. Os grupos controle mdx e C57BL10 receberam óleo mineral. EPA diminuiu a mionecrose, os níveis séricos da enzima creatinoquinase e o TNF-alfa em músculos esqueléticos distróficos. Sugere-se que o EPA tenha utilidade terapêutica nas distrofinopatias / Abstract: In Duchenne muscular dystrophy (DMD) and in the mdx murine model of DMD, lack of dystrophin leads to myonecrosis and cardiorespiratory failure. The intense inflammatory reaction, mediated by immune cells and TNF-alpha, contributes to the progressive myonecrosis. The eicosapentaenoic acid (EPA) is an omega-3 fatty acid that shows beneficial effects in inflammatory diseases. In the present study, we examined the effects of EPA on the early stages of dystrophy in mdx mice. Mdx mice (14 days old) received EPA at 300 mg/kg EPA for 16 days, while the control mdx mice and C57BL10 received vehicle. EPA treatment decreased creatine kinase and TNF-alpha levels and reduced myonecrosis. The present results support further studies with EPA as a potential therapy for dystrophinopathies / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Macrófagos infectados com Leishmania são protegidos de apoptose, entretanto não se conhece o mecanismo de transdução de sinal intracelular que interfere neste processo de morte. Neste trabalho, células J 774 em cultura, com privação de nutrientes, sofrem apoptose, a qual aumenta na presença dos indutores camptotecina (CPT) ou fator de necrose tumoral recombinante (rTNF). Estas células quando infectadas com amastigotas ou promastigotas de Leishmania (L.) chagasi (5 parasitos/uma célula) são protegidas de apoptose. Avaliando as possíveis vias intracelulares envolvidas nesse processo, observamos que a privação de nutrientes altera o potencial de membrana da mitocôndria, havendo reversão com a infecção tanto com promastigotas e amastigotas, entretanto a reversão da alteração do potencial de membrana induzida por rTNF só foi observada com infecção com promastigotas. Tanto a atividade de caspase 3, como a detecção de caspase 3 clivada induzidas por H202 são revertidas com a infecção com promastigotas ou amastigotas. Quando analisamos a expressão de poli (ADP ribose) polimerase (PARP), em relação às células sem indução, a indução por CPT não levou ao aumento da PARP de 116 kDa, mas, aumento da banda de 24 kDA. Por outro lado, a infecção por amastigota de Leishmania (L.) chagasi em células J774 levou à diminuição da expressão de PARP de 116 kDa, mas aumento da de 24 kDa. Nas células infectadas por promastigotas de Leishmania (L.) chagasi, observamos uma diminuição da banda de 116 kDa, aparecimento de uma molécula de 89kDa e diminuição da expressão da de 24 kDa. Nas células sob indução por CPT, a infecção levou a resultados similares, exceto a diminuição da molécula de 24 kDa quando infectado por amastigota. Avaliando-se a influência da proteína do choque térmico de 83 kDa de Leishmania infantum, como possível fator que interferiria no processo de apoptose, observamos que a fagocitose de bactérias Escherichia coli (M15) contendo plasmídio com gene de HSP83 expressando essa proteína, leva a diminuição da apoptose nessas células, mesmo quando induzidas por CPT ou rTNF. Nossos dados mostram que a infecção de macrófagos J774 in vitro por Leishmania (L.) chagasi, interfere no processo de apoptose afetando diversas vias de sinalização intracelular de apoptose, tanto extrínsecas quanto intrínsecas, sendo que promastigota é mais efetiva em inibir apoptose nesta linhagem macrofágica. / Macrophages infected by Leishmania are protected from apoptosis, however the mechanism of intracellular signal transduction that interferes in this death process remains unknown. In this work, J774 cells in culture, under nutrient deprivation undergo apoptosis, which is increased in the presence of inducers: camptothecin (CPT) or recombinant tumoral necrosis factor (rTNF). These cells infected by amastigotes or promastigotes of Leishmania (L.) chagasi (5 parasites per cell) are protected from apoptosis. Evaluating the possible intracellular pathways involved in this process, we observed nutrient deprivation alters the mitochondrial membrane potential, reversed by both amastigote and promastigote infection, in contrast, mitochondrial membrane potential was altered by rTNF and it was reversed only by promastigotes. Both caspase 3 activity and caspase 3 cleavage detection induced by H2O2 are reversed with amastigote or promastigote infection. When we analysed the expression of poly (ADP-ribose) polymerase, related to no induced cells . CPT induction didnLt increase 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Otherwise, Leishmania (L.) chagasi amastigote infection in J774 cells decreased 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Incells infected by Leishmania (L.) chagasi , we observed a decrease of 116 kDa fragment, appearance of a 89 kDa fragment and a decreasing of a 24 kDa fragment. In the cells under CPT induction similar results were found, except a decreasing of a 24 kDa when infected by amastigote. Evaluating the Leishmania (L.) infantum Heat Shock Protein of 83 kDa, as a possible factor that interferes in the apoptosis process, we observed that a phagocytosis of Escherichia coli (M15) bacteria with a HSP83 gene within a plasmid expressing this protein induced by isopropyl &#946; - D- tiogalactopiranosideo (IPTG), considerably diminished apoptosis in these cells even when induced by CPT or rTNF. Our data show that Leishmania (L.) chagasi infection in J774 macrophages in vitro notoriously interferes in the apoptosis process affecting several intracellular pathways involved in both extrinsic and intrinsic pathways, more prominently with promastigote in this macrophage cell lineage.

Macrófagos infectados com Leishmania são protegidos de apoptose, entretanto não se conhece o mecanismo de transdução de sinal intracelular que interfere neste processo de morte. Neste trabalho, células J 774 em cultura, com privação de nutrientes, sofrem apoptose, a qual aumenta na presença dos indutores camptotecina (CPT) ou fator de necrose tumoral recombinante (rTNF). Estas células quando infectadas com amastigotas ou promastigotas de Leishmania (L.) chagasi (5 parasitos/uma célula) são protegidas de apoptose. Avaliando as possíveis vias intracelulares envolvidas nesse processo, observamos que a privação de nutrientes altera o potencial de membrana da mitocôndria, havendo reversão com a infecção tanto com promastigotas e amastigotas, entretanto a reversão da alteração do potencial de membrana induzida por rTNF só foi observada com infecção com promastigotas. Tanto a atividade de caspase 3, como a detecção de caspase 3 clivada induzidas por H202 são revertidas com a infecção com promastigotas ou amastigotas. Quando analisamos a expressão de poli (ADP ribose) polimerase (PARP), em relação às células sem indução, a indução por CPT não levou ao aumento da PARP de 116 kDa, mas, aumento da banda de 24 kDA. Por outro lado, a infecção por amastigota de Leishmania (L.) chagasi em células J774 levou à diminuição da expressão de PARP de 116 kDa, mas aumento da de 24 kDa. Nas células infectadas por promastigotas de Leishmania (L.) chagasi, observamos uma diminuição da banda de 116 kDa, aparecimento de uma molécula de 89kDa e diminuição da expressão da de 24 kDa. Nas células sob indução por CPT, a infecção levou a resultados similares, exceto a diminuição da molécula de 24 kDa quando infectado por amastigota. Avaliando-se a influência da proteína do choque térmico de 83 kDa de Leishmania infantum, como possível fator que interferiria no processo de apoptose, observamos que a fagocitose de bactérias Escherichia coli (M15) contendo plasmídio com gene de HSP83 expressando essa proteína, leva a diminuição da apoptose nessas células, mesmo quando induzidas por CPT ou rTNF. Nossos dados mostram que a infecção de macrófagos J774 in vitro por Leishmania (L.) chagasi, interfere no processo de apoptose afetando diversas vias de sinalização intracelular de apoptose, tanto extrínsecas quanto intrínsecas, sendo que promastigota é mais efetiva em inibir apoptose nesta linhagem macrofágica. / Macrophages infected by Leishmania are protected from apoptosis, however the mechanism of intracellular signal transduction that interferes in this death process remains unknown. In this work, J774 cells in culture, under nutrient deprivation undergo apoptosis, which is increased in the presence of inducers: camptothecin (CPT) or recombinant tumoral necrosis factor (rTNF). These cells infected by amastigotes or promastigotes of Leishmania (L.) chagasi (5 parasites per cell) are protected from apoptosis. Evaluating the possible intracellular pathways involved in this process, we observed nutrient deprivation alters the mitochondrial membrane potential, reversed by both amastigote and promastigote infection, in contrast, mitochondrial membrane potential was altered by rTNF and it was reversed only by promastigotes. Both caspase 3 activity and caspase 3 cleavage detection induced by H2O2 are reversed with amastigote or promastigote infection. When we analysed the expression of poly (ADP-ribose) polymerase, related to no induced cells . CPT induction didnLt increase 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Otherwise, Leishmania (L.) chagasi amastigote infection in J774 cells decreased 116 kDa PARP, but increased a 24 kDa fragment. Incells infected by Leishmania (L.) chagasi , we observed a decrease of 116 kDa fragment, appearance of a 89 kDa fragment and a decreasing of a 24 kDa fragment. In the cells under CPT induction similar results were found, except a decreasing of a 24 kDa when infected by amastigote. Evaluating the Leishmania (L.) infantum Heat Shock Protein of 83 kDa, as a possible factor that interferes in the apoptosis process, we observed that a phagocytosis of Escherichia coli (M15) bacteria with a HSP83 gene within a plasmid expressing this protein induced by isopropyl &#946; - D- tiogalactopiranosideo (IPTG), considerably diminished apoptosis in these cells even when induced by CPT or rTNF. Our data show that Leishmania (L.) chagasi infection in J774 macrophages in vitro notoriously interferes in the apoptosis process affecting several intracellular pathways involved in both extrinsic and intrinsic pathways, more prominently with promastigote in this macrophage cell lineage.