A ciclosporina (CsA) é um agente imunossupressor freqüentemente utilizado na clínica para a prevenção da rejeição ao transplante e no tratamento de doenças auto-imunes. Apesar da ação no sistema imune, o tratamento com CsA apresenta efeitos adversos graves. Múltiplos fatores de confusão na prática clínica, incluindo fatores de risco prévios, diferenças genéticas e de resposta imune dos receptores do órgão dificultam a determinação dos efeitos adversos especificamente relacionados ao tratamento com CsA. A busca por protocolos de imunossupressão eficazes, que não afetem a qualidade de vida dos pacientes conduz a investigação do envolvimento da CsA em doenças vasculares. A doença vascular é uma das principais causas de morbidade e mortalidade entre pacientes transplantados e o tratamento com CsA parece estar envolvido neste evento. O objetivo desta tese foi investigar parâmetros bioquímicos sistêmicos envolvidos em distúrbios vasculares induzidos pelo tratamento crônico com CsA em ratos não-transplantados. Primeiramente, demonstramos que o nosso protocolo de administração de CsA foi capaz de induzir imunossupressão, com diminuição dos níveis séricos de citocinas que medeiam a resposta imunológica (IL-1α, IL-1β e IL-2), sem causar nefro e hepatotoxicidade. Além disso, verificamos um perfil bioquímico coerente com intolerância à glicose, incluindo a diminuição dos níveis séricos de insulina em jejum e alteração do teste de tolerância à glicose, sugerindo o desenvolvimento de um perfil de diabetes em ratos tratados com CsA 15 mg/kg. O tratamento com CsA também aumentou os níveis de homocisteína total (tHcy), um fator de risco para doenças cardiovasculares. Os níveis de fibrinogênio no plasma, o número de plaquetas, os níveis séricos de triglicérides, colesterol e VLDL também aumentaram com o tratamento de CsA 15 mg/kg. Além disso, demonstramos que a atividade ecto-nucleotidásica sobre nucleotídeos de adenina em soro foi inibida pelo tratamento com CsA. Ratos tratados com CsA apresentaram uma diminuição na hidrólise de ATP, ADP e AMP em soro, além de aumento dos níveis plasmáticos de ADP e redução dos níveis de adenosina (ADO). Enquanto os níveis de tHcy correlacionaram-se negativamente com a inibição da hidrólise de nucleotídeos e os níveis plasmáticos de ADO, esta correlação foi positiva para os níveis plasmáticos de ADP. Isto sugere que a inibição da atividade ectonucleotidásica pode estar relacionada ao aumento dos níveis séricos de tHcy. Além disso, a análise morfológica de ratos tratados com CsA 15 mg/kg apresentou lesão celular e resposta inflamatória envolvendo o endotélio e a camada íntima da artéria aorta. Em conclusão, as evidências obtidas nesta tese podem ser relevantes para futuros estudos que visam investigar os mecanismos de ação da CsA sobre os distúrbios vasculares que acompanham seu uso. Além disso, contribuímos para a elucidação de um método de quantificação das purinas derivadas da adenina e guanina em plasma e líquor por HPLC. Esta metodologia tem sido amplamente utilizada em amostras de humanos, ratos e camundongos, contribuindo para o esclarecimento dos mecanismos de ação das purinas. / Cyclosporine (CsA) is an immunosuppressive agent frequently used in the clinic for prevention of allograft rejection and for the treatment of autoimmune diseases. Despite its desired action on the immune system, CsA treatment may present serious adverse effects. It is difficult to distinguish, in the clinical setting, a direct effect of CsA treatment from other confounding variables, such as allograft rejection and effects due to other drug therapies. The search for effective immunosuppression protocols which does not affect the quality of life of patients is driving research to investigate the CsA involvement in vascular diseases. Vascular disease is a major cause of morbidity and mortality among transplanted recipients and CsA treatment has been consistently implicated in this event. Here, we investigate systemic biochemical parameters involved in vascular disturbances induced by chronic CsA treatment in non-transplanted rats. Firstly, we demonstrate that our CsA immunosuppressive protocol was able to induce immunosuppression by decreasing the serum levels of cytokines that mediate immunological responses (IL-1α, IL-1β and IL-2) without causing nephro and hepatotoxicity. Moreover, we demonstrate biochemical profile coherent with glucose intolerance, including decreased fasting serum insulin levels and altered glucose tolerance test, suggesting the development of a framework straight to diabetes on CsA 15 mg/kg treated group. CsA treatment also increased serum total homocysteine (tHcy) concentration, an important and independent risk factor for cardiovascular diseases. Plasma fibrinogen levels, platelet number, serum triglycerides, cholesterol and VLDL were also increased by CsA 15 mg/kg treatment. Also, we showed that ectonucleotidase activities on adenine nucleotides in serum were inhibited by CsA treatment. CsA treated rats showed a decrease in serum ATP, ADP and AMP hydrolyzes, and increased ADP and decreased ADO plasma levels. THcy levels correlated negatively with the inhibition of nucleotides hydrolyzes and ADO plasma levels, and positively with ADP plasma levels. These correlations suggest that the inhibition of serum ecto-nucleotidase activities could be related to the increase of serum tHcy levels. In addition, morphological evaluation of CsA 15 mg/kg treated rats exhibited cell injury and inflammatory response involving the endothelium and the intimal layer of aorta artery. In conclusion, the evidences obtained in this thesis may be relevant for future studies that aim to investigate the mechanisms of action of CsA on vascular disturbances that accompany patients under immunosuppressive therapy with CsA. In addition, we contribute to the elucidation of a method for quantification of adenine- and guanine-based purines in plasma and cerebrospinal fluid by HLPC. This methodology has been widely used in human, mice and rats samples, contributing to the elucidation of the mechanisms of action of purines.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-graduação em Engenharia Mecânica, Florianópolis, 2002. / Made available in DSpace on 2012-10-20T08:55:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 273652.pdf: 7391757 bytes, checksum: 5cd04ad621dec836db72ba163efd27a5 (MD5) / O presente trabalho é resultado do encontro do desafio apresentado pelo estudo de processos de fabricação novos e ainda não tão vastamente difundidos, como é o caso do laser, com a necessidade da empresa Nano Endoluminal S.A. de avaliar as novas possibilidades que surgiriam com o uso desta fonte de energia na fabricação de precisão, visando a confecção de dispositivos médicos endoluminais. Assim sendo estabeleceu-se como objetivos para este trabalho de mestrado um estudo teórico dos conceitos básicos da Amplificação de Luz por Emissão Estimulada de Radiação (LASER), envolvendo o fenômeno, o equipamento, suas principais aplicações e processos industriais, e um estudo prático do uso desta ferramenta na confecção de próteses, catéteres e dispositivos específicos, de acordo com as necessidades expostas pela empresa conveniada. O estudo prático começou pelo corte de chapas finas de aço inoxidável, visando a obtenção de subsídios para a avaliação das possibilidades e dificuldades envolvidas na confecção de stents. Na continuidade estuda-se a furação de filmes de ptfe. Esta necessidade surgiu de uma inovação em um projeto de endoprótese vascular cujas características desejadas seriam difíceis de serem obtidas por processos mecânicos, apontando o laser como uma possível ferramenta alternativa. E por fim, a terceira aplicação, objeto de experimentação, foi a soldagem, motivada pelo problema da união de arames de NiTi, um antigo e recorrente problema entre os fabricantes de endopróteses vasculares. Os resultados obtidos satisfizeram à proposta do estudo, trazendo uma nova ferramenta, que já apresenta influência em decisões de projeto e processo, trouxe um novo campo de atuação e modificou consideravelmente a visão e atitude frente às possibilidade dos processos de fabricação vigentes. Este trabalho contou com o apoio da empresa, e uma parceria com o Instituto de Fabricação (Institut für Fertigung - IFF) da Universidade Técnica de Ilmenau (TU-Ilmenau), na Alemanha, onde foram realizados os experimentos envolvendo o corte a laser e a revisão bibliográfica.

Resumo: O Acidente Vascular Cerebral e uma das principais causas de morte e a principal causa de incapacidade física e mental, com um forte impacto econômico e social. Em aproximadamente 40% dos pacientes ocorrem sequelas motoras, de linguagem e distúrbios da deglutição. O objetivo deste estudo e avaliar a utilização de um programa computadorizado em pacientes pos-Acidente Vascular Cerebral Isquêmico quanto à probabilidade de pneumonia. Metodologia: estudo prospectivo e transversal realizado em Hospital Universitário de Curitiba no período de marco de 2010 a agosto de 2012. Após a confirmação do Acidente Vascular Cerebral Isquêmico por Tomografia Axial Computadorizada, foram realizadas as avaliações clinica e nasolaringofibroscopica da deglutição ate 72 horas do inicio dos sintomas. Todos os pacientes receberam orientações fonoaudiologicas pos-Acidente Vascular Cerebral e os dados obtidos foram posteriormente analisados pelo programa computadorizado. Os pacientes receberam acompanhamento medico e fonoaudiologico por três meses. Resultados: Foram avaliados 52 pacientes com idade media de 62,05 ±13,88 anos, sendo 29 (55,8%) do gênero masculino. Dos totais de pacientes, somente três (5,7%) apresentaram pneumonia aspirativa. Estes foram enquadrados pelo programa computadorizado no grupo com probabilidade de pneumonia entre 80% a 100% com outros nove pacientes (somando 23% do total). Outros 32 pacientes (61,7%) apresentaram a probabilidade de pneumonia entre 0% a 19%; cinco pacientes (9,5%), entre 20% a 49%; enquanto três indivíduos (5,7%) ficaram no grupo entre 50% a 79%. Conclusão: O programa computadorizado aumenta a boa correlação com o índice de probabilidade de Pneumonia Aspirativa.

Diferentemente do que ocorre em adultos, fatores que influenciam a sobrevida do enxerto e da criança transplantada são menos conhecidos. A incidência e fatores de risco para complicação vascular foram estudados em 99 pacientes menores de 18 anos com hepatopatia crônica submetidos a transplante hepático de doador falecido, de março de 1995 a novembro de 2009, no Hospital de Clínicas de Porto Alegre / Rio Grande do Sul, Brasil. As variáveis analisadas incluem idade, gênero e peso do doador e receptor, indicação do transplante, escores de gravidade (PELD/MELD), aspectos cirúrgicos, complicações vasculares pós-operatórias e sobrevida. Complicação vascular ocorreu em 19,1%, sendo que a complicação arterial é mais freqüente, ocorre mais precoce e está associada a taxas elevadas de perda do enxerto e óbito do paciente. Alguns fatores de risco foram estatisticamente significativos, dentre eles: veia porta com diâmetro ≤3 mm, razão peso doador/peso receptor, tempo de isquemia prolongado e uso de enxerto na anastomose arterial. A escolha do tratamento depende do momento do diagnóstico, entretanto neste estudo, a revisão da anastomose, trombectomia cirúrgica e retransplante tiveram resultado inferior ao tratamento percutâneo. Redução dos fatores de risco e detecção precoce da complicação vascular são importantes para o sucesso do transplante. / Unlike in adults, risk factors influencing graft and patient survival after liver transplantation in children have not been clearly established. The incidence of and possible risk factors for vascular complications were studied in 99 under-18 patients with chronic liver disease who underwent deceased donor orthotopic liver transplantation between March 1995 and November 2009 at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. The variables analyzed included donor and recipient age, gender, and weight; indication for transplant; relevant severity scores (PELD/MELD); surgical aspects; postoperative vascular complications; and survival. Vascular complications occurred in 19 patients. Arterial events were most common, occurred earlier in the postoperative period, and were associated with high graft loss and mortality rates. On multivariate analysis, the following risk factors were identified: portal vein diameter ≤ 3 mm, donor-to-recipient body weight ratio, prolonged ischemic time, and use of arterial conduits for reconstruction at the site of anastomosis. The choice of treatment depends on the timing of diagnosis; however, in this sample, revision of anastomoses and surgical correction produced outcomes inferior to those obtained with percutaneous angioplasty. Reduction of risk factors and early detection of vascular complications are key to successful transplantation.

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais da Universidade do Extremo Sul Catarinense (UNESC), como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências Ambientais. / The Atlantic Forest biome is a complex assemblage of tropical ecosystems with a unique importance for harboring a representative part of the Brazilian and global biodiversity. Vascular epiphytes, an almost exclusive category of tropical forests, represent approximately 10% of all vascular plants and may achieve more than 25% of the species in countries with this type of formation. The purpose of this study was to carry out a floristic and structural survey of vascular epiphytes, including spatial distribution, in the Serra Furada State Park (SFSP), a conservation unit located in the South of Santa Catarina State, Southern Brazil. Epiphytic species were sampled along seven transects established along an elevation gradient in the SFSP. Each transect comprised five point-centered quadrants, were the nearest tree with a DBH ≥ 10cm was considered as a sample unit. Each tree was further divided into two vertical zones, trunk and crown, where the presence of epiphytes was registered. Additional sampling was performed by a “walking method” across the forest, in order to provide a more complete floristic list. Absolute and relative frequency on trees, trunks and crowns were estimated as structural parameters, and an importance value was then calculated to provide a general species ordination. Diversity and evenness were estimated by the Shannon and Pielou indexes, respectively. Data analysis comprised a chi-square (χ²) test to compare observed and expected frequency on trunks and crowns, a correlation analysis to compare tree size and epiphytic richness, and a correspondence analysis (CA) to detect the spatial patterns of the seven sampled transects. As a result, 115 species of vascular epiphytes were registered, 85 in the phytosociological survey and 30 in the additional walking method in the forest. Orchidaceae was the richest family, with 38 species, followed by Bromeliaceae and Polypodiaceae, with 23 and 14 species, respectively. The most diversified genera, with five or more species, were Vriesea (10), Epidendrum (6), Peperomia (5) and Tillandsia (5). Ecological categories included 94 species (81.73%) of true epiphytes, while the most frequent pollination and dispersion strategies were entomophilous (66.66%) and anemochorous (56.52%), respectively. Species frequency and richness showed significant differences between trunks and crowns, reflecting higher values in the most favorable crown environment. Correlation coefficients showed a significant increase of species richness according to height and DBH of phorophytes. The Shannon index of diversity of the SFSP epiphytic community was 3.81 and the Pielou index of evenness was 0.85. These values indicate a relative high diversity in comparison to other studies carried out in South Brazil. Correspondence analysis indicated three transect groups according to elevation, but most probably influenced by edge effect and stream proximity and distance. Although the number of studies concerning vascular epiphytes is increasing in recent times, the present study greatly contributes to the knowledge of this life-form in Southern Santa Catarina, where epiphytes have been mostly omitted in floristic studies. / O bioma Mata Atlântica é um conjunto complexo de ecossistemas tropicais com importância ímpar para abrigar uma parte representativa da biodiversidade brasileira e mundial. Os epífitos vasculares, uma categoria quase exclusiva das florestas tropicais, representam aproximadamente 10% de todas as plantas vasculares, podendo atingir mais de 25 % das espécies em países com este tipo de formação. O objetivo deste estudo foi realizar levantamento florístico e estrutural de epífitos vasculares, incluindo a distribuição espacial, no Parque Estadual da Serra Furada (PESF), uma unidade de conservação localizada no sul do Estado de Santa Catarina, sul do Brasil. As espécies epifíticas foram amostradas em seis transectos estabelecidos ao longo de um gradiente de altitude no PESF. Em cada transecto foram demarcados cinco pontos quadrantes centrados, sendo consideradas as árvores mais próximas com DAP ≥ 10 cm como uma unidade amostral. Cada árvore foi dividida em duas zonas verticais, fuste e copa, onde a presença de epífitos foi registrada. Amostragem adicional foi realizada pelo método de caminhamento pela floresta, a fim de fornecer uma lista florística mais completa. Foram estimados, como parâmetros estruturais, as frequências absoluta e relativa em árvores, troncos e copas, e o valor de importância, calculados para fornecer uma ordenação das espécies em geral. A diversidade e equabilidade foram estimados pelos índices de Shannon e Pielou, respectivamente. A análise dos dados incluiu um teste quiquadrado (χ²) para comparar a frequência observada e a esperada em troncos e copas, uma análise de correlação para comparar o tamanho da árvore e a riqueza de epífitos, e uma análise de correspondência (AC) para detectar os padrões espaciais dos seis locais amostrados. Como resultado, 115 espécies de epífitos vasculares foram registrados, 85 no levantamento fitossociológico e 30 no método de caminhamento na floresta. Orchidaceae foi a família mais rica, com 38 espécies, seguido de Bromeliaceae e Polypodiaceae, com 23 e 14 espécies, respectivamente. Os gêneros mais diversos, com cinco ou mais espécies, foram Vriesea (10), Epidendrum (6), Peperomia (5) e Tillandsia (5). As categorias ecológicas incluiram 94 espécies (81,73%) de holoepífitos verdadeiros, enquanto que as estratégias de polinização e dispersão mais frequentes foram entomofilia (66,66%) e anemocoria (56,52%), respectivamente. A frequência e riqueza de espécies mostraram diferenças significativas entre fustes e copas, com valores mais elevados na copa, apontando como ambiente favorável. Os coeficientes de correlação mostraram aumento significativo da riqueza de espécies de acordo com a altura e DAP de forófitos. O índice de diversidade de Shannon da comunidade epifítica do PESF foi 3,81 e o índice de equabilidade de Pielou foi de 0,85. Estes valores indicam alta diversidade relativa quando comparados com outros estudos realizados no Sul do Brasil. A análise de correspondência indicou três grupos dos transectos de acordo com a altitude, mas a maioria provavelmente influenciada pelo efeito de borda e pela proximidade e distância de córregos. Embora o número de estudos com os epífitos vasculares venham crescendo, o presente estudo contribui efetivamente para o conhecimento desta forma de vida no sul de Santa Catarina, onde os epífitos têm sido quase sempre omitidos em estudos florísticos.

Resumo: Estudos recentes indicam que um nível plasmático elevado de homocisteína é um fator de risco importante e prevalente para doença vascular aterosclerótica coronariana, cerebral e periférica, e para as doenças tromboembólicas. A homocisteína é um aminoácido sulfurado sintetizado em condições fisiológicas a partir da metionina alimentar, sendo utilizado em diversas vias metabólicas. A hiperhomocisteinemia, definida como nível plasmático acima de 15 μmol/L, pode ser atribuída a ocorrência de defeitos genéticos de algumas enzimas do metabolismo da homocisteína, ou à deficiências nutricionais das vitaminas B6, B12 e folato, ou ainda, estar relacionada à outros fatores de risco para aterosclerose, como a obesidade, a dislipidemia, a hipertensão arterial e o hábito tabágico. Foram sugeridos alguns mecanismos biologicamente plausíveis de dano vascular causado pelo aumento da homocisteína no plasma, incluindo agressão direta ao endotélio, indução do estresse oxidativo na parede vascular, alteração na produção de óxido nítrico, alterações das propriedades antitrombóticas e oxidação de lipoproteínas. Com o objetivo de avaliar a freqüência de hiperhomocisteinemia e a sua relação com indicadores relacionados ao estado nutricional (antropométrico, dietético e laboratorial), foi realizado um estudo transversal (cross-sectional ) com 40 pacientes (mediana 61 anos) portadores de doença arterial periférica atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Detectou-se freqüência elevada de pacientes portadores de isquemia crônica de membros (75%), com diagnóstico de sobrepeso (32,5%) ou obesidade (20%), com aumento da adiposidade corporal (100%) e redução da massa muscular (62,5 a 71%), com ingestão insuficiente das vitaminas B6 (85%), B12 (60%) e folato (72,5%)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Recent studies denotes a high plasmatic level of homocysteine is a important factor of risk and prevalent to cardiovascular, cerebral and peripheral atherosclerotic diseases, and to thromboembolic diseases. Homocysteine is a synthesized sulfur amino acid in physiologic conditions derived to alimentary methionine, it has been used in various metabolism ways. Hyperhomocysteinemia, defined as a plasmatic level above 15μ mol/ L, can be attributed to the occurrence of genetics defect of some enzymes from the metabolism of homocysteine, or of the nutritional deficiency of vitamins B6, B12 and folate, or further, be related to the others factors of risk to atherosclerosis such as obesity, dyslipidemia, hypertension and smoking. It was suggested that some plausible biological mechanisms of vascular damage caused by the increase of homocysteine in the plasma, including oxidative stress in the vascular wall, modification in the production of nitric oxide, modification of the antithrombotics proprieties and oxidation of lipoproteins. The main goal to evaluate the frequency of hyperhomocysteinemia and its relation to the indicators related to the nutritional condition (anthropometric, dietetics and laboratorial), it was accomplished a cross-sectional study among 40 patients (median 61 years) with peripheral arterial disease attended at the Hospital of Medicine School in Botucatu (UNESP). It was detected a high frequency of patients with chronic limb ischemia (75%), overweight diagnosis (32,5%) or obesity (20%), increase of corporal adiposity (100%) and reduce of muscular mass (62,5% to 71%), insufficient intake of vitamins B6 (85%), B12 (60%) and folate (72,5%) and exceeding of protein (80%) and methionine (85%), increased serum level of triglyceride (52,5%), total cholesterol (60%), LDL- c (95%) and reduce of HDL-c (60%). Hyperhomocysteinemia was found in 60% of the patients... (Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Winston Bonetti Yoshida / Coorientador: Roberto Carlos Burini / Mestre

A ciclosporina (CsA) é um agente imunossupressor freqüentemente utilizado na clínica para a prevenção da rejeição ao transplante e no tratamento de doenças auto-imunes. Apesar da ação no sistema imune, o tratamento com CsA apresenta efeitos adversos graves. Múltiplos fatores de confusão na prática clínica, incluindo fatores de risco prévios, diferenças genéticas e de resposta imune dos receptores do órgão dificultam a determinação dos efeitos adversos especificamente relacionados ao tratamento com CsA. A busca por protocolos de imunossupressão eficazes, que não afetem a qualidade de vida dos pacientes conduz a investigação do envolvimento da CsA em doenças vasculares. A doença vascular é uma das principais causas de morbidade e mortalidade entre pacientes transplantados e o tratamento com CsA parece estar envolvido neste evento. O objetivo desta tese foi investigar parâmetros bioquímicos sistêmicos envolvidos em distúrbios vasculares induzidos pelo tratamento crônico com CsA em ratos não-transplantados. Primeiramente, demonstramos que o nosso protocolo de administração de CsA foi capaz de induzir imunossupressão, com diminuição dos níveis séricos de citocinas que medeiam a resposta imunológica (IL-1α, IL-1β e IL-2), sem causar nefro e hepatotoxicidade. Além disso, verificamos um perfil bioquímico coerente com intolerância à glicose, incluindo a diminuição dos níveis séricos de insulina em jejum e alteração do teste de tolerância à glicose, sugerindo o desenvolvimento de um perfil de diabetes em ratos tratados com CsA 15 mg/kg. O tratamento com CsA também aumentou os níveis de homocisteína total (tHcy), um fator de risco para doenças cardiovasculares. Os níveis de fibrinogênio no plasma, o número de plaquetas, os níveis séricos de triglicérides, colesterol e VLDL também aumentaram com o tratamento de CsA 15 mg/kg. Além disso, demonstramos que a atividade ecto-nucleotidásica sobre nucleotídeos de adenina em soro foi inibida pelo tratamento com CsA. Ratos tratados com CsA apresentaram uma diminuição na hidrólise de ATP, ADP e AMP em soro, além de aumento dos níveis plasmáticos de ADP e redução dos níveis de adenosina (ADO). Enquanto os níveis de tHcy correlacionaram-se negativamente com a inibição da hidrólise de nucleotídeos e os níveis plasmáticos de ADO, esta correlação foi positiva para os níveis plasmáticos de ADP. Isto sugere que a inibição da atividade ectonucleotidásica pode estar relacionada ao aumento dos níveis séricos de tHcy. Além disso, a análise morfológica de ratos tratados com CsA 15 mg/kg apresentou lesão celular e resposta inflamatória envolvendo o endotélio e a camada íntima da artéria aorta. Em conclusão, as evidências obtidas nesta tese podem ser relevantes para futuros estudos que visam investigar os mecanismos de ação da CsA sobre os distúrbios vasculares que acompanham seu uso. Além disso, contribuímos para a elucidação de um método de quantificação das purinas derivadas da adenina e guanina em plasma e líquor por HPLC. Esta metodologia tem sido amplamente utilizada em amostras de humanos, ratos e camundongos, contribuindo para o esclarecimento dos mecanismos de ação das purinas. / Cyclosporine (CsA) is an immunosuppressive agent frequently used in the clinic for prevention of allograft rejection and for the treatment of autoimmune diseases. Despite its desired action on the immune system, CsA treatment may present serious adverse effects. It is difficult to distinguish, in the clinical setting, a direct effect of CsA treatment from other confounding variables, such as allograft rejection and effects due to other drug therapies. The search for effective immunosuppression protocols which does not affect the quality of life of patients is driving research to investigate the CsA involvement in vascular diseases. Vascular disease is a major cause of morbidity and mortality among transplanted recipients and CsA treatment has been consistently implicated in this event. Here, we investigate systemic biochemical parameters involved in vascular disturbances induced by chronic CsA treatment in non-transplanted rats. Firstly, we demonstrate that our CsA immunosuppressive protocol was able to induce immunosuppression by decreasing the serum levels of cytokines that mediate immunological responses (IL-1α, IL-1β and IL-2) without causing nephro and hepatotoxicity. Moreover, we demonstrate biochemical profile coherent with glucose intolerance, including decreased fasting serum insulin levels and altered glucose tolerance test, suggesting the development of a framework straight to diabetes on CsA 15 mg/kg treated group. CsA treatment also increased serum total homocysteine (tHcy) concentration, an important and independent risk factor for cardiovascular diseases. Plasma fibrinogen levels, platelet number, serum triglycerides, cholesterol and VLDL were also increased by CsA 15 mg/kg treatment. Also, we showed that ectonucleotidase activities on adenine nucleotides in serum were inhibited by CsA treatment. CsA treated rats showed a decrease in serum ATP, ADP and AMP hydrolyzes, and increased ADP and decreased ADO plasma levels. THcy levels correlated negatively with the inhibition of nucleotides hydrolyzes and ADO plasma levels, and positively with ADP plasma levels. These correlations suggest that the inhibition of serum ecto-nucleotidase activities could be related to the increase of serum tHcy levels. In addition, morphological evaluation of CsA 15 mg/kg treated rats exhibited cell injury and inflammatory response involving the endothelium and the intimal layer of aorta artery. In conclusion, the evidences obtained in this thesis may be relevant for future studies that aim to investigate the mechanisms of action of CsA on vascular disturbances that accompany patients under immunosuppressive therapy with CsA. In addition, we contribute to the elucidation of a method for quantification of adenine- and guanine-based purines in plasma and cerebrospinal fluid by HLPC. This methodology has been widely used in human, mice and rats samples, contributing to the elucidation of the mechanisms of action of purines.

Estudos morfométricos têm demonstrado uma reação crônica na parede arterial, caracterizada pela hiperplasia intimal secundária à migração e proliferação de células musculares lisas e pela deposição de matriz extracelular após o implante de próteses endoluminais tipo stent. O objetivo deste estudo é analisar o espessamento intimal adjacente ao implante de um stent. Foram estudados 14 suínos de raça mista, com peso inicial de 28 a 33 kg. Sete animais receberam o implante de um stent auto-expansível tipo “Z”, com 3,8 mm de diâmetro, confeccionado em aço inoxidável, na artéria carótida comum direita, sob dissecção direta do vaso. O grupo controle consistiu de outros sete animais que sofreram manipulação arterial, com o sistema introdutor, sem o implante do stent. As artérias carótidas comuns contralaterais não lesadas, dos dois grupos, foram utilizadas como controle. A metodologia do estudo consistiu da análise morfométrica de amostras de tecido arterial, obtidas de um segmento medindo 0,3 cm junto ao segmento distal do stent, quatro semanas após o implante. Os achados morfométricos foram comparados com amostras arteriais oriundas das carótidas lesadas, no grupo controle, e das carótidas contralaterais não lesadas, dos dois grupos. Foi realizado o monitoramento hematimétrico e do perfil lipídico para controle da viscosidade sangüínea e da hipercolesterolemia. A análise estatística foi realizada através do teste de Mann-Whitney e do teste T de Wilcoxon, para amostras não-paramétricas. Os dados foram apresentados como mediana e intervalos entre quartis (percentis 25 e 75). O valor de significância considerado foi de p<0,05. Os resultados demonstraram um maior espessamento intimal no grupo submetido ao implante de stent: a área intimal foi 0,1689 mm2 (0,1224-0,3979), no grupo stent, e, 0,0021 (0,0014-0,0038), no grupo não stent (p=0,008). As áreas luminais e da camada média não apresentaram alterações significativas, entre os dois grupos. Quando os dois grupos foram comparados às suas respectivas artérias carótidas contralaterais, foram encontradas alterações significativas nas mensurações da área intimal e do lúmen arterial. Não houve alterações estatisticamente significativas na área da camada média. Conclui-se que todas as artérias submetidas ao implante do stent apresentaram espessamento intimal, sem alterações na camada média, quatro semanas após o implante de um stent. / Morphometric studies have evidenced a chronic reaction on the arterial wall characterized by intimal hyperplasia secondary to migration and proliferation of smooth muscle cells and by extracellular matrix deposal after stenting. The purpose of this study is to analyze the intimal thickening adjacent to a stent implantation. Fourteen crossbred pigs initially weighing 28 to 33 kg were studied. Seven animals received a stainless steel, autoexpansive “Z” stent-type implantation (diameter = 3.8-mm) on the right common carotid artery under direct vessel dissection. The control group consisted of other seven animals that underwent arterial manipulation by the delivery system without a stent implantation. Uninjured contralateral common carotid arteries of both groups were used as controls. Study methodology included morphometric analysis of arterial tissue samples taken from a 0.3-cm segment along the stent distal segment four weeks after stent placement. Morphometric findings were compared to arterial samples resulting from injured carotids in the control group, and from uninjured contralateral carotids of both groups. Hematimetric and lipid profile monitoring was ordered to evaluate blood viscosity and hypercholesterolemia. Statistical analysis of the morphometric data consisted of unparied Mann-Whitney’s U test and Wilcoxon’s T test for non-parametric data. All data are presented as median and interquartiles range (25 - 75 percentiles). A value of p< .05 was considered significant. The results of this study showed a greater intimal thickening in the group that underwent a stent implantation: intimal area was 0,1689 mm2 (0,1224-0,3979) in the stent group and 0,0021 mm2 (0,0014- 0,0038) in the non stent group (p=.008). No significant changes in luminal area and media layer were identified when both group were compared. When both group were analysed against their respective uninjured normal contralateral carotid arteries significant alterations on intimal and luminal areas were detected. No significant changes in the medial area were detected in either group. In conclusion, a considerable intimal thickening was observed in all carotids submitted to stent implantation and there was no morphometric alterations in the media tunica, four weeks after stent placement.

Diferentemente do que ocorre em adultos, fatores que influenciam a sobrevida do enxerto e da criança transplantada são menos conhecidos. A incidência e fatores de risco para complicação vascular foram estudados em 99 pacientes menores de 18 anos com hepatopatia crônica submetidos a transplante hepático de doador falecido, de março de 1995 a novembro de 2009, no Hospital de Clínicas de Porto Alegre / Rio Grande do Sul, Brasil. As variáveis analisadas incluem idade, gênero e peso do doador e receptor, indicação do transplante, escores de gravidade (PELD/MELD), aspectos cirúrgicos, complicações vasculares pós-operatórias e sobrevida. Complicação vascular ocorreu em 19,1%, sendo que a complicação arterial é mais freqüente, ocorre mais precoce e está associada a taxas elevadas de perda do enxerto e óbito do paciente. Alguns fatores de risco foram estatisticamente significativos, dentre eles: veia porta com diâmetro ≤3 mm, razão peso doador/peso receptor, tempo de isquemia prolongado e uso de enxerto na anastomose arterial. A escolha do tratamento depende do momento do diagnóstico, entretanto neste estudo, a revisão da anastomose, trombectomia cirúrgica e retransplante tiveram resultado inferior ao tratamento percutâneo. Redução dos fatores de risco e detecção precoce da complicação vascular são importantes para o sucesso do transplante. / Unlike in adults, risk factors influencing graft and patient survival after liver transplantation in children have not been clearly established. The incidence of and possible risk factors for vascular complications were studied in 99 under-18 patients with chronic liver disease who underwent deceased donor orthotopic liver transplantation between March 1995 and November 2009 at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. The variables analyzed included donor and recipient age, gender, and weight; indication for transplant; relevant severity scores (PELD/MELD); surgical aspects; postoperative vascular complications; and survival. Vascular complications occurred in 19 patients. Arterial events were most common, occurred earlier in the postoperative period, and were associated with high graft loss and mortality rates. On multivariate analysis, the following risk factors were identified: portal vein diameter ≤ 3 mm, donor-to-recipient body weight ratio, prolonged ischemic time, and use of arterial conduits for reconstruction at the site of anastomosis. The choice of treatment depends on the timing of diagnosis; however, in this sample, revision of anastomoses and surgical correction produced outcomes inferior to those obtained with percutaneous angioplasty. Reduction of risk factors and early detection of vascular complications are key to successful transplantation.

Estudos morfométricos têm demonstrado uma reação crônica na parede arterial, caracterizada pela hiperplasia intimal secundária à migração e proliferação de células musculares lisas e pela deposição de matriz extracelular após o implante de próteses endoluminais tipo stent. O objetivo deste estudo é analisar o espessamento intimal adjacente ao implante de um stent. Foram estudados 14 suínos de raça mista, com peso inicial de 28 a 33 kg. Sete animais receberam o implante de um stent auto-expansível tipo “Z”, com 3,8 mm de diâmetro, confeccionado em aço inoxidável, na artéria carótida comum direita, sob dissecção direta do vaso. O grupo controle consistiu de outros sete animais que sofreram manipulação arterial, com o sistema introdutor, sem o implante do stent. As artérias carótidas comuns contralaterais não lesadas, dos dois grupos, foram utilizadas como controle. A metodologia do estudo consistiu da análise morfométrica de amostras de tecido arterial, obtidas de um segmento medindo 0,3 cm junto ao segmento distal do stent, quatro semanas após o implante. Os achados morfométricos foram comparados com amostras arteriais oriundas das carótidas lesadas, no grupo controle, e das carótidas contralaterais não lesadas, dos dois grupos. Foi realizado o monitoramento hematimétrico e do perfil lipídico para controle da viscosidade sangüínea e da hipercolesterolemia. A análise estatística foi realizada através do teste de Mann-Whitney e do teste T de Wilcoxon, para amostras não-paramétricas. Os dados foram apresentados como mediana e intervalos entre quartis (percentis 25 e 75). O valor de significância considerado foi de p<0,05. Os resultados demonstraram um maior espessamento intimal no grupo submetido ao implante de stent: a área intimal foi 0,1689 mm2 (0,1224-0,3979), no grupo stent, e, 0,0021 (0,0014-0,0038), no grupo não stent (p=0,008). As áreas luminais e da camada média não apresentaram alterações significativas, entre os dois grupos. Quando os dois grupos foram comparados às suas respectivas artérias carótidas contralaterais, foram encontradas alterações significativas nas mensurações da área intimal e do lúmen arterial. Não houve alterações estatisticamente significativas na área da camada média. Conclui-se que todas as artérias submetidas ao implante do stent apresentaram espessamento intimal, sem alterações na camada média, quatro semanas após o implante de um stent. / Morphometric studies have evidenced a chronic reaction on the arterial wall characterized by intimal hyperplasia secondary to migration and proliferation of smooth muscle cells and by extracellular matrix deposal after stenting. The purpose of this study is to analyze the intimal thickening adjacent to a stent implantation. Fourteen crossbred pigs initially weighing 28 to 33 kg were studied. Seven animals received a stainless steel, autoexpansive “Z” stent-type implantation (diameter = 3.8-mm) on the right common carotid artery under direct vessel dissection. The control group consisted of other seven animals that underwent arterial manipulation by the delivery system without a stent implantation. Uninjured contralateral common carotid arteries of both groups were used as controls. Study methodology included morphometric analysis of arterial tissue samples taken from a 0.3-cm segment along the stent distal segment four weeks after stent placement. Morphometric findings were compared to arterial samples resulting from injured carotids in the control group, and from uninjured contralateral carotids of both groups. Hematimetric and lipid profile monitoring was ordered to evaluate blood viscosity and hypercholesterolemia. Statistical analysis of the morphometric data consisted of unparied Mann-Whitney’s U test and Wilcoxon’s T test for non-parametric data. All data are presented as median and interquartiles range (25 - 75 percentiles). A value of p< .05 was considered significant. The results of this study showed a greater intimal thickening in the group that underwent a stent implantation: intimal area was 0,1689 mm2 (0,1224-0,3979) in the stent group and 0,0021 mm2 (0,0014- 0,0038) in the non stent group (p=.008). No significant changes in luminal area and media layer were identified when both group were compared. When both group were analysed against their respective uninjured normal contralateral carotid arteries significant alterations on intimal and luminal areas were detected. No significant changes in the medial area were detected in either group. In conclusion, a considerable intimal thickening was observed in all carotids submitted to stent implantation and there was no morphometric alterations in the media tunica, four weeks after stent placement.