Orientador: Delia B. Rodriguez-Amaya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-17T19:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_JoseEmilsonMacedo_D.pdf: 1145251 bytes, checksum: 12b769bfa14756a6b420616c8d648c83 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A implementação de novas tecnologias de processamento e o desenvolvimento de novos produtos amplia a necessidade de se estudar não apenas seus atributos sensoriais e sua vida de prateleira, mas também os seus aspectos nutricionais e funcionais. Dentre estas tecnologias emergentes, o uso da microencapsulação na preservação dos carotenóides e flavonóides em alimentos durante o processamento e na estocagem do produto, focando os materiais de parede e as condições operacionais utilizadas foram objetos da revisão bibliográfica no primeiro capítulo. No segundo capítulo, as técnicas de processamento sob alta pressão e seus possíveis efeitos na isomerização e degradação dos carotenóides em frutas e hortaliças foi o foco da pesquisa bibliográfica. A microfiltração de sucos e polpas de frutas, suas limitações tecnológicas, a permeação e possíveis perdas de carotenóides, flavonóides e da vitamina C foram descritos na revisão do terceiro capítulo. No quarto capítulo, a otimização da microencapsulação por spray drying da polpa de pitanga com maltodextrina, amido modificado e goma arábica, visando a maior retenção dos carotenóides e dos flavonóides, foi realizada por metodologia de superfície de resposta. As melhores retenções dos carotenóides e dos flavonóides no processamento por spray drying ocorreram na temperatura de entrada de 150°C, numa proporção de 25% de polpa e 75% de material de parede. A goma arábica apresentou a melhor eficiência na microencapsulação. A estabilidade de carotenóides e flavonóides durante a estocagem das microcápsulas na temperatura ambiente e na presença de oxigênio e luz foi também investigada no capítulo 5. A goma arábica promoveu a maior estabilidade dos compostos estudados durante a estocagem na presença de luz (345lux). A degradação de carotenóides seguiu uma cinética de primeira ordem e os flavonóides, a cinética de zero ordem. O efeito da alta pressão hidrostática na polpa de cajá, na manutenção das formas trans-carotenóides ou na formação de cis-carotenóides é apresentado no capítulo 6. As polpas não pressurizadas e as pressurizadas não diferiram significativamente nas concentrações dos trans-carotenóides. As concentrações dos cis-isômeros foram significativamente maiores nas amostras pressurizadas, com exceção do ß-caroteno. Acima de 400MPa e por mais de 15 minutos de pressurização, fica mais evidente a tendência de redução da forma trans em todos os carotenóides estudados e de modo inverso, uma elevação das concentrações de cis-carotenóides na polpa de cajá pressurizada. No capítulo 7 são apresentados os resultados da microfiltração de polpas de goiaba, pitanga e tomate, onde as concentrações de carotenóides, flavonóides e da vitamina C foram quantificadas ao longo do fluxograma de processamento. Não houve a permeação dos carotenóides através da membrana filtrante. Mesmo com permeação dos flavonóides através das membranas, as concentrações no retentado foram duas vezes maiores para os três frutos em estudo, em relação as obtidas no permeado. O ácido ascórbico foi o composto que mais permeou. No entanto, houve perdas em todas as etapas de processamento / Abstract: The implementation of new processing technologies and the development of new products amplifies the necessity to study not only the sensory attributes and the shelf life, but also their nutritional and functional aspects. Among these emerging technologies, the use of microencapsulation in the preservation of carotenoids and flavonoids in foods during processing and storage of the product, focalizing wall materials and the operating conditions used, were the objectives of the review of literature in first chapter. In the second chapter, processing techniques at high pressure and their possible effects on the isomerization and degradation of carotenoids in fruits and vegetables were the focus of the literature review. The microfiltration of juices and pulps, the technological limitations, the permeation and possible losses of carotenoids, flavonoids and vitamin C were described in the review of the third chapter. In the fourth chapter, the optimization of microencapsulation by spray drying of the pulp of pitanga with maltodextrin, modified starch and gum Arabic, aiming at greater retention of carotenoids and flavonoids, was carried out by response surface methodology. The best retentions of both carotenoids and flavonoids in spray drying occurred at an inlet temperature of 150°C, at a proportion of 25% pulp and 75% wall material. Gum Arabic showed greater microencapsulation efficiency. The stability of carotenoids and flavonoids during storage of the microcapsules at ambient temperature in the presence of oxygen and light was investigated in Chapter 5. Gum Arabic promoted greater estability of the compounds studied during storage in the presence of light (345lux). The degradation of carotenoids followed first order kinetics and of flavonoids, zero order kinetics. The effect of high hydrostatic pressure on the pulp of cajá, in retaining transcarotenoid or in the formation of cis-carotenoid, is presented in Chapter 6. The unpressurized and pressurized pulps did not differ significantly in the concentrations of the trans-carotenoids. The concentrations of the cis-isomers were significantly higher in the pressurized samples, with the exception of ß-carotene. Above 400MPa and for more than 15 minutes of pressurization, the tendency of the trans¿form to decline for all the carotenoids studied, and conversely, the elevation of cis-carotenoids in the pressurized cajá pulp became more evident. Chapter 7 presents the results of microfiltration of pulp from guava, pitanga and tomato, in which the concentrations of carotenoids, flavonoids and vitamin C were determined along the processing flow diagram. There was no permeation of carotenoids through the filtering membrane. Although flavonoids permeated through the membrane, the concentrations in the retentate were twice those of the permeate, for all three fruits studied. Ascorbic acid permeated more, but there were losses in all the processing steps / Doutorado / Engenharia de Alimentos / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_GlauraScantamburloAlves_D.pdf: 1055644 bytes, checksum: ab0438c5919291591e8712767f1827c9 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A hiperglicemia está relacionada com desordens no sistema reprodutor masculino. Quando induzida quimicamente, ela pode causar diminuição nos níveis dos hormônios sexuais, no peso dos órgãos reprodutores, na concentração espermática, na fertilidade bem como alteração no comportamento sexual de ratos machos. No homem, a hiperglicemia pode levar a impotência sexual, diminuição da libido e da espermatogênese. Contudo, os principais fatores que ocasionam essas alterações ainda são discutíveis. Uma das hipóteses seria o aumento do estresse oxidativo, o qual pode causar peroxidação lipídica nas membranas biológicas, neuropatias hiperglicêmicas, danificar a molécula de DNA e comprometer a comunicação celular. No entanto, há escassez de informações que relacionem o efeito do estresse oxidativo aumentado com a morfofisiologia do sistema reprodutor masculino em indivíduos hiperglicêmicos. Diante disso, o objetivo deste estudo foi avaliar se o tratamento com antioxidantes (vitaminas C e/ou E), ao diminuir o estresse oxidativo, poderia diminuir os danos causados pela hiperglicemia no sistema reprodutor masculino de ratos. Para tanto, a hiperglicemia foi induzida quimicamente utilizando dose única do antibiótico streptozotocin em ratos machos adultos (90 dias de idade; 9 ou 10/grupo experimental). Esses animais foram divididos em grupos experimentais que receberam vitamina C e E (sozinhas ou associadas), ou apenas os veículos (grupo normoglicêmico) durante trinta dias consecutivos por via oral. No 31º dia do período experimental, após a eutanásia dos animais, foi coletado sangue para avaliação dos biomarcadores do estresse oxidativo e dos níveis hormonais, e órgãos reprodutores para avaliação dos parâmetros espermáticos e resposta noradrenérgica do ducto deferente. O delineamento experimental acima descrito foi empregado a um outro lote de animais para realização das análises histopatológicas e morfométricas do testículo e epidídimo. Os resultados mostraram que a hiperglicemia causou significativo aumento do estresse oxidativo e da sensibilidade dos receptores a1 noradrenérgicos, diminuição no peso corporal e dos órgãos reprodutores, redução na motilidade espermática, no nível de testosterona, aumento no número de espermatozóides malformados e um rearranjo nos componentes do tecido epididimário. As vitaminas reduziram significativamente o nível do estresse oxidativo e o número de espermatozóides malformados, mas em ambos os casos a vitamina C foi mais efetiva. As vitaminas também reduziram parcialmente a sensibilidade dos receptores a à noradrenalina. Com relação aos prejuízos da motilidade espermática a vitamina C sozinha amenizou parcialmente essas alterações. Também, a administração da vitamina C sozinha preveniu a redução da proporção dos componentes epididimários. Além disso, a vitamina C sozinha e associada com a vitamina E restabeleceram parcialmente os níveis de testosterona. Entretanto, a associação das vitaminas causou uma redução significativa nos níveis de LH. Contudo, a produção espermática diária, o tempo de trânsito espermático pelo epidídimo, o aspecto histológico dos testículos e epidídimos, o diâmetro dos túbulos seminíferos, os níveis de FSH e a resposta máxima noradrenérgica foram estatisticamente semelhantes entre os grupos experimentais. Em conclusão, essas vitaminas, atuando como antioxidantes, podem diminuir algumas alterações no sistema reprodutor masculino de ratos causados pela hiperglicemia. / Abstract: The hyperglycemia is related to disorders in the male reproductive system. When induced chemically, it can reduce the sexual hormones' level, reproductive organs' weight, sperm concentration, and fertility as well as the male rat sexual behavior. In men, the hyperglycemia can lead to sexual impotence, libido and spermatogenesis reduction. However, the main factors that are responsible for these alterations are still controversial. One of the possible causes for this would be the increase of the oxidative stress, which can cause lipid peroxidation in the biological membranes, hyperglycemic neuropathies, injury in the DNA molecule and to compromise the cellular communication. However, there is a lack of information related to the increased oxidative stress effect with the morphophysiology from the male reproductive system in hyperglycemic subjects. In this sense, the aim of the present study was to evaluate if the treatment with antioxidants (vitamins C and/or E), lowering the oxidative stress, could somehow attenuate the damages caused by hyperglycemia in the male rat reproductive system. Therefore the hyperglycemia was induced chemically using a single dose of streptozotocin antibiotic in male adult rats (90 days old; 9 or 10/experimental group). These animals were divided into experimental groups that received vitamin C or E (isolated or in association), or only the vehicles (normoglycemic group) during thirty consecutive days orally. At the 31st day from the experimental period, after the euthanasia of the rats, blood was collected to evaluate biomarkers of oxidative stress and hormonal levels, and reproductive organs to evaluate the permatic parameters and the noradrenergic response of vas deferens. The experimental design described above was applied in another amount of animals for the accomplishment of histopathological and morphometric analysis from testis and epididymis. The results showed that hyperglycemia caused significant increase in the oxidative stress and in the sensibility of noradrenergic a1 receptors, decrease in the body mass and in the reproductive organs' weights, reduction on the sperm motility, on epididymal tissue, in the testosterone level, an increase in the malformed sperm number and a rearrangement in the epididymal tissue components. The vitamins reduced significantly the level of oxidative stress and the number of malformed sperm, but in both cases vitamin C was more effective. These vitamins also reduced partly the sensibility to noradrenalin in the a receptors. In relation to the injuries in the sperm motility, the vitamin C alone attenuated partly these alterations. In addition, the vitamin C alone also prevented the reduction of the epididymal compartimental. Besides that, the vitamin C alone and in association to vitamin E reestablished partly the testosterone levels. Meanwhile, the association of the vitamins caused a significant reduction in the LH levels. Nonetheless, the daily sperm production, the transit time by epididymis, the histological aspect of the testes and epididymides, the seminiferous tubular diameter, the FSH levels and the maximum noradrenergic response were statistically equal among the groups. In summary, these vitamins, acting as antioxidants, may reduce some changes in the rat male reproductive system caused by hyperglycemia. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O exercício físico intenso altera o sistema antioxidante, aumentando a geração de radicais livres e/ou diminuindo a concentração de antioxidantes. Assim o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da oferta de vitamina C através de um suplemento alimentar e dieta rica em ácido ascórbico no estresse oxidativo induzido pelo exercício. A amostra foi composta por 13 nadadores de elite (6 homens e 7 mulheres), com idades entre 18 e 26 anos, IMC médio 21,8kg/m², que treinavam em média 19,4h semanais. Os atletas foram submetidos à carga de exercício aguda em 3 fases, controle (C), dieta rica em vitamina C (D) e suplemento de vitamina C (S), nas quais amostras de sangue foram colhidas antes, imediatamente após e 24 horas depois do exercício, para determinação bioquímica e do estresse oxidativo. O uso de suplementos alimentares foi feito pela maioria dos nadadores (92,3%), e os suplementos mais usados eram Maltodextrina, associação de proteína e carboidrato, enquanto o relato do consumo de antioxidantes não foi muito freqüente (25%). Em relação ao consumo de antioxidantes, os nadadores apresentavam consumo alimentar variável de vitamina C, sendo que muitos deles apenas adequaram o consumo devido à adição feita pelo estudo. O consumo de vitamina E foi inadequado para todos os atletas, já o consumo de selênio, retinol e zinco tiveram uma grande oscilação. Durante as fases o único antioxidante que apresentou flutuações foi o ácido ascórbico, que foi menor na fase C em relação às outras fases. Para a maioria dos indivíduos o consumo de carboidrato e fibras se mostrou insuficiente, e o de lipídeos e calorias adequados, enquanto o consumo de proteínas variou bastante. O uso de dieta rica em vitamina C favoreceu uma menor peroxidação lipídica em nadadores de alto rendimento, já que apresentou menores valores de FOX, e diminuição da peroxidação lipídica após exercício, pela diminuição dos valores de TBARS, enquanto tiveram aumento dos níveis de vitamina C no plasma logo após o exercício. Enquanto o uso de suplemento de vitamina C, que também conteve a peroxidação lipídica após exercício, aumentou o poder antioxidante nos mesmos nadadores, devido maiores níveis do antioxidante GSH. Os quais sem uso de nenhuma adição de vitamina C tiveram um maior dano hepático e tecidual, pois apresentaram maiores níveis de TGO, menores níveis de antioxidantes, devido aos baixos níveis de vitamina C e GSH, e um aumento do ácido úrico, um antioxidante que aumenta em situações onde há grande quantidade de radicais livres presentes. Ainda pode-se verificar que, antes do exercício, quanto mais ácido ascórbico na dieta mais vitamina C, menos TGO e menos ácido úrico no sangue; e ainda logo após o exercício e 24 horas depois quanto mais ácido ascórbico menos TGO e menos ácido úrico séricos. Sendo assim as mudanças observadas com a adição de vitamina C à dieta de nadadores de alto rendimento sugere um importante papel do ácido ascórbico plasmático e da suplementação alimentar na defesa contra o estresse oxidativo induzido pelo exercício / The strenuous exercise alters the antioxidant system by increasing the generation of free radicals and / or decreasing the concentration of antioxidants. Then the aim of this study was to investigate the effects of supply of vitamin C through a dietary supplement and diet rich in ascorbic acid in the exercise-induced oxidative stress. The sample was compound of 13 elite swimmers (6 men and 7 women) aged between 18 and 26 years, average BMI 21.8 kg / m², who trained on average 19.4 hours per week. The athletes were submitted to acute exercise load in three phases: control (C), diet rich in vitamin C (D) and supplement vitamin C (S), in which blood samples were collected before, immediately after and 24 hours after exercise to biochemical determination and oxidative stress. The use of dietary supplements is done by most of the swimmers (92.3%), and supplements most used were maltodextrin, association of protein and carbohydrate, while the report of consumption of antioxidants was not very frequent (25%). Regarding the consumption of antioxidants, the swimmers had dietary vitamin C variable, and many of them just adjusted consumption due to addition made by the study. The consumption of vitamin E was inadequate for all athletes, while the consumption of selenium, retinol and zinc had a great oscillation. During the phases the only antioxidant that showed fluctuations was ascorbic acid, which was lower in phases C when compared to other phases. For most individuals the consumption of carbohydrates and fibers were insufficient, and lipid and calories adequate, while protein intake varied widely. The use of diet rich in vitamin C favored a lower lipid peroxidation in swimmers high performance, then showed lower values of FOX, and decreased lipid peroxidation after exercise by the decrease in TBARS values, while they had increased levels of vitamin C plasma immediately after exercise. While the use of supplement vitamin C, which also contained the lipid peroxidation after exercise, increased the antioxidant power of the same swimmers, due higher levels of the antioxidant GSH. This without use addition of vitamin C had a greater damage liver and tissue, because they showed higher levels of TGO, lower levels of antioxidants, due lower levels of vitamin C and GSH, and increased uric acid, an antioxidant that increases in situations where there are lots amount the free radicals presents. Further can be seen that, before exercise, the more ascorbic acid in vitamin C diet, less TGO and less uric acid in blood, and even after exercise and 24 hours after the more ascorbic acid less serum TGO and uric acid. Thus the observed change with the addition of vitamin C to the diet of high-performance swimmers suggests an important role of ascorbic acid and dietary supplementation in protecting against exercise-induced oxidative stress.

O aumento da conscientização por parte da população em relação ao impacto da alimentação no estado de saúde tem imposto à indústria de alimentos uma série de novos desafios, entre eles a necessidade de desenvolver alimentos com maior apelo de \"saudabilidade\" e que promovam bem-estar físico e mental. Em função das recentes exigências do consumidor, os compostos bioativos, aqueles capazes de otimizar funções fisiológicas atuando na promoção e prevenção da saúde têm sido alvos de inúmeras pesquisas. Incorporar compostos bioativos em alimentos é um difícil tarefa, pois muitos compostos bioativos são altamente susceptíveis à degradação quando incorporado à matriz alimentícia. Entre esses compostos está o ácido ascórbico, considerado um composto bioativo por ser um potente antioxidante, que além do seu papel no organismo humano, inclusive vitamínico, também exerce função de aditivo alimentar atuando como um antioxidante natural capaz de evitar ou retardar a oxidação de componentes da matriz alimentícia, evitando assim, alterações de cor e/ou odor desagradáveis. Uma alternativa viável e promissora de incorporar ácido ascórbico à matriz alimentícia evitando sua degradação seria o uso da tecnologia de microencapsulação. Das numerosas técnicas de microencapsulação disponíveis, spray chilling, também conhecida como spray congealing ou spray cooling, vem recebendo especial atenção nos últimos anos em função do seu baixo custo e facilidade de execução. Neste sentido, este trabalho objetivou-se estudar a microencapsulação do ácido ascórbico pela técnica de spray chilling e aplicar as micropartículas carregadas em um produto cárneo emulsionado, não apenas para desenvolvimento de um alimento contendo composto funcional, mas também para substituir o antioxidante até então utilizado na indústria de alimentos para o produto cárneo em questão. O estudo foi dividido em 3 etapas, duas delas compreenderam o desenvolvimento e caracterização das micropartículas lipídicas sólidas carregadas com ácido ascórbico e a terceira à aplicação do ácido ascórbico encapsulado em salsicha produzida com carne de frango. A estabilidade do ácido ascórbico microencapsulado foi consideravelmente melhorada em comparação com sua forma livre. A tecnologia de spray chilling revelouse como uma técnica eficaz de microencapsulação para atender o objetivo proposto. A aplicação do ácido ascórbico encapsulado em salsicha foi bem sucedida, foi produzido um alimento com características similares ao convencional, inclusive, com aceitação sensorial favorável. Foi atendido o objetivo de microencapsular o ácido ascórbico e promover sua aplicação em uma matriz alimentícia. Os resultados desse trabalho poderão subsidiar novos estudos com intuito de microencapsular outros compostos bioativos e de aplicar o ácido ascórbico microencapsulado em outras matrizes alimentícias seja com objetivo de desenvolver alimentos funcionais e/ou de substituir aditivos alimentares atualmente utilizados que não oferecem nenhum benefício adicional à saúde do consumidor por um composto que além de atuar como antioxidante na matriz alimentícia, tem função vitamínica e de composto bioativo no organismo favorecendo a manutenção da saúde do consumidor, e assim, atendendo as novas tendências de busca por alimentos mais saudáveis. / The increased awareness on the part of the population in relation to the impact of food on health has imposed the food industry a series of new challenges, among them the need to develop foods with greater appeal of healthfulness and that promote wellbeing. Due to recents demands consumer, the bioactive compounds, those able to optimize physiological functions working in health promotion and disease prevention have been the targets of numerous studies. Incorporate bioactive compounds in foods is a difficult task because many bioactive compounds are highly susceptible to degradation when incorporated into the food matrix. Among these compounds is ascorbic acid, considered as a bioactive compound to be a potent antioxidant in addition to its role in the human body, including vitamin, also exerts a function as a food additive acting as a natural antioxidant can prevent or retard oxidation Component the food matrix, thus avoiding color change and/or unpleasant odor. A viable and promising alternative to incorporating ascorbic acid to the food matrix preventing their degradation would be the use of microencapsulation technology. Of the numerous techniques available microencapsulation, spray chilling, also known as spray congealing or spray cooling, has received special attention in recent years due to their low cost and ease of implementation. Thus, this work aimed to study the microencapsulation of ascorbic acid by spray chilling technique and apply the loaded microparticles in a emulsified meat product, not only for the development of a food containing functional compound, but also to replace the hitherto used antioxidant in the food industry for meat product in question. The study was divided into three stages, two of which comprised the development and characterization of solid lipid microparticles loaded with ascorbic acid and third application of ascorbic acid produced sausage with encapsulated in chicken. The stability of the microencapsulated ascorbic acid has been considerably improved compared to the free form. The spray chilling technology proved to be an effective technique of microencapsulation to meet the objective. The application of ascorbic acid encapsulated in sausage was successful food was produced with characteristics similar to conventional inclusive, with favorable sensory acceptability. Was served the purpose of microencapsulate ascorbic acid and promote its application in a food matrix. The results of this study may support further studies aiming to microencapsulate other bioactive compounds and apply ascorbic acid microencapsulated other food matrix is aiming to develop functional foods and/or replace currently used food additives that offer no additional benefit to health consumer for a compound that in addition to acting as an antioxidant in food matrix has vitamin function and bioactive compound in the body favoring the maintenance of the health of the consumer, and thus, given the new trends search for healthier foods.

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-26T04:11:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aldrigue_MauroLuiz_D.pdf: 4824419 bytes, checksum: ad7cda2a5f6c5f9480fcf5bcc909dd80 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Atualmente, a vitamina C é a mais importante dentre as vitaminas comercializadas. Destaca-se por sua eficiente ação antioxidante, empregada em alimentos e seu largo uso como fármaco. Entre os compostos que apresentam esta atividade vitamínica, o ácido L-ascórbico (AA) é a forma mais difundida e comercializada, embora o produto de sua oxidação, o ácido desidroascórbico (DHAA) possua a mesma atividade vitamínica. Já, com cerca de 5% desta atividade, o ácido isoascórbico (IAA) é adicionado a vários alimentos, o, que leva a necessidade de métodos eficientes também para o seu controle. Para melhor avaliar o potencial vitamínico de fontes naturais de vitamina C, que são as frutas, os legumes e seus produtos, busca-se desenvolver métodos que determinem simultaneamente estas formas ativas, o que constitue em um dos grandes desafios metodológicos na atualidade. Assim, a metodologia para análise das formas ativas de vitamina C (AA, DHAA e lAA) foi estabelecida com a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), utilizando coluna Spherisorb ODS-2, 5Jµm,150x4,6mm, fase móvel aquosa com 2,5mmol/L de cetrimida e 25mmol/L de acetato de amônia, pH 5,60 ajustado com ácido acético e vazão de 0,80mL/min, utilizando detector de arranjo de diodos, operando a 263nm. A quantificação foi feita por padronização externa, através das curvas analíticas. Os limites de detecção e quantificação estabelecidos foram de 0,5Jµg/mL e 1,0µg/mL, respectivamente, tanto para o AA DHAA e lAA. As taxas de recuperação foram de 97,8; 98,8 e 117,1% para o AA DHAA e lAA, respectivamente. Os testes de repetibilidade apresentaram coeficientes médios de variação abaixo de 6,0%. Concomitantemente, uma outra condição cromatográfica de análise foi desenvolvida, com os mesmos objetivos, empregando uma coluna PLRP-S, 5µm,100A, 250x4,6mm, fase móvel aquosa com 250mmol/L de NaH2P04,pH 3,30, ajustado com HCl, vazão de 0,50mL/min, utilizando o mesmo sistema de detecção. Os limites de detecção e quantificação, para esta nova condição, foram 0,35µg/mL e 1,0µg/mL, respectivamente para todas as formas de vitamina C estudadas e os coeficientes de variação abaixo de 10,0%. Para a detecção de DHAA, em ambas as condições, foi utilizada a reação com DL-homocisteína e a quantificação por diferença entre duas injeções. Estudou-se também a reação do DHAA com o-fenilenodiamina (o-PDA), para detecção em uma única injeção, porém obteve-se menor sensibilidade e maior tempo de reação. Na aplicação em amostras optou-se pela metodologia desenvolvida com coluna C18, principalmente por apresentar uma melhor resolução e um menor custo. O método foi aplicado na determinação de vitamina C total (AA e DHAA) em caju, cujo teor variou de 207,0 a 300,8mg/l00g em frutos maduros. Nos produtos de caju a concentração variou entre 148,5 a 243,0mg/100g em sucos comerciais; 118,0mg/100g em polpa congelada comercial; 229,0 a 318,5mg/100g em polpa congelada artesanal; e 170,7mg/100g em néctar. Os frutos de acerola apresentaram teores médios de 1229,2mg/100g em frutos maduros a 3498,lmg/100g em frutos verdes. Nos sucos comerciais os valores obtidos variaram de 710,0 a 881,2mg/100g; 1141,1 a 1375,2mg/100g na polpa congelada comercial e 282,3mg/100g no néctar. Outras matérias-primas também tiveram seu teor de vitamina C determinado, como uva e suco de uva comercial, goiaba vermelha, ameixa, figo-da-índia e beterraba. O DHAA foi detectado exclusivamente em ameixa e uva niágara e com teor elevado em frutos de caju (45,7%) e frutos maduros de acerola (20,7%). Os resultados foram comparados com o método oficial de titulação com 2,6-dicloroindofenol. O estudo de validação do método desenvolvido com a coluna C18, apresentou resultados bastante satisfatórios para recomendá-Io na aplicação da determinação de vitamina C em trutas e seus produtos, além de oferecer duas vantagens em relação ao método oficial: não apresenta interferência em matrizes coloridas e possibilita a determinação do DHAA, que é imprescindível em alguns casos / Abstract: Currently, amongst commercially available vitamins, vitamin C is the most important. Due to its efficient antioxidant action, it is used in foods and widely in farmaceuticals. Of the substances which present this vitaminic activity, L-ascorbic acid (AA) is a well known and commercialized form, though its oxidation product, dehydroascorbic acid (DHAA) possesses the same amount of antiascorbutic action. Isoascorbic acid (IAA) which possesses about 5% of this activity is added to various foods, thus requiring efficient methods for its control. To better evaluate the vitaminic potential of the natural sources of vitamin C, i.e. fruits, legumes and their products, the need to develop methods which could simultaneously determine these active forms imposes a great methodological challenge. Thus, a methodology for the analysis of the various active forms of vitamin C (AA, DHAA, IAA) was developed, using a High Performance Liquid Chromatography (HPLC) technique, and using a Spherisorb ODS-2 column, 1,5µm particle size, 15cmx4.6mm i.d. The aquous mobile phase was 2.5mmol/L of cetrimide and 25mmol/L of ammonium acetate, pH 5.60 adjusted with acetic acid and a flow rate of 0.8mL/min, using a diode array detector (DAD) operating at 263nm. Quantitative data were obtained using calibration curves constructed by plotting peak area versus concentration. Detection and quantification limits were 0.5 and 1.0µg/mL for AA, DHAA and IAA, respectively. The recovery was 97.8% for AA, 98.8% for DHAA and 117.1% for IAA. Reapeated injections showed a relative standard deviation lower than 6.0%. Concomitantly, another method was also developed, with the same objectives, with a PLRP-S column, 5µm particle size, 100A pore size, 25cmx4.6mm i.d., mobile phase of 250mmol/L NaH2P04, pH 3.30 adjusted with HCI, flow rate of 0.50mL/min and DAD (?=263nm). Detection and quantification limits were 0.35µg/mL and 1.0µg/mL respectively. The relative standard deviation was lower than 10.0%. For the detection of DHAA, in both methods, the reaction with DL-homocistein was used and quantification by difference, using two injections. A reaction of DHAA with o-phenylenediamine (o-PDA) was also studied, for detection with single injection, but with lower sensitivity in the UV detection and a reaction which consumed much time. For application in the samples we opted for the methodology developed using the CI8 column, mainly for presenting a better resolution and being less expensive. The determination of total vitamin C (AA and DHAA) was carried out in cashew fruit, which varried from 207.0 to 300.8mg/100g in mature fruits and 148.5 to 243.0mg/100g in commercial juices. Commercial frozen cashew pulp presented 118.0mg/100g and artesanal pulp 229.0 to 318.5mg/100g, while a nectar presented 170.7mg/100g. The West Indian cherry fi-uitspresented a variation trom 1229.2mg/100g in mature fruits to 3498.1mg/100g in green fruits. Commercial juices varried trom 710.0 to 881.2mg/100g; frozen commercial pulp from 1141.1 to 1375.2mg/100g and nectar 282.3mg/100g. Vitamin C was determined in other samples: grape, grape juice, prune, red guava, figo-da-Índia and beeroot. DHAA was only detected in prune and niagara grapes and at higher concentrations in cashew fruits (45.7%) and mature West Indian cherry fruits (20.7%). The results were compared with the official method of titration with 2,6- dichloroindophenol. The study of the validation of the method developed with the C18 column, presented satisfactory results thus being recommended for the determination of vitamin C in fruits and their products, besides offering the advantages in relation to the method of AOAC in matrixes which present interference with the color during titration, and it also offers the possibility of determining of DHAA, which is necessary in some cases / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

>Magister Scientiae - MSc / Blood pressure and heart rate is known to increase during smoking. These effects are specifically associated with nicotine while the other components of tobacco smoke seem to be of minor importance. It is becoming increasingly clear that fetal nicotine exposure, through transfer of nicotine via the placenta, has numerous consequences that is detrimental to the health of the fetus and that these effects may last into adulthood or perhaps even manifest itself later in life. In this study, we investigated the effects of maternal nicotine exposure during pregnancy and lactation on the blood pressure of the male offspring. A preliminary study indicated that the female offspring do not become hypertensive. We were particularly interested to determine whether hypertension in the offspring could be prevented or attenuated by vitamin C (an antioxidant) therapy. When confirmed to be pregnant, female Wistar rats were divided into four groups. The control group (group 1) received saline (1ml/day, s.c), the animals in group 2 received nicotine (1mg/kg/day in ml, s.c), group 3 animals received a combination of saline (1 ml/day s.c.) and vitamin C (1g/l in drinking water) and the animals in group 4 received a combination of nicotine (1mg/kg/day, s.c) and vitamin C (1g/l in the drinking water) during pregnancy and lactation. At weaning eight animals from group 2 received vitamin C in the drinking water (1g/l) until the end of the experiment. Blood pressure and body weight were measured every two weeks for 5 months. Blood samples were collected, and serum prepared at 3 weeks and at 5 months for biochemical analysis. Total antioxidant capacity (TAC), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and superoxide dismutase (SOD) assays were determined at 3 weeks; TAC was also measured at five months. After 5 months, the animals were sacrificed and abdominal aorta was excised for histological (H and E staining) and IHC (AGE) evaluation. From the data generated in this study, it was evident that maternal nicotine exposure during pregnancy and lactation increased blood pressure of male offspring but not female offspring. Exposure to nicotine during pregnancy and lactation significantly increased systolic blood pressure from 115±4.6 mm Hg in the first month to 147±6.1 mm Hg at five months (P<0.05), diastolic blood pressure was increased from 84±3.4 mm Hg in the first month to 110±7.2 mm Hg at 5 months (P<0.05) and MAP was increased from 94.8±3.8 mm Hg in the first month to 121±6.4 mm Hg at 5 months. Interestingly the MAP of the nicotine group was normal during the first two months. HR was similar in all groups at 5 weeks and 5 months. Maternal vitamin C supplementation in rats exposed to nicotine during pregnancy and lactation did not prevent development of hypertension of the offspring (MAP=121±6.4 mm Hg in the nicotine group vs 113.4±1.7 mmHg in the nicotine and vitamin C group, P>0.05). Supplementation with vitamin C in the drinking water after weaning significantly reduced blood pressure of the offspring (MAP=121±6.4 mm Hg vs 97.6±2.9 mm Hg respectively, P<0.05). No significant difference was found in any of the biochemical assays. Maternal nicotine exposure during pregnancy and lactation leads to alteration in aorta structure as evaluated by H and E staining. Structural alterations include protrusion of the intima and irregular arrangement of the vascular smooth muscle cells (VSMC) in the tunica media. Maternal vitamin C supplementation and vitamin C supplementation after weaning did not prevent the structural alteration of the aorta. Immunohistochemistry (IHC) indicated that the accumulation of AGE's in the nicotine group was stronger than in the control group. In conclusion, we show for the first time that hypertension induced by maternal nicotine exposure can be reversed after weaning by supplementation with vitamin C, an antioxidant.

Please read the abstract in the section 00front of this document / Thesis (DPhil (Medical Immunology))--University of Pretoria, 2006. / Immunology / unrestricted

Vitamin C is used in the diets in order to improve growth, resistance to stress and disease, as well as the survival of fish. It can also be effective in the conservation of fish during processing and storage, inhibiting the degradation of lipids by oxidation. This study evaluated the stocking density and the effects of supplementation of vitamin C in the final quality of the fillet tilapia (Oreochromis nilotius, Linneaus, 1875). We used one hundred and twenty fingerlings for each trial, the study of fish stocking density had an initial weight of 4.0 g and evaluation of supplementation with vitamin C, 11.0 g. Both studies had a randomized design, comprising four treatments of different stocking densities (50, 75, 100 and 125 fish/m3) with five replications. Already working with vitamin C (ascorbic acid 2 - sulfate acid - protected form) was carried out in four treatments with six replicates, characterized by four levels of supplementation of vitamin C in the diets (250, 500 and 750 mg/kg diet) and control group (zero mg/kg diet) with two different stocking densities (50 and 100 fish/m3). The ration given to the first study contained 36% crude protein and 3100 kcal/DE/kg feed and the second was 28% crude protein and 3400 kcal/DE/kg. After ninety days, the fish were slaughtered and evaluated the growth performance parameters for the study of stocking density, chemical composition, cholesterol content, fatty acid profile, quality of lipid fraction in both studies. The liver of fish from the second stage of labor was frozen at - 80°C for lipid peroxidation analysis and determination of enzyme activity of oxidative stress (catalase and superoxide dismutase). It follows that for the study of stoking significant difference ρ <0.05 between the final average weight and total weight gain between the different densities tested, the highest weight was found in the group density of 75 fish/m3. The body composition analysis, differences were observed ρ <0.05 between the densities on moisture, total lipid content, protein, calories and cholesterol. The ratio polyunsaturated / saturated was higher in density of 11.76 for 100 fish/m3, since the density of 50 fish/m3 presented a sum of 6.85 for the levels of EPA + DHA. In assessing the nutritional quality of lipids, the densities studied showed the contents of n-6/n-3, hypocholesterolemic/hypercholesterolemic index of polyunsaturated fatty acids of atherogenicity and index of thrombogenicity as favorable for consumption. Fish reared at a density of 50 fish/m3 can be seen as a good food from a nutritional standpoint, they presented a good level of fatty acids, especially omega-3 fatty acid and its value in hypocholesterolemic/hypercholesterolemic. Regarding the second stage of labor was observed difference ρ<0.05 between the levels of vitamin C supplementation levels in total lipid content, crude protein, calories and cholesterol. The ratio polyunsaturated/saturated was higher in the supplementation level of 250 mg of vitamin C (1.26), since the level of 500 mg of vitamin C showed a sum of 6.48 for the levels of EPA + DHA. In assessing the nutritional quality of lipids, the levels of vitamin C study showed rates of n-6/n-3, hypocholesterolemic / hypercholesterolemic index of atherogenicity and index of thrombogenicity for subsequent food consumption. Fish reared with diets supplemented with 750 mg of vitamin C in the density of 50 fish/m3 can be seen as a good food from a nutritional standpoint, they presented a good level of fatty acids, especially omega-3 fatty acid and its value in hypocholesterolemic/hypercholesterolemic. In the study of redox balance results showed that there was an increase in lipid peroxidation, suggesting that there may have been damage to the liver of animals and the antioxidant defenses were not sufficient to prevent oxidative stress. Density of 50 fish/m3, the dietary supplementation with vitamin C can be pro-oxidant. Since the density 100 fish/m3, vitamin C supplementation may be an antioxidant. The catalase activity of the enzyme showed low activity, suggesting an impairment in hepatic redox balance for this enzyme in animals receiving diets containing different levels of vitamin C. Since superoxide dismutase activity of the enzyme showed high activity, suggesting a redox balance in protecting liver for this enzyme in animals receiving diets containing different levels of vitamin C. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A vitamina C é usada nas dietas com a finalidade de melhorar o crescimento, a resistência ao estresse e às doenças, assim como a sobrevivência de peixes. Também pode ser eficiente na conservação do pescado durante o processamento e estocagem, inibindo a degradação dos lipídeos pela oxidação. O presente trabalho avaliou a densidade de estocagem e os efeitos da suplementação de vitamina C na qualidade final do filé de Tilápia-do-Nilo (Oreochromis nilotius, Linneaus, 1875). Foram utilizados cento e vinte alevinos para cada estudo, sendo que os peixes do estudo da densidade de estocagem tinham peso inicial de 4,0 g e os da avaliação com a suplementação de vitamina C de 11,0 g. O delineamento inteiramente casualizado foi utilizado em ambos os estudos perfazendo quatro tratamentos de diferentes densidades de estocagem (50, 75, 100 e 125 peixes/m3) com cinco repetições. Já o trabalho com a vitamina C (ácido 2 - sulfato ascórbico - forma protegida) foi realizado em quatro tratamentos com seis repetições, caracterizado pela suplementação de quatro níveis de vitamina C nas rações (250, 500 e 750 mg/kg de ração) e o grupo controle (zero mg/kg de ração) com duas diferentes densidades de estocagem (50 e 100 peixes/m3). A ração fornecida para o primeiro estudo continha 36% de proteína bruta e 3100 kcal/energia digestiva/kg de ração e a segunda tinha 28% de proteína bruta e 3400 kcal/energia digestiva/kg. Após noventa dias, os peixes foram abatidos e foram avaliados os parâmetros de desempenho zootécnico para o estudo de densidade de estocagem, composição centesimal, teor de colesterol, perfil de ácidos graxos, qualidade da fração lipídica para ambos os estudos. O fígado dos peixes da segunda etapa do trabalho foi congelado a – 80ºC para análises de peroxidação lipídica e determinação da atividade das enzimas do estresse oxidativo (catalase e superóxido dismutase). Conclui-se que para o estudo de densidade de estocagem houve diferença significativa ρ<0,05 entre o peso médio final e no ganho de peso total entre as diferentes densidades populacionais testadas; o maior peso foi encontrado no grupo de densidade de 75 peixes/m3. Quanto à análise da composição corporal observou-se diferença ρ<0,05 entre as densidades nos teores de umidade, lipídeos totais, teor de proteína bruta, valor calórico e de colesterol. A relação poliinsaturados/saturados foi mais elevada na densidade de 100 peixes/m3 de 11,76, já a densidade de 50 peixes/m3 apresentou uma somatória de 6,85 para os teores de ácido eicosapentaenóico + ácido docosahexaenóico. Na avaliação da qualidade nutricional dos lipídeos, as densidades estudadas mostraram os índices de n-6/n-3, hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos, índice de ácidos graxos poliinsaturados de aterogenicidade e índice de trombogenicidade como favoráveis para consumo alimentar. Os peixes criados na densidade de 50 peixes/m3 podem ser considerados como um bom alimento do ponto de vista nutricional, pois apresentaram um bom teor de ácidos graxos, principalmente de ácido ômega-3 e pelo seu valor em hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos. Com relação à segunda etapa do trabalho foi observado diferença ρ<0,05 entre os níveis de suplementação da vitamina C nos teores de lipídeos totais; teor de proteína bruta; valor calórico e de colesterol. A relação poliinsaturados/saturados foi mais elevada no nível de suplementação de 250 mg de vitamina C (1,26), já o nível de 500 mg de vitamina C apresentou um somatório de 6,48 para os teores de ácido eicosapentaenóico + ácido docosahexaenóico. Na avaliação da qualidade nutricional dos lipídeos, os níveis de suplementação de vitamina C estudados mostraram os índices de n-6/n-3, hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos, índice de aterogenicidade e índice de trombogenicidade favoráveis quanto ao consumo alimentar. Os peixes criados com ração suplementada com 750 mg de vitamina C na densidade de 50 peixes/m3 podem ser considerados como um bom alimento do ponto de vista nutricional, pois apresentaram um bom teor de ácidos graxos, principalmente de ácido ômega-3 e pelo seu valor em hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos. Já no estudo do balanço redox os resultados mostraram que houve aumento na peroxidação lipídica, sugerindo que podem ter existido danos ao fígado dos animais e as defesas antioxidantes não foram suficientes para evitar o estresse oxidativo. Na densidade de 50 peixes/m3, a ração suplementada com vitamina C pode ser pró-oxidante. Já na densidade 100 peixes/m3, a vitamina C suplementada pode ser antioxidante. A atividade da enzima catalase apresentou uma baixa atividade, sugerindo um comprometimento no balanço redox hepático para esta enzima nos animais submetidos à ração com diferentes níveis de suplementação de vitamina C. Já atividade da enzima superóxido dismutase apresentou elevada atividade, sugerindo uma proteção no balanço redox hepático para esta enzima nos animais submetidos à ração com diferentes níveis de suplementação de vitamina C.

A administração de princípios ativos pela mucosa oral é uma forma eficiente para a distribuição de fármacos e nutrientes, oferecendo diversas vantagens como uma fácil aplicação, evitando o metabolismo de primeira passagem hepática e potencialmente melhorando a biodisponibilidade dessas substâncias. A acerola e o camu-camu apresentam uma alta concentração de vitamina C e são consideradas fontes de diferentes compostos ativos, porém a vitamina C presente nas frutas é facilmente oxidada pelos fatores ambientais, e essas frutas são pouco acessíveis ao consumo populacional. Filmes de desintegração oral (FDO) podem apresentar rápido tempo de desintegração e fácil administração, o que os torna um material interessante para a veiculação de compostos com atividades farmacêuticas ou nutricionais. Assim, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e caracterização de filmes de desintegração oral à base de amido e gelatina com adição de extrato seco de acerola e camu-camu produzidos por \"spray dryer\" como uma alternativa para a administração de vitamina C. Os FDOs foram produzidos pela técnica de casting, variando-se a proporção de amido e gelatina. Como plastificante foi utilizado o sorbitol (20 g / 100 g de polímero), mantendo-se constante a concentração de polímeros (2 g /100 g de solução filmogênica) e de extrato seco de acerola (4 g /100 g de solução filmogênica) e camu-camu (4 g / 100 g de solução filmogênica). Os extratos secos de acerola e camu-camu foram caracterizados com relação à concentração da vitamina C e da estabilidade desses extratos nessas condições (30 °C, UR 75 % e 40 °C, UR 75%). Os FDOs foram caracterizados em relação a espessura, propriedades mecânicas, ângulo de contato, FT-IR, microscopia electrônica de varredura, concentração de vitamina C, atividade antioxidante, atividade antimicrobiana, estabilidade da vitamina C, tempo de desintegração, estabilidade da atividade de eliminação de radicais de DPPH&bull;, avaliação sensorial. Os extratos secos apresentaram uma boa estabilidade em relação à vitamina C e aos compostos antioxidantes (sequestro do radical DPPH&bull;). Os FDOs sem adição de extrato, independente da formulação, mostraram-se homogêneos, com ausência de partículas insolúveis e alta capacidade de formação de filme. Para os FDOs com maior concentração de amido foi observado reduzido tempo de desintegração e pH próximo ao bucal. Após a adição dos extratos, os FDOs apresentaram redução do tempo de desintegração, boa aceitação sensorial, propriedades antioxidantes e estabilidade pelo sequestro do radical DPPH&bull;. O pH de superfície dos filmes com adição de extrato seco de acerola foi mais próximo ao bucal quando comparado com os filmes com camu-camu. No entanto, os FDOs com acerola apresentaram reduzida estabilidade da vitamina C em relação ao tempo de armazenamento, enquanto que os filmes com camu-camu apresentaram melhor estabilidade. De modo geral, na formulação produzida apenas com amido (100 g de amido / 100 g de polímeros) observou-se uma maior concentração da vitamina C no final da estabilidade realizada à 30 °C e umidade relativa de 75 %, elevada estabilidade dos compostos ativos (DPPH) e alta taxa de uniformidade na distribuição da vitamina C no filme de desintegração oral. Dessa forma, os FDOs podem ser considerados uma boa alternativa para a suplementação de vitamina C. / The administration of active ingredients through the oral mucosa is an efficient way to deliver drugs and nutrients because it offers various advantages such as easy application, avoiding the hepatic metabolism of the first pass and potentially improving the bioavailability these substances. Acerola and camu-camu have high concentration of vitamin C and are considered sources of different active compounds, however the vitamin C present in fruits is easily oxidized by environmental factors, and such fruits are poorly accessible to population consumption. Orally disintegrating films (ODF) can provide rapid disintegration and easy administration, which makes them interesting materials to deliver compounds with pharmaceutical or nutritional properties. This work aimed at the development and characterization of orally disintegrating films based on starch and gelatin with addition of acerola and camu-camu dry extract produced by spray dryer as an alternative to vitamin C administration. ODFs were produced with casting technique by varying the ratio of starch and gelatin. Sorbitol (20 g / 100 g polymer) was used as plasticizer, with constant the concentration of polymer (2 g / 100 g filmogenic solution), and dry extracts of acerola and camu-camu (4 g / 100 g filmogenic solution). Acerola and camu-camu dry extracts were characterized regarding vitamin C concentration and stability (30 °C, RH 75% and 40 °C, RH 75%). ODFs were characterized considering thickness, mechanical properties, contact angle, FT-IR, scanning electron microscopy, vitamin C concentration, antioxidant activity, antimicrobial activity, vitamin C stability, disintegration time, stability of the scavenging activity of DPPH&bull; radical, and sensory evaluation. Dry extracts showed good stability for vitamin C and antioxidant compounds (scavenging activity of DPPH&bull; radical). ODFs without extract addition, regardless of the formulation, were homogeneous, without insoluble particles and with high film formation capacity. Reduced disintegration time and pH similar to oral pH was observed for ODFs with high starch concentration. After the addition of extracts, ODFs presented decreased disintegration time and good sensorial acceptation, antioxidant properties and stability of the scavenging activity of DPPH&bull; radical. Surface pH of films with acerola dry extract was the closest to oral pH when compared with films with camu-camu dry extracts. However, ODFs with acerola dry extract showed reduced stability of vitamin C regarding storage time, whereas films with camu-camu dry extract showed better stability. In general, the formulation produced only with starch (100 g starch / 100 g polymer) presented higher concentration of vitamin C at the end of stability assay performed at 30 °C and 75% relative humidity, as well as high stability of active compounds (DPPH) and high uniformity rate in vitamin C distribution in the orally disintegrating film. Thus, ODFs can be considered a good alternative for the supplementation of vitamin C.

This thesis deals with determination of content of vitamin C in various types of cornelian cherry (Cornus mas L.). Some basic information about Cornus mas L. and its various types are described in the literary part of this thesis. The summary of important components present at fruit and some possibilities of processing and utilization are described here too. Various methods of determination of vitamin C are presented at the end of the literary part. The main result of the experimental part of this thesis is the comparison of content of vitamin C in various types of cornelian cherry (Cornus mas L.). Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatography was used as the main method. HPLC method of determination of vitamin C in various types of Cornus mas L. was completed with the orientation titration. Then total antioxidant capacity of fruit was evaluated by using of reaction of extracts of fruit with stable radical DPPH. The biggest amount of vitamin C was determined in the Fruchtal variety. The biggest total antioxidant capacity was determined in the Vydubecký variety.