In the first part of the theses, I studied therapeutical effect of intratumoral application of various types of bacteria on melanoma B16-F10 bearing mice alone or in combination with another immunostimulatory compounds. Tumour size, metastasis and survival were monitored. The second part was focused on study of cytotoxic effect of neutrophils on melanoma cells and the role of neutrophil extracellular traps formation.

The aim of this thesis was to investigate the possible role of neutrophil granulocytes in antitumor reactions. Most of our experiments were focused on in vitro studies assessing the cytotoxic effect of mouse neutrophils on B16-F10 melanoma cells labelled with PAMPs. We put an emphasis on activation and generating a prime state of neutrophils. Moreover, a release rate of enzyme myeloperoxidase from azurophil granules was detected as a marker of neutrophil degranulation. We also attempted to attract neutrophils into tumor microenvironment using thioglycolate medium and its main compound casein.

The aim of thesis was to study murine melanoma B16- F10 therapy based on the use of TLR agonists combinedwith activation of phagocytosis. Mechanisms of this therapy were studied on the bases of analysis of tumor infiltrating immune cells and evaluationof thein effect on tumor cells.

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A morte celular programada (apoptose) tem sido implicada no desenvolvimento tumoral e no potencial metastático. O Bcl-2, um proto-oncogene inibidor da apoptose, vem sendo estudado em várias neoplasias incluindo o Melanoma Cutâneo (MC). Esse estudo avaliou a expressão imunoistoquímica da proteína bcl-2 em 35 metástases linfonodais regionais, 28 metástases subcutâneas e 17 metástases viscerais de MC e correlacionou com a sobrevida. O tempo médio de acompanhamento foi de 29,7 meses nas metástases linfonodais, 23,1 meses nas metástases subcutâneas e 22,9 meses nas metástases viscerais. A expressão de bcl-2 foi de 74,3% nas metástases linfonodais, 85,7% nas subcutâneas e 82,4% nas viscerais. Após análise uni e multivariada não houve correlação entre a positividade para bcl-2 e a sobrevida em nenhum dos tipos de metástases. Conclui-se que a avaliação imunoistoquímica da proteína bcl-2 isoladamente, em metástases, não é um marcador prognóstico no MC. Estudos posteriores das relações entre os membros da família BCL-2 poderão elucidar seu papel no desenvolvimento do Melanoma Cutâneo.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2011 / Bibliografia: f. 68-72 / A presente Dissertação de Mestrado consiste em apresentar uma abordagem de segmentação automática do melanoma usando a morfologia matemática em cor. Usando a ordenação lexicográfica no espaço de cor HSI mostra-se que é possível detectar a lesão de melanom / This Master Thesis presents an approach for automatic segmentation of melanoma using color mathematical morphology. The use of the lexicographic order from HSI color space shows that it is possible to detect the melanoma lesions with precision. The resear

Nas últimas décadas, é intensa a procura de uma explicação genética sobre a origem, crescimento e progressão do melanoma cutâneo. A tentativa de encontrar uma ligação direta entre as mutações gênicas e a origem da doença tem sido o objetivo dos pesquisadores dedicados ao estudo dessa neoplasia. Diversos métodos são utilizados na busca de uma avaliação prognóstica para a progressão do melanoma, citando-se, entre eles, a pesquisa do linfonodo sentinela, a imunoistoquímica, as técnicas moleculares e a técnica de microarray. A necessidade de estabelecer um método, com excelente sensibilidade e especificidade, tem levado os pesquisadores a buscarem melhores evidências. É importante para esses estudos a obtenção de dados confiáveis sobre as técnicas, progressão e sobrevida livre de doença. Por meio da imunoistoquímica, técnica relativamente simples e de baixo custo, a expressão da proteína p16 pode ser analisada e correlacionada com o prognóstico da doença. No melanoma cutâneo, a expressão da proteína diminui, à medida que aumenta sua agressividade, ou seja, é forte nos nevos e melanomas in situ, e fraca ou ausente nos melanomas metastáticos. Em alguns estudos, a comparação com outros marcadores é analisada. A finalidade deste estudo é fazer uma revisão da literatura internacional sobre o uso da proteína p16 como fator prognóstico para o melanoma, bem como avaliar a importância das alterações do gene p16INK4a, co-responsáveis pela gênese e evolução do melanoma.

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Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-24 / Introdução: A avaliação de lesões pigmentadas de pele para o diagnóstico precoce de melanoma primário é baseada na análise macro e microscópica dessas lesões, por meio de modelos morfológicos pré-estabelecidos para cada padrão histopatológico. Entretanto, a sensibilidade e a especificidade diagnósticas dependem da experiência dos avaliadores. Frente a esta problemática, estudos referentes à automatização de métodos diagnósticos estão sendo discutidos. A Biópsia Óptica é um dos métodos experimentais estudados, cuja principal vantagem é a extração de informações sobre os caracteres bioquímicos das amostras avaliadas, de forma reprodutível, cuja interpretação dependerá de algoritmos matemáticos desenvolvidos exclusivamente para essa finalidade. Uma das técnicas de Biópsia Óptica é a Espectroscopia Raman, conhecida por ser uma ferramenta altamente compatível para estudos em sistemas biológicos, e que tem sido utilizada nos últimos 15 anos na avaliação de lesões neoplásicas para promoção de diagnóstico tanto in vivo quanto in vitro. Objetivo: Avaliar a viabilidade de algoritmos de pré-processamento e de classificação para espectros Micro-Raman de epiderme de pele normal e de melanoma cutâneo espesso. Métodos: Para a aquisição dos espectros Micro-Raman, sete amostras de pele normal e seis amostras de melanoma cutâneo foram preparadas do mesmo modo para análise histopatológica por congelação. Foi construído um espectrômetro Micro-Raman, composto por laser de excitação @785 nm, circuito óptico composto por lentes, filtros e espelhos, microscópio óptico invertido e detector de CCD. Coletados os 168 espectros de pele normal e os 150 de melanoma cutâneo, a classificação dos subtipos estruturais foi realizada por meio da Análise dos Componentes Principais e da Análise de Clusterização e a classificação diagnóstica entre Pele Normal e Melanoma Cutâneo foi desempenhada pela aplicação da Análise dos Componentes Principais e da Análise Discriminante Linear. Resultados: A atribuição dos modos vibracionais se referiu à região de deslocamento Raman entre 1200 a 1800 cm-1, destacando-se os modos de 1260, 1300, 1380, 1440, 1550, 1650 cm-1, referentes aos ácidos nucléicos, Amida III e lipídios, respiração do anel aromático C=C das bandas da melanina, estiramento simétrico CH de lipídios e proteínas e estiramento C=O de proteínas e C=C de lipídios. A classificação dos grupos espectrais e atribuição celular foi possível para os dois grupos, sendo atribuídos a cada um deles quatro subgrupos: para a pele normal foi possível inferir os espectros referentes à camada córnea, queratinócitos, melanócitos e colágeno; para o melanoma, os subgrupos espectrais foram atribuídos para melanoma acral (queratina), melanoma com alta pigmentação melânica, pigmentação por hemossiderina, tecido inflamatório, necrótico e fibroso. A classificação diagnóstica foi possível com sensibilidade entre 39,1 % e 100 % e especificidade entre 54,8 % a 100 %, dependendo do subgrupo confrontado. Conclusão: Os espectros, os tipos de pré-processamento e os algoritmos de classificação foram viáveis para associação dos tipos histológicos e diagnóstico do Melanoma Cutâneo. / Introduction: Pigmented skin lesions evaluation for primary melanoma early diagnosis is based on macro and microscopical analysis by means of preestablished standard histopathology morphological models. However, diagnostic sensitivity and specificity depend on the specialists experiences. Facing this problem, studies concerning about the diagnostic methods automation are being discussed. Optical Biopsy is a experimental technique, which main advantage is that biological samples biochemical characteristics are extracted in a reproducible way, whose interpretation will depend on mathematical algorithms developed exclusively for this purpose. Raman spectroscopy is one of Optical Biopsy techniques, known to be highly compatible for biological systems studies. Raman spectroscopy has been used in the last 10 years in the evaluation of neoplastic lesions to promote diagnosis. Objective: To evaluate the feasibility of preprocessing algorithms for Micro-Raman spectra of normal skin epidermis and cutaneous melanoma classification. Methods: Seven samples of normal skin and six samples of cutaneous melanoma in native were sectioned using a cryostat with 16 μm thick section per sample and distributed on CaF2 slides for Micro-Raman spectral acquisition. A Micro-Raman spectrometer was built with a excitation laser @780 nm, optical circuit composed by lenses, filters, mirrors, optical inverted microscope, and a CCD detector. It was collected 168 spectra of normal skin and 150 of cutaneous melanoma. The classification of the Normal Skin and Melanoma subgroups was performed using Principal Components Analysis and Cluster Analysis, and the diagnostic classification was performed applying Principal Components Analysis and Linear Discriminant Analysis. Results: Vibrational modes assignment was referred to the Raman spectral region from 1200 to 1800 cm-1. Especially at 1260, 1300, 1380, 1440, 1550, 1650 cm-1, the vibrational modes were attributed to nucleic acids, Amide III and lipids, aromatic ring C=C breathing bands of melanin, symmetric CH stretch of lipids and proteins and C=O stretching of proteins and lipids from C=C. The spectral classification and cell allocation was possible for the two groups. For normal skin it was possible find the spectral feature for: corneal layer, keratinocytes, melanocytes and collagen; for melanoma, spectral features were attributed to acral melanoma (keratin), melanoma with high melanocytic pigmentation, hemosiderin pigmentation, inflammatory, necrotic and fibrous tissues. Diagnostic classification was possible with sensitivity between 39.1 % and 100 % and specificity between 54.8 % to 100 %, depending on the subgroups confronted. Conclusion: Spectra aquisition, pre-processing and classification algorithms mehods were viable for histological types diagnosis of cutaneous melanoma. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações