Objetivos: Determinar o percentual de asmáticos com má percepção da dispnéia e sua correlação com a intensidade da broncoconstrição aguda, hiper-responsividade brônquica, uso de medicação de manutenção e controle da asma. Métodos: Ensaio clínico não controlado com pacientes asmáticos do ambulatório de asma do Hospital São Lucas da PUCRS. Foram realizados testes de broncoprovocação com metacolina com protocolo dosimetrado e avaliada a percepção da dispnéia após cada dose administrada, utilizando a escala de Borg. Foram coletados dados demográficos e questionado quanto ao controle da asma, medicação em uso e necessidade de broncodilatador de curta ação. Para análise estatística foram utilizados teste de Chi-Quadrado e Teste t de Student e correlação de Spearman. Resultados: Foram estudados 65 pacientes com asma, dos quais 53 tiveram sua avaliação completa. Trinta e dois pacientes apresentaram percepção da dispnéia (60,5%) quando ocorreu broncoconstrição induzida pela metacolina. Entretanto, 21 pacientes (39,5%) não apresentaram alteração em relação aos sintomas de dispnéia, mesmo com queda de 20% do VEF1. Os grupos dos percebedores e não percebedores não apresentavam diferenças quanto ao VEF1 basal, percentagem de queda do VEF1 e dose de metacolina necessária para broncoprovocação. Não houve correlação significativa entre percepção da dispnéia com idade (p=0,247), sexo (p=0,329), uso de medicação de manutenção (p=0,152), controle da asma (p=0,562), hiper-responsividade brônquica (p=0,082) e gravidade da broncoconstrição aguda (p=0,749). Conclusões: Percentagem significativa dos asmáticos apresenta baixo grau de percepção da broncoconstrição. Os fatores relacionados com a incapacidade de identificação da modificação da função pulmonar não estão bem definidos. Diagnóstico e orientação dos maus percebedores é fundamental para redução de morbidade e mortalidade por asma. / Objective: To assess the percentage of poor perception of dyspnea in asthmatics and its correlation with acute bronchoconstriction severity, airway hyperresponsiveness, medication use and asthma control. Methods: Uncontrolled clinical trial of asthmatics from outpatient department HSL-PUCRS. Methacholine challenge testing was performed with five-breath dosimeter protocol. The perception of airway narrowing after 20% fall in FEV1 was evaluated using the Borg scale. Data concerning demographic information, asthma control, long-term management medication and rescue medication consumption were recorded. Chi-square test and Student´s T test and Spearman’s correlation were applied for the statistical analysis. Results: 65 patients were included and 53 completed the evaluation. 32 patients presented dyspnea (60,5%) when methacholine induced bronchoconstriction occurred but 21 patients (39,5%) did not show any difference related to dyspnea symptoms, even with 20% fall in FEV1. There were no differences between the two groups in terms of the baseline FEV1, % of fall FEV1, and methacoline dose that promoted a positive test. There was no significant association between airway obstruction and age (p= 0.247), sex (p=0.329), long term management medication use (p=0.152), asthma control (p=0.562), airway hyperresponsiveness (p=0.082), and acute bronchoconstriction severity (p=0.749). Conclusion: Significant percentage of astmatics presents poor perception of bronchoconstriction. The identification and orientation of this group of patients is essential to make plans of interventions and eventually reduce asthma morbidity and mortality.

Foram estudadas 356 endoscopias respiratórias realizadas em crianças no Hospital da Criança Santo Antônio de Porto Alegre, no período de março 1989 a março de 1992. Os exames endoscópicos foram realizados sob anestesia geral, usando o endoscópio rígido pediátrico. Das crianças examinadas, observou-se predominância do sexo masculino (56%); mais da metade tinha menos de seis meses de idade no momento da endoscopia, tendo sido observada as..~ociação significativa entre esta 1:1ixa et.:iria e a presença de anormalidade na via aérea. As indicações mais freqüentes de endoscopia foram estridor (52%), suspeita de corpo estranho (16% ), atclectasia (16%) c dificuldade de extubação traqucal (8%). Os diagnósticos mais comuns foram laringomalacia (36%) c estcnose subglótica ( 6%) nas regiões glótica e subglótica, e corpo estranho (9%) e traqueomalacia (7%) na região traqueobrônquica. Em 54 crianças (21%) não foi encontrada nenhuma anormalidade da via aérea. A laringomalacia representou 60% dos diagnósticos observados nas regiões glótica e subglótica. A.;; manifestações clínicas que tiveram associação significativa com este diagnóstico foram cstridor (98% ), engasgo alimentar (lO%) e cianose aos esforços (lO%). Em somente 11% dos pacientes com laringomalacia foi necessária intervenção cirúrgica, tendo sido realizada a laringoplastia cndoscópka. Em 30% destes pacientes operados não houve melhora, tendo sido necessária a reali?.ação de traqucostomia. O corpo estranho na via aérea foi mais freqüente em crianças de um a três anos de idade. A história sugestiva de aspiração estava presente em 77% destes pacientes, e os achados clíniéos associados significativamente com este diagnóstico foram diminuição unilateral do murmúrio vesicular e sibilância localizada. Somente um exame radiológico de tórax foi normal; as alterações observadas nos demais indicaram que a atelectasia e a hiperinsutlação localizada estiveram significativamente associadas à presença de corpo estranho na via aérea. Todos os materiais estranhos foram retirados através da endoscopia; o mais comum deles foi o grão de amendoim. A traqueomalacia foi diagnosticada principalmente em crianças com idade inferior a seis meses (19lfrJ), que apresentavam estridor (84l7(;,), tosse (21 %) c sibilância (16%). Houve uma associação significativa deste diagnóstico com outras doenças, principalmente aquelas do aparelho respiratório (laringomalacia e broncomalacia). Somente em três pacientes (16%) foi necessário algum procedimento cirúrgico, tendo-se optado pela traqueostomia. A história de intubação anterior ao exame endoscópico foi observada em 21% das crianças estudadas. Destas, a complicação mais freqüentemente observada após a intubação foi a estcnose da região subglótica. As crianças com este diagnóstico apresentavam estridor (60%)), que surgia logo após ou mesmo depois de vários meses da extubação. O único fator prcdisponcnte à complicação de intubação traqucal que esteve associado à estenose subglótica foi o número de intubaçõcs: crianças submetidas a duas ou mais intubações mostraram associação significativa com o diagnóstico de estenose subglótica. O tratamento destas crianças foi realizado com dilatação endoscópica em 14 (93%) e cirurgia aberta em um (7% ). Durante o período deste estudo, foram observadas apenas três complicações leves da endoscopia respiratória: dois pacientes apresentaram bradicardia durante o exame, e um necessitou intubação traqueal devido a edema subglótico pós-endoscópico. Isto ratifica o conceito de que a endoscopia rcspiratóría rígida em crianças é eficaz c isenta de complicações graves. / Three hundred and fifly-six rcspiratory cndoscopies wcrc madc in children at Santo Antonio Childrcn's Hospital of Porto Alegre (Brazil), from March 1988 to March 1992. The cndoscopics wcrc pcrformcd undcr general anesthesia, and a rigid pediatric bronchoscope was uscd. A predominance o f thc malc scx (56(]0) was observcd among thc cxamincd childrcn; more than half o f the total number was undcr six months old at thc time o f the cndoscopy, having hcnce bcen obscrvcd a significant association bctween this age group and the prcscncc o f abnormality in Lhe airway. The mostcommon indications forcndocopy wcrc stridor (52%), suspected forcign body (16%), atclcctasis (16%) and difficulty tracheal extubation (8<nl). The most frcqucnt diagnoses were laryngomalacia (36(~;) and suhglottic stcnosis (6%) in thc glottic and subglottic arcas, and forcign hody (9%) and trachcomalacia (7%) in thc trachcobronchial arca. Endoscopy was complctely normal in only 54 (21%) o f the paticnl-; invcstigatcd. L1ryngomalacia rcprcscntcd 60% o f thc diagnoscs observcd in the glottic and subglottic arcas. Thc clinicai manifcstations that had a significant association with this diagnosis wcrc stridor (989rJ0, choking with food (10%) and cyanosis under effort (10%). Only 11% of thc patients with laryngomalacia necdcd surgical opcration. In such cases a laryngoplasty was madc. In 30% of thc operated palienl~ no improvement was noticcd thus making tracheostomy neccssary. Fordgn body aspiration was more frequcnt in childrcn hetwecn one and threc years old. The suggestive history of aspiration was prescnt in 77% of these patients, and the clinicai findings significantly associated werc decreascd breath sounds and localizcd wheezing. Only onc radiological chcst tcst was normal; thc altera tions obscrved in the othcrs indicatcd that thc atclcctasis and thc localizcd a ir trapping werc significantly associated with the prcscnce of a foreign body in thc airway. All thc foreign hodics wcrc rcmovcd hy mcans of cndoscopy. Thc most frcqucnt one was peanul'i. Trachcomalacia was diagnosed mainly in childrcn undcr six months old (79% ), who prcscnted stridor (84% ), cough (21%) and wheezing (16% ). There was a significant association o f this diagnosis with othcr diseases, mainly those o f the rcspiratory systcm (laryngomalacia and bronchomalacia). Only thrcc patients nccded surgical proccdurc. In thesc cases a tracheostomy was made. A history o f intubation bcfore thc cndoscopy was obscrved in 21% o f the children studied. Among those, the most frequcntly obscrvcd complication after intubation was stcnosis o f the subglottic arca. The childrcn w ith this diagnosis prcscntcd stridor ( 60% ), which appcarcd soon aftcr o r cven scvcral months after extubation. Thc only factor leading to trachcal intubation complication that was associated with subglottic stenosis was numbcr o f intubation: childrcn who had undcrgone two o r more intubations showcd significant association with thc diagnosis ofsubglottic stcnosis. The trcatment givcn to these childrcn was endoscopic dilation in 14 (93%) and surgery in one (7%). During thc pcriod of this study, only thrcc slight complication of the respiratory endoscopy wcre ohseiVcd: two paticnts prescntcd bradycardia during thc cxam, and one necded tracheal intubation due to post-endoscopic subglottic edema. This ratifics thc concept that thc rigid respiratory endoscopy in childrcn is effications and free o f serious complications.

Objetivo: Avaliar e comparar os achados dos Potenciais Evocados Auditivos de Tronco Encefálico em indivíduos com holoprosencefalia (HPE) e holoprosencefalia-like (HPE-like). Modelo: Análise prospectiva comparando os achados dos PEATE entre três grupos: indivíduos com HPE clássica (GH), indivíduos com HPE-like (GHL) e grupo controle (GC), a um nível de significância de 5%. Local de Execução: Setor de Genética, HRAC-USP. Participantes: 57 pacientes, com idades entre 1 ano e 6 meses e 22 anos, sendo 13 com HPE clássica, 22 com HPE-like, e um grupo controle de 22 indivíduos normais. Variáveis: Latências absolutas das ondas I, III e V; latências interpicos I-V, III-V e I-III e diferença interaural da onda V do PEATE, em milissegundos, para cada orelha. Resultados: Os valores médios em milissegundos das latências absolutas e interpicos nas orelhas direita e esquerda respectivamente foram os seguintes. ara a onda I: 2,21 e 2,19 (GH); 1,99 e 2,01 (GHL); 1,92 e 1,91 (GC). Para a onda III: 4,35 e 4,52 (GH); 4,04 e 4,04 (GHL); 3,97 e 3,94 (GC). Para a onda V: 6,47 e 6,51 (GH); 5,95 e 5,94 (GHL); 5,90 e 5,90 (GC). Para o interpicos I-V: 4,20 e 4,24 (GH); 3,94 e 3,92 (GHL); 3,97 e 3,97 (GC). Para o interpicos III-V: 2,27 e 2,07 (GH); 1,91 e 1,90 (GHL); 1,92 e 1,95 (GC). Para o interpicos I-III: 2,14 e 2,33 (GH); 1,03 e 2,01 (GHL); 2,04 e 2,01 (GC). Os valores de diferença interaural da onda V foram: 0,13 (GH); 0,06 (GHL) e 0,03 (GC). Conclusões: Os dados sugerem que grande parte dos indivíduos com HPE clássica apresentam alterações de PEATE compatíveis com o grau de comprometimento neurológico, enquanto aqueles com HPE-like apresentam poucas alterações, sendo estas justificadas pelas patologias de orelha média decorrentes da fissura de palato. / Objective: To evaluate and compare Auditory Brainstem Response (ABR) findings in patients with holoprosencephaly (HPE) and the “HPE-like" phenotype. Model: A prospective analysis comparing ABR results among three different groups: patients with classic HPE (GH), patients with HPE-like (GHL) and control group (GC), at a 5% significance level. Setting: Genetics Department, HRAC-USP. Participants: 57 patients, aged from 18 months to 22 years. Thirteen of them had classic HPE, 22 had HPE-like, and 22 were audiologically normal individuals, who joined the GC. Variables: Waves I, III and V absolute latencies; interpeak intervals I-V, III-V and I-III and wave V interear difference of ABR, in milisseconds, considering both right and left ears. Results: Mean values, in milisseconds, of absolute latencies and interpeaks recorded from right and left ears, respectivelly, were: Wave I: 2,21 and 2,19 (GH); 1,99 and 2,01 (GHL); 1,92 and 1,91 (GC). Wave III: 4,35 and 4,52 (GH); 4,04 and 4,04 (GHL); 3,97 and 3,94 (GC). Wave V: 6,47 and 6,51 (GH); 5,95 and 5,94 (GHL); 5,90 and 5,90 (GC). Interpeak I-V: 4,20 and 4,24 (GH); 3,94 and 3,92 (GHL); 3,97 and 3,97 (GC). Interpeak III-V: 2,27 and 2,07 (GH); 1,91 and 1,90 (GHL); 1,92 and 1,95 (GC). Interpeak I-III: 2,14 and 2,33 (GH); 1,03 and 2,01 (GHL); 2,04 and 2,01 (GC). Wave V interear difference were: 0,13 (GH); 0,06 (GHL) and 0,03 (GC). Conclusions: Results suggest that most patients with classic HPE have abnormalities detected by ABR testing, which are related to the severity of neurologic impairment. Otherwise, those with the HPE-like phenotype have few alterations, most likely resulting from middle ear pathologies that occur in presence of cleft palate.

O trato olivococlear medial realiza o controle eferente das células ciliadas externas, regulando as contrações lentas e atenuando as contrações rápidas. Com o surgimento das técnicas de pesquisa da amplitude das emissões otoacústicas sem e com estimulação acústica contra, ipsi ou bilateralmente, é possível estimar clinicamente as condições fisiológicas desse trato, uma vez que o efeito resultante de redução/supressão das emissões otoacústicas indica seu funcionamento efetivo. O envelhecimento implica em diminuição da atividade do sistema auditivo central, em função da degeneração das estruturas envolvidas nas habilidades auditivas. A perda de fibras axonais e a diminuição da bainha de mielina nas estruturas do trato representam perda da eficácia de sua função. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da idade na atividade do trato sobre as propriedades mecânicas da cóclea, por meio da análise da amplitude das emissões otoacústicas com estimulação acústica contralateral. A casuística foi composta por 75 indivíduos ouvintes, de ambos os sexos, agrupados conforme a idade. A metodologia para captação das emissões otoacústicas foi o modo convencional, com clique linear na intensidade de 60 dB NPS e o ruído branco, como estímulo contralateral, em 60 dB NPS. A análise dos resultados considerou o valor do response das orelhas e a comparação entre os grupos etários. Os resultados revelam diferenças estatisticamente significantes entre os valores do response das EO sem e com estimulação acústica contralateral, nos indivíduos de 20 a 39 anos. O efeito redução/supressão das EOE-T diminui substancialmente com a idade, por volta da quarta década. Conclui-se que o envelhecimento prejudica a efetividade da atividade do trato sobre a cóclea. / Medial olivocochlear tract makes the efferent control of the outer hair cells, controlling the slow contractions and mitigating rapid contractions. Upon the appearance of techniques for the investigation of the amplitude of otoacoustic emissions with and without acoustic stimulation against, ipsi and bilaterally, it is now possible to stimulate clinically the physiologic conditions of this tract, once the resulting effect of reduction/suppression of otoacoustic emissions indicates its effective action. Aging brings a decrease of the activity of central auditory system, as a function of the degeneration of structures involved in auditory abilities. The loss of axon fibers and the decrease of myelin sheath in tract structures causes the loss of efficacy in its function. It was the objective of this study to assess the effect of aging in tract activity upon mechanical properties of cochlea, through the analysis of the amplitude of acoustic emissions with a contralateral acoustic stimulation. Casuistic comprised 75 both sex hearing individuals, grouped according to age. Methodology to capture otoacoustic emissions employed conventional means, with a linear click at a 60 dB NPS intensity and white sound, as a contralateral stimulus, at 60 dB NPS. The analysis of results considered the value of the response of the ears and the comparison of between age groups. Results show statistically significant differences between values for response of EO with and without a contralateral acoustic stimulation, in individuals between 20 to 39 years of age. The reduction/suppression effect of EOE-T decreases greatly with aging, around the fourth decade. It is concluded that aging impairs the efficacy of the activity of tract upon the cochlea.

A utilização das emissões otoacústicas (EOs) têm contribuído na avaliação do sistema auditivo eferente por meio do estudo do efeito da estimulação acústica simultânea à pesquisa das EOs, descrito na literatura como supressão das EOs. Este trabalho teve por objetivo comparar o efeito da estimulação contralateral do ruído na amplitude das emissões otoacústicas evocadas por clique (EOE-c), em crianças que apresentam audição normal e em crianças com Neuropatia Auditiva/Dessincronia Auditiva. A casuística foi constituída de 16 crianças com audição normal e 11 crianças com o diagnóstico audiológico de Neuropatia Auditiva/Dessincronia Auditiva. As EOE-c foram pesquisadas, utilizando-se o clique linear na intensidade de 60 dB NPS e, para a estimulação contralateral do ruído, foi utilizado o ruído branco na intensidade de 65 dB NPS, com monitoramento do nível de pressão sonora, gerado no conduto auditivo externo, por meio do microfone sonda. Os resultados demonstraram que, nas crianças com audição normal, além da redução da amplitude das EOE-c, foi observada supressão das EOE-c, ou seja, a ausência do registro das EOE-c com a estimulação contralateral do ruído. Nas crianças com Neuropatia Auditiva/Dessincronia Auditiva, foi observado que a estimulação contralateral do ruído não provocou mudanças significativas na amplitude das EOE-c. Este trabalho permitiu concluir que a amplitude das EOE-c do grupo de crianças com audição normal se comportou de maneira estatisticamente diferente do grupo de crianças com Neuropatia Auditiva/Dessincronia Auditiva na presença da estimulação contralateral do ruído, e que a média da redução da amplitude das EOE-c frente à estimulação contralateral do ruído nas crianças com audição normal é estatisticamente maior que a redução da amplitude das EOEc nas crianças com Neuropatia Auditiva/Dessincronia Auditiva. / The use of otoacoustic emissions (EOs) has contributed to the evaluation of the efferent auditory system through the effect of the acoustic stimulation simultaneous to the EOs, described in the literature as EOs suppression. This study had the objective of comparing the effect of the contralateral stimulation of the noise in the amplitude of the click-evoked otoacoustic emissions (EOE-c), in children having normal hearing and in children with Auditory Neuropathy/ Auditory Dsy-synchrony. The casuistry was constituted by 16 children having normal hearing and 11 children diagnosed audiologically as having Auditory Neuropathy/ Auditory Dsy-synchrony. The EOE-c were scrutinized by using the linear click in the intensity of 60 dB SPL, and to the contralateral noise stimulation, the white noise was employed in the intensity of 65 dB SPL, with the monitoring of the level of sound pressure generated in the external auditory conduit, by using the microphone probe. The results have shown that in children with normal hearing, besides the reduction of amplitude of the EOE-c, it was noticed their suppression, that is, the absence of the record of the EOE-c with the contralateral noise stimulation. It was observed that the contralateral noise stimulation havent provoked significative change in the amplitude of the EOE-c in children with Auditory Neuropathy/ Auditory Dsy-synchrony. This study allowed us to conclude that the amplitude of EOE-c in children with normal hearing presented a different statistical result in the group of children with Auditory Neuropathy/ Auditory Dsy-synchrony in the presence of the contralateral noise stimulation and the average of the amplitude reduction of the EOE-c in the face of children with normal hearing is statistically higher than the amplitude reduction of the EOE-c in the children with Auditory Neuropathy/Auditory Dsy-synchrony.

A Estimulação Transcraniana por Corrente Contínua (ETCC) é um método para modulação não-invasiva da atividade cerebral que vem sendo amplamente utilizado na pesquisa clínica e na investigação da relação complexa entre comportamento e atividade cerebral. Por outro lado, os efeitos da ETCC sobre o desempenho visual ainda foram pouco estudados, e a especificidade de vias visuais e funções afetadas pela estimulação não foi investigada. É fundamental elucidar tais questões antes de propor aplicações clínicas adequadas da ETCC na reabilitação visual. Aqui, utilizamos testes psicofísicos e eletrofisiológicos sensíveis a alterações em diferentes vias e grupos de células do sistema visual para avaliar os efeitos da ETCC. Realizamos experimentos em voluntários saudáveis e um modelo animal. Nos experimentos em humanos, os participantes receberam ETCC anódica, catódica e placebo (Oz-Cz, 0,06mA/cm2) em sessões distintas. (1) Para testar a visão de cores, utilizamos Cambridge Colour Test (CCT) e uma tarefa de contraste de cores com grade senoidal verde-vermelho. No CCT a ETCC anódica aumentou a sensibilidade no eixo tritan (p<0,001) e não teve efeito sobre a sensibilidade nos eixos protan e deutan. ETCC catódica diminuiu a sensibilidade no eixo deutan e aumentou a sensibilidade no eixo tritan. Os efeitos retornaram à linha de base após 15 min. (2) Para testar visão de acromática utilizamos testes psicofísicos de sensibilidade ao contraste de grades e Pedestal--Pedestal. Utilizamos também Potencial Visual Evocado de Varredura (PVEv) para contraste e acuidade de Vernier. ETCC não afetou sensibilidade ao contraste psicofísica ou os limiares de Vernier ou contraste medidos com PVEv. ETCC anódica aumentou significativamente limiares para decremento do pedestal apenas nas respostas mediadas pela via magnocelular. Para o PVEv de contraste, ETCC catódica aumentou amplitude da resposta supralimiar para 0,5cpg e diminuiu para 4cpg sem afetar as respostas para 16cpg. ETCC catódica aumentou a fase para 4cpg e diminuiu para 16cpg. Houve efeito significativo da ETCC catódica e anódica sobre resposta supralimiar de Vernier. (3) Para avaliar os efeitos sobre o campo visual utilizamos os protocolos 10-2 e 60-4 do campímetro Humphrey. A ETCC só afetou significativamente o desempenho sobre os pontos mais excêntricos medidos com o campímetro, aumentando a sensibilidade. Ainda, resultados anteriores da literatura não foram replicados. O efeito diferencial da ETCC catódica sobre a sensibilidade tritan, deutan e o processamento de diferentes faixas de freqüência espacial sugere que diferentes vias e grupos de células no sistema visual são afetados de maneira distinta pela ETCC. Em geral, os resultados encontrados sugerem que ETCC pode ter um efeito distinto em diferentes grupos de células no córtex visual e assim, é uma ferramenta em potencial para estudar a organização do sistema visual. Além disso, as alterações de latência encontradas sugerem que a ETCC pode levar a alterações funcionais modulando a somação temporal das células 7 estimuladas. Futuros estudos devem levar em consideração possíveis efeitos diferenciais da ETCC em diferentes grupos de células nas áreas estimuladas. (4) No experimento realizado com modelo animal, coelhos albinos receberam ETCC sobre o córtex visual primário. PVE por flashes foram medidos antes e após ETCC. Apenas a ETCC catódica produziu efeitos significativos. Os resultados estão de acordo com a literatura em humanos e foram consistentes para todos os animais. O uso deste modelo possibilitará pesquisas no nível celular e molecular dos efeitos da ETCC sobre o córtex visual / Transcranial Direct Current Stimulation ( tDCS ) is a noninvasive brain stimulation method that has been widely used in clinical research and investigations of the complex relationship between behavior and brain activity. Nevertheless, the effects of tDCS on visual performance are still poorly understood and specificity of the visual pathways and functions affected by stimulation was not yet investigated. It is essential to elucidate such issues before proposing appropriate clinical applications of tDCS on visual rehabilitation . Here, we used psychophysical and electrophysiological methods sensitive to changes in different groups of cells and pathways of the visual system to evaluate the effects of tDCS . We conducted experiments in healthy volunteers and an animal model . In human experiments , participants received anodal , cathodal and sham tDCS ( Oz - Cz , 0.06 mA/cm2 ) in separate sessions. (1) To test color vision , we used Cambridge Colour Test ( CCT ) and a color contrast sensitivity task with red-green sinusoidal gratings. Anodal tDCS increased sensitivity in the tritan axis ( p < 0.001 ) and had no effect on the sensitivity in protan and deutan axes . Cathodal tDCS decreased sensitivity in deutan axis and increased sensitivity in the tritan axis. The effects returned to baseline after 15 min. ( 2 ) To test achromatic vision we used psychophysical tests of grating contrast sensitivity and Pedestal - - Pedestal . We also used Sweep Visual Evoked Potential ( PVEv ) for contrast sensitivity and vernier acuity. TDCS did not affect psychophysical of PVEv contrast thresholds. Anodal tDCS significantly increased thresholds for the pedestal decrement only in the magnocellular pathway mediated responses. For PVEv contrast , cathodal tDCS increased to suprathreshold response amplitude to 0.5 cpd and decreased it for 4cpd without affecting responses to 16cpd . Cathodal tDCS increased the phase for 4cpg and decreased it to 16cpg . There was a significant effect of anodal and cathodal tDCS on suprathreshold Vernier responses. (3) To evaluate the effects on the visual field we used the 10-2 and 60-4 protocols of the Humphrey perimeter. tDCS only significantly affected the performance of the most eccentric points measured with the perimeter, increasing sensitivity. Still , previous literature results were not replicated. The opposite effect of cathodal tDCS on the tritan and deutan sensitivity, and in the processing of different spatial frequency bands suggests that different pathways and groups of cells in the visual system are affected differently by tDCS. In general , the results suggest that tDCS may have a different effect on different groups of cells in the visual cortex and thus is a potential tool for studying the organization of the visual system . Furthermore, the change latency encountered suggest that tDCS can lead to functional alterations of the temporal summation in the stimulated cells. Future studies should take into account possible differential effects of tDCS on different groups of cells in the stimulated areas. (4) In the experiment with the animal model, albino rabbits received tDCS over the primary visual cortex . VEP flashes were measured before and after tDCS. Only cathodal tDCS produced significant effects. The results are consistent with the literature in humans and were consistent for all animals . The use of this model will enable research of cellular and molecular mechanisms of tDCS on visual cortex

Durante o desenvolvimento do sistema nervoso, as células têm a tarefa de proliferar, migrar, diferenciar, morrer ou amadurecer de modo altamente preciso para formar estruturas complexas. Tal precisão é alcançada em decorrência da interação perfeita entre as células que se comunicam por meio de mensageiros químicos no ambiente extracelular. Nesse contexto, nosso grupo tem reportado o envolvimento da bradicinina (BK) em processos do desenvolvimento neural. Recentemente, observou-se que a BK desempenha um papel importante na determinação do destino neural, favorecendo a neurogênese em detrimento da gliogênese em diversos modelos de diferenciação, além de potencializar a migração celular observada no modelo de neuroesferas de rato (Trujillo et al, 2012). Essas descobertas motivaram, como objetivo geral dessa tese, a investigação dos mecanismos subjacentes à BK que determinam seus efeitos. Dessa forma, o principal modelo de diferenciação utilizado foi as células precursoras neurais (CPNs) isoladas do telencéfalo de embriões de camundongos. Estas células proliferam na presença dos fatores de crescimento (GFs) EGF + FGF2, mantendo-se multipotentes e formando as neuroesferas, ao passo que migram e diferenciam em neurônios e glias pela remoção desses GFs, com boa proximidade aos eventos do desenvolvimento do cortex in vivo. Como resultados do presente trabalho, observou-se, inicialmente, que a BK também influencia efetivamente na diferenciação neural no modelo de CPNs murinas. Ao término da diferenciação, observou-se que esta cinina favoreceu a migração e promoveu o enriquecimento neuronal, evidenciado pelo aumento da expressão das proteínas &#946;3-Tubulina e MAP2. Constatou-se também, que se observa uma baixa taxa de proliferação ao término da diferenciação na presença de BK (Trujillo et al, 2012), em consequência da grande proporção de neurônios em cultura estimulada por esta cinina. Esta relação causal foi evidenciada pelo ensaio de incorporação de EdU e concomitante imuno-detecção dos marcadores &#946;3-Tubulina, GFAP e Nestina. Fatores que promovem a neurogênese podem promovê-la suprimindo a proliferação celular em CPNs indiferenciadas, mais especificamente, alongando a fase G1 do ciclo celular que resulta na divisão de diferenciação. Assim, investigou-se também se a BK influencia nesse processo. Análises por citometria de fluxo demonstraram que esta cinina suprimiu a proliferação estimulada pelos GFs, levando ao acúmulo de células na fase G1 do ciclo celular. Esse acúmulo não provém do bloqueio do ciclo, uma vez que se observam grandes proporções de células nas fases subsequentes à G1, indicando que essa fase foi apenas prolongada pela BK e, assim, corroboraria no favorecimento da neurogênese. Outra face dos mecanismos adjacentes à BK para seus efeitos na diferenciação neural se refere às vias de sinalização disparadas por esta cinina. Observou-se que a BK induz a produção de AMPc por intermédio de proteínas G sensíveis à toxina pertussis (TP) (provavelmente através da subunidade &#946;&#947; de proteínas Gi) e promove a mobilização de cálcio dos estoques intracelulares, evidenciando o envolvimento da família de proteínas Gq. Esses resultados sugerem que o receptor B2 de cinina acopla-se tanto às proteínas Gi quanto às proteínas Gq em CPNs. A exposição dessas células à BK também ativou as vias da PI3K/Akt e da MAPK p38, mas não influenciou na ativação de STAT3 e JNK. Destaca-se o potencial da rota da MAPK ERK como uma das principais cascatas responsáveis por decodificar sinais de mensageiros externos em respostas celulares. O tratamento com BK em CPNs ativou a ERK por tempo prolongado e estimulou sua translocação para o núcleo. O efeito de BK na glio- e neurogênese de CPNs foi dependente da atividade de ERK, porque o bloqueio farmacológico dessa enzima impediu esse efeito de BK. Por outro lado, o favorecimento da migração induzido por esta cinina foi dependente da atividade da p38, enquanto, o seu efeito antiproliferativo foi condicionado à atividade das suas duas MAPKs, ERK e p38. Além disso, a via da PI3K/Akt ativada por BK não influenciou nos três eventos avaliados. Finalmente, utilizou-se nessa tese uma abordagem reducionista da diferenciação, porém amplamente utilizada por estudos mecanísticos de neurogênese, as células PC12. Assim, observou-se que a BK também ativa a ERK por tempo prolongado e com translocação nuclear, sendo que tal forma de ativação dessa quinase é proposta na literatura como necessária e suficiente para induzir a neurogênese dessas células. Demonstrou-se ainda que o bloqueio apenas da ativação sustentada de ERK, pela inibição das atividades das PKCs clássicas, impede o favorecimento da neurogênese por BK em células PC12. Juntos, esses resultados contribuem para elucidação dos mecanismos de ação da BK na regulação da diferenciação neural, colaborando para melhor entender esse processo e prevendo possíveis aplicações em terapias de reparo neuronal em pacientes com doenças, por exemplo, de Parkinson, Alzheimer, Esclerose Múltipla e lesões isquêmicas. / During CNS development cells perform the task of proliferating, migrating, differentiating, dying or maturing in highly accurate patterns. Such accuracy is reached as a result of the perfect interaction among the cells that constantly communicate with each other through cell-cell contact or through chemical messengers present in the extracellular medium. In this context, our group has reported the involvement of bradykinin (BK) in neural differentiation of stem cell models (Trujillo et al, 2012). Recently, it has been observed that BK plays an important role in determining neural destination, favoring neurogenesis over gliogenesis in several models of differentiation, besides potentializing cell migration observed in the model of rat neurospheres. These discoveries have motivated, as the general objective of this thesis, the investigation of the mechanisms underlying BK-promoted effects on neural differentiation using neural precursor cells (NPCs) isolated from the telencephalon of mice embryos. These cells proliferate in the presence of growth factors (GFs) EGF + FGF2, remaining multipotent and forming neurospheres, while they migrate and differentiate in neurons and glias following removal of these GFs, resembling in simplified conditions events of the development of the cortex in vivo. As results of the present thesis, it was initially observed that BK also effectively influences neural differentiation fate of the mouse NPC model. This kinin favored migration and promoted neuronal enrichment, evidenced by increased expression of &#946;3-Tubulin and MAP2 marker proteins. Moreover, proliferation rates were largely decreased following differentiation in the presence of BK (Trujillo et al, 2012), due to the large proportion of neurons in the culture stimulated by this kinin. This causal relation was evidenced by the EdU incorporation assay and the concomitant immunodetection rates of &#946;3- Tubulin, GFAP and Nestin markers. Factors which promote neurogenesis can promote it by suppressing cell proliferation in undifferentiated NPCs, more specifically, prolonging the G1 phase of the cell cycle that result in the division of differentiation. Thus, it was further investigated whether BK influences this process. Flow cytometry analyses showed that this kinin suppressed the proliferation stimulated by GFs, resulting in the accumulation of cells in the G1 phase of the cell cycle. This accumulation is not caused by a cycle block, since wide proportions of cells are observed in phases subsequent to the G1, indicating that this phase was only prolonged by BK, thus corroborating for favoring neurogenesis. Another aspect of the mechanisms adjacent to BK for its effects on neural differentiation refers to the signaling pathways triggered by this kinin. Here, we show that the kinin B2 receptor couples to both Gi and Gq proteins in NPCs. BK induced the production of intracellular cAMP by activation of G proteins sensitive to pertussis toxin (PT) (probably through &#946;&#947; subunit of Gi proteins) and promoted the mobilization of calcium from intracellular stocks, demonstrating the involvement of YM-254890-sensitive Gq proteins. Exposure of these cells to BK also activated PI3K/Akt and MAPK p38 pathways, but did not affect the activation of STAT3 and JNK. It is important to note the potential MAPK-ERK route as one of the main cascades responsible for decoding signals from external messengers into cellular responses. NPC treatment with BK activated ERK for prolonged time and stimulated its translocation into the nucleus. The effect of BK on glio- and neurogenesis of NPCs depended plainly on ERK activity, because the pharmacological blockade of this enzyme prevented the BK-exerted effects. On the other hand, the favoring of migration induced by this kinin was dependent on p38 activity, while its antiproliferative effect was conditioned to the activity of both the MAPKs ERK and p38. In addition, the PI3K/Akt pathway activated by BK did not affect any of the three evaluated events. Finally, we used in this thesis a reductionist approach of differentiation based on the use of PC12 cells, which has been widely used for mechanistic studies of neurogenesis. Thus, it was observed that BK also activated ERK for prolonged time and with nuclear translocation, considering that such form of kinase activation is proposed in the literature as necessary and sufficient to induce neurogenesis in these cells. This study also demonstrated that blockade only of the sustained ERK activation, through the inhibition of the activity of classic PKCs, prevents the favoring of neurogenesis by BK in PC12 cells. Together, these results compose novel mechanisms of action of BK on events of neural development in vitro, contributing to the better understanding of this process and foreseeing possible applications in the future for neuronal repair strategies

Tese de mestrado integrado. Engenharia Civil (Vias de Comunicação). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2013

Tese de mestrado integrado. Engenharia Civil. Área de Especialização de Vias de Comunicação. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

Tese de mestrado integrado. Engenharia Civil (especialização em Vias de Comunicação). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008