Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by Luanna Maia (luanna@bce.unb.br) on 2009-03-09T12:48:41Z No. of bitstreams: 1 Tese_Loiselene Carvalho da Trindade.pdf: 3690145 bytes, checksum: 0c6bb1644820c1ea99648a03adf90c94 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-03-09T16:04:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Loiselene Carvalho da Trindade.pdf: 3690145 bytes, checksum: 0c6bb1644820c1ea99648a03adf90c94 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-03-09T16:04:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Loiselene Carvalho da Trindade.pdf: 3690145 bytes, checksum: 0c6bb1644820c1ea99648a03adf90c94 (MD5) / A bactéria Xanthomonas campestris pv. viticola (Nayudu) Dye, agente do cancro bacteriano da videira, foi relatada pela primeira vez nas áreas irrigadas do Submédio do Vale São Francisco em Petrolina, Pernambuco, em 1998. A doença também foi identificada em Juazeiro, Bahia, e posteriormente no Piauí, no Ceará, Roraima e Goiás. O uso de material propagativo livre do patógeno tornou-se uma preocupação, uma vez que a ocorrência da bacteriose ainda esta restrita a essas regiões no país e existe o risco de disseminação para outras regiões produtoras no sul e sudeste do Brasil. Com o objetivo de desenvolver um método molecular para detecção e identificação dessa bactéria, três oligonucleotídeos iniciadores foram desenhados com base no seqüenciamento parcial do gene hrpB. As combinações de iniciadores Xcv1F/Xcv3R e RST2/Xcv3R foram testados quanto à especificidade e sensibilidade para detecção do DNA de X. campestris pv. viticola. Com os dois pares de iniciadores, a amplificação foi positiva com o DNA das 44 estirpes de X. campestris pv. viticola testados, com quatro estirpes da patovar mangiferaeindicae, e cinco estirpes de X. axonopodis pv. passiflorae. Contudo, a digestão dos produtos de PCR com HaeIII permitiu diferenciar as estirpes das três patovares. Nenhum dos dois pares de iniciadores amplificou o DNA de videira, de 20 bactérias não patogênicas da flora da videira, e de nove estirpes de outros sete gêneros de bactérias fitopatogênicas. A sensibilidade dos iniciadores Xcv1F/Xcv3R e RST2/Xcv3R foi de 10 pg e 1 pg de DNA purificado de X. campestris pv. viticola, respectivamente. O limiar de detecção de RST2/Xcv3R foi de 104 UFC/ml, mas empregando-se um segundo ciclo de amplificação com o iniciador interno Xcv1F, esse limiar foi reduzido para 102 UFC/ml. Os iniciadores foram testados na detecção da bactéria em pecíolos inoculados com a estirpe UnB 1186 e embora não se tenha tido sucesso na PCR com o extrato do macerado do tecido sintomático, foi possível detectar o patógeno usando-se lavado de placas após o crescimento por 72 h ou a partir de uma única colônia diluída em 200 l de água. A identidade da bactéria foi confirmada pela análise de RFLP, que gerou o padrão típico de X. campestris pv. viticola. Com o uso de nested-BIO-PCR utilizando dois ciclos de amplificação com os iniciadores RST2/Xcv3R e Xcv1F/Xcv3R foi possível detectar X. campestris pv. viticola em plantas assintomáticas e sintomáticas, coletadas em março de 2007, em Petrolina, PE. xiii Este método mostrou-se mais eficiente que a detecção direta, ou seja, sem uma etapa de enriquecimento em meio de cultura. Além disso, foi possível reduzir para 72 horas o tempo para detecção e identificação de X. campestris pv. viticola, tempo reduzido se comparado aos métodos convencionais. A alta similaridade observada entre as duas patovares, viticola e mangiferaeindicae de X. campestris foi comprovada através da análise de seqüências de nucleotídeos de diferentes regiões genômicas, ITS, 16S rRNA, hrpB6 e o gene do citocromo “b561-like”. Os resultados também sugeriram que as duas patovares estariam mais próximas filogeneticamente a X. campestris e X. axonopodis. Testes de inoculação cruzada em videira e mangueira mostraram a capacidade de X. campestris pv. mangiferaeindicae de infectar plantas de videira e confirmaram a patogenicidade de X. campestris pv. viticola à mangueira, quando a inoculação é feita por infiltração foliar. O estudo dos perfis plasmideais mostrou variabilidade entre as estirpes em relação ao número e tamanho dos plasmídeos, sendo o primeiro relato da presença de plasmídeos em X. campestris pv. viticola. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The bacterium Xanthomonas campestris pv. viticola (Nayudu) Dye, causal agent of grapevine bacterial canker, was first detected in Brazil in the irrigated areas of the São Francisco river basin, in Petrolina, State of Pernambuco, in 1998. The disease was also reported in Juazeiro, Bahia and later in the states of Piauí, Ceará, Roraima and Goiás. The use of pathogen-free propagative material has become an important concern, considering the restricted occurrence of this pathogen in the country and the risk of dissemination to other grapevine production regions in the south and southeast of the country. In order to develop a molecular method for detection and identification of this pathogen, three primers were designed based on the partial sequences of the hrpB gene. The primers combinations Xcv1F/Xcv3R and RST2/Xcv3R were tested for specificity and sensitivity in detecting X. campestris pv. viticola DNA. With the two sets of primers, amplification was positive with all 44 X. campestris pv. viticola isolates tested, 4 isolates of pathovar mangiferaeindicae and 5 of X. axonopodis pv. passiflorae. Digestion of PCR products with HaeIII allowed differentiation of these 3 pathovars. None of the primer pairs were able to amplify grapevine DNA, DNA from 20 non pathogenic bacterium from the grapevine microflora, or DNA from 9 isolates from 7 genera of plant pathogenic bacteria. Sensitivity of the primers Xcv1F/Xcv3R and RST2/Xcv3R was 10 pg and 1 pg of purified X. campestris pv. viticola DNA, respectively. The detection limit for RST2/Xcv3R was 104 UFC/ml, but this limit could be lowered to 102 CFU/ml with a second round of amplification using the internal primer Xcv1F. The primers were tested for detecting of X. campestris pv. viticola in grapevine petioles previously inoculated with strain UnB 1186, and although amplification was not possible using extracts of macerated plant tissue, detection was possible using agar plate washes after 72 h of growth, or from a single colony diluted in 200 l of water. Using Nested-BIO-PCR with two amplification rounds with RST2/Xcv3R and Xcv1F/Xcv3R primers, it was possible to detect X. campestris pv. viticola in both symptomatic and asymptomatic plants. This method was more effective than a method that employed direct detection from boiled macerated extracts with no previous enrichment on culture medium. The use of BIO-PCR reduced the time needed for detecting and identifying X. campestris pv. viticola to 72 hours, when compared to more traditional diagnostic methods. xv The high similarity observed between the two pathovars of X. campestris, viticola and mangiferaeindicae was cnfirmed by the analysis of nucleotide sequences from different genomic regions, ITS, 16S rRNA, hrpB6 and the cytochrome b561-like gene. The results also suggested that these two pathovars are phylogenetically related to X. campestris and X. axonopodis. Cross inoculation tests on grapevine and mango plants inoculation, showed the ability of X. campestris pv. mangiferaeindicae to infect grapevine and confirmed the pathogenicity of X. campestris pv. viticola to mango plants, when using the infiltration technique. Plasmid DNA extractions showed variability among strains of the two pathovars in plasmid number and size. This is the first report of plasmid occurrence in X. campestris pv. viticola.

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This thesis deals with the comparison of anthocyanins in blue grape varieties. It has been compared 23 varieties of Vitis vinifera L. and 9 interspecific varieties from the harvest 2015. The grapes come from the wine region Mikulov and from the wine village Lednice. Literary part deals with the chemical structure of anthocyanins and their occurrence in grapes, further accumulation of anthocyanins and influencing factors, physico-chemical factors affecting the stability of anthocyanins, change of anthocyanins during the vinification and extraction of anthocyanins and measurement of color parameters. The practical part is especially focused on compare the content of anthocyanins and their profile in varieties of Vitis vinifera L. and interspecific varieties.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Banco do Nordeste do Brasil / A irrigaÃÃo de lavouras e a sua adequada adubaÃÃo constituem-se nas principais tÃcnicas utilizadas quando se visa o aumento da produtividade nos diferentes cultivos vegetais. Entretanto, pesquisas jà realizadas disponibilizaram poucas informaÃÃes quanto à aplicaÃÃo de Ãgua e do macronutriente potÃssio (K) no cultivo da videira. Em consequÃncia, com o objetivo de avaliar a produtividade e as caracterÃsticas biomÃtricas da videira (Vitis vinifera L.) sob diferentes lÃminas de irrigaÃÃo, sob diferentes intervalos e crescentes nÃveis de adubaÃÃo potÃssica, aplicadas via fertirrigaÃÃo, trÃs experimentos foram realizados concomitantemente no municÃpio de Limoeiro do Norte - CE (05Â06âS, 37Â52âW, 151 m), no perÃodo de setembro/08 a janeiro/09. O delineamento experimental utilizado nos trÃs experimentos foi em blocos casualizados, com quatro repetiÃÃes. No experimento 1, testou-se cinco diferentes lÃminas de irrigaÃÃo quantificadas em funÃÃo da evaporaÃÃo medida no tanque classe âAâ (ECA): 50%, 75%, 100%, 125% e 150% da ECA. No experimento 2, estudou-se cinco intervalos de fertirrigaÃÃo potÃssica, sendo estes: tratamento 01, as fertirrigaÃÃes ocorreram a cada 2 dias; tratamento 02, as fertirrigaÃÃes ocorreram a cada 4 dias; tratamento 03, as fertirrigaÃÃes ocorreram a cada 6 dias; tratamento 04, as fertirrigaÃÃes ocorreram a cada 8 dias e tratamento 05, as fertirrigaÃÃes ocorreram a cada 10 dias. No experimento 3, analisou-se seis nÃveis de fertirrigaÃÃo potÃssica: 0%, 50%, 75%, 100%, 125% e 150% da recomendaÃÃo utilizada pela agroempresa (368 kg.ha-1 de K2O). AtravÃs do software âSAEG 9.0 â UFVâ, os dados foram submetidos à anÃlise de variÃncia e posteriormente quando significativos pelo teste F realizou-se a anÃlise de regressÃo, buscando-se ajustar equaÃÃes com significados biolÃgicos. No experimento 1 concluiu-se que as variÃveis nÃmero de cachos por planta, tamanho do cacho, nÃmero de bagas, teor de sÃlidos solÃveis totais e produtividade apresentaram diferenÃas estatÃsticas significativas, sendo que todas estas variÃveis, excetuando o teor de sÃlidos solÃveis, obtiveram o seu maior valor com a maior lÃmina de irrigaÃÃo experimental. Neste experimento constatou-se que o modelo linear foi o mais adequado para explicar as variÃveis analisadas. No experimento 2, os intervalos de fertirrigaÃÃo nÃo influenciaram diretamente na produtividade da videira, mas possibilitaram diferenÃas estatÃsticas significativas para as variÃveis massa mÃdia dos cachos, largura dos cachos e nÃmero de bagas. Jà no experimento 3, os diferentes nÃveis de fertirrigaÃÃo potÃssica avaliados proporcionaram diferentes respostas nas caracterÃsticas produtivas da videira, sendo estatisticamente significativas as anÃlises das variÃveis nÃmero de cachos por planta, massa mÃdia dos cachos, massa mÃdia de 10 bagas, largura da baga, teor de sÃlidos solÃveis totais e produtividade. Em todas as variÃveis analisadas nos experimentos 2 e 3, foi encontrado que o modelo polinomial quadrÃtico como o mais adequado para explicar o comportamento das caracterÃsticas biomÃtricas. / The irrigation of crops and their proper fertilization are on the main techniques used when it is aimed at increasing productivity in the different vegetable crops. However, previous studies have provided little information regarding the application of water and macronutrient potassium (K) in the cultivation of the vine. As a result, in order to evaluate the productivity and biometric characteristics of the grape (Vitis vinifera L.) under different irrigation levels and in different intervals and increasing levels of potassium applied through fertigation, three trials were conducted concurrently in the city of Limoeiro do Norte -CE (05Â06âS, 37Â52âW,151 m), in the period of September/08 to January/09. The experimental design used in all experiments was a randomized block design with four replications. In experiment 1, we tested five different irrigation quantified on the basis of the class âAâ pan evaporation: 50%, 75%, 100%, 125% and 150% of the class âAâ pan evaporation. In experiment 2, we studied five different interval of fertigation potassium, which are: treatment 01, the fertigation occurred every 2 days, treatment 02, the fertigation occurred every 4 days, treatment 03, the fertigation occurred every 6 days, treatment 04, the fertigation occurred every 8 days and treatment 05, the fertigation occurred every 10 days. In experiment 3, we analyzed six levels of potassium fertigation: 0%, 50%, 75%, 100%, 125% and 150% of the recommendation used by agribusiness (368 kg.ha- 1 of K2O). Through the software SAEG 9.0 - UFV, the data were subjected to analysis of variance and significant later when the F test was carried out regression analysis, trying to adjust equations with biological meanings. In experiment 1 it was concluded that the varying number of clusters per plant, size of the bunch, number of berries, total soluble solids and yield significantly different, with all these variables, except the soluble solids, obtained its peak with the greatest water depth experimental. In this experiment it was found that the linear model was best suited to explain the variables. In experiment 2, the intervals of fertigatio n did not affect directly the productivity of the vine, but allowed statistically significant differences for the variables average mass of clusters, width and number of clusters of berries. In the experiment 3, the different levels of potassium fertigation evaluated produced different responses in the productive characteristics of the vine, being statistically significant, analysis of variable number of clusters per plant, average weight of the bunches, the mean weight of 10 berries, berry width, content s oluble solids and productivity. In all variables in experiments 2 and 3, we found that the quadratic polynomial model as the most adequate to explain the behavior of biometrics.

L'objectif initial de ce travail de thèse est de valoriser les informations relatives au suivi temporel de la vigne, du raisin et de l'environnement de la plante et enregistrées dans des bases de données (BD) de traçabilité pour permettre la comparaison entre parcelles et millésimes, en vue de décisions par analogies.Les travaux réalisés durant cette thèse ont permis de proposer une méthode de transformation qui permet de représenter des ensembles de données asynchrones dans un espace commun afin de les comparer. Cette méthode s'appuie sur l'expertise du système de production. Dans ce travail de thèse, cette méthode a été appliquée à la comparaison de couples parcelle×millésime.L'expertise du système de production viticole permet, dans une première phase, de définir (i) la forme générale de la cinétique d'évolution de grandeurs de mesures évaluées sur la vigne, le raisin ou l'environnement de la plante et (ii) l'effet du climat sur la plante. Cette expertise est utilisée, dans une seconde phase, pour proposer des modèles paramétriques de l'évolution de chaque grandeur. Les données de suivi de chaque couple parcelle×millésime permettent d'ajuster les paramètres du modèle. Un vecteur de paramètres est défini par couple parcelle×millésime. Ce vecteur représente l'espace commun qui rend les couples parcelle×millésime comparables. Deux stratégies de comparaison sontalors possibles : (i) les comparaisons sont réalisées à partir des paramètres (méthode intensive), ou (ii) les comparaisons sont réalisées à partir de l'estimation de la valeur de la grandeur pour chaque couple parcelle×millésime et chaque unité de temps, commune à tous les couples (méthode extensive).Cette méthode a été appliquée à trois exemples différents.Dans une première application, les climats de différents millésimes intervenus sur différents cépages, entre la floraison et la véraison, ont été comparés entre eux après modélisation des grandeurs de mesure climatiques, à l'aide de modèles très simples.Dans une seconde puis une troisième application, la cinétique d'augmentation du pH et d'accumulation des sucres dans les baies de raisin pendant la maturation a été modélisée sous la forme d'une sigmoïde. Les comparaisons ont ensuite été réalisées en travaillant sur (i) la courbe représentative de chaque cinétique (pH), (ii) les paramètres du modèle (sucres) et (iii) une estimation journalière de la concentration en sucres dans les baies.Les bases de données utilisées dans ces applications proviennent de deux régions très différentes. Des données issues du suivi de la station expérimentale INRA Pech Rouge en Languedoc-Roussillon, dans le sud de la France, ont été utilisées pour l'application 1 et une partie de l'application 3. Des données de suivi de différents domaines de la Napa Valley en Californie ont servi pour l'application 2 et une partie de l'application 3.Le changement d'espace de représentation des données apporte une connaissance nouvelle pour décrire les individus et les phénomènes temporels de la vigne. Cette connaissance pourrait permettre de formaliser un raisonnement par analogies utilisant et valorisant l'expérience passée pour la gestion du millésime en cours. / The initial objective of this thesis is to enhance the in-time follow-up information of the vine, the grape and the environment of the plant stored in traceability databases (BD) traceability to allow comparison between plots and vintages, to a future analogy-based decision support.The work done during this thesis allowed to propose a transformation method for representing sets of asynchronous data in a common space for comparison. This method relies on the expertise of the production system. In this thesis, this method was applied to the comparison of pairs of plot×vintage.The expert knowledge of the vineyard production system allows, in a first phase, to define (i) the general shape of the kinetics of on the vine, the grapes or the plant environment measured grandeurs, and (ii) the effect of the climate on the plant.This expertise is used in a second phase, to propose parametrical models that represent each grandeur kinetic. Monitoring data of each pair plot×vintage are used to adjust the model parameters. A vector of parameters is defined for each pair plot×vintage. This vector represents the common space that makes pairs of plot×vintage comparable. Two comparison strategies are possible: (i) comparisons are made from the parameters (intensive method), or (ii) comparisons are made from the estimation of the value of the quantity for each pair plot×vintage and each time unit, common to all pairs (extensive method).This method was applied to three different examples.In a first application, the climate of different vintages occurred on different grape varieties, between flowering and veraison, were compared with each other after modeling of the measured climate grandeurs, with very simple models.In a second and a third application, the kinetics of the increase of pH and accumulation of sugars in grape berries during ripening was modeled using a sigmoid. Comparisons were then made by working on (i) the graph of each kinetic (pH), (ii) parameters (sugars) and (iii) an estimation of the daily sugar concentration in berries.The databases used in these applications come from two very different winegrowing regions. Data from the monitoring of the INRA Pech Rouge Experimental Station, in Languedoc-Roussillon in the south of France, were used for the application 1 and part of the application 3. Monitoring data from different estates of Napa Valley in California were used for the application 2 and part of the application 3.The change of space where data are represented constitutes a new knowledge that permit one to describe individuals and temporal phenomena of the vine. This knowledge could allow to formalize an analogy-based reasoning that uses and promotes past experience to manage the current vintage.

As lesões renais agudas (LRAs) nefrotóxicas correspondem a 30% dos casos de LRA. A nefrotoxicidade é efeito indesejável de diversos fármacos de uso rotineiro na clínica, entre eles as drogas imunossupressoras. A nefrotoxicidade do Tracolimus (Fk 506) é uma das causas de LRA após o transplante renal. Com a ampla utilização do Fk 506 nas terapias imunossupressoras e devido ao seu potencial nefrotóxico que pode levar à perda do enxerto, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito renoprotetor do extrato de Vitis vinifera L, um fitomedicamento com efeito antiinflamatório e antioxidante, na nefrotoxicidade induzida pelo Tacrolimus em ratos. Foram utilizados ratos Wistar, machos, adultos, pesando entre 250 - 300g, todos tratados 1x/dia por 5 dias, conforme os seguintes grupos: Salina (grupo controle) (NaCl 0,9%, 0,1ml por gavagem); Vitis (Vitis vinifera L 3mg/kg por gavagem), Fk (Tacrolimus 0,5mg/kg por gavagem) e Fk+Vitis (Tacrolimus 0,5mg/kg + 3mg/kg por gavagem). Foram avaliados a função renal (FR) (clearance de creatinina, método Jaffé); os peróxidos urinários (PU) (FOX-2), o malondealdeído (MDA-TBARS) e a histologia renal. Os dados desse estudo confirmaram a lesão nefrotóxica de caráter oxidativo induzida pelo Tacrolimus. A Vitis vinifera L demonstrou efeito renoprotetor significativo, com melhora na FR, redução dos níveis de peroxidação lipídica e proteção histológica. Esse estudo confirmou a renoproteção da Vitis vinifera L na LRA induzida pelo Tacrolimus. / The nephrotoxic injury corresponds to 30% of the acute kidney injury (AKI) cases. Nephrotoxicity is an undesirable effect of several drugs used in the clinic, among them, the imunossupressoras drugs. The Tacrolimus (FK 506) nephrotoxicity is the main cause of AKI after kidney transplantation. Being Fk 506 widely used in the immunessupressive therapies and due to its nephrotoxic effect that can lead to the loss of graft, the aim of this study was evaluate the renoprotective action of Vitis Vinifera L extract , a phitomedicine with antioxidant and antinflammatory effects in the nephrotoxicity induced by FK 506 in rats. Wistar rats, male, adults, weight ranging from 250-300g were used, all treated once/day for 5 days, as the following groups: Saline (control group) (NaCl 0.9%, 0,1ml per gavage), Vitis (Vitis vinifera L, 3mg/Kg per gavage), FK (Tacrolimus 0.5mg/Kg per gavage) and FK+Vitis (Tacrolimus 0.5mg/Kg per gavage + Vitis vinifera L, 3mg/Kg per gavage). Renal Function (RF) (creatinine clearance, Jaffé method), urinary peroxides (FOX-2), malondialdehyde (MDA-TBARS) and the kidney histological were evaluated. The data of this study confirmed the oxidative kidney injury by Tacrolimus. The Vitis vinifera L showed significant renoprotective effect, with improvement in the RF, a reductin in lipid peroxidation and histological protection. This study confirmed the renoprotective effect of Vitis Vinifera in the AKI by Tacrolimus.

As lesões renais agudas (LRAs) nefrotóxicas correspondem a 30% dos casos de LRA. A nefrotoxicidade é efeito indesejável de diversos fármacos de uso rotineiro na clínica, entre eles as drogas imunossupressoras. A nefrotoxicidade do Tracolimus (Fk 506) é uma das causas de LRA após o transplante renal. Com a ampla utilização do Fk 506 nas terapias imunossupressoras e devido ao seu potencial nefrotóxico que pode levar à perda do enxerto, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito renoprotetor do extrato de Vitis vinifera L, um fitomedicamento com efeito antiinflamatório e antioxidante, na nefrotoxicidade induzida pelo Tacrolimus em ratos. Foram utilizados ratos Wistar, machos, adultos, pesando entre 250 - 300g, todos tratados 1x/dia por 5 dias, conforme os seguintes grupos: Salina (grupo controle) (NaCl 0,9%, 0,1ml por gavagem); Vitis (Vitis vinifera L 3mg/kg por gavagem), Fk (Tacrolimus 0,5mg/kg por gavagem) e Fk+Vitis (Tacrolimus 0,5mg/kg + 3mg/kg por gavagem). Foram avaliados a função renal (FR) (clearance de creatinina, método Jaffé); os peróxidos urinários (PU) (FOX-2), o malondealdeído (MDA-TBARS) e a histologia renal. Os dados desse estudo confirmaram a lesão nefrotóxica de caráter oxidativo induzida pelo Tacrolimus. A Vitis vinifera L demonstrou efeito renoprotetor significativo, com melhora na FR, redução dos níveis de peroxidação lipídica e proteção histológica. Esse estudo confirmou a renoproteção da Vitis vinifera L na LRA induzida pelo Tacrolimus. / The nephrotoxic injury corresponds to 30% of the acute kidney injury (AKI) cases. Nephrotoxicity is an undesirable effect of several drugs used in the clinic, among them, the imunossupressoras drugs. The Tacrolimus (FK 506) nephrotoxicity is the main cause of AKI after kidney transplantation. Being Fk 506 widely used in the immunessupressive therapies and due to its nephrotoxic effect that can lead to the loss of graft, the aim of this study was evaluate the renoprotective action of Vitis Vinifera L extract , a phitomedicine with antioxidant and antinflammatory effects in the nephrotoxicity induced by FK 506 in rats. Wistar rats, male, adults, weight ranging from 250-300g were used, all treated once/day for 5 days, as the following groups: Saline (control group) (NaCl 0.9%, 0,1ml per gavage), Vitis (Vitis vinifera L, 3mg/Kg per gavage), FK (Tacrolimus 0.5mg/Kg per gavage) and FK+Vitis (Tacrolimus 0.5mg/Kg per gavage + Vitis vinifera L, 3mg/Kg per gavage). Renal Function (RF) (creatinine clearance, Jaffé method), urinary peroxides (FOX-2), malondialdehyde (MDA-TBARS) and the kidney histological were evaluated. The data of this study confirmed the oxidative kidney injury by Tacrolimus. The Vitis vinifera L showed significant renoprotective effect, with improvement in the RF, a reductin in lipid peroxidation and histological protection. This study confirmed the renoprotective effect of Vitis Vinifera in the AKI by Tacrolimus.

Com o avanço no desenvolvimento industrial sustentável estão sendo exploradas novas aplicações de uso dos subprodutos agroindustriais. O bagaço de uva obtido a partir da vinificação ou produção de sucos mantém importantes quantidades de polifenóis em suas cascas, sementes e engaço após o processamento, úteis para proteção da pele contra os raios ultravioleta. Neste contexto, o objetivo do nosso estudo foi caracterizar quimicamente o extrato do bagaço de uva Cabernet Sauvignon e avaliar a sua segurança e eficácia clínica em fotoprotetor tópico. Nesta dissertação, o extrato hidroetanólico (70% v/v) do bagaço de uva total, incluindo cascas, sementes e engaços de Vitis vinifera L., foi obtido por percolação seguido de liofilização. Os ensaios divididos em duas etapas: i) In vitro: determinação dos fenólicos totais (FT) usando Folin-Ciocalteu e expresso em equivalentes de ácido gálico (GAE); flavonoides por meio da reação com tricloreto de alumínio e expresso em quercetina; atividade antioxidante do extrato e das formulações através da desativação de radicais livres de DPPH• expressa em equivalentes de Trolox (TE); identificação dos principais compostos fenólicos do extrato bruto por espectrometria de massa (HPLC/ESI-MS/MS); desenvolvimento de nove formulações usando o delineamento experimental; medição dos valores de transmitância das formulações referentes ao fator de proteção solar (FPS), fotoestabilidade e fator de proteção UVA (FP-UVA) através do equipamento Labsphere UV-2000S® e ii) Em seres humanos, apenas duas formulações foram avaliadas clinicamente, C sem extrato e com filtros UVA e UVB: butilmetoxidibenzoilmetano, etil-hexilmetoxicinamato e etil-hexildimetil PABA (11,5% p/p) e D com extrato (bagaço de uva 10% p/p) e filtros UV. Inicialmente, a segurança dermatológica, irritabilidade e sensibilização; fototoxicidade e fotossensibilização foram avaliadas pelo Teste de Contato Repetitivo em Humanos (HRIPT). Posteriormente, a eficácia fotoprotetora clínica foi testada na pele de dez voluntários. O teor de FT encontrado no extrato de bagaço de uva foi de 141,11 ± 3,38 mg GAE.g-1 e de flavonoides 3,01 ± 0,14 mg QE.g-1. A eficácia antioxidante das soluções metanólicas com extrato e fotoprotetor na concentração de 1 mg.mL-1 em peso seco em pH 5 e 7 foram aproximadamente: 707 µmol TE.g-1 e 520 µmol TE.g-1, respectivamente. Isto significa uma queda em torno de 26,45% da capacidade antioxidante do extrato quando incorporado à formulação. Foram identificadas por espectrometria de massa dezenove substâncias fenólicas, entre elas dímeros e trímeros de procianidinas, di-hidroflavonol, flavonóis e antocianidinas. Os resultados demonstraram efeito sinérgico entre os filtros UV e extrato vegetal no FPS e efeito antagônico com a variação do tempo de irradiação sobre as respostas do FPS, atividade antioxidante, comprimento de onda crítico, proteção UVA, proteção UVB e razão UVA/UVB. A melhor combinação eficiência-resposta foi detectada na formulação D com um aumento do FPS in vitro em cerca de 210%. Os testes de segurança não induziram qualquer reação adversa. A eficácia fotoprotetora clínica de D foi 21% (10,20 - 12,30) superior em relação à formulação C, demonstrando maior eficiência na proteção UVA. Sendo assim, C e D foram consideradas seguras para uso tópico e D estatisticamente superior tanto na proteção UVA quanto UVB comparado à amostra só associada de filtros. Logo, o bagaço de uva é um promissor ingrediente sustentável multifuncional útil para o uso em protetor solar. / With the advance in sustainable industrial development, new applications of agro-industrial by-products are being explored. Grape pomace obtained from winemaking or juice production keeps important amounts of polyphenols in their skins, seeds and stalks after processing that are useful for protection of skin against ultraviolet rays. In this context, the objective of our study was to chemically characterize Cabernet Sauvignon pomace extract and to evaluate its safety and clinical efficacy in topical photoprotector. The hydroethanolic extract (70% v/v) of the Vitis vinifera L. whole grape pomace, including seeds, skins and stalks, was obtained by percolation after lyophilization. The tests were divided into two stages: i) In vitro: total phenols (TF) using Folin-Ciocalteu and expressed in Gallic Acid Equivalent (GAE); flavonoids by reaction with aluminum trichloride and expressed as quercetin; antioxidant activity of the extract and formulations by inhibition by DPPH• expressed as Trolox equivalents (TE); identification of the main phenolic compounds of the crude extract by mass spectrometry (HPLC/ESI-MS/MS); development of nine formulations using experimental design and evaluated the SPF, photostability and UVA protection factor (UVA-PF) through the Labsphere UV-2000S® equipment; ii) In humans, only two formulations were clinically evaluated, C without extract and with UVA and UVB filters: butilmetoxidibenzoilmetano, etil-hexilmetoxicinamato and etil-hexildimetil PABA (11.5% w/w) and D with extract (10% w/w grape pomace) and filters UV. Initially, the dermatological safety, irritability and sensitization; phototoxicity and photosensitization were evaluated by the Human Repeat Insult Patch Test (HRIPT). After, the clinical photoprotective efficacy was tested on the skin of ten volunteers. The FT content found in the dried extract was 141.11 ± 3.38 mg GAE.g-1 and flavonoids 3.01 ± 0.14 mg QE.g-1. The antioxidant potential of the methanolic solutions with extracts and photoprotectors at the concentration of 1 mg.ml-1 in dry weight and at pH 5 and 7 were around: 707 µmol TE.g-1 and 520 µmol TE.g-1, respectively. This means a drop of about 26.45% of the antioxidant capacity of the extract when incorporated into the formulation. Mass spectrometry identified nineteen phenolic substances, among them procyanidins dimers and trimmers, di-hydroflavonol, flavonols and anthocyanin. The results showed a synergistic effect between the UV filters and the herbal extract in the SPF and the antagonistic effect with the variance of the irradiation time in the SPF responses, antioxidant activity, critical wavelength, UVA protection, UVB protection and UVA/UVB ratio. The best efficiency-response combination was detected in the D formulation with an in vitro SPF increase of about 210%. Safety tests did not induce any adverse reaction. The clinical efficiency of D photoprotection was 21% (10.20 - 12.30) higher than the C formulation, demonstrating high efficiency in UVA protection. Thus, C and D were considered safe for topical use and D statistically superior in both UVA and UVB protection to the only combined sample of filters. Therefore, grape pomace is a promising multifunctional sustainable ingredient qualified to be used in sunscreen industry.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-02-07T12:08:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Isabela Leticia Pessenti.pdf: 2816974 bytes, checksum: 7ddb844219627cfd4008623f5e811191 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-07T12:08:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Isabela Leticia Pessenti.pdf: 2816974 bytes, checksum: 7ddb844219627cfd4008623f5e811191 (MD5) Previous issue date: 2017-07-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As condições climáticas apresentam forte influência na cultura da videira. O alto índice de precipitação e a baixa amplitude térmica, por exemplo, podem fazer com que as uvas não alcancem índices adequados de maturação. Com o objetivo de verificar o efeito da desfolha, da aplicação do ácido abscisico e de extratos vegetais na qualidade de uvas, dois experimentos foram conduzidos em vinhedo comercial com as cvs. Primitivo e Malbec, respectivamente, em Água Doce–SC. Os tratamentos foram os seguintes para o experimento 1: 1) testemunha (sem tratamento); 2) desfolha manual no início da maturação (estádio “pintor”); 3) desfolha manual 15 dias após a primeira desfolha; 4) ácido abscísico 200 mg L-1; 5) ácido abscísico 400 mg L-1; 6) ácido abscísico 600 mg L-1. Para o experimento 2 foram incluídos dois tratamentos adicionais: 7) extrato de gervão 100 g L-1, 8) extrato de capim limão 100 g L-1. Foram realizadas as seguintes avaliações: massa e diâmetro de bagas, diâmetro e comprimento de ramos, massa de cachos, teor de sólidos solúveis, acidez titulável, relação sólidos solúveis/acidez, pH, teor de antocianinas, polifenóis totais, teor de flavonoides, intensidade de cor, radiação fotossinteticamente ativa, índice de clorofila, índice de desfolha e de clorose, luminosidade, croma, tonalidade, índice de coloração para bagas vermelhas e teor de álcool para o vinho. A desfolha e a aplicação de S-ABA não apresentou efeitos sobre as características químicas dos cachos e bagas nas duas cultivares. Houve maior radiação fotossinteticamente ativa nos tratamentos de desfolha e S-ABA. A aplicação de S-ABA proporcionou clorose nas folhas, seguido de baixo teor de clorofila, ocasionando a senescência, seguido de desfolha. A desfolha e a aplicação de ácido abscísico proporcionaram níveis aumentados de polifenóis totais, antocianinas, flavonoides e intensidade de cor, tanto na uva Primitivo, quanto na Malbec e no vinho. Os extratos vegetais aplicados não influenciaram nas análises físico-químicas, no teor de antocianinas e polifenóis totais, apenas no teor de flavonoides e intensidade de cor na cv Malbec. / Climatic conditions have a strong influence on grapevine cultivation. The high rate of rainfall and low temperature range, for example, can cause the grapes do not reach adequate maturation indexes. In order to check the effect of defoliation, the application of abscisic acid and application of plant extracts on the quality of grapes, two experiments were conducted in commercial vineyard with the cvs. Primitivo and Malbec, respectively, in Água Doce – SC. The treatments were as follows for experiment 1: 1) control (no treatment); 2) manual defoliation in early maturation (‘veraison’); 3) defoliation 15 days after the first manual defoliation; 4) abscisic acid 200 mg L-1; 5) abscisic acid 400 mg L-1; 6) abscisic acid 600 mg L-1. For experiment 2 were included two additional treatments: 7) gervão extract 100 g L-1, 8) extract lemon grass 100 g L-1. The following reviews were carried out: mass and berry diameter, diameter and length of branches, number and mass of branches, soluble solids, titratable acidity, soluble solids/acidity, pH, anthocyanins, total polyphenols, flavonoids, color intensity, photosynthetically active radiation, chlorophyll index, index of defoliation and chlorosis, lightness, chroma, hue, color index for red berries and alcohol content for wine. Defoliation and application of S-ABA showed no effects on the chemical characteristics of the bunches and berries in the two cultivars. There was a higher photosynthetically active radiation treatments of defoliation and S-ABA. The application of S-ABA provided chlorosis in leaves, followed by low chlorophyll content, causing the senescence, followed by defoliation. Defoliation and application of abscisic acid have provided increased levels of total polyphenols, anthocyanins, flavonoids and color intensity, both in Primitivo grape as the Malbec and wine. The plant extracts applied did not influence on the physical and chemical analyses, the anthocyanins and total polyphenols, flavonoids content only and intensity of color in cv Malbec.

Com o avanço no desenvolvimento industrial sustentável estão sendo exploradas novas aplicações de uso dos subprodutos agroindustriais. O bagaço de uva obtido a partir da vinificação ou produção de sucos mantém importantes quantidades de polifenóis em suas cascas, sementes e engaço após o processamento, úteis para proteção da pele contra os raios ultravioleta. Neste contexto, o objetivo do nosso estudo foi caracterizar quimicamente o extrato do bagaço de uva Cabernet Sauvignon e avaliar a sua segurança e eficácia clínica em fotoprotetor tópico. Nesta dissertação, o extrato hidroetanólico (70% v/v) do bagaço de uva total, incluindo cascas, sementes e engaços de Vitis vinifera L., foi obtido por percolação seguido de liofilização. Os ensaios divididos em duas etapas: i) In vitro: determinação dos fenólicos totais (FT) usando Folin-Ciocalteu e expresso em equivalentes de ácido gálico (GAE); flavonoides por meio da reação com tricloreto de alumínio e expresso em quercetina; atividade antioxidante do extrato e das formulações através da desativação de radicais livres de DPPH• expressa em equivalentes de Trolox (TE); identificação dos principais compostos fenólicos do extrato bruto por espectrometria de massa (HPLC/ESI-MS/MS); desenvolvimento de nove formulações usando o delineamento experimental; medição dos valores de transmitância das formulações referentes ao fator de proteção solar (FPS), fotoestabilidade e fator de proteção UVA (FP-UVA) através do equipamento Labsphere UV-2000S® e ii) Em seres humanos, apenas duas formulações foram avaliadas clinicamente, C sem extrato e com filtros UVA e UVB: butilmetoxidibenzoilmetano, etil-hexilmetoxicinamato e etil-hexildimetil PABA (11,5% p/p) e D com extrato (bagaço de uva 10% p/p) e filtros UV. Inicialmente, a segurança dermatológica, irritabilidade e sensibilização; fototoxicidade e fotossensibilização foram avaliadas pelo Teste de Contato Repetitivo em Humanos (HRIPT). Posteriormente, a eficácia fotoprotetora clínica foi testada na pele de dez voluntários. O teor de FT encontrado no extrato de bagaço de uva foi de 141,11 ± 3,38 mg GAE.g-1 e de flavonoides 3,01 ± 0,14 mg QE.g-1. A eficácia antioxidante das soluções metanólicas com extrato e fotoprotetor na concentração de 1 mg.mL-1 em peso seco em pH 5 e 7 foram aproximadamente: 707 µmol TE.g-1 e 520 µmol TE.g-1, respectivamente. Isto significa uma queda em torno de 26,45% da capacidade antioxidante do extrato quando incorporado à formulação. Foram identificadas por espectrometria de massa dezenove substâncias fenólicas, entre elas dímeros e trímeros de procianidinas, di-hidroflavonol, flavonóis e antocianidinas. Os resultados demonstraram efeito sinérgico entre os filtros UV e extrato vegetal no FPS e efeito antagônico com a variação do tempo de irradiação sobre as respostas do FPS, atividade antioxidante, comprimento de onda crítico, proteção UVA, proteção UVB e razão UVA/UVB. A melhor combinação eficiência-resposta foi detectada na formulação D com um aumento do FPS in vitro em cerca de 210%. Os testes de segurança não induziram qualquer reação adversa. A eficácia fotoprotetora clínica de D foi 21% (10,20 - 12,30) superior em relação à formulação C, demonstrando maior eficiência na proteção UVA. Sendo assim, C e D foram consideradas seguras para uso tópico e D estatisticamente superior tanto na proteção UVA quanto UVB comparado à amostra só associada de filtros. Logo, o bagaço de uva é um promissor ingrediente sustentável multifuncional útil para o uso em protetor solar. / With the advance in sustainable industrial development, new applications of agro-industrial by-products are being explored. Grape pomace obtained from winemaking or juice production keeps important amounts of polyphenols in their skins, seeds and stalks after processing that are useful for protection of skin against ultraviolet rays. In this context, the objective of our study was to chemically characterize Cabernet Sauvignon pomace extract and to evaluate its safety and clinical efficacy in topical photoprotector. The hydroethanolic extract (70% v/v) of the Vitis vinifera L. whole grape pomace, including seeds, skins and stalks, was obtained by percolation after lyophilization. The tests were divided into two stages: i) In vitro: total phenols (TF) using Folin-Ciocalteu and expressed in Gallic Acid Equivalent (GAE); flavonoids by reaction with aluminum trichloride and expressed as quercetin; antioxidant activity of the extract and formulations by inhibition by DPPH• expressed as Trolox equivalents (TE); identification of the main phenolic compounds of the crude extract by mass spectrometry (HPLC/ESI-MS/MS); development of nine formulations using experimental design and evaluated the SPF, photostability and UVA protection factor (UVA-PF) through the Labsphere UV-2000S® equipment; ii) In humans, only two formulations were clinically evaluated, C without extract and with UVA and UVB filters: butilmetoxidibenzoilmetano, etil-hexilmetoxicinamato and etil-hexildimetil PABA (11.5% w/w) and D with extract (10% w/w grape pomace) and filters UV. Initially, the dermatological safety, irritability and sensitization; phototoxicity and photosensitization were evaluated by the Human Repeat Insult Patch Test (HRIPT). After, the clinical photoprotective efficacy was tested on the skin of ten volunteers. The FT content found in the dried extract was 141.11 ± 3.38 mg GAE.g-1 and flavonoids 3.01 ± 0.14 mg QE.g-1. The antioxidant potential of the methanolic solutions with extracts and photoprotectors at the concentration of 1 mg.ml-1 in dry weight and at pH 5 and 7 were around: 707 µmol TE.g-1 and 520 µmol TE.g-1, respectively. This means a drop of about 26.45% of the antioxidant capacity of the extract when incorporated into the formulation. Mass spectrometry identified nineteen phenolic substances, among them procyanidins dimers and trimmers, di-hydroflavonol, flavonols and anthocyanin. The results showed a synergistic effect between the UV filters and the herbal extract in the SPF and the antagonistic effect with the variance of the irradiation time in the SPF responses, antioxidant activity, critical wavelength, UVA protection, UVB protection and UVA/UVB ratio. The best efficiency-response combination was detected in the D formulation with an in vitro SPF increase of about 210%. Safety tests did not induce any adverse reaction. The clinical efficiency of D photoprotection was 21% (10.20 - 12.30) higher than the C formulation, demonstrating high efficiency in UVA protection. Thus, C and D were considered safe for topical use and D statistically superior in both UVA and UVB protection to the only combined sample of filters. Therefore, grape pomace is a promising multifunctional sustainable ingredient qualified to be used in sunscreen industry.