Orientador: Ana Marisa Fusco-Almeida / Coorientador: Rondinelli Donizetti Herculano / Banca: Sergio Luiz de Souza Salvador / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Jean Leandro dos Santos / Banca: Janaina Habib Jorge / Resumo: O aumento na incidência de infecções fungicas tem progredido significativamente e dados epidemiológicos mostram que as leveduras do gênero Candida são as principais responsáveis pelas micoses em humanos. A terapêutica para o tratamento dos processos infecciosos causados por fungos tem encontrado uma série de problemas, como a crescente evolução da resistência aos antimicrobianos, o número restrito de fármacos disponíveis e os efeitos colaterais. Neste contexto, faz-se necessário o desenvolvimento de antifúngicos mais eficazes e menos tóxicos. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi o de realizar a síntese e verificar a atividade antifúngica de derivados nitrofuranos contra células planctônicas e biofilmes de cepas padrão de Candida spp., bem como analisar os efeitos tóxicos destes compostos em modelos alternativos ao uso de mamíferos. Realizou-se a síntese e caracterização físico-química de derivados nitrofuranos. Estes tiveram sua sensibilidade testada contra células planctônicas e biofilmes de Candida spp. nos tempos de 6, 24 e 48 horas. Além disso, foram realizados ensaios de citotoxicidade dos derivados nitrofuranos, bem como ensaios de toxicidade em Galleria mellonella, Danio rerio (zebrafish) e Caenorhabditis elegans. Os resultados obtidos mostraram que os compostos L7CF 113 e L7CF165 foram os que apresentaram melhor atividade antifúngica. Os biofilmes de C. albicans, C. krusei e C. glabrata formados em 6 horas apresentaram atividade metabólica reduzida quando em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The increase in the incidence of fungal infections has progressed significantly and epidemiological data show that yeasts of the genus Candida are the main responsible for the mycoses in humans. Therapy for the treatment of infectious processes caused by fungi has encountered a number of problems, such as the increasing evolution of antimicrobial resistance, the limited number of drugs available and the side effects. In this context, the development of more effective and less toxic antifungal agents is necessary. The objective of the present study was to perform the synthesis and to verify the antifungal activity of nitrofuran derivatives against planktonic cells and biofilms of references strains of Candida spp., as well as to analyze the toxic effects of these compounds in alternative models to the use of mammals. The physicochemical synthesis and characterization of nitrofuran derivatives was carried out. These had their sensitivity tested against planktonic cells and biofilms of Candida spp. at times of 6, 24 and 48 hours. In addition, cytotoxicity assays of nitrofuran derivatives as well as toxicity assays were performed in Galleria mellonella, Danio rerio (zebrafish) and Caenorhabditis elegans. The results obtained showed that the compounds L7CF 113 and L7CF 165 showed the best antifungal activity. The biofilms of C. albicans, C. krusei and C. glabrata formed in 6 hours showed reduced metabolic activity when in contact with the compounds L7CF 113 and L7CF 165 in concentrations equal to or greater than 62.50 μg / mL. The biofilms of C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. parapasilosis and C.tropicalis, formed at 24 and 48 hours, presented reduced metabolic activity for compound L7CF 113 and L7CF 165 in concentrations equal to or greater than 125 μg / mL. The cytotoxicity assays... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador: Emerson Ferreira Queiroz / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Cristiano Soleo de Funari / Resumo: A espécie Tetrapterys mucronata (Malpighiaceae), uma das espécies ocasionalmente utilizados na Ayahuasca, despertou há algum tempo o interesse do grupo de pesquisa NuBBE para a realização do estudo químico e avaliação das atividades biológicas devido a sua utilização nos rituais religiosos conhecidos como "Santo Daime". Este estudo revelou resultados interessantes nos ensaios preliminares voltados para a identificação de potenciais inibidores de acetilcolinesterase, e mostrou que a espécie T. mucronata tem alcaloides e compostos fenólicos como principais constituintes químicos. Estes resultados levaram ao estudo de outras espécies de Tetrapterys ainda sem estudo químico, incluindo espécies que pertenciam a esse gênero e recentemente foram reclassificados como Niedenzuella, como no caso da Niedenzuella multiglandulosa, espécie selecionada para esta pesquisa de mestrado. Esta espécie é conhecida devido aos efeitos tóxicos que causam a morte de rebanhos bovinos, e de outros mamíferos, em geral, causando prejuízos substanciais na balança comercial brasileira. Este trabalho tem como objetivo a busca de compostos tóxicos presentes nas folhas de Tetrapterys multiglandulosa. Essa espécie foi selecionada por serem relatados na literatura surtos de intoxicação do gado (em 2004 e 2005) em áreas altamente infestadas pela planta, causando morte de vacas e aborto de bezerros no estado do Mato Grosso do Sul. Estudos recentes encontrados na literatura indicam a presença de monofluoracetato (... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tetrapterys mucronata (Malpighiaceae) species, one of the species occasionally used in Ayahuasca, has become of interest of NuBBE research group to perform a chemical study for an evaluation of the biological activities due to its use in religious rituals known as "Santo Daime". This study revealed interesting results in preliminary assays aiming to identify acetylcholinesterase potential inhibitors, and that this species has alkaloids and phenolic compounds as its major chemical compounds. These results led our research group to study other species from Tetrapterys genus without further chemical studies, including species that used to belong to this genus and that recently has changed to Niedenzuella genus, such as Niedenzuella multiglandulosa, the selected species for this master's research. This species is known for causing toxic effects that may cause death in cattle and other mammals in general, causing substantial losses in Brazilian trade balance. The objective of this research is to search for toxic compounds in Niedenzuella multiglandulosa leaves. This species was chosen for having reports in the literature of outbreaks of cattle intoxication (in 2004 and 2005) in which the pasture was highly infested with it, causing death of cows and led to abortion of calves in Mato Grosso do Sul state. Recent studies found in the literature indicate the presence of monofluoracetate (MFA), a well-known toxic substance, in this species, but so far there were no phytochemical and to... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-01-20T13:03:11Z No. of bitstreams: 1 2015_AndreSantosLeonardo.pdf: 1556117 bytes, checksum: 4e296b434783a231f7ba6e7ccbaab1cf (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-01-26T15:23:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_AndreSantosLeonardo.pdf: 1556117 bytes, checksum: 4e296b434783a231f7ba6e7ccbaab1cf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-26T15:23:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_AndreSantosLeonardo.pdf: 1556117 bytes, checksum: 4e296b434783a231f7ba6e7ccbaab1cf (MD5) / O Danio rerio é amplamente utilizado em estudos relacionados ao coração e por isso torna-se importante o conhecimento a respeito da morfologia desse órgão nestes peixes. Este estudo teve como objetivo avaliar as densidades numérica e volumétrica de cardiomiócitos (Nv(c) e Vv(c), respectivamente), densidade volumétrica de interstício(Vv(i)), além das quantidades e distribuições de tecido conjuntivo e vasos no miocárdio em diferentes idades. Para isto, foram analisados 65 peixes, machos e fêmeas, com idades entre 12-18 meses, durante treze semanas. Houve a partir da semana VIII uma diminuição significativa na densidade numérica de cardiomiócitos e na quantidade de vasos, com aumento na quantidade de tecido conjuntivo, além de um aumento significativo na densidade volumétrica de interstício entre as duas primeiras e duas últimas semanas. Comparando os animais da semana I com os da semana XIII, observou-se uma diminuição significativa de 20,7% na densidade numérica de cardiomiócitos e de 13,6% nos vasos, enquanto ocorreu um aumento significativo no conjuntivo de 17,8% e 12% na densidade volumétrica de interstício. Foi verificado que ao longo da idade estudada que não houve alteração significativa na densidade volumétrica de cardiomiócitos. Os resultados deste estudo proporcionam a descrição de componentes do coração do Danio rerio ao longo do tempo, estabelecendo parâmetros quantitativos que podem auxiliar no entendimento dos mecanismos morfofuncionais atuantes nesse órgão. / The zebrafish is widely used in studies related to the heart and therefore becomes important to know about the morphology of this organ in this fish. This study aimed to evaluate the numerical and volumetric densities of cardiomyocytes (Nv(c) and Vv(c), respectively), the volumetric density of interstitium (Vv(i)), besides of amounts and distribution of connective tissue and vessels in the myocardium at different ages. Sixty five fishes, males and females, aged 12-18 months were analyzed for thirteen weeks. There was a significant decrease in the numerical density of cardiomyocytes and vessels, with increased amount of connective tissue from week VIII, and a significant increase in volume density of interstitium between the first two and last two weeks. Comparing the animals of week I with the week XIII, there was a significant decrease of 20.7% in the numerical density of cardiomyocytes and 13.6% in the vessels, whereas there was a significant increase of 17.8% in connective tissue and 12% in volume density of interstitium. It was verified that throughout studied age no significant change in the volume density of cardiomyocytes. The results of this study provide a description of the components of the Danio rerio heart establishing quantitative parameters that can help understand the morphological and functional mechanisms that operate in this organ.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-02-03T12:07:14Z No. of bitstreams: 1 2015_LeticiaBatelliOliveira.pdf: 1067248 bytes, checksum: 3f41835c5e057ac8ca47216c3b8f4f22 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-02-05T12:20:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LeticiaBatelliOliveira.pdf: 1067248 bytes, checksum: 3f41835c5e057ac8ca47216c3b8f4f22 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-05T12:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LeticiaBatelliOliveira.pdf: 1067248 bytes, checksum: 3f41835c5e057ac8ca47216c3b8f4f22 (MD5) / O fígado é um órgão essencial e realiza várias atividades vitais, como metabolização, síntese e armazenamento. Este trabalho teve como objetivo descrever a macroscopia e microscopia do fígado do zebrafish e suas modificações temporais em treze semanas. Foram utilizados quarenta e seis (46) peixes da espécie Danio rerio, adultos, vinte e sete (27) fêmeas e dezenove (19) machos. Sete peixes foram eutanasiados para avaliação macroscópica e três peixes eutanasiados semanalmente durante treze semanas para avaliação microscópica. Realizou-se técnica histológica de rotina e as lâminas foram coradas com Hematoxilina/Eosina e Ácido Periódico de Schiff (PAS). Semanalmente, foram determinadas as densidades volumétricas (Vv(h)) e numérica (Nv(h)) dos hepatócitos e a intensidade de vacuolização. O fígado localizou-se na cavidade celomática ventralmente à bexiga natatória, apresentou coloração levemente amarronzado e estava dividido em três lobos hepáticos. Microscopicamente, era constituído por hepatócitos que formavam uma dupla camada celular ao redor de sinusóides. A coloração do citoplasma dos hepatócitos nos machos foi mais eosinofílica e nas fêmeas basofílica. Não foi observada a formação de tríades portais e células fagocitárias. A vesícula biliar apresentava epitélio de transição e os ductos biliares epitélio simples cúbico. As densidades volumétrica e numérica dos hepatócitos durante as treze semanas não apresentaram diferença estatística, mas a correlação entre esses parâmetros foi positiva. A vacuolização foi devido a presença de glicogênio. O fígado de zebrafish possui particularidades macro e microestruturais e quantitativamente tem grande capacidade de adaptação do número e volume de hepatócitos em resposta às necessidades fisiológicas do animal naquele momento. / Liver is an essential organ and performs a number of vital activities such as metabolism, synthesis and storage. This research aimed to describe macroscopically and microscopically the liver of zebrafish and the liver temporal changes in thirteen weeks. We used forty six (46) fishes Danio rerio, adults, twenty seven (27) females and nineteen (19) males. Seven fishes were euthanized for macroscopic analyses and three fishes were euthanized weekly for thirteen weeks for microscopic analyses. It was conducted routine histological technique and the slides were stained with Hematoxylin/Eosin and periodic acid-Schiff (PAS). Weekly, it was determined volumetric (Vv(h)) and numerical (Nv(h)) densities of hepatocytes and intensity of vacuolization. The liver was located in the coelomic cavity ventrally to swim bladder, showed slightly brownish and was divided into three hepatic lobes. Microscopically, the liver consisted of hepatocytes arranged as a double cell layer around sinusoids. The staining of the cytoplasm of hepatocytes in males was more eosinophilic and basophilic than in females. Formation of portal triads and phagocytic cells were not found. The gallbladder had transitional epithelium and biliary ducts were composed by simple cubic epithelium. The volume and numerical density of hepatocytes during thirteen weeks showed no statistical difference, but the correlation between these parameters was positive. The vacuolization was due glycogen. The zebrafish liver has macro and microstructural features and quantitatively has great ability to adapt in volume and number of hepatocytes in response to the physiological needs.

Sequences of stereotyped actions are central to the everyday lives of humans and animals, from the kingfisher's dive to the performance of a piano concerto. Lashley asked how neural circuits managed this feat nearly 6 decades ago, and to this day it remains a fundamental question in neuroscience. Toward answering this question, vocal performance in the songbird was used as a model to study the performance of learned, stereotyped motor sequences. The first component of this work considers the song motor cortical zone HVC in the zebra finch, an area that sends precise timing signals to both the descending motor pathway, responsible for stereotyped vocal performance in the adult, and the basal ganglia, which is responsible for both motor variability and song learning. Despite intense interest in HVC, previous research has exclusively focused on describing the activity of small numbers of neurons recorded serially as the bird sings. To better understand HVC network dynamics, both single units and local field potentials were sampled across multiple electrodes simultaneously in awake behaving zebra finches. The local field potential and spiking data reveal a stereotyped spatio-temporal pattern of inhibition operating on a 30 ms time-scale that coordinates the neural sequences in principal cells underlying song. The second component addresses the resilience of the song circuit through cutting the motor cortical zone HVC in half along one axis. Despite this large-scale perturbation, the finch quickly recovers and sings a near-perfect song within a single day. These first two studies suggest that HVC is functionally organized to robustly generate neural dynamics that enable vocal performance. The final component concerns a statistical study of the complex, flexible songs of the domesticated canary. This study revealed that canary song is characterized by specific long-range correlations up to 7 seconds long-a time-scale more typical of human music than animal vocalizations. Thus, the neural sequences underlying birdsong must be capable of generating more structure and complexity than previously thought.

The work is focused on the status and role of zebra mussels (Dreissena polymorpha) in the water reservoir Želivka. Literature review summarizes the basic characteristics of living zebra mussels and its impact on the aquatic ecosystem. Current knowledge about this invasive bivalves show that its presence in the water reservoir has certain advantages, but also disadvantages. The main advantage is that zebra as filtrator, increases the transparency of the water and provides food for the animals living in the aquatic environment, or in its vicinity. Disadvantages are then mainly from the economic point of view, the zebra clogs pipes and thus prevents water flow and attached to marker buoys, fishing nets and attaches to the hulls of ships that can be attacked from the inside. In field part population of zebra mussels was sampled in different parts of the reservoir and identified following parameters (temperature and oxygen stratification, coverage to substrate coverage depending on the depth and the substrate, the length of shells according to the horizontal and vertical gradient filtering capacity and the volume rate). The results showed that the incidence and size of shells affects both horizontal and vertical gradient. Zebra mussels occur most depth 1-9 m on rocky, or stony substrate. The greatest incidence was found at Budeč and at Hráz, where the water is less eutrophic than the Zahrádka. Based on these parameters, and literature data was calculated hypothetical filter capacity and discussed its possible impact on the ecosystem components of the reservoir.

A hiperprolinemia é uma doença metabólica que pode ser causada por dois distintos erros inatos do metabolismo da prolina. A hiperprolinemia tipo I ocorre por uma deficiência na enzima prolina oxidase, enquanto que a hiperprolinemia tipo II é causada pela ausência da atividade da enzima Δ1-pirrolino-5-carboxilato desidrogenase. Os pacientes afetados por essa doença geralmente apresentam manifestações neurológicas, tais como convulsões, déficit cognitivo e retardo mental. Além disso, tem sido descrita uma associação entre a hiperprolinemia moderada e doenças psiquiátricas. Entretanto, os mecanismos neuroquímicos relacionados a esses sintomas neurológicos ainda são pouco compreendidos. Portanto, no presente estudo, investigamos o efeito da exposição aguda e crônica à prolina sobre parâmetros comportamentais em peixe-zebra, tais como: atividade locomotora, ansiedade e interação social. Além disso, avaliamos o efeito in vivo e in vitro da prolina sobre a atividade da acetilcolinesterase (AChE), bem como sobre a atividade e expressão gênica das ectonucleotidases em cérebro de peixe-zebra. Para os estudos in vivo, os animais foram expostos a duas concentrações de prolina (1,5 e 3,0 mM) durante 1 hora ou 7 dias (tratamento agudo e crônico, respectivamente). Para os ensaios in vitro, diferentes concentrações de prolina foram testadas (variando de 3,0 a 1000 μM). A exposição aguda à prolina não promoveu alterações significativas nos parâmetros bioquímicos e comportamentais analisados. Entretanto, a exposição crônica à prolina na concentração de 1,5 mM provocou um aumento na atividade locomotora do peixe-zebra, caracterizada pelo aumento no número de linhas cruzadas (47%), na distância total percorrida (29%) e na velocidade média (33%). Um aumento significativo no tempo gasto na parte superior do aquário (91%) também foi observado após esse mesmo tratamento, o que pode ser interpretado como um comportamento ansiolítico. A prolina na concentração de 1,5 mM também induziu o déficit de interação social (78%), quando comparado ao grupo controle. Além disso, exposição crônica aumentou significativamente a atividade da AChE em ambos os grupos tratados (34% e 39%). Esse mesmo tratamento também aumentou a hidrólise de ATP em ambas as concentrações testadas (14% e 22%, respectivamente), enquanto que a hidrólise de ADP e AMP aumentou apenas na concentração de 3,0 mM (21% e 17%, respectivamente). A expressão gênica da E-NTPDase3 aumentou em ambos os grupos tratados após a exposição crônica à prolina, enquanto que a E-NTPDase1 teve seus níveis de transcritos aumentados apenas na concentração de 3,0 mM. A prolina, quando avaliada in vitro, não promoveu alterações significativas nas atividades das ectonucleotidase e da AChE. Por fim, demonstramos, ainda, que as alterações comportamentais e o aumento da atividade da AChE induzidos pela prolina foram completamente revertidos pela administração aguda de um antipsicótico atípico (sulpirida), mas não por um típico (haloperidol). Em conjunto, estes dados demonstram que a exposição crônica à prolina induz alterações comportamentais, bem como aumenta a atividade da AChE e catabolismo de nucleotídeos em cérebro de peixe-zebra. Esses achados podem contribuir, pelo menos em parte, para uma melhor compreensão dos mecanismos relacionados às manifestações neurológicas verificadas em pacientes hiperprolinêmicos, como os transtornos psicóticos e cognitivos. Além disso, este estudo pode facilitar o uso do peixe-zebra como modelo experimental para o estudo de erros inatos do metabolismo que afetam o sistema nervoso central. / Hyperprolinemia is a metabolic disease that may be caused by two distinct inborn errors of proline metabolism. Hyperprolinemia type I occurs by a deficiency in proline oxidase, while the hyperprolinemia type II is caused by an absence of Δ1-pyrroline-5-carboxylic acid dehydrogenase. Patients affected by this disease usually present neurological manifestations, such as seizures, cognitive impairment, and mental retardation. Moreover, an association between psychiatry disorders and moderate hyperprolinemia has been reported. However, the mechanisms related to these neurological symptoms still remain poorly understood. Therefore, in the present study, we investigated the effect of short- and long-term proline exposure on behavioral parameters in zebrafish, such as locomotor activity, anxiety, and social interaction. In addition, we evaluated the in vivo and in vitro effects of proline on acetylcholinesterase (AChE) activity, as well as on ectonucleotidase activities and gene expression in zebrafish brain. For the in vivo studies, animals were exposed at two proline concentrations (1.5 and 3.0 mM) during 1 hour or 7 days (short- or long-term treatments, respectively). For the in vitro assays, different proline concentrations (ranging from 3.0 μM to 1000 μM) were tested. Short-term proline exposure did not promote significant changes on the behavioral and biochemical parameters analyzed. Long-term exposure at 1.5 mM proline caused an increase in locomotor activity in zebrafish, characterized by an increase in the number of line crossings (47%), in the total distance traveled (29%), and in the mean speed (33%). A significant increase in the time spent in the upper portion of the test tank was also observed after the same treatment (91%), which may be interpreted as an indicator of anxiolytic behavior. Proline at 1.5 mM also induced social interaction impairment (78%), when compared to the untreated group. Moreover, long-term proline exposure significantly increased AChE activity for both treated groups (34% and 39%). This treatment also increased ATP catabolism in both concentrations tested (14% and 22%, respectively), whereas ADP and AMP hydrolysis were increased only at 3.0 mM proline (21% and 17%, respectively). The gene expression of E-NTPDase3 increased in both treated groups after long-term proline, whereas E-NTPDase1 transcript levels increased only at concentration of 3.0 mM. Proline, when assessed in vitro, did not promote significant changes on AChE and ectonucleotidase activities. At last, we demonstrated the proline-induced behavioral changes and increase in AChE activity were completely reversed by acute administration of an atypical antipsychotic drug (sulpiride), but not by a typical (haloperidol). Altogether, these data demonstrate that long-term proline exposure induces behavioral changes as well as increases AChE activity and nucleotide catabolism in zebrafish brain. These findings may contribute, at least in part, to better understand the mechanisms related to the neurological manifestations observed in hyperprolinemic patients, such as the psychotic and cognitive dysfunctions. Moreover, this study might facilitate the use of the zebrafish as experimental model for studying inborn errors of amino acid metabolism that affect the central nervous system.

Epilepsia é um grupo de desordens neurológicas caracterizada por crises epilépticas recorrentes não provocadas, afligindo 50 milhões de pessoas no mundo. Embora grande parte dos casos possa ser controlada através de medicação um número significativo de pacientes torna-se refratários apesar do tratamento com drogas anticonvulsivantes. Apesar do desenvolvimento bemsucedido de várias novas drogas antiepilépticas, a busca por novas terapias com maior eficácia e tolerabilidade ainda permanece um objetivo importante. O modelo de epilepsia induzido por pilocarpina tem sido amplamente utilizado em roedores para o estudo da patogênese da epilepsia do lobo temporal. Embora estes estudos com modelos animais tenham aumentado nossa compreensão das bases patológicas da epilepsia, os complexos mecanismos epileptogênicas e a geração de crises epilépticas ainda não foram completamente elucidados. Ultimamente, foram desenvolvidos estudos avaliando as características comportamentais de peixe-zebra e peixe-zebra (Danio rerio). Esse vertebrado é um modelo experimental que vem se consolidando em áreas da ciência por ter características bastante atrativas como pequeno custo e espaço requerido para manutenção, homologia genética e anatômica tornando-se de grande valia para uma maior compreensão dos mecanismos envolvidos nas crises epilépticas. A partir disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar e caracterizar comportalmentalmente as crises epilépticas induzidas por pilocarpina em peixezebra adulto. Para isso, os animais foram pré-tratados com uma curva de concentrações de pilocarpina nas doses de 150, 200, 300, 350 e 400 mg/Kg e filmados por 30 minutos. Com a maior dose foi observado um perfil claro de crise tônico-clônica. O uso do anticonvulsivo escopolamina na dose de 1mg/Kg, ip, 30 minutos antes da aplicação de PILO na maior concentração 400mg/Kg mostrou-se capaz de prevenir a crise tônico-clônica induzida pela PILO. A avaliação comportamental pós-crise foi realizada no aparato open-tank três dias após a crise quando os animais foram filmados por 6 minutos. Foram analisados distância percorrida, tempo móvel, tempo no topo e tempo no fundo. Os resultados deste estudo permitiram uma caracterização temporal das manifestações comportamentais das crises epliepticas em peixe-zebra adulto induzidas por diferentes concentrações de pilocarpina. / Epilepsy is a group of neurological disorders characterized by recurrent seizures. It affect about 50 million people worldwide, therefore a public health problem of great importance. While most cases can be controlled through medication, a significant number of patients continue to have seizures despite treatment with anticonvulsant drugs. Despite the successful development of several new antiepileptic drugs, the search for new and more effective therapies and greater tolerability remains an important goal. The pilocarpine model has been extensively used in rodents for the study of neural molecular cascades and mechanisms involved in the pathogenesis of temporal lobe epilepsy. Although studies with animal models have increased our understanding of the pathological bases of epilepsy, the epileptogenic complex mechanisms and the generation of epileptic seizures have not yet been fully elucidated. Lately, studies evaluating behavioral characteristics of zebrafish (Danio rerio) were developed. This vertebrate is an experimental model that has been consolidated in various areas of science for having very attractive features as small cost and space requirements for maintenance, rapid development and life cycle, large offspring, translucent embryos and susceptibility to manipulation and microinjection. Hence, the use of new models becomes of huge value to a greater understanding of the mechanisms involved in this pathology and thus the zebrafish emerges as a complementary alternative for the study of seizures and epilepsy. This study aimed to evaluate and characterize the seizures induced by pilocarpine in adult zebrafish. First, animals were treated with a pilocarpine at different concentrations (150, 200, 300 and 400 mg/kg) and filmed for 30 minutes. Tonic-clonic seizures were observed in the higher dose. When scopolamine, an anticholinergic anticonvulsant, was injected 30 minutes before the higher dose treatment, the pilocarpine-induced seizure was prevented. The post seizure behavioral evaluation was performed in the opentank apparatus three days after injection and filmed for 6 minutes. Measures analyzed in open-tank were distance traveled, moving time and time at the top and in the background. Taken together, our results allowed a temporal characterization of the seizures behavioral manifestations induced by different concentrations of pilocarpine in adult zebrafish.

Introdução: Os ovos de Zebrafish que não são fertilizados podem ser uma fonte de alimento para o peixe. O objetivo deste estudo é avaliar a influência do acesso aos ovos de Zebrafish no Índice de Massa Corporal, níveis séricos de colesterol e triglicérides e acúmulo de gordura no hepatócito. Materiais e métodos: Zebrafish adultos de ambos sexos foram divididos em dois grupos: grupo 1 com acesso livre aos próprios ovos e grupo 2 com o fundo do aquário coberto de bolas de vidro para evitar o acesso aos ovos por duas semanas. Para a coleta de sangue, ambos os grupos foram mantidos em jejum pelo período de 24 horas antes da coleta. O IMC foi medido em gramas por centímetro quadrado (g/cm²). Para coletar as amostras sanguíneas, os animais foram anestesiados e uma incisão, anterior a cauda, foi realizada para acessar a veia dorsal. Uma pipeta automática foi utilizada para coletar o sangue que foi centrifugado obtendo soro para análises. Os níveis séricos de triglicérides e colesterol foram analisados com testes colorimétricos. O fígado foi coletado para análise histológica. O n utilizado foi 4 para cada grupo. Para as análises bioquímicas foram utilizados pools de 10 peixes. Resultados: Os resultados estão expressos em média ± erro padrão. Não houve diferença significativa no IMC (grupo 1 0,037 ± 0,009 g/cm² e grupo 2 0,035 ± 0,008 g/cm²) nem nos níveis de colesterol (colesterol total: grupo 1 362 ± 73 mg/dL e grupo 2 357 ± 23 mg/dL; HDL – colesterol: grupo 1 91,22 ± 1,79 grupo 2 72,14 ± 2,89; LDL – colesterol: grupo 1 55,68 ± 10,88 grupo 2 44,18 ± 9,84 ). No entanto, houve diferença significativa nos níveis de triglicérides séricos (grupo 1 457 ± 43 mg/dL e grupo 2 292 ± 111 mg/dL P=0,03). Não foi observado acúmulo de lipídeos nos hepatócitos. Conclusões: O acesso aos próprios ovos alterou os níveis de triglicérides sem modificar os níveis de colesterol, alterar o IMC nem acumular gordura nos hepatócitos. / Introduction: The Zebrafish eggs that are not fertilized can be a food source for the fish. The aim of this study was to measure the influence of accessing eggs in Body Mass Index, cholesterol and triglycerides serum levels and lipid accumulation in hepatocyte of Zebrafish. Material and Methods: Adult Zebrafish of both genders were divided into two groups: group 1 free access to their own eggs and group 2 with the bottom of the aquarium filled with glass balls to prevent them to access their eggs for two weeks. To the blood collection, both groups were kept fasting for 24 hours before the blood collection. The body mass index (BMI) was measure in gram per square centimeter (g/cm²). To collect the blood samples, animals were anesthetized and an incision was made before the tail to access the dorsal vein. We used an automatic pipette to collect the blood. It was centrifuged and serum was obtained for analysis. Triglycerides and cholesterol seric levels were analyzed with colorimetric tests. The liver was collected to histological analysis. The n used was 4 for each group. Pools with serum of 10 animals were used to biochemical analysis. Results: The results are expressed in mean ± standard error. There was no significant difference in BMI (group 1 0,037 ± 0,009 g/cm² and group 2 0,035 ± 0,008 g/cm²) neither in cholesterol levels (total cholesterol: group 1 362 ± 73 mg/dL and group 2 357 ± 23 mg/dL; HDL – cholesterol: group 1 91,22 ± 1,79 group 2 72,14 ± 2,89; LDL – cholesterol: group 1 55,68 ± 10,88 group 2 44,18 ± 9,84 ). However, there was a significant difference in triglycerides levels (group 1 457 ± 43 mg/dL and group 2 292 ± 111 mg/dL P=0,03). Lipid accumulation was not observed in hepatocytes. Conclusion: Having access to eggs seams to influence the Zebrafish´s triglycerides serum levels without modifying the BMI and cholesterol serum levels neither lipid accumulation in hepatocytes.

O pentilenotetrazol (PTZ) é um agente convulsivo amplamente utilizado em modelos animais para investigações envolvendo crises convulsivas. Embora haja um crescente número de estudos envolvendo zebrafish adulto e convulsão, não há até o momento uma caracterização comportamental detalhada do modelo de indução de crises por PTZ neste animal. Portanto, o objetivo deste estudo foi realizar uma caracterização detalhada das manifestações comportamentais no modelo de convulsão induzida por PTZ em zebrafish adulto. Grupos de 12 animais foram submetidos, por imersão, a distintas diferentes concentrações de PTZ (5, 7.5, 10 e 15 mM). O comportamento convulsivo foi observado durante 20 minutos. Os animais apresentaram os seguintes escores comportamentais: (0) nados curtos; (1) aumento na atividade natatória e na abertura opercular; (2) movimentos erráticos e acelerados; (3) movimentos circulares; (4) convulsão clônica; (5) convulsão tônica; (6) morte. Os animais expostos a diferentes distintas concentrações de PTZ apresentaram diferentes distintos perfis convulsivos, intensidades de convulsão e latência para chegar aos escores. Apenas os animais imersos na concentração de 15 mM apresentaram maior tempo para retornar ao comportamento normal após a exposição ao PTZ. A mortalidade foi de 33% e 50% para as concentrações de 10 mM e 15 mM, respectivamente. No intuito de avaliar abordagem perfil comportamental frente ao pré-tratamento de um fármaco anticonvulsivo, 12 animais foram expostos a diazepam (DZP) por 40 min e após expostos ao PTZ (10 mM). O tratamento com DZP atenuou a severidade da convulsão, mas não o tempo necessário para retornar ao comportamento normal. Levando em consideração que este modelo baseia-se na imersão direta do animal a uma solução de PTZ, avaliamos também as concentrações cerebrais deste agente convulsivo. Além disso, investigamos também uma possível correlação entre a concentração cerebral de PTZ, o tempo e a concentração de exposição. Os resultados decorrentes da exposição dos animais a 5 e 10 mM de PTZ, apontam para uma correlação tempo e concentração dependentes. Os resultados deste trabalho demonstram uma caracterização comportamental detalhada ao longo do tempo de exposição ao PTZ, além de avaliar pela primeira vez a intensidade de convulsão, tempo de retorno ao comportamento normal e mortalidade dos animais. Além disso, pela primeira vez foram determinadas as concentrações cerebrais deste composto neste modelo de convulsão em zebrafish adulto. Por fim, espera-se que tais ferramentas comportamentais e de quantificação cerebral deste composto possam ser úteis em futuras investigações translacionais e estudos que tenham como objetivo melhor compreender esta desordem. / Pentylenetetrazole (PTZ) is a common convulsant agent used in animal models to investigate the mechanisms of seizures. Although adult zebrafish have been recently used to study epileptic seizures, a thorough characterization of the PTZ-induced seizures in this animal model is missing. The goal of this study was to perform a detailed temporal behavior profile characterization of PTZ-induced seizure in adult zebrafish. The behavioral profile during 20 min of PTZ immersion (5, 7.5, 10, and 15 mM) was characterized by stages defined as scores: (0) short swim, (1) increased swimming activity and high frequency of opercular movement, (2) erratic movements, (3) circular movements, (4) clonic seizure-like behavior, (5) fall to the bottom of the tank and tonic seizure-like behavior, (6) death. Animals exposed to distinct PTZ concentrations presented different seizure profiles, intensities and latencies to reach all scores. Only animals immersed into 15 mM PTZ showed an increased time to return to the normal behavior (score 0), after exposure. Total mortality rate at 10 and 15 mM were 33% and 50%, respectively. Considering all behavioral parameters, 5, 7.5, 10, and 15 mM PTZ, induced seizures with low, intermediate, and high severity, respectively. Pretreatment with diazepam (DZP) significantly attenuated seizure severity. Finally, the brain PTZ levels in adult zebrafish immersed into the chemoconvulsant solution at 5 and 10 mM were comparable to those described for the rodent model, with a peak after a 20-min of exposure. The PTZ brain levels observed after 2.5-min PTZ exposure and after 60-min removal from exposure were similar. Altogether, our results showed a detailed temporal behavioral characterization of a PTZ epileptic seizure model in adult zebrafish. These behavioral analyses and the simple method for PTZ quantification could be considered as important tools for future investigations and translational researches.