Candida species have emerged as the second most common cause of vulvovaginitis in the world, producing infections that can cause unwanted symptoms such as itching, discharge, dyspareunia and burning. The objective of this study was to evaluate the genetic variability and the antifungal susceptibility profile of Candida yeasts isolated from vaginal secretions of patients Maceió - Alagoas. The yeasts were collected weekly in the sector of five clinical microbiology laboratories located in the city of Maceió between March and December 2010. For each isolate was performed through a purification of seeding a suspension of yeast in YPD solid medium. DNA extraction was performed by phenol / chloroform and identification by PCR with primers species specific for C.albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei and C. parapsilosis. The patients with vaginal candidiasis were evaluated for the presence of symptoms and risk factors for acquiring the disease. The patterns of sensitivity to ketoconazole, fluconazole, itraconazole and amphotericin B were evaluated according to CLSI standards (M27-A2).Molecular typing was used in the microsatellite (GTG) 5 and the fragments separated on 1.5% agarose gel at 75 volts / cm for 120 minutes, stained with ethidium bromide and viewed on photodocumentation system. Banding patterns were analyzed by BioNumerics 6.5 soltware to obtain electropherogram using the similarity coefficient Jacard. We obtained 296 isolates of Candida yeasts, and C. albicans (82.45%) the most frequent species, followed by C. glabrata with 7.75%, C. parapsilosis with 4.05%, C. tropicalis witn 3.75% and C. krusei 2%. These isolates exhibited resistance profile of 66,7% for amphotericin B, fluconazole for 52,6%, 89,7% for itraconazole and to ketoconazole 21,3%. Among the risk factors for acquiring the disease stands out pregnancy with 24.66% and history of VVC in 15.52%. The main clinical sign was presented discharge in 77,13% of cases. The species analyzed showed a high diversity for the genetic marker (GTG)5, with values ranging from 0.7470 to 0.9963, which allowed the formation of genetic patterns 172 for C. albicans, 10 for C. tropicalis, 11 for C. parapsilosis, 8 for C. glabrata and 4 for C. krusei. The incidence of Candida species with a profile of resistance to itracozaol, amphotericin B, fluconazole and ketoconazole, provides epidemiological data for the study area and reinforces the importance of identifying yeasts to the species level and testing of in vitro antifungal susceptibility. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As espécies de Candida têm emergido como a segunda causa mais comum de vulvovaginites no mundo, produzindo infecções, que podem causar sintomas indesejáveis como, prurido, corrimento, dispareunia e ardor. O objetivo desse estudo foi avaliar a variabilidade genética e o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos em leveduras do gênero Candida isoladas de secreção vaginal de pacientes de Maceió Alagoas. As amostras foram coletadas no setor de microbiologia clínica de cinco laboratórios localizados na cidade de Maceió, entre Março e Dezembro de 2010. Para cada isolado foi realizada uma purificação por meio de semeio de uma suspensão da levedura em meio YPD sólido. A extração do DNA foi realizada pelo método do fenol/clorofórmio e a identificação por PCR com iniciadores espécie-específicos para C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei e C. parapsilosis. As pacientes com candidíase vulvovaginal foram avaliadas quanto à presença de sintomas e fatores de risco para aquisição da doença. Os padrões de sensibilidade ao cetoconazol, fluconazol, itraconazol e anfotericina B foram avaliados de acordo com as normas do CLSI (M27-A2). Na tipagem molecular foi utilizado o microssatélite (GTG)5 e os fragmentos separados em gel de agarose 1,5 % a 75 volts/cm por 120 minutos, corados com brometo de etideo e visualizados em sistema fotodocumentação. Os padrões de bandas obtidos foram analisados pelo soltware BioNumerics 6.5 para obtenção de eletroferograma utilizando o coeficiente de similaridade Jacard. Foram obtidos 296 isolados de leveduras do gênero Candida, sendo C. albicans (82,45%) a espécie mais frequente, seguida de C. glabrata com 7,75%, C. parapsilosis com 4,05%, C. tropicalis com 3,75% e C. krusei com 2%. Esses isolados exibiram perfil de resistência de 66,7% para anfotericina B, 52,6% para fluconazol, 89,7% para itraconazol e 21,3% para cetoconazol. Entre os fatores de risco para aquisição da doença destaca-se gravidez com 24,66% e histórico prévio de CVV em 15,54%. O principal sinal clínico apresentado foi corrimento em 77,13% dos casos. As espécies analisadas apresentaram elevada diversidade para o marcador genético (GTG)5, com valores que variaram de 0,7470 a 0,9963, o que possibilitou a formação de 172 padrões genéticos para C. albicans, 10 para C. tropicalis, 11 para C. parapsilosis, 8 para C. glabrata e 4 para C. krusei. O aparecimento de espécies de Candida com perfil de resistência ao itraconazol, anfotericina B, fluconazol e cetoconazol, fornece dados epidemiológicos para região estudada e reforça a importância da identificação das leveduras em nível de espécie e da realização de testes de sensibilidade antifúngica in vitro.

Bacterial resistance is one of the worldwide public health issues. This work aimed to genetically characterize species of the family Enterobacteriaceae phenotipic producing ESBL and KPC obtained from patients of Alagoas. Bacteria were identified by semi-automated tests. Confirmed as producing ESBL and KPC by phenotypic screening tests. The antimicrobial in vitro susceptibility test was performed by disk-diffusion method. DNA was extracted by boiling method at 95ºC. The resistance genes blaTEM, blaCTX-M, blaSHV e blaKPC were identified with specific primers and genetic typing was performed by PCR with the microsatellite (GTG)5. 254 isolates of enterobacteria were obtained, of which 92,12% (234/254) had some of the genes blaTEM, blaCTX-M, blaSHV or blaKPC, 87,18% (204/234) ESBL (blaTEM, blaCTX-M, blaSHV) and 12,82% (30/234) KPC (blaKPC). Of these 234 isolates, 4,7% (11/234) were community-acquired infections with genes that express ESBL and 95,3% (223/234) of hospital infections, of which 86,55% (193/223) ESBL and 13,45% (30/223) KPC. BlaCTX-M (> 80%) was the most frequent type gene in enterobacteria. Urinary infections were the most frequent cases of infection in the community by Escherichia coli (54,55%) and Klebsiella pneumoniae (39,46%) in the hospital. BlaKPC was identified only in bacteria of hospital infections, especially in K. pneumoniae (30%). At the ICUs (38,57%) were obtained the most number of isolates producing ESBL and KPC. These enterobacteria showed multidrug resistance phenotypes with high levels for aminoglycosides, fluoroquinolones and sulfamethoxazole/trimethoprim. Associations between genotypes and antibiotic resistance were observed. Cases of clonal spread were identified in the hospital of Alagoas by enterobacteria producing ESBL and KPC. There is a predominance of genes blaTEM, blaCTX-M, blaSHV and blaKPC among isolates of enterobacteria resistant to beta-lactam, with the prevalence of the genetic element blaCTX-M. The clonal spread have contributed to the high levels of beta-lactam resistance among isolates of enterobacteria at hospitals in this study. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A resistência bacteriana representa um dos problemas mundiais de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo caracterizar geneticamente espécies da família Enterobacteriaceae produtoras fenotípicas de ESBL e KPC obtidas de pacientes de Alagoas. As bactérias foram identificadas por testes semi-automatizados. Confirmadas como produtoras de ESBL e KPC por testes fenotípicos de triagem. O teste de susceptibilidade in vitro aos antimicrobianos foi realizado pelo método de disco-difusão. O DNA foi extraído pelo método de fervura à 95ºC. Os genes de resistência blaTEM, blaCTX-M, blaSHV e blaKPC foram identificados com oligonucleotídeos específicos e a tipagem genética foi realizada pela PCR com o microssatélite (GTG)5. Foram obtidos 254 isolados de enterobactérias, dos quais 92,12% (234/254) apresentaram alguns dos genes blaTEM, blaCTX-M, blaSHV ou blaKPC, sendo 87,18% (204/234) ESBL (blaTEM, blaCTX-M, blaSHV) e 12,82% (30/234) KPC (blaKPC). Desses 234 isolados, 4,7% (11/234) foram de infecções comunitárias com os genes que expressam ESBL e 95,3% (223/234) de infecções hospitalares, dos quais 86,55% (193/223) ESBL e 13,45% (30/223) KPC. BlaCTX-M (> 80%) foi o tipo gênico mais frequente nas enterobactérias. As infecções urinárias foram os casos mais frequentes de infecção na comunidade por Escherichia coli (54,55%) e Klebsiella pneumoniae (39,46%) no ambiente hospitalar. BlaKPC foi identificado apenas em bactérias causadoras de infecção hospitalar, principalmente em K. pneumoniae (30%). Nas UTIs (38,57%) foram obtidos o maior número de isolados produtores de ESBL e KPC. Estas enterobactérias apresentaram fenótipos de multidroga resistência com elevados níveis para os aminoglicosídeos, fluoroquinolonas e sulfametoxazol/trimetoprim. Associações entre os genótipos e à resistência aos antibióticos foram observadas. Casos de disseminação clonal foram identificados no ambiente hospitalar de Alagoas por enterobactérias produtoras de ESBL e KPC. Há uma predominância dos genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M e blaKPC entre os isolados de enterobactérias resistentes aos beta-lactâmicos, com prevalência do elemento genético blaCTX-M. A disseminação clonal tem contribuído para os elevados níveis de resistência aos beta-lactâmicos entre os isolados de enterobactérias nos hospitais deste estudo.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1536_1.pdf: 1578098 bytes, checksum: cd53d4f3b0340ecec7afbbf71d57a1be (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A produção de cachaça no Brasil data do início da colonização. Entretanto, as indústrias de cachaça até 1945 eram rurais e rudimentares, não havendo padrões de qualidade. A produção doméstica aumentou bastante e desde então o processo de produção vem sendo aperfeiçoado e melhorado, o que tem acarretado melhorias no rendimento, produtividade e qualidade do produto final. É uma bebida tipicamente brasileira, vem conquistando parcela crescente do mercado internacional de bebidas destiladas por ser considerada exótica e de sabor especial. O processo artesanal, no entanto, carece de procedimentos tecnológicos mais refinados que tornem o produto competitivo no mercado, tanto em termos de produtividade quanto em qualidade. Estas características estão diretamente relacionadas com a qualidade da população de leveduras envolvidas no processo fermentativo da cachaça. A análise desta população poderá fornecer subsídios para a identificação de linhagens específicas para os diferentes alambiques, as quais deverão unir o maior rendimento com a produção de metabólitos que qualificam o produto em termos de aroma e sabor. A partir destes fatos, têm-se como objetivos caracterizar e identificar a população de leveduras do processo fermentativo em diferentes unidades de produção de cachaça artezanal da zona da mata de Pernambuco e avaliar a produção de metabólitos fermentativos de interesse para a qualidade organoléptica da cachaça a partir de culturas puras das leveduras isoladas. A caracterização molecular das leveduras isoladas através de marcadores de PCR, forneceram dados importantes para detectar quais são os perfis de leveduras presente na fermentação da cachaça e através do sequenciamento detectamos as espécies. Os isolados foram caracterizados quanto ao perfil de amplificação do locus ITS1-5.8s ITS2 do DNA ribossomal e agrupados em ribotipos. A relação genética entre os isolados do mesmo ribotipo e a diferenciação entre os ribotipos foram comprovadas pela técnica de DNA-fingerprinting usando os iniciadores (GTG)5, M13 e (GACA)4. Um ou dois representantes de cada ribotipo foi posteriormente identificado por seqüenciamento da região D1/D2 do gene 26S de rDNA. Além de diferentes linhagens de Saccharomyces cerevisiae foram encontradas também as espécies Pichia caribbica (Candida fermentati), Candida millei, C. drosophilae, C. ubatubensis, C. guillermondii e Zyqosaccharomyces fermentati. Dois isolados foram identificados como Candida sp e Zyqosaccharomyces sp. Para as características metabólicas foram cultivadas células em meio YPD, coletadas e reinoculadas em meio de caldo de cana filtrado para concentração final de células de 10% (m/v). Os inóculos foram incubados até o final da fermentação, os metabólitos presentes nos sobrenadantes foram determinados por cromatografia gasosa. As linhagens isoladas de alambiques produtores de aguardente artesanal apresentaram diferenças significativas em relação aos parâmetros produção de rendimento da fermentação e na formação dos principais compostos voláteis. Não foi observada a produção de metanol nos ensaios fermentativos

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4413_1.pdf: 803009 bytes, checksum: 2449a453f3c7b312f9820def6480617e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Um total de 803 amostras de leveduras foram isoladas em intervalos de quinze dias de amostras de mosto fermentado de quatro diferentes destilarias de álcool combustível no Nordeste do Brasil: 110 isolados da destilaria Miriri, 90 da destilaria Giasa e 443 da destilaria Japungu, todas localizadas no Estado da Paraíba. Outras 160 foram da destilaria JB, localizada no Estado de Pernambuco. Todas as leveduras foram submetidas à análise molecular baseada em PCR através do iniciador (GTG)5, que permite a amplificação de seqüências simples entre dois microssatélites no DNA. Também foram analisadas amostras de DNA de Saccharomyces cerevisiae de referência, de diferentes espécies de Saccharomyces e de espécies não pertencentes ao gênero Saccharomyces. Para todas as linhagens de S.cerevisae industriais e de coleção usadas como referência, foram obtidos padrões de amplificação que compartilham bandas não encontradas em outras espécies de Saccharomyces, nem nas espécies testadas não pertencentes ao gênero Saccharomyces. Isto demonstra que o iniciador (GTG)5 pode ser usado para discriminar S.cerevisae de qualquer outra espécie de levedura, o que sugere seu uso posterior em taxonomia molecular. Além disso, bandas polimórficas foram identificadas entre muitas linhagens de S. cerevisae, tanto de referência quanto de isolados industriais, o que permitiu a discriminação de 17 linhagens nativas de S. cerevisiae, confirmadas pelo método clássico de identificação. Em conjunto, os resultados obtidos neste trabalho demonstraram que o iniciador (GTG)5 pode ser usado no acompanhamento de populações de leveduras em processos fermentativos. Os isolados de perfil (GTG)5 P1 e P18 apresentaram características fermentativas e de persistência no processo sendo portanto indicadas para receberem genes de interesse industrial

La technique d’empreinte génétique par rep-PCR, qui utilise des séquences d’ADN répétitives, a été utilisée pour mettre en évidence la présence de groupes d’Escherichia coli signatures pour divers poulaillers et d’évaluer leur évolution suite au détassement. L’amorce (GTG)5 a été utilisée pour générer des empreintes d’ADN de 522 isolats provenant de 7 poulaillers échantillonnés deux fois : juste avant et 5 jours après le détassement. Les empreintes d’ADN ont été analysées selon l’algorithme de correspondance de bandes de Jaccard. Les analyses de Jackknife des coefficients de similitude ont révélé qu’entre 73% et 93% des isolats ont pu être correctement regroupés selon leur poulailler d’origine. Un dendrogramme construit à partir des coefficients de similitude de Jaccard a groupé les isolats dans 42 grappes avec près de la moitié dans une seule grappe. Environ 80% des isolats ont été groupés dans les 6 plus grosses grappes. Quatre de ces grappes été constituées majoritairement d’isolats provenant d’un seul site. Ces grappes pourraient être des grappes signatures qui permettraient d’identifier des poulaillers en particulier. La comparaison des nombres de grappes présentes avant et après le détassement a révélé une variabilité de l’impact du détassement sur les populations fécales d’E. coli. Pour certains sites, il y avait peu d’agrégats présents tant avant qu’après le détassement alors que pour d’autres sites c’était le contraire. Quoique plus de recherches soient nécessaires afin de valider les conclusions, nos résultats suggèrent la présence de sous-populations signatures d’E. coli pour certains poulaillers et une réponse variable à l’effet du détassement. / Rep-PCR genomic fingerprinting, which uses repetitive intergenic DNA sequences, was investigated as a mean to identify signature pattern of chicken fecal Escherichia coli populations and evaluate their changes over time. The (GTG)5 primer was used to generate DNA fingerprints from 522 isolates originating from 7 chicken houses just prior to, and five days after, thinning. The DNA fingerprints were analysed by using the Jaccard band-matching algorithm. Jackknife analysis of the resulting similarity coefficients revealed that between 73% and 93% of the isolates could correctly be grouped in their house of origin. A dendrogram constructed by using Jaccard similarity coefficients grouped the isolates in 42 clusters with approximately half of them in the same cluster. Out of the 6 largest clusters, containing 80% of all isolates, 4 consisted mostly of isolates coming from only 1 house. These clusters could represent signature clusters identifying specific houses. A comparison of the number of clusters present before and after thinning for each house revealed a substantial difference in the behaviour of the fecal E. coli. For some houses, there were few clusters represented both before and after thinning, with a high number of new clusters appearing after thinning whereas in other houses, the contrary was observed. Our results suggest the presence of a signature subpopulation in some chicken houses and a variable response of the E. coli population to the effect of thinning.