Infecções por Neisseria meningitidis estão associadas a altos índices de morbimortalidade no mundo. Na Região da Grande São Paulo a Doença Meningocócica (DM) causada por Neisseria meningitidis sorogrupo C começou a se tornar prevalente em 2001 , representando, em 2003, 62,7% de todos os casos de DM sorogrupados sendo que aproximadamente 88,5% dessas cepas eram não sorotipados e não sorosubtipados (C:NST:NSST). Estes dados sugeriam que um fenótipo, C: NST:NSST, tinha emergido na Grande São Paulo e, considerando-se a importância histórica da doença na região, iniciamos o presente estudo com o objetivo de esclarecer a mudança na dinâmica da DM pela determinação das características fenotípicas e genotípicas destas cepas. Para tanto, analisamos por sorotipagem, tipagem das regiões Variáveis da PorA e PorB e do gene 16S RNA ribossomal, 753 cepas de N. meningitidis C isoladas de casos de DM provenientes da Grande São Paulo, no período de 1990 a 2003. Dado a impossibilidade de caracterização do novo fenótipo pelos anticorpos monoclonais disponíveis mundialmente, objetivamos também a produção de hibridomas produtores desses anticorpos para caracterização do fenótipo C:NST:NSST. Foram selecionadas duas linhagens celulares híbridas, produtoras de anticorpos monoclonais que reconhecem as proteínas PorA e PorB deste novo fenótipo. Entre as 255 cepas de N. meningitidis C inicialmente caracterizadas como NST:NSST, 75% (n=191) tomaram-se completamente sorotipadas como 23:P1.14-6. A análise da similaridade do gene 16S RNA ribossomal das cepas analisadas demonstrou um único padrão genético, sugerindo a clonalidade deste novo fenótipo. Os dados obtidos neste trabalho, demonstram a introdução, na Região da Grande São Paulo, de um novo clone de Neisseria meningitidis C apresentando o fenótipo C:23:P1.14-6 e que está sendo responsável pelo aumento dos casos de DM causada por este sorogrupo. / Neisseria meningitidis (Men) is an important cause of morbidity and mortality and is a leading cause of bacterial meningitis and septicemia in children and young adults in Brazil. Meningococcal disease caused by MenC started becoming the most prevalent serogroup in 2001, representing 62.7% of all MD cases serogrouped in 2003 in Greater Sao Paulo and approximately 88.5% of MenC isolates were nonserotypeable and non-serosubtypeable (NST:NSST). This data suggested that a novel invasive isolate (C:NT:NSST) had emerged in GSP, and considering the historical importance of MenC disease in the region, we initiated this study to better understand the dynamics of MD looking at the phenotypic and molecular characteristics of these isolates. To accomplish this goal, we characterized 753 MenC isolates recovered during the period of 1990 to 2003 by serotyping, PorS and PorA VR typing, 16S rRNA gene typing and produced new serotyping monoclonal antibodies (MAbs) to characterize the C:NST:NSST isolates. We were able to select two hybridoma cells that recognizes PorB and PorA proteins. Among the 255 strains initially characterized as NST:NSST, 75% (n=191) of them became completely serotyped as 23:P1 .14-6. Sy 16S RNA ribossomal typing, these strains showed the same pattern suggesting strain clonality. Our data demonstrate the introduction of a new clone of Neisseria rneningitidis C presenting the phenotype C:23:P1.14-6 and that is being responsible for the increase of the cases of DM caused by this serogroup in Great Sao Paulo.

Trabalhamos com funções definidas em Rn que tomam valores numa C*-álgebra A. Consideramos o conjunto SA (Rn) das funções de Schwartz, (de decrescimento rápido), com norma dada por ||f||2 = ||?f(x)*f(x)dx||½. Denotamos por CB?(R2n,A) o conjunto das funções C? com todas as suas derivadas limitadas. Provamos que os operadores pseudo-diferenciais com símbolo em CB?(R2n,A) são contínuos em SA(Rn) com a norma || ? ||2, fazendo uma generalização de [10]. Rieffel prova em [1] que CB?(Rn,A) age em SA(Rn) por meio de um produto deformado, induzido por uma matriz anti-simétrica, J, como segue: LFg(x)=F×Jg(x) = ?e2?iuvF(x+Ju)g(x+v)dudv, (integral oscilatória). Dizemos que um operador S é Heisenberg-suave se as aplicações z |-> T-zSTz e ? |-> M-?SM?, z,? E Rn, são C? onde Tzg(x)=g(x-z) e M?g(x)=ei?xg(x). No final do capítulo 4 de [1], Rieffel propõe uma conjectura: que todos os operadores \"adjuntáveis\" em SA(Rn), Heisenberg-suaves, que comutam com a representação regular à direita de CB?(Rn,A), RGf = f×JG, são os operadores do tipo LF. Provamos este resultado para o caso A=|C, ver [14], usando a caracterização de Cordes (ver [17]) dos operadores Heisenberg-suaves em L2(Rn) como sendo os operadores pseudo-diferenciais com símbolo em CB?(R2n). Também é provado neste trabalho que, se vale uma generalização natural da caracterização de Cordes, a conjectura de Rieffel é verdadeira. / We work with functions defined on Rn with values in a C*-algebra A. We consider the set SA(Rn) of Schwartz functions (rapidly decreasing), with norm given by ||f||2 = ||?f(x)*f(x)dx||½ . We denote CB?(R2n,A) the set of functions which are C? and have all their derivatives bounded. We prove that pseudo-differential operators with symbol in CB?(R2n,A) are continuous on SA(Rn) with the norm || · ||2, thus generalizing the result in [10]. Rieffel proves in [1] that CB?(Rn,A) acts on SA(Rn) through a deformed product induced by an anti-symmetric matrix, J, as follows: LFg(x)=F×Jg(x) = ?e2?iuvF(x+Ju)g(x+v)dudv (an oscillatory integral). We say that an operator S is Heisenberg-smooth if the maps z |-> T-zSTz and ? |-> M-?SM?, z,? E Rn are C?; where Tzg(x)=g(x-z) and where M?g(x)=ei?xg(x). At the end of chapter 4 of [1], Rieffel proposes a conjecture: that all "adjointable" operators in SA(Rn) that are Heisenberg-smooth and that commute with the right-regular representation of CB?(Rn,A), RGf = f×JG, are operators of type LF . We proved this result for the case A = |C in [14], using Cordes\' characterization of Heisenberg-smooth operators on L2(Rn) as being the pseudo-differential operators with symbol in CB?(R2n). It is also proved in this thesis that, if a natural generalization of Cordes\' characterization is valid, then the Rieffel conjecture is true.

Introdução: A Organização Mundial da Saúde estima que cerca de 71 milhões de pessoas estejam vivendo infectadas pelo vírus da hepatite C (HCV), o que corresponde a 1% da população mundial. A infecção crônica pelo HCV é uma das principais causas de cirrose hepática e carcinoma hepatocelular. O tratamento farmacológico visa a erradicação do vírus e melhora da atividade inflamatória. Em 2015, três fármacos de ação direta (DAA), simeprevir (SMV), sofosbuvir (SOF) e daclatasvir (DCV), foram incluídos no protocolo brasileiro de tratamento da hepatite C crônica. Estudos demonstram que o uso destes medicamentos está associado a elevadas taxas de resposta ao tratamento e a menor incidência de reações adversas em relação às terapias baseadas no uso do interferon e de inibidores de protease de primeira geração. Outros trabalhos indicam que pode haver associação entre a presença de determinadas mutações de resistência viral com a resposta ao tratamento farmacológico. Objetivos: Verificar a efetividade e a segurança dos esquemas de tratamento da hepatite C crônica que envolvem os DAA e analisar se a presença das mutações de resistência impacta negativamente na resposta ao tratamento. Casuística e Métodos: Trata-se de um estudo quase experimental de braço único realizado no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto. Foram incluídos indivíduos maiores de 18 anos, infectados pelo genótipo 1 do HCV, que iniciaram tratamento com esquema que continha SOF em associação com DCV ou SMV. Foram coletados dados sociodemográficos, antropométricos, clínicos e realizou-se levantamento da ocorrência de reações adversas durante o tratamento, por meio do sistema informatizado do hospital. A coleta de sangue, para verificação da presença de mutações de resistência viral, foi realizada em até 15 dias antes do início do tratamento. O principal desfecho considerado foi a RVS12, definida como a ausência de carga viral detectável na 12ª semana após o fim do tratamento. Resultados: 262 indivíduos foram incluídos no estudo, dos quais 58,0% eram do sexo masculino e 79,4% foram classificados como brancos. A média de idade calculada para a amostra foi 55 anos, com desvio padrão de 10 anos. Quanto aos esquemas de tratamento propostos, 49,6% dos pacientes receberam tratamento com SOF e DCV e 50,4% fizeram uso de SOF e SMV. A taxa global de RVS12 foi de 92,7% (93,9% para SOF + DCV e 91,7% para SOF + SMV). Não foram identificados fatores associados a RVS, segundo a análise estatística. As reações adversas mais comuns foram anemia, náuseas, cefaleia e fadiga. Não foi encontrada evidência de associação entre a presença de mutações associadas a resistência ao tratamento e a falha no tratamento. Conclusão: O uso de esquemas de tratamento compostos por SOF e DCV ou SOF e SMV apresentou alta taxa de RVS e bom perfil de tolerabilidade em pacientes com genótipo 1 do HCV. / Background: The World Health Organization estimates that about 71 million people are living with hepatitis C virus (HCV), which accounts for 1% of the world population. Chronic HCV infection is one of the major causes of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The pharmacological treatment aims to eradicate the virus and improve inflammatory activity. In 2015, three direct-acting antivirals (DAA), simeprevir (SMV), sofosbuvir (SOF) and daclatasvir (DCV) were included in the brazilian protocol for the treatment of chronic hepatitis C. Studies have shown that the use of these drugs is associated with higher rates of response to treatment and to lower incidence of adverse reactions, compared to therapies based on the use of interferon and first-generation protease inhibitors. Other studies indicate that there may be an association between the presence of certain viral resistance mutations and the response to pharmacological treatment. Aims: To verify the effectiveness and safety of chronic hepatitis C treatment regimens involving DAA and to analyze whether the presence of resistance mutations negatively affects SVR rates. Methods: It is an almost experimental single-arm study performed at the Clinics Hospital of the Ribeirão Preto Medical School. We included individuals older than 18 years old, infected with HCV genotype 1, who started treatment with a regimen containing SOF in combination with DCV or SMV. Sociodemographic, anthropometric and clinical data were collected and the occurrence of adverse reactions during the treatment was investigated through the computerized system of the hospital. Blood collection for search for viral resistance mutations was performed within 15 days prior to initiation of treatment. The main outcome was SVR12, defined as the absence of detectable viral load at the 12th week after the end of treatment. Results: 262 subjects were included in the study, of which 58.0% were male and 79.4% were white. The mean age calculated for the sample was 55 years, with standard deviation of 10 years. Regarding the treatment regimens, 49.6% of the patients received SOF and DCV and 50.4% used SOF and SMV. The SVR12 rate was 92.7% (93.9% for SOF + DCV and 91.7% for SOF + SMV). No factors associated with SVR were identified according to the statistical analysis. The most common adverse reactions were anemia, nausea, headache and fatigue. No evidence of association was found between the presence of mutations associated with treatment resistance and treatment failure. Conclusion: The use of treatment regimens composed of SOF and DCV or SOF and SMV showed a high rate of SVR and a good tolerability profile in patients with HCV genotype 1.

A interação do citocromo c com a cardiolipina ocorre por interações eletrostáticas e hidrofóbicas. A formação do complexo citocromo c/ cardiolipina promove uma pequena mudança estrutural na proteína, que proporciona atividade peroxidásica ao citocromo c e consequentemente capacidade de oxidar substratos orgânicos, incluindo a cardiolipina. A oxidação da cardiolipina acompanhada da inserção de um grupo peróxido vem sendo relacionada à perda da interação hidrofóbica entre o complexo citocromo c/cardiolipina, que resulta no desligamento do citocromo c da membrana e na sua saída do espaço intermembranas para o citosol, onde essa proteína induz a cascata de apoptose. Neste trabalho foi avaliada a ligação do citocromo c a lipossomos contendo cardiolipina oxidada e a reatividade desta proteína com o mono-hidroperóxido da cardiolipina (TLCL(OOH)1) presente na membrana. Nossos dados mostraram que ocorre uma diminuição significativa na ligação do citocromo c a membrana oxidadas apenas quando 100% da cardiolipina presente na membrana está na forma de TLCL(OOH)1, condição que extrapolaria o que seria esperado para o sistema biológico. Análises por SDS-PAGE revelaram que o citocromo c sofre agregação na presença de membranas contendo TLCL(OOH)1, indicando que a proteína reage com este peróxido. De fato, determinamos a velocidade de reação do citocromo c com o TLCL(OOH)1 e com hidroperóxido do ácido linoléico, inseridos em membrana contendo cardiolipina (9,58 ± 0,16 x 102 M-1.s-1 e 6,91 ± 0,30 x 102 M-1.s-1, respectivamente). As velocidades de reação com os peróxidos de lipídio foram pelo menos 10 vezes superiores à velocidade medida com o peróxido de hidrogênio (5,91 ± 0,18 x101 M-1.s-1). Assim, mostramos que o citocromo c liga-se à membrana contendo hidroperóxido de cardiolipina e que reage com o mesmo promovendo a formação de agregado protéico de alto peso molecular / The interaction of cytochrome c with cardiolipin is promoted by electrostatic and hydrophobic interactions. The cytochrome c / cardiolipin complex formation causes structural changes in the protein that activates cytochrome c peroxidase activity, giving it the ability to oxidize organic substrates, including cardiolipin. The oxidation of cardiolipin coupled with a peroxide group insertion has been related to the loss of hydrophobic interactions between the cytochrome c / cardiolipin complex, resulting in cytochrome c release from the membrane and in its translocation from intermembranes space to cytosol, where this protein induces apoptosis cascade. In this work the binding of cytochrome c to liposomes containing oxidized cardiolipin and its reactivity with the membrane mono-hydroperoxides (TLCL(OOH)1) were evaluated. Our data showed a significant decrease in cytochrome c binding to oxidized membranes only when 100% of the membrane cardiolipin is in the TLCL(OOH)1 form, a condition that would extrapolate the expected concentrations that would be found in a biological system. SDS-PAGE analysis revealed that cytochrome c undergoes aggregation in the presence of membranes containing TLCL(OOH)1, indicating that this protein reacts with the peroxide. In fact, we determined the rate of cytochrome c reaction with TLCL(OOH)1 and linoleic acid hydroperoxide inserted into cardiolipin containing membranes (9.58 ± 0.16 x 102 M-1s-1 and 6.91 ± 0.30 x 102 M-1s-1,respectively). The reaction rates obtained with lipid peroxides were at least 10 times higher than that obtained with hydrogen peroxide (5.91 ± 0.18 x 101 M-1s-1).Thus we show that cytochrome c binds to membrane containing cardiolipin hydroperoxides and reacts with it promoting the formation of high molecular weight protein aggregates.

A expressão do fator de crescimento endotelial vascular tipo C (VEGF-C) e de podoplanina pelas células malignas tem sido associada com a maior ocorrência de metástases regionais e/ou pior prognóstico para os pacientes com câncer de boca. O objetivo deste estudo foi avaliar o significado clinico da expressão de VEGF-C e podoplanina em 42 carcinomas espinocelulares (CEC) bem diferenciado de boca, com e sem comprometimento linfonodal, incluindo oito carcinomas verrucosos, tratados no Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço, do Hospital do Câncer A. C. Camargo, São Paulo, no período de 1980 a 2000. Os pacientes foram analisados quanto ao gênero, idade, cor, tabagismo, etilismo, localização do tumor primário, classificação pelo sistema TNM, tratamento, ocorrência de recidivas local e regional, metástase à distância, de segundo tumor primário, além da presença de infiltrações perineural, muscular, glandular e óssea e de embolizações vasculares. Analisou-se também o índice histopatológico de malignidade tumoral e as expressões imuno-histoquímica de VEGFC e de podoplanina pelas células malignas no front de invasão tumoral. A associação das expressões de VEGF-C e podoplanina com as variáveis estudadas foi calculada pelo teste quiquadrado. As probabilidades de sobrevida, acumuladas nos períodos de 5 e 10 anos calculadas pelo método de Kaplan-Meier e comparadas pelo teste de long-rank. A maioria dos CEC de boca, incluindo os carcinomas verrucosos, exibiu uma forte expressão de VEGF-C pelas células malignas. Houve uma tendência, sem associação estatisticamente significativa, dos pacientes com CEC de boca e forte expressão de VEGF-C apresentarem maior freqüência de recidivas locais e/ou regionais. A forte expressão de podoplanina foi significativamente associada com o gênero masculino (p=0,037), com o estadiamento T1 e T2 (p=0,037), com o estadio clínico I e II (p=0,027) e com a presença de infiltração glandular (p=0,003). As recidivas locais e regionais foram detectadas mais freqüentemente nos CEC de boca com forte expressão de podoplanina, porém sem diferença estatisticamente significativa, quando comparados com aqueles com expressão fraca da proteína. As taxas de sobrevida global e específica por câncer para os pacientes com tumores com forte expressão de VEGF-C e a taxa de sobrevida global para a forte expressão de podoplanina foram percentualmente menores do que aquelas dos pacientes com tumores com fraca expressão destas proteínas. O comprometimento linfonodal cervical se mostrou fator de prognóstico significativo (p=0,001) para os pacientes com câncer de boca. Estes resultados sugerem que a forte expressão de VEGF-C e podoplanina pelas células malignas juntamente com o comprometimento linfonodal regional são fatores indicativos de uma evolução clínica desfavorável e de um pior prognóstico para os pacientes com CEC bem diferenciados de boca. / The expression of vascular endothelial growth factor C (VEGF-C) and podoplanin by malignant cells has been associated with a greater incidence of regional metastasis and/or poor prognosis for patients with oral cancer. The purpose of this study was to evaluate the clinical significance of VEGF-C and podoplanin expression in 42 well-differentiated oral squamous cell carcinomas (OSCC), with and without lymph node involvement, including eight verrucous carcinoma, treated at the Department of the Head and Neck Surgery and Otorhinolaryngology, A. C. Camargo Cancer Hospital, São Paulo, from 1980 to 2000. Patients were evaluated according the following parameters: gender, age, ethnic group, tobacco and/or alcohol consumption, tumor location, TNM stage, treatment and clinical follow-up (recurrence, occurrence of a second primary tumor and death) and the presence of perineural, muscular, glandular and bone infiltrations or vascular embolizations. In addition, we investigated the histopathological malignancy index and the immunohistochemistry expression of VEGF-C and podoplanin by malignant cells in the invasive front tumor. Chisquare test or Fishers exact test was used to analyze the association of VEGF-C and podoplanin with demographic, clinical and microscopic variables in OSCC patients. The 5 and 10-year survival rates were calculated by Kaplan-Meier method and the comparison of the survival curves were performed using log rank test. Most of OSCC, including verrucous carcinoma, showed a high expression of VEGF-C by malignant cells. The OSCC patients with high expression of VEGF-C showed a tendency, without statistical significance, of local and/or regional recurrence. The overexpression of podoplanin was significantly associated with the male gender (p=0,037), with T1 and T2 stage (p=0,037), with I and II clinical stage (p=0,027) and with the presence of glandular infiltration (p=0,003). The local and regional recurrences were detected more frequently in OSCC with high expression of podoplanin, without statistical significant difference, when compared with those with low expression of the protein. The overall survival rates and cancer specific survival rates for OSCC patients with high VEGF-C expression and the overall survival rate for OSCC patients with podoplanin overexpression were lower than those of OSCC patients with low expression of these proteins. The cervical lymph node involvement was significant prognostic factor (p=0,001) for patients with oral cancer. These results suggest that the overexpression of VEGF-C and podoplanin by malignant cells and regional lymph node involvement are indicative factors of an unfavorable clinical outcome and a poor prognosis for patients with well-differentiated OSCC.

Bactérias podem formar comunidades bacterianas sésseis, conhecidas como biofilmes, os quais possuem um grande impacto tanto na indústria, por serem responsáveis pelo entupimento e corrosão de tubulações, quanto na saúde, por serem resistentes ao tratamento com antibióticos. Nos últimos anos, o mensageiro secundário c-di-GMP foi descoberto como um importante regulador nas vias de sinalização envolvidas na capacidade da bactéria alternar entre esses dois fenótipos: livre nadante ou em biofilme. Um dos alvos moleculares de c-di-GMP é FleQ, uma Enhancer binding protein bacteriana (bEBP), que regula a expressão dos genes flagelares de forma dependente do fator σ54, em um processo dependente de ATP. FleQ também atua no controle da transcrição dos genes envolvidos na síntese do exopolissacarídeo PEL, principal constituinte da matriz protetora que reveste o biofilme bacteriano em Pseudomonas aeruginosa, possivelmente em um processo dependente do fator σ70. A atividade de FleQ é regulada pelos níveis de c-di-GMP e por uma segunda proteína, FleN, que se liga diretamente à FleQ. Apesar do papel do complexo FleQ:FleN na regulação do operon pel ter sido estudado, seu efeito na transcrição dos genes flagelares ainda é desconhecido. Para um melhor entendimento do mecanismo regulatório de FleQ, foram resolvidas as estruturas cristalográficas do domínio REC e do domínio AAA+ em seu estado apo e em complexo com ADP, ATPγS e c-di-GMP. Também foi identificado e confirmado o sítio ativo da proteína, as diferentes formas oligoméricas de FleQ, além da proposição de como a atividade da proteína é controlada por FleN. Esses resultados sugerem um mecanismo único na transcrição mediada por uma bEBP não convencional que atua tanto com o fator σ54 e σ70, no qual a oligomerização do complexo FleQ:FleN possui um papel essencial na regulação dos genes flagelares e de formação do biofilme. Estes estudos também levam à hipótese que outras bEBPs, associadas a diferentes fenótipos, podem ser reguladas por c-di-GMP. / Bacteria can form sessile communities known as biofilm, which has a major industrial impact, causing tubing obstruction and corrosion, and in the health, due to its resistance against antibiotic treatment. In recent years, a novel secondary messenger molecule named c-di-GMP has been discovered as a key regulator in signaling pathways related to the bacteria capacity to alternate between two distinct phenotypes: free-swimming cells and biofilm community. One of the molecular targets of c-di-GMP so far identified is FleQ, a bacterial enhancer binding protein (bEBP), which regulates flagellar gene expression in a σ54 dependent mechanism. FleQ acts also controlling transcription of genes involved in PEL exopolysaccharide synthesis, main component of the protective matrix, possibly in a σ70 dependent process. FleQ activity is regulated by a second protein, FleN, which directly interacts with FleQ. Although the role of FleQ:FleN complex in regulating pel operon has been studied, its effect in flagellar gene transcription has not. For a better understanding of FleQ regulatory mechanism, we obtained the crystallographic structure of the REC domain and the AAA+ domain in its apo state and bound to ADP, ATPγS and c-di-GMP. It has also been identified and confirmed c-di-GMP binding site, the distinct oligomers of FleQ, and also proposed a mechanism by which FleN regulates FleQ. These results suggest an unique mechanism in the transcription mediated by an unusual bEBP that acts in conjunction with both σ54 and σ70 factors, in which oligomerization of FleQ:FleN complex has a crucial role in the regulation of flagellar and biofilm formation genes. These studies also lead to the hypothesis that others bEBP, related to distinct phenotypes, may be regulated by c-di-GMP.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-25Bitstream added on 2014-06-13T19:40:39Z : No. of bitstreams: 1 graciani_fs_dr_arafcf_parcial.pdf: 545160 bytes, checksum: d12c1e4909cabaf516ea500fd292c6e9 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:47Z: graciani_fs_dr_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:34Z : No. of bitstreams: 1 000726391.pdf: 1117169 bytes, checksum: 0f0bc7cc07ba17b24618a33ee997eb8d (MD5) / câncer é considerado como uma das principais causas de morte no mundo. A compreensão das diferenças biológicas entre células cancerígenas e normais é fundamental para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, buscando sempre a maior seletividade em alvos que sejam críticos para células cancerígenas se comparado às células normais, sendo uma das características apresentadas em células cancerígenas o aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs). O objetivo deste estudo consiste em estudar a geração de peróxido de hidrogênio (H2O2) por meio da associação ácido ascórbico/naftoquinona e sua aplicação em modelos de citotoxicidade, além de verificação de possível seletividade entre células normais e tumorais. Foram utilizados os métodos de avaliação do consumo de oxigênio, determinação da produção de H2O2, avaliação da ocorrência de cliclo redox por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e interação destas drogas com glutationa (GSH) ou nicotinamida adenina dinucleotídeo reduzida (NADH). O ensaio de citotoxicidade foi determinado pelo método da sulforodamina B em células câncer de mama (MCF-7 BUS) e células normais de ovário de hamster chinês (CHO). Foi descoberto que a presença de um grupo retirador de elétrons na molécula de naftoquinona teve um efeito direto sobre a eficiência da produção de H2O2. O composto 2- bromo-1,4-naftoquinona (BrQ), em que o átomo de bromo substituído no grupo metil na molécula 2-metil-1,4-naftoquinona (VK3), foi aproximadamente 10 a 19 vezes mais eficiente do que VK3 em termos de consumo de oxigênio e produção de H2O2, respectivamente. A proporção [H2O2] μM/minproduzido/[naftoquinona] μM/minconsumido foi 68 ± 11 and 5.8 ± 0.2 para BrQ e VK3, respectivamente, que revelou a maior eficácia de BrQ como um catalisador para a oxidação de ácido ascórbico (VC)... / Cancer is considered as one of the leading causes of death worldwide. Understanding the biological differences between normal cells and cancer cells is critical for the development of new therapeutic strategies, always seeking greater selectivity at targets that are critical for cancer cells compared to normal cells, one of the features shown in cancer cells is the increase reactive oxygen species (ROS). The aim of this study is to investigate the generation of hydrogen peroxide (H2O2) through association naphthoquinone/ascorbic acid and its application in models of cytotoxicity, and check possible selectivity between normal cells and tumor cells. Methods were used to evaluate the oxygen consumption, determination of H2O2 production, assessing the occurrence of redox cycle by HPLC and interaction of these drugs in combination with glutathione (GSH) or reduced nicotinamide adenine dinucleotide (NADH). The cytotoxicity assay was determined by the sulforhodamine B in breast cancer cell (MCF-7 BUS) and chinese hamster ovary (CHO). It has been discovered that the presence of an electron withdrawing group in the naphthoquinone had a direct effect on the efficiency of production of H2O2. The compound 2-bromo-1,4-naphthoquinone (BrQ) in which the bromine atom substituted the methyl group in the molecule 2-methyl -1,4- naphthoquinone (VK3) was approximately 10 to 19 times more efficient that VK3 in terms of oxygen consumption and the production of H2O2, respectively. The ratio [H2O2] μM/ minproduced/[naphthoquinone] μM/minconsumed was 68 ± 5.8 and 11 ± 0.2 for BrQ and VK3, respectively, which showed the greatest efficacy BrQ as a catalyst for the oxidation of ascorbic acid (VC). Both VK3 and BrQ reacted with GSH, but the substrate was BrQ more effective. Part of GSH was incorporated into naphthoquinone, giving rise to a nucleophilic substitution product (Q -SG)... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:01:21Z : No. of bitstreams: 1 000751413.pdf: 2252740 bytes, checksum: 6e8ef15e5086c99f37df6243e30b0a16 (MD5) / Estresse calórico afeta o desempenho e as características morfofuncionais dos frangos. Manipulação das condições ambientais na fase fetal tem se mostrado efetiva na indução de características adaptativas ao calor na incubação. Manipulação nutricional da ave com anti-estressores também tem sido apontado como potencial indutor de adaptações fisiológicas ao calor na fase de criação. O presente estudo analisou os efeitos do estresse por calor na incubação associado ou não à injeção de ácido ascórbico (AA) intra ovo sobre características morfofuncionais dos pintos na eclosão e sobre seu desempenho pós-eclosão e características morfofuncionais à idade de abate quando criados sob temperatura fria, termoneutra ou quente. No Capítulo 1 apresentamos uma abordagem teórica sobre o tema. Nos Capítulos 2, 3 e 4 são abordados os efeitos da alta temperatura de incubação associada ou não com diferentes porcentagens de AA injetado intra ovo antes da incubação sobre parâmetros de incubação (temperatura da casca dos ovos, perda de massa dos ovos, eclodibilidade, mortalidade, condutância e qualidade dos pintos), hemodinâmica (eritrograma, leucograma e variáveis bioquímicas e gases) e desenvolvimento da bursa de Fabrícius (peso, área medular e cortical dos folículos, espessura de epitélio e proliferação celular). Para isso, ovos férteis de matrizes de frangos de corte (Cobb) foram utilizados em delineamento experimental inteiramente casualizado 2x5 (temperatura de incubação: 37,5ºC e 39ºC; sem injeção de AA e injeção de 0%, 2%, 4% e 6% de AA). Os dados do Capítulo 2 mostram que as porcentagens de AA utilizadas afetaram a perda de calor por condução e a taxa de eclosão dos ovos, e que não minimizaram os efeitos da alta temperatura de incubação sobre o desenvolvimento hepático e cardíaco... / Heat stress affects the performance and morphofunctional characteristics of broilers. Manipulation of environmental conditions during the fetal period has been effective in the induction of adaptive traits in heat incubation.Nutritional manipulation of the bird with anti-stressors has also been touted as a potential inducer of physiological adaptations to heat in the growing phase. The present study examined the effects of heat stress on incubation with and without intra-egg injection of ascorbic acid (AA) on the morphofunctional characteristics of chicks at hatching and their post-hatch performance and morphofunctional characteristics at slaughter age when raised under cold thermoneutral or hot temperatures. In Chapter 1 we present a theoretical approach to the topic. In Chapters 2, 3 and 4 the effects of high incubation temperature associated or not with different percentages of AA injected intra-egg before incubation on incubation parameters (temperature, eggshell, weight loss, hatchability, mortality, conductance and chick quality), hemodynamics (erythrocyte, leukocyte count and biochemical variables and gases) and development of the Fabrucius bursa (weight, medullary and cortical area of the follicles, epithelial thickness and cell proliferation) are addressed. For this fertile Cobb broiler eggs were used in a completely randomized design 2x5 (incubation temperature: 37.5º C and 39º C, not injection of AA, and injection of 0%, 2%, 4% and 6% of AA). The data in Chapter 2 show that the percentage of AA used affected the heat loss by conduction and hatching rate of the eggs and did not minimize the effects of high temperature incubation on the heart and liver development...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-19Bitstream added on 2014-06-13T18:41:30Z : No. of bitstreams: 1 jeronimo_m_dr_arafcf.pdf: 924549 bytes, checksum: deb5b1b247d16a3e3dd39dbb0f5987fb (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os laboratórios de análise de alimentos e fármacos necessitam demonstrar competência técnica para garantia da qualidade dos ensaios que realizam, assegurando a confiabilidade e comparabilidade dos resultados que emitem que subsidiam tomadas de decisões relativas a aspectos econômicos, de saúde pública e defesa do consumidor. O presente trabalho apresenta uma abordagem metrológica de métodos clássicos e instrumental para a determinação do ácido ascórbico (AA). Os parâmetros de validação de todos os métodos de análise abordados neste trabalho e o cálculo da incerteza atenderam as diretrizes da ISO-Guia-IEC-17025 e dos guias EURACHEM. Os métodos clássicos validados foram: N-Bromosuccinamida (NBS), Iodo, Iodato de Potássio e Método do 2,6 diclorofenol-indofenol (DCFI). O método instrumental validado foi o espectrofotométrico, utilizando o reagente 2,6 diclorofenol-indofenol. Os parâmetros avaliados foram: a faixa linear de trabalho, seletividade, linearidade, precisão pela norma da American Society for Testing and Materials (ASTM E 691-99) (sn), precisão por repetição (sr), limite de detecção (LD), limite de quantificação (LQ), robustez (teste de Younden-Steiner) e incerteza genérica. A linearidade avaliada pela análise de resíduo (Y-Yo) mostra que a curva é linear em toda a sua extensão ensaiada em todos os métodos validados e eles foram precisos, robustos e exatos. A importância da validação de métodos analíticos está na obtenção de resultados confiáveis e adequados ao uso pretendido / The laboratory analysis of food and drugs need to demonstrate technical competence for quality assurance tests to perform, ensuring the reliability and comparability of results that give off that support decision making on economic, public health and consumer protection. This paper presents a metrological approach of classical methods and instrument for the determination of ascorbic acid (AA). The validation parameters of all methods of analysis in this paper and the calculation of uncertainty within the guidelines of ISO-IEC-17025-Guide and EURACHEM guides. The classical methods have been validated: N-Bromosuccinamida (NBS), Iodine, Potassium iodate method and 2.6-dichlorophenol indophenol (DCPI). The instrumental method was validated spectrophotometric reagent using 2.6-dichlorophenol indophenol. The parameters evaluated were: the linear range of work, selectivity, linearity, accuracy in the standard American Society for Testing and Materials (ASTM E 691-99) (sn), by repetition accuracy (sr), limit of detection (LD), limit of quantification (LQ), robustness (test-Younden Steiner) and general uncertainty. Linearity was assessed by residual analysis (Y-Yo) shows that the curve is linear over its entire length in all tested methods validated and they were accurate and robust The importance of validation of analytical methods is to obtain reliable results and suitable for intended use

Submitted by LUISA FOURNIER ARAUJO null (luhfournier@yahoo.com.br) on 2017-03-13T15:05:59Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO LUISA FOURNIER.pdf: 1448990 bytes, checksum: 2f1266701041a2c76dd899bf05730b15 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-20T13:02:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 araujo_lf_me_bot.pdf: 1448990 bytes, checksum: 2f1266701041a2c76dd899bf05730b15 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T13:02:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 araujo_lf_me_bot.pdf: 1448990 bytes, checksum: 2f1266701041a2c76dd899bf05730b15 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / A hepatite C crônica é uma doença causada pelo vírus da hepatite C e que cursa com inflamação hepática crônica, podendo levar à cirrose, insuficiência hepática terminal e carcinoma hepatocelular. O tratamento tem o objetivo de inibir permanentemente a replicação viral, porém quando se utiliza interferon peguilado e ribavirina alguns efeitos colaterais são comuns, como a perda de peso, que pode levar à interrupção do tratamento. A hipótese do estudo foi que o grau de fibrose e as doses de ribavirina pudessem influenciar a perda de peso e de outras medidas antropométricas durante o tratamento antiviral. O objetivo foi verificar a relação entre o grau de acometimento hepático, a idade, o sexo, a dose de ribavirina e a perda de medidas antropométricas em pacientes com hepatite C crônica em tratamento com interferon peguilado e ribavirina. Participaram do estudo 76 pacientes ambulatoriais avaliados por mensuração de peso, altura, dobra cutânea triciptal, circunferência do braço, circunferência muscular do braço e área muscular do braço, medidos antes e depois de 24 semanas de tratamento. Dados epidemiológicos foram obtidos do prontuário dos pacientes, analisando também resultados de biópsia hepática. Inicialmente a amostra foi dividida em dois grupos de acordo com a presença ou não de fibrose hepática avançada, sendo então realizada comparação entre valores observados em cada grupo ao longo do tratamento, utilizando o teste t pareado ou o teste de Wilcoxon. A seguir as alterações antropométricas ao longo do tratamento antiviral foram avaliadas através de um modelo proposto para mensurar o papel do grau de fibrose, do sexo, da idade e da dose de ribavirina nas alterações antropométricas, utilizando métodos estatísticos como a análise de resíduo e o coeficiente de determinação ajustado. Foi possível observar que o tratamento antiviral levou a reduções de várias medidas antropométricas, e o modelo utilizado mostrou que as principais variáveis envolvidas nessas alterações foram a idade e o sexo, sem que houvesse papel relevante do grau de fibrose ou das doses de ribavirina. / Chronic hepatitis C is a disease caused by the hepatitis C virus and causes chronic hepatic inflammation, which can lead to cirrhosis, terminal liver failure and hepatocellular carcinoma. The treatment aims to stop viral replication definitively, but when using pegylated interferon and ribavirin some side effects are common, such as weight loss, which can lead to treatment discontinuation. The hypothesis of this study was that the degree of liver fibrosis and the ribavirin doses could have a role on the reductions of anthropometric measures during antiviral treatment. The aim was to assess the relationship between the degree of hepatic impairment, ribavirin doses, age, gender and anthropometric changes in patients with chronic hepatitis C submitted to 24 weeks of treatment with pegylated interferon and ribavirin. Seventy-six patients were included and their weight, height, triceps skin fold, arm circumference, arm muscle circumference and arm muscle area were measured before and after 24 weeks of treatment. Epidemiological data and liver biopsy findings were obtained from patients' charts. The sample was divided into two groups according to the presence or absence of advanced hepatic fibrosis. The values observed in each group were compared by paired t test or Wilcoxon test. Then, the anthropometric changes throughout the antiviral treatment by a model aimed to measure the role of fibrosis degree, age, sex and ribavirin doses on the anthropometric changes, using statistical methods such as residual analysis and adjusted determination coefficient. It was possible to observe that the antiviral treatment caused reductions of many anthropometric measures, and the model proposed showed that the main variables involved in such reductions were age and sex, without a significant role that could be attributed to the degree of liver fibrosis or to the ribavirin doses.