O ATP mediando a sinalização purinérgica no bulbo ventrolateral rostral contribui para o controle do quimiorreflexo central e periférico regulando a pressão arterial e a respiração, mediante o envolvimento dos neurônios do núcleo retrotrapezóide (RTN). No entanto, as potenciais contribuições da sinalização purinérgica, no RTN, na função cardiorrespiratória em animais não anestesiados ainda não foram testadas. Mostramos que a injeção de ATP no RTN promoveu aumento cardiorrespiratório por um mecanismo dependente de receptores P2. Mostramos também que o bloqueio de receptor P2 não específico (PPADS), mas não de receptores específicos P2Y (MRS2179), reduziu a resposta ventilatória à hipercapnia (7% CO2) e hipóxia (8 % O2) em ratos não anestesiados. Além disso, a adenosina (ADO) no RTN atenuou o aumento da ventilação induzido por hipercapnia in vivo e o disparo dos neurônios in vitro. Estes resultados demonstram que a sinalização mediada por ATP contribui para o controle respiratório do quimiorreflexo central e periférico em ratos acordados e uma vez que o ATP se metaboliza rapidamente em ADO, esta teria ação no balanço da resposta quimiorreceptora no RTN. / ATP-mediated purinergic signaling at the level of the rostral ventrolateral medulla (RVLM) contributes to both central and peripheral chemoreceptor control of breathing and blood pressure within the retrotrapezoid nucleus (RTN). However, potential contributions of purinergic signaling in the RTN to cardiorespiratory function in conscious animals has not been tested. We show that in the absence of functional C1 cells, ATP into the RTN increased cardiorespiratory output by a P2-recepor dependent mechanism. We also show that a non-specific P2 receptor blocker (PPADS) reduced the ventilatory response to hypercapnia (7% CO2) and hypoxia (8% O2) in unanesthetized awake rats. Conversely, a specific P2Y1-receptor blocker (MRS2179) into the RTN had no measurable effect on respiratory responses elicited by hypercapnia or hypoxia. Moreover, adenosine (ADO) into the RTN could attenuate the hypercapnia-induced increase in ventilation in vivo and firing rate in RTN neurons in vitro. These results demonstrate that ATP-mediated purinergic signaling contributes to central and peripheral chemoreflex control of breathing in awake rats and ADO could provide a balance between ATP stimulation and its inhibition in RTN during hipercapnia.

Doenças da córnea estão entre as principais causas de cegueira e os mecanismos de lesão e reparação estão em grande parte concentradas no epitélio, porém os mediadores e alvos para possíveis intervenções terapêuticas são pouco conhecidos.Nas agressões ao epitélio da córnea, a ativação dos receptores vanilóides de potencial transitório 1 (TRPV1) leva a resposta inflamatória e cicatricial. O objetivo desse trabalho é identificar os mecanismos de sinalização e resposta do TRPV1 na córnea de animais experimentais. O cultivo de células epiteliais de córnea de ratos, a identificação de mediadores por western blot, medida do influxo de cálcio, resposta de citocinas medidas por ensaio quantitativo de PCR em tempo real (RNAm) e ELISA (proteína) após estímulos nocioceptivos ou inflamatórios; e a investigação histológica e imunohistoquimica em modelos animais, sejam ratos com diabetes mellitus (DM) por 8 semanas ou expostos a cloreto de benzalcônio a 0,2% (BAC) por 7 dias. Camundongos TRPV1-/- comparados aos controles C57 foram comparados sem estimulo, ou sob estimulo único com CAP a 1µM, BAC 0,2 % por 7 dias ou após queimadura alcalina com NaOH a 1M. Os resultados mostraram a presença de TRPV1 em epitélio de córnea em cultura primária, mostraram que essas células respondem com influxo de cálcio ao estímulo com o agonista Capsaicina a 1µM e aumento de TNF? e IL-1? (sendo máximo nas combinações CAP+CPZ e Win+CAP, respectivamente). Em ratos com DM e BAC ocorre a redução da expressão do RNAm de IL-1? (p=0,0269) na córnea, entre outras alterações. Os camundongos TRPV1-/- tem fenótipo físico e ocular normal, porém reduzida sensibilidade a CAP 1µM. O tratamento com BAC leva a diminuição da secreção lacrimal (p=0,0011) e de IL-1? e TNF? na glândula lacrimal (GL) de TRPV1-/- machos (p=0,0177, p=0,0245, respectivamente). A queimadura alcalina com NaOH 1M resultou em melhor cicatrização e maior espessura epitelial no grupo TRPV1-/-. Em ix conclusão, o TRPV1 está presente na córnea e atua em resposta a agressões externas. Situações adquiridas como DM e toxicidade por BAC, reconhecidas como neuropáticas diminuem a expressão de mediadores inflamatórios. A ausência genética e TRPV1 não altera o fenótipo, mas apresenta menor sensibilidade e melhor restauração da superfície ocular após queimadura alcalina / Corneal diseases are among the leading causes of blindness.Damage and repair mechanisms are largely concentrated in the epithelium, but the mediators and targets for possible therapeutic interventions are poorly understood. The aggressions to the corneal epithelium, the activation of vanilloid receptors transient potential 1 (TRPV1) leads to inflammatory and wound healing. The aim of this study is to identify the signaling mechanisms and TRPV1 response in the cornea of experimental animals.The culture of epithelial cells from rat cornea, to identify mediators by western blot analysis, measurement of calcium influx, cytokine response measured by PCR real time (mRNA) and ELISA (protein) nocioceptivos or after inflammatory stimuli; and the histological and immunohistochemical investigation in animal models are mice with diabetes mellitus (DM) for 8 weeks, and exposed to benzalkonium chloride at 0.2% (BAC) for 7 days. Mice TRPV1-/- compared to control C57 were compared with no stimulus, or under single stimulation with 1 µM Capsaicine (CAP), BAC 0.2% for 7 days or after the alkali burn with NaOH 1 M.The results showed the presence of TRPV1 in corneal epithelium in primary culture, showed that these cells respond to calcium influx the stimulus with capsaicin agonist 1?M and increase of TNF? and IL-1? (being maximum at the CAP + CPZ combinations and Win + CAP, respectively). In rats with DM and BAC occurs reducing the expression of IL-1? mRNA (p = 0.0269) in the cornea, among other changes. The TRPV1-/- mice have physical phenotype and normal ocular but low sensitivity to CAP 1?M. Treatment with BAC leads to decreased tear secretion (p = 0.0011) and IL-1? and TNF? in the lacrimal gland (GL) of TRPV1-/- mice (p = 0.0177, p = 0.0245, respectively) . The alkaline burn with NaOH 1M resulted in better healing and greater epithelial thickness in TRPV1-/- group .In conclusion, TRPV1 is present in the cornea and operates in response to external aggressions. Situations existing as DM and xi toxicity BAC recognized as neuropathic decrease the expression of inflammatory mediators. Genetic absence and TRPV1 does not alter the phenotype, but has lower sensitivity and better restoration of the ocular surface after alkaline burn

Diversos atletas e praticantes de atividades físicas incorporam em suas rotinas de treinamento, exercícios aeróbios e de força motora simultaneamente. Contudo, essa combinação conhecida como treinamento concorrente (TC) tem demonstrado uma atenuação da resposta adaptativa da força e hipertrofia muscular. O presente estudo analisou se alguns genes e proteínas envolvidos na resposta hipertrófica e na biogênse mitocondrial do músculo esquelético poderiam explicar a atenuação da resposta adaptativa com o TC. Trinta e sete sujeitos foram divididos nos grupos: controle (C), aeróbio (TA), força (TF) e concorrente (TC) e submetidos a oito semanas de treinamento. Os resultados significantes foram: aumento na força dinâmica máxima de 270,3 (±45,5) para 320,3 (±57,0) Kg para o TF e de 268,4 (±47,6) para 315,7 (±63,5) para o TC; área de secção transversa do quadríceps de 8332,4 (±817,5) mm2 para 8849,5 (±893,3) mm2 para o TF e de 8340,8 (±1000,0) mm2 para 8996,8 (±919,5 )mm2 para o TC; o gene da mTOR demonstrou aumento significante de 1,01 (±0,10) U.A para 1,44 (±0,17) U.A no TF e redução de 1,01 (±0,15) para 0,536 (± 0,25) U.A da p70S6K1 no TC; a expressão total da proteína p70S6K1 demonstrou aumentou no grupo TC em relação ao C (1,1 (±0,2) U.A vs 0,8 (±0,3) U.A), a fosforilação da Akt no resíduo ser473 e da p70S6K1no resíduo thr389 aumentou somente no TF em relação ao C (1,3 (±0,2) U.A vs 0,9 (±0,1) U.A e 1,3 (±0,4) vs 0,8 (±0,3) U.A, respectivamente). O grupo TF e TC demonstraram adaptações similares nas variáveis de força e hipertrofia muscular apesar de algumas diferenças na resposta molecular. Esses achados indicam que na fase inicial do TC as diferenças na adaptação molecular não refletem em alterações na força e hipertrofia muscular quando comparadas ao TF / Many athletes and individuals involved in physical training perform strength and endurance exercises in the same training unit. However, this combination, referred as concurrent training (CT), has shown to blunt strength and skeletal muscle growth responses. This study investigated whether some genes and proteins associated with muscle growth and mitochondrial biogenesis may explain the decreased adaptive response to CT. Thirty seven participants were divided into four groups: control (C), endurance (TA), strength (TF) and concurrent (TC) and submitted to eight weeks of training. Significant results were found in the following variables from pre to post training: maximum dynamic strength - TF from 270,3 (±45,5) to 320,3 (±57,0) Kg and TC from 268,4 (±47,6) to 315,7 (±63,5); quadriceps cross sectional area (CSA) - TF from 8332,4 (±817,5) mm2 to 8849,5 (±893,3) mm2, TC from 8340,8 (±1000,0) mm2 to 8996,8 (±919,5)mm2; mTOR gene expression increased significantly post-training only for the TF (1,01 (±0,10) A.U to 1,44 (±0,17) A.U) and p70S6K1 was significantly reduced post-training (1,01 (±0,15) to 0,536 (± 0,25) A.U) for the TC; p70S6K1 total protein content was significantly greater after TC when compared with C (1,1 (±0,2) U.A vs 0,8 (±0,3)) and phosphorylation of both Akt at ser473 and p70S6K1 at thr389 increased only after TF compared with C (1,3 (±0,2) U.A vs 0,9 (±0,1) U.A and 1,3 (±0,4) vs 0,8 (±0,3) U.A, respectively). TF and TC groups had similar improvements in muscle strength and hypertrophy, besides some differences in the molecular responses. These differences at the molecular level in early phases of the TC do not blunt muscle strength and hypertrophy adaptations compared with the TF

O protozoário intracelular Neospora caninum é um parasito importante em bovinos, nos quais pode causar abortamentos e infecção congênita. Os cães e alguns outros canídeos são os hospedeiros definitivos e vários pontos na cadeia epidemiológica ainda são pouco conhecidos. Esta tese tem por objetivos estudar aspectos da epidemiologia do N. caninum em bovinos leiteiros de rebanhos do Vale do Paraíba Paulista, São Paulo, Brasil. Para tanto um estudo prospectivo, com duração de dois anos e nove colheitas de sangue de todos os bovinos de três propriedades, foi realizado. Dados sobre: ocorrência de anticorpos anti- N .caninum, ocorrência e períodos de abortamentos, intervalo entre partos e número de serviços foram avaliados. Associação entre o estatus sorológico dos pares mães-filhas, bem como variação dos títulos de anticorpos durante a gestação em vacas positivas foi estudada. Um último estudo avaliou a permanência dos anticorpos anti-N. caninum, adquiridos passivamente através do colostro, em bezerros nascidos negativos. Os estudos permitiram concluir que a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum variou entre os rebanhos e dentro de cada rebanho nas diferentes colheitas; resultados sorológicos transitórios, não caracterizando soroconversão, foram observados; altas taxas de transmissão vertical e baixas taxas de transmissão horizontal foram encontradas; risco relativo de abortamentos em vacas soropositivas em relação às negativas foi observado em algumas ocasiões; dentre os índices reprodutivos avaliados somente os abortamentos foram significativos; anticorpos colostrais foram detectados nos bezerros até a 21ª semana pós-nascimento e vacas gestantes apresentaram variação nos títulos de anticorpos, com mais altos níveis no 2º e 3º trimestre de gestação, sem associação com abortamentos. Este foi o primeiro estudo prospectivo sobre aspectos epidemiológicos do N. caninum em bovinos no Brasil / The intracellular protozoan parasite Neospora caninum is an important parasite in cattle, in which can cause miscarriages and congenital infection. Dogs and some other canids are the definitive hosts and various points in the epidemiology of this parasite are still obscure. This thesis aims to study aspects of the epidemiology of N. caninum in dairy cattle from herds in the Vale do Paraíba Paulista, São Paulo, Brazil. Therefore, a prospective study lasting two years and nine blood samples of all cattle from three farms was conducted and data from existence of anti-N. caninum antibodies in the herds, occurrence and periods of miscarriages, calving interval and number of services were assessed. Association between the serological status of the mother-daughter pairs, and variation in antibody titers during pregnancy in positive cows was studied. A final study evaluated the persistence of anti-N. caninum antibodies, passively acquired through colostrum, in calves born negative. The studies showed that the occurrence of anti-N. caninum antibodies ranged between herds and within herds in the different groups; transient serological results, not characterizing seroconversion, were observed; high vertical and low horizontal rates of transmission were found; relative risk of abortion in seropositive cows in relation to negative was observed in some occasions; among the reproductive indices evaluated only abortions were analised as significant; colostral antibodies were detected in calves until weeks 21 post-birth, and pregnant cows showed variation in antibody titers, with highest levels in the 2nd and 3rd trimester or the pregnancy and this found was not associated with miscarriages. This was the first prospective study on epidemiology of N. caninum in cattle in Brazil

A associação da obesidade e asma atópica está bem descrita. Embora reconhecidamente uma patologia mediada por eosinófilos, à asma apresenta fenótipos distintos onde os neutrófilos exercem relevante papel na inflamação pulmonar e manutenção da inflamação. Existem dados de que mulheres obesas asmáticas são mais propensas a desenvolver a asma mediada por neutrófilos, cuja característica é ser de difícil controle, e ainda refrataria a corticoterapia. Ainda não existem modelos experimentais de asma neutrofílica, que visem a ligar os mecanismos associados à resistência aos corticoides em mulheres com asma neutrofílica. Neste estudo caracterizamos um modelo experimental de asma neutrofilica em camundongos fêmeas e apresentamos dados do papel da obesidade na inflamação pulmonar. Nossos dados permitem sugerir que o modelo de asma neutrofílica está, sob ponto de vista inflamatório caracterizado, e que o recrutamento de neutrófilos independe da obesidade. Nosso estudo pode contribuir para a compreensão dos mecanismos que regulam a asma de neutrofilica em mulheres obesas. / The association of obesity and atopic asthma is well described. Although admittedly an eosinophil-mediated pathology, asthma presents distinct phenotypes where neutrophils exert a relevant role in lung inflammation and maintenance of inflammation. There are data that obese asthmatic women are more likely to develop neutrophil-mediated asthma, which is difficult to control and still refractory to corticosteroids. There are as yet no experimental models of neutrophilic asthma to link mechanisms associated with resistance to corticosteroids in women with neutrophilic asthma. In this study we characterized an experimental model of neutrophilic asthma in female mice and presented data on the role of obesity in pulmonary inflammation. Our data allow us to suggest that the neutrophilic asthma model is, under a characterized inflammatory point of view, and that neutrophil recruitment is independent of obesity. Our study may contribute to understanding the mechanisms that regulate neutrophilic asthma in obese women.

Doenças da córnea estão entre as principais causas de cegueira e os mecanismos de lesão e reparação estão em grande parte concentradas no epitélio, porém os mediadores e alvos para possíveis intervenções terapêuticas são pouco conhecidos.Nas agressões ao epitélio da córnea, a ativação dos receptores vanilóides de potencial transitório 1 (TRPV1) leva a resposta inflamatória e cicatricial. O objetivo desse trabalho é identificar os mecanismos de sinalização e resposta do TRPV1 na córnea de animais experimentais. O cultivo de células epiteliais de córnea de ratos, a identificação de mediadores por western blot, medida do influxo de cálcio, resposta de citocinas medidas por ensaio quantitativo de PCR em tempo real (RNAm) e ELISA (proteína) após estímulos nocioceptivos ou inflamatórios; e a investigação histológica e imunohistoquimica em modelos animais, sejam ratos com diabetes mellitus (DM) por 8 semanas ou expostos a cloreto de benzalcônio a 0,2% (BAC) por 7 dias. Camundongos TRPV1-/- comparados aos controles C57 foram comparados sem estimulo, ou sob estimulo único com CAP a 1µM, BAC 0,2 % por 7 dias ou após queimadura alcalina com NaOH a 1M. Os resultados mostraram a presença de TRPV1 em epitélio de córnea em cultura primária, mostraram que essas células respondem com influxo de cálcio ao estímulo com o agonista Capsaicina a 1µM e aumento de TNF? e IL-1? (sendo máximo nas combinações CAP+CPZ e Win+CAP, respectivamente). Em ratos com DM e BAC ocorre a redução da expressão do RNAm de IL-1? (p=0,0269) na córnea, entre outras alterações. Os camundongos TRPV1-/- tem fenótipo físico e ocular normal, porém reduzida sensibilidade a CAP 1µM. O tratamento com BAC leva a diminuição da secreção lacrimal (p=0,0011) e de IL-1? e TNF? na glândula lacrimal (GL) de TRPV1-/- machos (p=0,0177, p=0,0245, respectivamente). A queimadura alcalina com NaOH 1M resultou em melhor cicatrização e maior espessura epitelial no grupo TRPV1-/-. Em ix conclusão, o TRPV1 está presente na córnea e atua em resposta a agressões externas. Situações adquiridas como DM e toxicidade por BAC, reconhecidas como neuropáticas diminuem a expressão de mediadores inflamatórios. A ausência genética e TRPV1 não altera o fenótipo, mas apresenta menor sensibilidade e melhor restauração da superfície ocular após queimadura alcalina / Corneal diseases are among the leading causes of blindness.Damage and repair mechanisms are largely concentrated in the epithelium, but the mediators and targets for possible therapeutic interventions are poorly understood. The aggressions to the corneal epithelium, the activation of vanilloid receptors transient potential 1 (TRPV1) leads to inflammatory and wound healing. The aim of this study is to identify the signaling mechanisms and TRPV1 response in the cornea of experimental animals.The culture of epithelial cells from rat cornea, to identify mediators by western blot analysis, measurement of calcium influx, cytokine response measured by PCR real time (mRNA) and ELISA (protein) nocioceptivos or after inflammatory stimuli; and the histological and immunohistochemical investigation in animal models are mice with diabetes mellitus (DM) for 8 weeks, and exposed to benzalkonium chloride at 0.2% (BAC) for 7 days. Mice TRPV1-/- compared to control C57 were compared with no stimulus, or under single stimulation with 1 µM Capsaicine (CAP), BAC 0.2% for 7 days or after the alkali burn with NaOH 1 M.The results showed the presence of TRPV1 in corneal epithelium in primary culture, showed that these cells respond to calcium influx the stimulus with capsaicin agonist 1?M and increase of TNF? and IL-1? (being maximum at the CAP + CPZ combinations and Win + CAP, respectively). In rats with DM and BAC occurs reducing the expression of IL-1? mRNA (p = 0.0269) in the cornea, among other changes. The TRPV1-/- mice have physical phenotype and normal ocular but low sensitivity to CAP 1?M. Treatment with BAC leads to decreased tear secretion (p = 0.0011) and IL-1? and TNF? in the lacrimal gland (GL) of TRPV1-/- mice (p = 0.0177, p = 0.0245, respectively) . The alkaline burn with NaOH 1M resulted in better healing and greater epithelial thickness in TRPV1-/- group .In conclusion, TRPV1 is present in the cornea and operates in response to external aggressions. Situations existing as DM and xi toxicity BAC recognized as neuropathic decrease the expression of inflammatory mediators. Genetic absence and TRPV1 does not alter the phenotype, but has lower sensitivity and better restoration of the ocular surface after alkaline burn

A obesidade está aumentando de forma epidêmica em todo o mundo e a mesma possui efeito profundo na fisiologia da respiração, estando associada com estado de crônica inflamação sistêmica, que pode promover a hiper-reatividade das vias aéreas. Para estudar os processos que ocorrem nas vias aéreas, o presente estudo teve como objetivo avaliar a resistividade das vias aéreas de camundongos da linhagem Swiss induzidos à obesidade. Como metodologia foi realizada a análise dos efeitos da indução da obesidade pelo modelo de redução de ninhada; mecânica respiratória para analisar a resistividade do sistema respiratório pela mensuração das variáveis: elastância tecidual (Htis), das resistências dos pulmões (Gtis) e das vias aéreas (Raw) e histeresividade (η); análise morfométrica do tecido pulmonar para quantificar as células inflamatórias e os alvéolos normais, colapsados e hiperinsuflados; quantificação das proteínas colágeno III e elastina dos animais da ninhada normal e reduzida por meio da técnica do Western Blot, para verificar a presença de remodelamento. De acordo com os resultados obtidos foi possível constatar a eficácia do modelo de indução, pois houve aumento do peso corporal, do índice de Lee e da massa de gordura periepididimal e retroperitoneal. Com relação à mecânica pulmonar, não houve diferença entre os grupos para os valores basais, após a administração de salina (Sal) e metacolina (MCh), nos parâmetros Raw, Gtis, Htis e η. Frente ao desafio com salbutamol (Salb), apenas o η, que representa relação entre dissipação e conservação de energia nos tecidos pulmonares, apresentou diferença entre os grupos, sendo maior no grupo ninhada reduzida. Esse resultado pode ser atribuído a heterogeneidade acarretada pela broncoprovocação e a diminuição da resposta a broncodilatadores promovida pela inflamação e pela alteração da matriz extracelular. Houve diminuição de alvéolos normais e aumento do colapso alveolar, que pode acarretar aumento da viscoelasticidade pulmonar e heterogeneidade apresentada pelo mesmo o que também pode ser atribuído à presença do aumento de colágeno III e diminuição da elastina, encontrados neste estudo. Essa alteração do conteúdo de fibras colágenas e elásticas sugere um processo de remodelamento. Houve aumento de células inflamatórias mononucleares e polimorfonucleares o que indica presença de processo inflamatório, que também pode auxiliar no processo de remodelamento e desencadear hiper-responsividade. Portanto, a obesidade acarretou aumento de células inflamatórias, alterações na matriz extracelular do parênquima pulmonar e colapso alveolar nos animais da ninhada reduzida, porém não houve modificação nos parâmetros Raw, Gtis, Htis da mecânica pulmonar entre os grupos e no parâmetro η houve diferença após a administração do salbutamol, demonstrando que não houve alteração da responsividade. / Obesity is increasing in epidemic form throughout the world and it has a profound effect on the physiology of respiration and is associated with a state of chronic systemic inflammation, which can promote the hyperreactivity of the airways. To study the processes that occur in the airways, this study aimed to evaluate the resistivity of the airways strain obesity induced Swiss mice. We analyzed the effects of induction of obesity by reducing litter model; respiratory mechanics, to analyze the resistivity of the respiratory system by: tissue elastance (Htis), the resistances of the lungs (Gtis) and airway (Raw) and histeresividade (η), morphometric analysis of lung tissue for quantification of inflammatory cells and normal, collapsed and hyperinflated alveoli; quantification of the proteins collagen type III and elastin in animals normal and litter reduced by the technique of Western Blot to verify the presence of remodeling. According to the obtained results it can be seen that the induction model was effective because there was an increase in body weight, Lee index and mass periepididymal and retroperitoneal fat. With respect to lung mechanics, there was no difference between groups for baseline values after administration of saline (Sal) and methacholine (MCh) in Raw, Gtis, Htis and η parameters. Upon salbutamol (Salb) challenge, only the η, which represents a relationship between dissipation and energy conservation in the lung tissues, differed between groups, being higher in reduced litter group. This result can be attributed to heterogeneity entailed by bronchial provocation and diminished response to bronchodilators promoted by inflammation and alterations of the extracellular matrix. There was a decrease in normal alveoli and alveolar collapse increases, which can lead to an increased heterogeneity of lung and viscoelasticity for the same which can be attributed to the presence of increased and decreased collagen III, elastin, found in this study. This change of the content of collagen and elastic fibers suggests a remodeling process. There was an increase of mononuclear and polymorphonuclear inflammatory cells indicating the presence of inflammation, which can also aid in the remodeling process and lead to hyper- responsiveness. Therefore, obesity caused increase in inflammatory cells, changes in the extracellular matrix of the lung parenchyma and alveolar collapse in animals reduced litter, but there was no change in Raw, Gtis, Htis parameters of pulmonary mechanics between groups and the parameter η was no difference after administration of salbutamol, demonstrating that there had no change in responsiveness. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A leucemia linfoide aguda (LLA) é uma neoplasia hematológica agressiva, caracterizada pela expansão clonal de progenitores linfoides e ativação exacerbada de vias de sinalização. A via de sinalização de IGF1R/IRS1 inicia-se pela ligação do ligante IGF1 ao seu receptor transmembrana IGF1R, e subsequente ativação de seu substrato IRS1, que transmite sinais mitogênicos e antiapoptóticos, principalmente através da modulação das vias de sinalização PI3K/AKT/mTOR e MAPK . Estas vias de sinalização desempenham uma importante função na proliferação, sobrevivência e migração de células de leucêmicas. Dessa forma, o objetivo do nosso trabalho foi investigar a participação da via de sinalização IGF1R/IRS1 na LLA. Linhagens celulares Jurkat, MOLT-4, Namalwa e Raji foram tratadas ou não com inibidor de IGF1R/IRS1-2, NT157, ou com inibidor de IGF1R/IR, OSI-906, e submetidas à avaliação da viabilidade celular, apoptose, proliferação, ciclo celular, migração e expressão/ativação gênica e proteica. Células mononucleares de pacientes com LLA e de doadores saudáveis foram submetidas aos ensaios de viabilidade e apoptose, após tratamento com NT157 e OSI-906. O efeito do NT157 in vivo foi avaliado utilizando modelo de xenotransplante de células CEM em camundongos NSG. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa e Comitê de Ética no Uso dos Animais da Instituição. A análise estatística foi realizada pelo teste ANOVA e teste t de Student. O tratamento com NT157 reduziu a viabilidade e a proliferação, induziu apoptose e modulou o ciclo celular em todas as linhagens testadas (p<0,05). Similarmente, OSI- 906 reduziu a viabilidade e a proliferação, modulou o ciclo celular, porém não foi capaz de induzir apoptose nas linhagens de LLA (p<0,05). Os tratamentos com NT157 e com OSI-906 diminuíram significativamente a migração de Jurkat em fibronectina, porém não modularam a migração de Namalwa. Em um contexto molecular, a exposição ao NT157 resultou em inibição da fosforilação de proteínas da via de sinalização PI3K/AKT/mTOR e modulou a expressão de 25 genes relacionados com a via de sinalização MAPK, dentre eles CDKN1A (p21), FOS e JUN (p<0,05). OSI-906modulou a ativação das proteínas da via de sinalização PI3K/AKT/mTOR e a expressão gênica de p21, FOS e JUN, porém de uma forma diferente da modulação encontrada pelo tratamento com NT157 (p<0,05). Em células mononucleares de pacientes com LLA, NT157 induziu uma resposta heterogênea na viabilidade e induziu apoptose, e OSI-906 reduziu a viabilidade, porém não foi capaz de induzir apoptose nestes pacientes (p<0,05). Os tratamentos com NT157 e OSI-906 não apresentaram citotoxicidade em células de doadores saudáveis. Adicionalmente, o tratamento in vivo com veículo ou NT157 na dose de 50mg/kg/dia, via intraperitoneal, em modelos de xenotransplante com células CEM em camundongos NSG (n=5 para cada grupo) não apresentou efeitos antineoplásicos. Em conclusão, a inibição farmacológica de IGF1R/IRS1-2, por NT157, e de IGF1R/IR, por OSI-906, apresentaram efeitos antineoplásicos significativos em modelos de linhagens celulares e amostras primárias de pacientes com LLA. Os resultados dos estudos in vivo em modelos de xenotransplante indicam a necessidade de estudos de farmacocinética e farmacodinâmica para o NT157. Nossos resultados revelaram que NT157 exerce um efeito citotóxico nas células de LLA, enquanto que OSI-906 tem um efeito predominantemente citostático. Estes dados indicam que o inibidor de IGF1R/IRS1-2, NT157, obteve resultados antineoplásicos mais atrativos e a inibição direta de IRS1 pode ser um potencial alvo terapêutico em LLA. / Acute lymphoid leukemia (ALL) is an aggressive hematological neoplasm, characterized by clonal expansion of lymphoid progenitors and exacerbated activation of signaling pathways. The IGF1R/IRS1 signaling pathway initiated through binding of the ligand IGF1 to its transmembrane receptor IGF1R, and the subsequent activation of its substrate IRS1, which transmit mitogenic and antiapoptotic signals, mainly through the modulation of the PI3K/AKT/mTOR and MAPK signaling pathways. These signaling pathways play an important function in cell proliferation, survival and migration of leukemia cells. Therefore, the objective of our study was to investigate the participation of the IGF1R/IRS1 signaling pathway in ALL. Jurkat, MOLT-4, Namalwa and Raji cell lines were treated or not with IGF1R/IRS1-2 inhibitor, NT157, or with IGF1R/IR inhibitor, OSI-906, and evaluated for cell viability, apoptosis, proliferation, cell cycle, migration, gene and protein expression/activation. Mononuclear cells from patients with ALL and from healthy donors were submitted to the viability and apoptosis assays, after treatment with NT157 and OSI-906. The NT157 effect in vivo was evaluated using CEM cell line xenograft model in NSG mice. The study was approved by the Research Ethics Committee and the Ethics Committee on the Use of Animals of the Institution. Statistical analysis was performed by ANOVA and Student t test. Treatment with NT157 reduced viability and proliferation, induced apoptosis, and modulated the cell cycle in all cell lines tested (p<0.05). Similarly, OSI-906 reduced viability and proliferation, modulated the cell cycle, but was not able to induce apoptosis in ALL cell lines (p<0.05). Treatments with NT157 and OSI-906 significantly decreased the migration of Jurkat in fibronectin, but did not modulate the Namalwa migration. In a molecular context, the NT157 exposure resulted in inhibition of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway protein phosphorylation and modulated the expression of 25 genes related to the MAPK signaling pathway, including CDKN1A (p21), FOS and JUN (p<0,05). OSI-906 modulated the activation of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway proteins and the p21, FOS and JUN geneexpression, but in a different way from the modulation found by treatment with NT157 (p<0.05). In mononuclear cells of patients with ALL, NT157 induced a heterogeneous response in viability and induced apoptosis, and OSI-906 reduced viability, but was not able to induce apoptosis in these patients (p<0.05). Treatments with NT157 and OSI- 906 did not show cytotoxicity in healthy donor cells. Additionally, in vivo treatment with vehicle or NT157 at the dose of 50 mg/kg/day, intraperitoneally, in xenotransplantation models with CEM cells in NSG mice (n=5 for each group) showed no antineoplastic effects. In conclusion, the pharmacological inhibition of IGF1R/IRS1- 2, by NT157, and IGF1R/IR, by OSI-906, showed significant antineoplastic effects in cell line models and in primary samples of patients with ALL. The results of in vivo studies in xenotransplantation models indicate the need for pharmacokinetic and pharmacodynamic studies for NT157. In conclusions, our results revealed that NT157 exerts a cytotoxic effect on ALL cell lines and primary ALL cells, whereas OSI-906 has a predominantly cytostatic effect. These data indicate that the IGF1R/IRS1-2 inhibitor, NT157, obtained more attractive antineoplastic results and the direct inhibition of IRS1 may be a potential therapeutic to target in ALL.

As células produtoras de anticorpos desempenham um papel chave na resposta efetora a microrganismos, sendo o foco principal da maioria das vacinas existentes. Entretanto, elas podem ter efeitos deletérios em doenças autoimunes e na rejeição a transplantes. Apesar de grandes avanços no controle da resposta humoral, alguns desafios permanecem e neste contexto, novos alvos terapêuticos têm sido explorados. Sabe-se que alterações metabólicas decorrentes da ativação de células B estão intimamente relacionadas com a função efetora destas células, o que anteriormente se imaginava ser apenas um reflexo de crescimento e proliferação celular. Estas alterações são controladas por sensores metabólicos ativados logo após a ativação de células B, como o mTOR, o qual é componente central de dois complexos: mTORC1 e mTORC2. Estudos anteriores já reportaram o papel positivo exercido por mTOR na via glicolítica em células T, bem como na função efetora destas células. Aqui, nós formulamos a hipótese de que a via do mTOR favorece a via glicolítica em detrimento de OXPHOS em células B, e que estas alterações metabólicas impactam as funções efetoras das mesmas. Desta maneira, para investigarmos alterações nestas vias em decorrência de mTOR, células B foram isoladas de animais controle (CT), ou de animais com células B deficientes de mTORC1 (Raptor&#916;B) ou mTORC2 (Rictor&#916;B) e então estimuladas com LPS (lipopolissacarídeo) in vitro. Nossos dados indicam que a deficiência de mTORC2 beneficia OXPHOS em detrimento da via gicolítica, bem como a ativação de células B e a formação de plasmablastos. Na sequência, confirmamos que a redução nas taxas de glicólise, assim como a elevação da oxidação lipídica e de OXPHOS são cruciais para manter a elevada ativação de células B e formação de plasmablastos a partir de células B Raptor&#916;B e Rictor&#916;B. Constatou-se ainda que a produção total de IgM é elevada em células Rictor&#916;B após estímulo com LPS. Entretanto, identificamos que isso é decorrente do aumento de plasmablastos formados e não da capacidade individual de secreção dos mesmos. Diferentemente das células B deficientes, observamos que plasmablastos Raptor&#916;B e Rictor&#916;B reduzem a atividade mitocondrial. Na sequência, confirmamos que a atividade mitocondrial via oxidação lipídica é fundamental para a produção de anticorpos. Além disso, demonstramos que a deficiência de mTORC2 eleva a troca de isotipo, enquanto a de mTORC1 a diminui após estimulo com LPS e IL4. Posteriormente, o impacto da deficiência de mTORC2 em células B foi avaliado in vivo em modelo de transplante de pele. Neste caso, não observamos diferenças significativas na sobrevida do enxerto entre CT e Rictor&#916;B, mas foi constatado que apesar de ambos apresentarem formação de plasmócitos similares, animais deficientes apresentaram um número significativamente menor de células B na periferia. Assim, concluímos que a deficiência de mTORC1 ou mTORC2 em células B implica em uma maior diferenciação de plasmablastos e em uma maior produção total de anticorpos em Rictor&#916;B in vitro, enquanto um papel funcional para essas moléculas no contexto das células B in vivo ainda precise ser determinado. / Antibodies are produced by Antibody Secreting Cells (ASCs), which are essential to fight infections. They are also the basis of most successful vaccines available, however they can present deleterious effects in autoimmune diseases and in graft rejection. Even though there have been great improvements in controlling the humoral response, its proper manipulation still remains a challenge, thus new targets need to be explored. It is known that metabolic shifts that occur upon B cell activation are not only essential for cell growth and proliferation, but are also interconnected with these cells effector function. Metabolic shifts are controlled by metabolic sensors, as the mTOR, which is a core component of two complexes, mTORC1 and mTORC2. Previous studies with T cells have already reported that mTOR exerts a positive role on glycolysis, which in turn impacts the effector function of T cells. We then hypothesized that mTOR favors glycolysis over Oxidative Phosphorylation (OXPHOS) in B cells, and that these metabolic changes impact the effector function of B cells. Thus, to investigate the impact of the mTOR pathway on B cells, we isolated B cells from mice with mTORC1 deficient B cells (Raptor&#916;B) or mTORC2 deficient B cells (Rictor&#916;B) or Control mice (CT), and stimulated them in vitro with lipopolysaccharide (LPS). Our results indicate that the deficiency of mTORC2 favors OXPHOS over glycolysis, as well as B cell activation markers expression and plasmablast formation. Next, we confirmed that the reduced glycolysis levels, improved lipid oxidation and OXPHOS are in fact crucial for the enhanced activation and plasmablast formation observed in Raptor&#916;B and Rictor&#916;B B cells. We also described that IgM secretion was elevated in B cells from Rictor&#916;B after stimuli with LPS, however we found that this increase was due to the overall increase in plasmablasts in this group and not to their individual antibody secretion capacity. Interestingly, Raptor&#916;B and Rictor&#916;B plasmablasts differently from B cells, reduce their mitochondrial activity. Subsequently, we confirmed that the mitochondria via lipid oxidation is actually essential for antibody secretion. In addition, we showed that mTORC2 deficiency increases isotype switching, while mTORC1 deficiency diminishes it when IL4 was added to LPS. We then sought to determine if mTORC2 deficiency in B cells would present an impact in vivo in a skin graft model. However, we did not observe a significant difference in graft survival between the CT and Rictor&#916;B mice and in plasmacyte numbers, but we did observe a significant reduction in B cells in the periphery. Thus, we conclude that mTORC1 and mTORC2 deficiency leads to an improved plasmablast differentiation and an overall increase in antibody secretion in the last one in vitro, whereas the role of these sensors remains to be determined in vivo.

Introdução: O câncer das Vias Aéreas e Digestivas Superiores compreendem um grupo de tumores que se distribuem por diversas regiões anatômicas. Para a maioria das localizações os principais fatores de risco são o tabaco e o álcool. Como os fatores de risco são conhecidos espera-se que as diversas campanhas de prevenção e detecção precoce estivessem propiciando à diminuição da incidência. Objetivos Estimar em algumas localidades do mundo as tendências da incidência dos tumores de lábio, língua, boca, glândulas salivares, orofaringe, nasofaringe e hipofaringe de 1969 a 1999. Métodos Analisou-se os coeficientes de incidência de 18 Registros de Câncer de Base Populacional que possuíam toda a série histórica publicada no “Cancer Incidence in Five Continents".utilizando-se modelos de regressão polinomial.Resultados Houve tendência de aumento, estatisticamente significativo, para o câncer de língua e boca em São Paulo em mulheres e em homens de diversos países europeus e localidades dos EUA. Em contrapartida houve queda em Porto Rico, Mumbai e Cingapura. O câncer de lábio decresceu na maioria das localidades em homens. Entretanto em países do norte da Europa e em Iowa houve aumento em mulheres. O câncer de orofaringe aumentou em homens na Europa e em Iowa e decresceu em Cali, Quebec, e localidades da Ásia. O câncer de hipofaringe apresentou tendência crescente em várias localidades da Europa em homens e queda na Suécia, Inglaterra, Cingapura e Porto Rico. Conclusão os tumores de língua, boca e orofaringe continuam apresentando tendências de crescimento para diversas localidades. Por isso há a necessidade de campanhas propiciando a prevenção e a detecção precoce. / Introduction: Upper Aerodigestive Tract Cancer comprises a group of neoplasms which spread over many anatomic regions. Considering most of the locations, the worst risk coefficients are tobacco and alcohol. Taken the coefficients are known, prevention and precocious detection campaigns are expected to lessen the incidence statistics. Objectives. To estimate the trends on lip, oral cavity (tongue and mouth), salivary gland, oropharyngeal, nasopharyngeal and hypopharyngeal cancer incidences in some locations worldwide between 1969 - 1999. Methods Incidence coefficient data of eighteen records from the Population Database Cancer Registry which had its history published in “Cancer Incidence in Five Continents" has been analysed applying polynomial regression models. Results There has been a statistically significant increase to the number of oral cavity cancer in Sao Paulo among women; in European countries as well as in some North American cities, the increase was detected among both men and women. On the other hand, there has been a decrease in Puerto Rico, Mumbai and Singapore. The incidence of lip cancer decreased in most locations (among men). However, an increase has been detected in North Europe and in Iowa, USA (among women). Oropharyngeal cancer has increased in number among men in Europe and Iowa, USA; it decreased in number in Cali, Quebec, and other areas in Ásia. Hypopharyngeal cancer has shown to be an increasing trend in many Europeans countries among men, but a decreasing one in Sweden, England, Singapore and Puerto Rico. Conclusion Oral cavity and oropharyngeal neoplasms trends proceed grow in many locations. Finally, the need for prevention and precocious detection campaigns is urgent.