Diversos estudos em modelo animal indicam claramente que a transferência materna de IgG alérgeno-específica previne a resposta alérgica na prole. A presença de alérgeno no leite também mostrou proteger a prole por induzir tolerância oral. Neste estudo, analisamos em humanos a transferência materna de alérgenos dos ácaros Der p e Blo t e anticorpos específicos durante a gestação e amamentação em uma coorte de 91 amostras pareadas de soro materno, colostro e cordão umbilical. Demonstramos que tanto o Der p 1 como Blo t 5 podem estar presentes em amostras de colostro e cordão umbilical e identificamos a atopia materna como fator crítico para o aumento de IgG específica nestes compartimentos. No cordão umbilical, a maior diferença entre mães atópicas e não atópicas foi para a IgG4. A concentração de Der p 1 e Blo t 5 não apresentou correlação com o estado atópico materno ou concentração de anticorpos específicos. No colostro, apenas para o alérgeno Der p 1 a concentração foi maior em mães atópicas e apresentou correlação com os níveis de anticorpos IgG específicos. / Experimental data in rodents indicate that maternal allergen-specific IgG prevents allergic sensitization in the progeny. Airborne allergens in maternal milk also protects breastfeed mice by oral tolerance induction. In this study, we assessed in humans whether Der p and Blo t allergens and specific antibodies were transferred during pregnancy and breastfeeding in a cohort of 91 paired samples of maternal blood, colostrums and umbilical cord blood. Our study indicates that Der p 1 and Blo t 5 can be found in both, cord blood and colostrums, and identifies maternal atopy as a critical factor for increased levels of allergen-specific IgG in these compartments. In the cord blood the biggest difference between atopic and non atopic mothers was observed for IgG4. Der p 1 and Blo t 5 concentrations were not correlated with maternal atopic status nor specific-antibodies levels. In colostrums, only the concentration of Der p 1 was higher in atopic mothers and correlated with colostrums specific-IgG levels.

Orientadores: Irene Gyongyver Heidemarie Lorand-Metze, Maria Marluce Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:19:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_ElianeBorgesde_D.pdf: 1180810 bytes, checksum: c8a02911daa5432a6afbf77323a7f25f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Recém-nascidos de mulheres portadoras do vírus HIV, durante a gestação são expostos a algumas drogas e citocinas que podem alterar o desenvolvimento de seu sistema imunológico e influenciar a resposta imune dessas crianças às infecções e vacinas. Nós analisamos as subpopulações dos linfócitos, a maturação dos linfócitos B e o perfil de citocinas em recém-nascidos (RNs) a termo de mães HIV+ que foram tratadas com antirretroviral (ARV) e comparamos os resultados com um grupo controle de recém-nascidos não expostos ao HIV. Em estudo prospectivo, analisamos 36 mulheres HIV+ e seus RNs expostos e 15 mulheres não infectadas com seus RNs saudáveis. As características hematológicas e o perfil de citocinas das mães foram obtidos quando elas estavam na 35ª semana de gestação. Os linfócitos foram analisados por citometria de fluxo. As dosagens de IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IFN-g e TNF-a das mães e dos RNs foram realizadas por ELISA, em sobrenadantes de cultura de células mononucleares, sem estímulo e estimuladas por BCG e PHA. Após um ano de acompanhamento nenhuma das crianças expostas que participou deste estudo foi infectada pelo HIV. Os linfócitos B do sangue de cordão umbilical estavam aumentados nos RNs expostos, com aumento da subpopulação CD19+/CD5+. Em RNs expostos de mães usuárias de drogas ilícitas, este aumento foi ainda mais significativo. O tabagismo materno estava associado à diminuição de células T CD4+ do sangue de cordão. Os linfócitos B dos RNs expostos apresentaram correlação inversa com níveis de IL-7 e IL-4 do sangue de cordão. A produção de citocinas dos RNs e de suas mães foi similar, com exceção do IFN-g e do TNF-a que estavam elevados nas mães HIV+, especialmente nas usuárias de drogas ilícitas. Portanto, a ontogenia do sistema imune dos RNs foi influenciada pela infecção materna pelo HIV e o tratamento com ARV, assim como, o uso de drogas ilícitas e o tabagismo. Todos estes fatores podem influenciar a eficácia da vacinação durante o período neonatal. / Abstract: Children born to HIV+ mothers are exposed intra-utero to several drugs and cytokines that can modify the developing immune system, and influence the newborn's immune response to infections and vaccines. We analyzed cord blood lymphocyte subsets, B lymphocyte maturation and cytokine profile in term newborns of HIV+ mothers using ARV and compared them to normal newborns. In a prospective study, 36 mother-child pairs from HIV+ mothers and 15 HIV-uninfected mother-pairs were studied. Hematological features and cytokine profiles of mothers at 35 weeks of pregnancy were also examined. Lymphocytes were analyzed by flow cytometry. The non-stimulated, as well as BCG and PHA stimulated production of IL-2, IL-4, IL-7, IL-10, IL-12, IFN-g and TNF-a, from mothers and infants were quantified using ELISA. After a year of monitoring revealed that none of the exposed children who participated in the study were infected with HIV. In cord blood, B lymphocytes were increased in HIV-exposed newborns, with increase of CD19+/CD5+ lymphocytes. In children of HIV+ hard drug using mothers, also immature B-cells were increased. Maternal smoking was associated with a decrease of cord T CD4+ cells. Cord blood B lymphocytes showed an inverse correlation with cord blood IL-7 and IL-4 levels. Cytokine levels were similar in infants and their mothers except for IFN-g and TNF-a that were higher in HIV+ mothers, especially in drug abusing ones. The immune system ontogeny of term newborns is influenced by mother's HIV infection, ARV treatment as well as drug abuse and smoking. All these factors may influence effectiveness of neonatal vaccination. / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T18:40:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bizzetto_Renata_M.pdf: 5388324 bytes, checksum: 8344246752d17626b3442925d28a5b44 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O transplante com células tronco hematopeticas é a única opção curativa para os pacientes com síndromes de insuficiência medular hereditárias (SIMH). O sangue de cordão umbilical é uma fonte alternativa de células tronco hematopoéticas para o transplante alogênico. Pacientes e métodos: Este estudo retrospectivo e multicêntrico é baseado em dados do registro Eurocord sobre pacientes com SIMH, excluindo os paciente com anemia de Fanconi, que receberam transplante de sangue de cordão umbilical (TCU). Resultados: Sessenta e quatro pacientes com SIMH foram transplantados com doador aparentado (n=20) e não aparentado (n=44). Os diagnósticos foram: anemia de Blackfan Diamond (21 pacientes), trombocitopenia amegacariocítica congênita (16 pacientes), disqueratose congênita (8 pacientes), síndrome de Shwachman-Diamond (2 pacientes), neutropenia congênita grave (16 pacientes) e SIMH inclassificável (1 paciente). No grupo aparentado, 19 pacientes receberam transplante HLA compatível do irmão. A mediana de células nucleadas totais (CNT) infundidas foi 5x107/kg. A incidência cumulativa da recuperação de neutrófilos em 60 dias foi 95%, 2 pacientes tiveram doença do enxerto contra hospedeiro (DECH) grau II a IV e a incidência cumulativa em 2 anos de DECH crônica foi 11%. A sobrevida global (SG) em 3 anos foi 95%. No grupo não aparentado, 86% dos pacientes receberam enxerto com incompatibilidade HLA e 3 receberam duas unidades de cordão umbilical. A mediana de CNT infundidas foi 6,1x107/kg. A incidência cumulativa da recuperação de neutrófilos em 60 dias foi 55%; de DECH grau II a IV em 100 dias foi 24% e de DECH crônica em 2 anos foi 53%. A SG em 3 anos foi 61%; melhor SG foi associada com idade < 5 anos (p=0,01) e número CNT infundidas ? 6.1x107/kg (p=0,03). Conclusão: em pacientes com SIMH, TCU aparentado é associado com excelentes resultados enquanto no TCU não aparentado o aumento no número de células promove melhoresresultados / Abstract: Background: Allogeneic stem cell transplantation is the only curative option for patients with hereditary bone marrow failure syndromes (HBMFS). Umbilical cord blood (UCB) cells is an alternative stem cell source for allotransplantation. Design and Methods: This multicenter, retrospective study is based on data reported to Eurocord Registry about patients with HBMFS other than Fanconi anemia who received UCB transplantation (UCBT). Results: Sixty four patients with HBMFS were transplanted from related (n=20) or unrelated donors (n=44). Diagnoses were: Diamond-Blackfan anemia (21 patients), congenital amegakaryocytic thrombocytopenia (16 patients), dyskeratosis congenita (8 patients), Shwachman-Diamond syndrome (2 patients), severe congenital neutropenia (16 patients) and unclassified HBMFS (1 patient). In the related group, all patients but one received an HLA-matched sibling transplant. Median total nucleated cells (TNC) infused was 5x107/kg. Cumulative incidence (CI) of 60-day neutrophil recovery was 95%, 2 patients had grade II-IV acute graft-versus-host disease (GVHD), while the 3-year CI of chronic GVHD was 11%. The 3-year overall survival (OS) was 95%. In the unrelated group, 86% of patients had HLA mismatched grafts and 3 received two UCB units. Median TNC infused was 6.1x107/kg. Day-60 CI of neutrophil recovery was 55%; 100-day CI of grade II-IV acute GVHD was 24%, while 2-year CI of chronic GVHD was 53%. The 3-year OS was 61%; better OS was associated with age < 5 years (p=0.01) and a number of TNC infused ? 6.1x107/kg (p=0.03). Conclusion: in patients with HBMFS, related UCBT is associated with excellent outcomes while in unrelated UCBT increasing cell dose might provide better results / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Introduction: Gestational Hypertensive Syndromes (SHG) continue to be a major cause of direct morbidity and mortality in Brazil, with a high proportion in the North. Even with several health policies created to try to curb maternal morbidity and mortality, scientific data indicate that there is still a need for scientific studies, especially histopathological ones. Objective: To evaluate the histopathological changes in human placentas and umbilical cords, of parturients with SHG. Methodology: The research was carried out at the High-risk Maternity Our Lady of Lourdes, Aracaju-SE. The sample consisted of 28 pregnant women with SHG, distributed in 4 groups: Normotensive Pregnant Women, Gestational Hypertension, Chronic Hypertension and the group with Pre-eclampsia, totaling 7 pregnant women per group. The data were analyzed by the statistical program Grad pad prism, with significant data (<0.05), using the one-way Anova and Tukey's multiple comparison test. The placentas and umbilical cords were submitted to 4 different methodologies, beginning with the histological processing - light microscopy, then histopathological analyzes of placentas by Hematoxylin and Eosin - HE, histopathological analyzes of the placentas following the staining technique with Masson and histopathological analyzes of the placentas. placentas following the Coloring Technique - PAS. Results: After analyzing the histological images, it was possible to identify in the placentas of normotensive pregnant women the mature and flat decidua with eosinophilic tissue and presence of fibrin, with dense epithelium and intact villi. The chorionic villi presented quite vascularization, with knots and scions. The umbilical cord presented an artery with an intimate and muscular layer of usual thickness. As for the placentas of patients with gestational hypertension, the smooth muscle thickening of the placental vessels, microcalcifications and vessel hyalinization were observed, in addition it was observed aged areas and areas with hyaline degeneration in the villi. In the placentas of pregnant women with chronic hypertension, hyalinization and aging of the villi were found, with microcalcification and hemorrhagic foci. The umbilical cord of pregnant women with chronic hypertension presented thick muscle wall, vessel hyalinization and cell degeneration. In the placentas of pregnant women with mild preeclampsia it was possible to observe intense groupings of degenerated and hyalinized villi. The umbilical cord presented thickening of the muscular layer. The placentas of pregnant women with severe pre-eclampsia were able to observe hyalinization of the villi, severe groupings with focus of calcification and hemorrhagic areas. Finally, it was identified that pregnant women in adulthood acquired SHG; the newborns of pregnant women with chronic hypertension were those that suffered the greatest impact of the syndrome, presenting slight decrease in weight, height, thoracic perimeter and cephalic perimeter. The placentas and umbilical cords of pregnant women with SHG presented structural changes and involvement of the tissue structures when compared to the normotensive pregnant women group. Conclusion: In this sense, it is concluded that the gestational annexes with SHG have structural and cellular changes at the placental and umbilical cord level, chronic hypertension is called attention, the data are conclusive, in addition, the placenta and umbilical cord of pregnant women with SGH, are an inexhaustible source of important scientific production on gestational development, and may contribute actively to the clinical findings of pregnant women and the newborn. / Introdução: As Síndromes Hipertensivas Gestacionais (SHG) continuam sendo uma das principais causas de morbimortalidade direta no Brasil, apresentando proporção elevada nas regiões Norte. Mesmo com diversas políticas de saúde criadas para tentar frear a morbimortalidade materna, os dados científicos apontam que ainda há necessidade de estudos científicos, em especial os histopatológicos. Objetivo: Avaliar as alterações histopatológicas em placentas humanas e cordões umbilicais, de parturientes com SHG. Metodologia: A pesquisa foi realizada na Maternidade de alto risco Nossa Senhora de Lourdes, Aracaju-SE. A amostra foi constituída por 28 gestantes com SHG, distribuídas em 4 grupos dentre eles: Gestantes Normotensas, Hipertensa Gestacional, Hipertensa Crônica e o grupo com Pré-eclâmpsia, totalizando 7 gestantes por grupo. Os dados foram analisados pelo programa estatístico Grad pad prism, com dados significativos (<0,05), utilizando o one-way Anova e teste de comparação múltipla de Tukey. As placentas e cordões umbilicais foram submetidos a 4 metodologias distintas, tendo como início o processamento Histológico - microscopia de luz, depois análises histopatológicas das Placentas por Hematoxilina e Eosina - HE, análises histopatológicas das placentas seguindo a técnica de coloração com Masson e análises histopatológica das placentas seguindo a Técnica de coloração - PAS. Resultado: Após análise das imagens histológicas foi possível identificar nas placentas de gestantes normotensas, a decídua madura e plana com tecido eosinófilo e presença de fibrina, com epitélio denso e vilosidades íntegras. As vilosidades coriônicas apresentaram bastante vascularizadas, com nós e brotos sinciciais. O cordão umbilical apresentou artéria com camada intima e muscular de espessuras habituais. Quanto às placentas de pacientes que cursaram com hipertensão gestacional, notou-se o espessamento da camada muscular lisa dos vasos placentários, microcalcificações e hialinização dos vasos, além disso foi observado áreas envelhecidas e áreas com degeneração hialina nas vilosidades. Já nas placentas de gestantes com hipertensão crônica foram encontradas hialinização e envelhecimento das vilosidades, com microcalcificação e focos hemorrágicos. O cordão umbilical de gestante com hipertensão crônica, apresentou a parede muscular espessa, hialinização do vaso e degeneração celular. Já nas placentas de gestantes com pré-eclâmpsia leve foi possível observar agrupamentos intensos de vilosidades degeneradas e hialinizadas. O cordão umbilical apresentou espessamento da camada muscular. As placentas de gestantes com pré-eclâmpsia grave foram possíveis observar hialinização das vilosidades, agrupamentos severos com foco de calcificação e áreas hemorrágicas. Por fim, identificou-se que as gestantes em idade adulta adquiriram SHG; os recém-nascidos de gestantes com hipertensão arterial crônica foram os que sofreram o impacto maior da síndrome, apresentando leve diminuição do peso, estatura, perímetro torácico e perímetro cefálico. As placentas e cordões umbilicais de gestantes com SHG apresentaram mudanças estruturais e acometimento das estruturas teciduais quando comparados ao grupo das gestantes normotensas. Conclusão: Neste sentido, conclui-se que os anexos gestacionais com SHG possuem alterações estruturais e celulares a nível placentário e de cordão umbilical, chama-se atenção a hipertensão crônica, os dados são conclusivos, além disso, a placenta e cordão umbilical de gestantes com SGH, são fonte inesgotável de produção científica importantes sobre o desenvolvimento gestacional, podendo contribuir de forma ativa para os achados clínicos das gestantes e do recém-nascido. / Aracaju

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-03-12T11:29:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marilya Rodrigues Reis - 2014.pdf: 1109545 bytes, checksum: fac0fc99857d0d817f0ba34b20fcb964 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-16T11:47:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marilya Rodrigues Reis - 2014.pdf: 1109545 bytes, checksum: fac0fc99857d0d817f0ba34b20fcb964 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-16T11:47:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marilya Rodrigues Reis - 2014.pdf: 1109545 bytes, checksum: fac0fc99857d0d817f0ba34b20fcb964 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Hypertensive disorders of pregnancy (HDP) and gestational diabetes mellitus (GDM) are leading causes of maternal and fetal-neonatal morbidity and mortality. Their effects are believed to be associated with umbilical cord macroscopic changes. This study aimed to examine the association of umbilical cord macroscopic changes and newborn outcomes in high-risk pregnancies. A descriptive cross-sectional study was conducted in a public maternity hospital affiliated to the Brazilian National Health System (SUS) in the city of Goiânia, central-west Brazil, between January and December 2012. Medical information on high- (HDP and GDM) and normal-risk (control) pregnancy women and their newborns was collected in the postpartum period as well as information on the macroscopic characteristics of the umbilical cord of these infants. A total of 265 umbilical cords were examined. Of these, 126 were from the high-risk pregnancy group (64 of children of mothers with HDP and 62 of those of mothers with GDM) and 139 from the control group (73 HDP and 66 GDM controls). The most common umbilical cord macroscopic changes included true knots and non-central cord insertion in newborns of mothers with HDP and cord less than 35 cm long, true knots, and non-central cord insertion in those of mothers with GDM. Maternal age ≥36 years was significantly associated with single umbilical artery (SUA) (p = 0.03) in the control group. No statistically significant association was found between umbilical cord macroscopic changes and clinical characteristics of newborns of high-risk pregnancy women. / As alterações causadas pelas síndromes hipertensivas da gravidez (SHG) e pelo diabetes mellitus gestacional (DMG) são consideradas causas importantes de morbimortalidade materna e fetal/neonatal, e acredita-se que podem estar relacionadas com as alterações macroscópicas do cordão umbilical. O objetivo deste estudo foi verificar a associação entre as alterações macroscópicas do cordão umbilical, a gestação de alto risco e as repercussões neonatais. Trata-se de um estudo descritivo transversal, desenvolvido em uma maternidade de um Hospital Federal integrado ao Sistema Único de Saúde (SUS) de Goiânia – Goiás (GO), entre o período de janeiro de 2012 à dezembro de 2012. Foram coletados dados clínicos das puérperas com gestação de alto risco (diagnóstico clínico de SHG e DMG) e sem gestação de alto risco (grupo controle) e de seus respectivos neonatos, e dados macroscópicos dos cordões umbilicais dos neonatos das puérperas com e sem gestação de alto risco. Foram estudados 265 cordões umbilicais, destes, 126 correspondem ao grupo de puérperas com gestação de alto risco, tendo 64 puérperas o diagnóstico clínico de SHG e 62 puérperas o diagnóstico clínico de DMG, e 139 correspondem ao grupo controle, 73 constituindo o grupo controle de SHG e 66 o grupo controle de DMG. As alterações macroscópicas mais frequentes do cordão umbilical de puérperas com SHG foram a presença de nós verdadeiros e a inserção não central, e nas puérperas com DMG foram comprimento menor que 35cm, a presença de nós verdadeiros e a inserção não central, em comparação com as puérperas do grupo controle. A idade materna maior ou igual a 36 anos no grupo controle apresentou relação estatisticamente significante com a artéria umbilical única (AUU) (p=0,03). Não encontramos relação estatisticamente significante entre as condições clínicas dos neonatos de puérperas do grupo de gestação de alto risco com as alterações macroscópicas do cordão umbilical.

A inserção de fatores de transcrição conhecidos em células somáticas é capaz de reprograma-las levando a um estágio de pluripotência, gerando células-tronco pluripotentes induzidas (iPS). A utilização destas células na medicina regenerativa tem grande potencial tanto na medicina humana quanto na veterinária, e a influência da origem da célula somática utilizada na geração de iPS é discutida atualmente. Mamíferos domésticos, como por exemplo o equino, são bons modelos para o estudo para medicina humana e veterinária, com destaque para terapia celular utilizando células mesenquimais em lesões ortopédicas e articulares. Tendo como hipótese que células equinas com diferentes origens apresentam potenciais de indução à pluripotência e capacidade de diferenciação in vitro variáveis; esta proposta tem como objetivo gerar células iPS equinas obtidas através da transdução viral dos fatores de transcrição OSKM humanos ou murinos em fibroblastos (eFibro) adultos e células mesenquimais derivadas de tecido adiposo (eAdMSC), medula óssea (eMO) e tecido de cordão umbilical (etCU). Foram isoladas e cultivadas 4 linhagens de células do tecido de cordão umbilical, 3 linhagens de fibroblastos equinos, 3 linhagens de células mesenquimais de tecido adiposo equinas e 2 linhagens de células de medula óssea equina. Essas células tiveram seu tempo de duplicação celular calculado em horas (eMO 61,3&plusmn;15; etCU 53,8&plusmn;5; eFIBRO 27±2; eAdMSC 18,2&plusmn;4,5) e foram caracterizadas por diferenciação condrogênica, osteogênica e audiogênica e por imunofenotipagem. A partir destas células foram produzidas 85 linhagens iPS equinas (eiPS- 30 linhagens derivadas de fibroblasto, 33 linhagens derivadas de células de tecido adiposo, 21 linhagens derivadas de células de tecido de cordão umbilical com os fatores humanos e 1 linhagem de derivada de células de tecido adiposo com os fatores murinos). Testes de detecção de fosfatase alcalina e OCT4 foram realizados para células eiPS obtidas de cada linhagem e as células eiPS derivadas de tecido adiposo e fibroblastos foram positivas para detecção de NANOG, TRA1-60, TRA1-81 e as células eiPS derivadas de eAdMSC foram positivas para detecção de SSEA-1. As células eiPS derivadas de cada tipo celular geraram corpos embrióides, que posteriormente foram dissociados para teste de diferenciação espontânea in vitro. Os resultados mostram que células equinas podem ser mais facilmente reprogramadas com fatores humanos quando comparadas com os fatores murinos (P&lt;0.05). Enquanto os fatores murinos produziram apenas uma linhagem de células iPS derivada de eAdMSC, os fatores de reprogramação humanos foram capazes de produzir variadas linhagens de células iPS, sendo a formação de colônias mais eficiente para células derivadas de eAdMSC (322, P&lt;0.01) do que para células derivadas de eFibro (65) e etCU (58), que não diferiram (P=0.95), e não foi possível produzir células eiPS a partir de eMO. Usando o sistema de indução à pluripotência padronizado em nosso laboratório, a utilização de fatores humanos na reprogramação direta gera uma maior eficiência na produção de células iPS equinas quando comparados com fatores murinos. No nosso conhecimento, este é o primeiro relato de células eiPS produzidas unicamente dependentes de bFGF, sem necessidade de adição de LIF no meio de cultivo. / The insertion of known transcription factors into somatic cells is capable of reprogramming them into a pluripotency stage, generating induced pluripotent stem cells (iPS). The influence of the origin of the somatic cell used in the generation of iPS is currently discussed, and the use of these cells in regenerative medicine has great potential in both human and veterinary medicine. Domestic mammals, such as the equine are great models for the study of human and veterinary medicine, highlighting cell therapy using mesenchymal cells in orthopedic and articular injuries. Hypothesizing that equine cells derived from different tissues show variable pluripotency induction potentials and in vitro differentiation capacity, depending on the source of derivation; this proposal aims to generate equine iPS cells obtained by viral transduction of human or murine OSKM transcription factors in adult fibroblasts (eFibro) and mesenchymal cells derived from adipose tissue (eAdMSC), bone marrow(eMO), umbilical cord tissue (etCU). Four umbilical cord tissue cell lines, three equine fibroblast cells lines, three equine adipose tissue mesenchymal cell lines and 2 equine bone marrow cell lines were isolated and cultured. These cells had their doubling time calculated in hours (eMO 61.3 &plusmn; 15, etCU 53.8 &plusmn; 5, eFIBRO 27 &plusmn; 2, and ADMSC 18.2 &plusmn; 4.5) and were characterized by chondrogenic, osteogenic and adipogenic and by immunophenotyping. From these cells, 85 equine iPS (eiPS) cell lines were produced (30 fibroblast-derived cell lines, 33 cell lines derived from adipose tissue cells, 21 cell lines derived from umbilical cord tissue cells, with human factors and 1 cell line derived from eAdMSC using murine factors). Alkaline phosphatase and OCT4 detection tests were performed on eiPS cells obtained from each cell line and eAdMSC and eFibro derived iPS cells were positive for the detection of NANOG,TRA1-60, TRA1-81 and eiPS derived from eAdMSC were positive for SSEA-1 detection. Embryonic bodies, which were later dissociated for spontaneous differentiation test in vitro were derived from each cell type. Results show that equine cells can be more easily reprogrammed with human factors when compared to murine factors (P&lt;0.05). While murine factors produced only one eiPS cell line derived from eAdMSC, human reprogramming factors were able to produce multiple eiPS cell lines, and colony formation was more efficient for cells derived from eAdMSC (322 P &lt;0.01) than for cells derived from eFibro (65) and etCU (58), which did not differ (P = 0.95) and It has not yet been possible to produce iPS cells from the eMO cell lines. Using the induction system standardized in our laboratory, the use of human factors in direct reprogramming results in greater efficiency in the production of equine iPS cells when compared to murine factors. To our knowledge, this is the first report of eiPS cells produced solely dependent on bFGF, without the need for addition of LIF in the culture medium.

Estudos envolvendo a utilização do sangue de cordão umbilical foram intensificados na última década, devido ao grande potencial que estas possuem nas pesquisas de transplantes e ontogenia celular. A investigação dos métodos para a purificação e caracterização dessas células em diferentes animais pode aumentar a utilização destes como modelos experimentais para uma variedade de propostas científicas e terapêuticas. Para desenvolver a caracterização das células de sangue de cordão umbilical foram utilizadas 20 amostras oriundas de fetos de com idades compatíveis ao segundo e terceiro terço de gestação. Estas amostras foram processadas de duas formas distintas. A primeira forma visou às células presentes na camada leucocitária total, a segunda visou as células com densidade menor que 1077 separadas pelo Ficoll Paque. Os “pellets” resultantes foram processados para posterior observação por microscopia eletrônica de transmissão. Foram constatadas a presença de células granulares (basófilos, eosinófilos e neutrófilos) e agranulares (células bláticas, precursores eosinofílicos e linfócitos) em diferentes estágios de maturação em ambos os grupos e também células com características morfológicas compatíveis a apoptose. / Studies involving the use of umbilical cord blood were intensified in the last decade, due to its huge potential for transplant research and the ontogeny of leucocytes cells. The investigation of the methods to purify and characterize these cells in different animals are a base for experimental models for a variety of scientific and therapeutic proposals. To develop the characterization of the umbilical cord cells, twenty samples of fetal were collected. The fetal were in the second and third thirds of the gestation. These samples were processed in two distinct forms. The first form, studied the cells in the buffet coat. The second, studied the cells with density less than, 1,077 separated by the Ficoll Paque. The resulting pellets were processed for later observation by electronic microscopy transmission. The presence of granular and non granular cells were detected in different maturation stages in both groups and also morphological compatible cells with apoptosis.

Master of Science in Biomedical Sciences / Department of Anatomy and Physiology / Mark L. Weiss / Mesenchymal stromal cells (MSCs) derived from the umbilical cord (UC-MSCs) have therapeutic applications and are studied to understand their potential uses and immunomodulatory properties. Research must identify good manufacturing process (GMP) compliant methods to isolate and expand UC-MSCs. In addition, MSCs metabolism characteristics in culture are unknown, warranting further investigation. Viability of MSCs decreases after cryopreservation, which is detrimental to clinical translation. Previously published methods used to isolate MSCs from the umbilical cord included open dissection steps and xenogeneic components. Here, I developed improved methods by eliminating dissection which reduces contamination risks. Instead, I used the whole umbilical cord and Miltenyi dissociator tubes to mechanically and enzymatically dissociate cells in a closed system. Xenogeneic components were decreased by using medium containing pooled human platelet lysate instead of fetal bovine serum. The cell numbers isolated from umbilical cord averaged 2.68 x 10⁵ per cm, which represents greater than 20 fold improvement over the previous method. Moreover, expansion cell numbers were increased using 10% pooled human platelet lysate supplemented media. The UC-MSCs generated here met the International Society of Cell Therapy (ISCT) definition of MSCs. Metabolism characteristics of MSCs indicated that glucose was the critical metabolite, maintaining cells longer in culture than glutamine. Cell death followed depletion of glucose, too. Finally, the average viability after thawing cryopreserved MSCs was more than 95%, higher than previous methods. The improvements I introduced to our methodology could speed clinical translation of MSCs as an allogeneic cellular therapy

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Umbilical cord blood (UCB) is used as a source of haematopoietic stem cells (HSCs) for transplantation but shows defective homing to the bone marrow niche and delayed haematological reconstitution. Following transplantation, HSCs will home to the bone marrow in response to the CXCL12 chemokine, adhere to the bone marrow sinusoidal endothelial cells and then migrate into and lodge in bone marrow niches. In addition to CXCR4, a variety of molecules have been described as being important in these processes. In this laboratory, junctional adhesion molecule-A (JAM-A) was shown to be expressed on human UCB CD133⁺/CD34⁺ cells and regulated by hypoxia. In this thesis, further phenotypic studies show that this molecule is most highly expressed on human CD41a⁺ megakaryocytes and CD14⁺ monocytes/macrophages in UCB. JAM-A was also found to be expressed on all human UCB CD133⁺ cells, which have been shown by others to encompass the HSCs and early myeloid-lymphoid precursors and on the majority of CD34⁺ haematopoietic progenitor cells (HPCs). While it is also present on bone marrow sinusoidal endothelium (BMEC), JAM-A is not detected on cultured bone marrow mesenchymal stromal cells (MSCs). JAM-A blockade, silencing and overexpression experiments showed that JAM-A contributes to, but is not solely responsible for, the adhesion of CD34⁺ haematopoietic progenitor cells to IL-1β activated BMEC-60 cells and fibronectin. Lack of significance in cell migration suggested that JAM-A is more likely to act as an adhesion molecule or a regulator of adhesion rather than as a migratory molecule in such cells. Further functional studies using the proximity ligation assay highlight a potential association of JAM-A with CXCR4 and the adhesion molecules, tetraspanin CD82 and integrin β1. Mechanistic studies were commenced to establish if JAMA could modulate CXCR4 signalling following CXCL12 stimulation, but time constraints prevented these from being completed. These preliminary experiments which were carried out first in the Jurkat cell line lacking JAM-A or transduced to express JAM-A, however, suggest that JAM-A may modulate CXCL12-induced Rap1 phosphorylation and ERK1/2 phosphorylation. The former pathway is important for integrin function and the latter pathway is important in cell adhesion. The results described here, although requiring finalisation, support the hypothesis that JAM-A acts as an adhesion molecule and also may fine tune CXCR4 and integrin mediated functions on human CD34⁺ cells, thereby potentially regulating engraftment of these cells to the bone marrow niche.