Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:44Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10788a.pdf: 1677698 bytes, checksum: 72b5f6391cabef25ece5a511c8284b1d (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:44Z : No. of bitstreams: 2 Publico-10788a.pdf: 1677698 bytes, checksum: 72b5f6391cabef25ece5a511c8284b1d (MD5) Publico-10788b.pdf: 1134388 bytes, checksum: 43fdc7fcffc7621bc166ea26e5e7681f (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:45Z : No. of bitstreams: 3 Publico-10788a.pdf: 1677698 bytes, checksum: 72b5f6391cabef25ece5a511c8284b1d (MD5) Publico-10788b.pdf: 1134388 bytes, checksum: 43fdc7fcffc7621bc166ea26e5e7681f (MD5) Publico-10788c.pdf: 1594628 bytes, checksum: fa7fab28f569affbc5aded02dd906e12 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Nosso principal objetivo foi caracterizar a família gp82 de proteínas, codificada pela família gênica gp82, que é parte da grande família multigênica gp85/trans-sialidase do T. cruzi. Até o início desse estudo, somente a gp82 de superfície, envolvida na invasão celular das formas metacíclicas da cepa CL e identificada pelo anticorpo monoclonal (MAb) 3F6, havia sido descrita. Na primeira parte, investigamos as bases da avirulência in vivo e in vitro das formas metacíclicas do clone CL-14 do T. cruzi , derivado da cepa CL. Descobrimos que a baixa infectividade desses parasitas está associada com a reduzida expressão da gp82 na superfície, reforçando o papel central da molécula na infecção pelo T. cruzi. Além disso, os dados sugeriram que devido à deficiência da gp82, as formas metacíclicas do clone CL-14, como as da cepa G, uti lizam preferencialmente as glicoproteínas gp35/50 para interagir com a célula hospedeira. Na segunda parte, analisamos a expressão e a localização de moléculas da família gp82 em formas metacíclicas das cepas G e CL do T. cruzi. Para isso, isolamos um novo membro (clone C03) que, em contraste com o clones de cDNA representantes da família gp82 previamente descritos, J18 (cepa G) e R31 (cepa CL), não contém o epítopo do MAb 3F6. Na análise comparativa da seqüência de aminoácidos do clone C03, observamos 59,1% de identidade com o clone J18 e 60,2% de identidade com o clone R31. Além disso, quando alinhamos as seqüências de aminoácidos dos clones C03 e Tc-85 (gp85 das formas tripomastigotas de cultura de tecido), observamos 57,2% de identidade, indicando que esse clone também é parte da família gp85/trans-sialidase. Utilizando os anticorpos policlonais anti-J18 e anti-C03, e o MAb 3F6, mostramos que membros da família gp82 são expressos em formas metacíclicas na superfície e intracelularmente, e que alguns desses membros têm localização diferenciada em parasitas dos grupos T. cruzi I e II. Ao contrário da gp82 reativa com o MAb 3F6, específica das formas metacíclicas, outras moléculas da família foram detectadas também nas formas tripomastigotas de cultura de tecido e amastigotas pelos anticorpos policlonais. Na terceira parte, investigamos o efeito da gp82 em sua forma recombinante (J18), sobre a linhagem de melanoma murino Tm5. Observamos que J18 liga-se a essas células induzindo a despolimerização dos filamentos de actina similar à citocalasina-D, droga indutora de apoptose em células de mamíferos. Em vista disso, fizemos uma análise comparativa das alterações no citoesqueleto de actina e eventos característicos de morte celular por apoptose nas células Tm5 tratadas com J18, e na linhagem de melanócitos melan-a, da qual Tm5 é derivada. Mostramos que J18 tem função indutora de apoptose somente sobre as células do melanoma Tm5. Descrevemos assim uma propriedade de um membro da família gp82, nunca antes descrita para nenhum outro componente molecularmente definido do T. cruzi. / The main goal of this work was to characterize the proteins encoded by the gp82 gene fami ly, which is part of the large T. cruzi gp85/trans-sialidase multigenic family. Previous studies had focused on the surface gp82, which is engaged in the cell invasion by CL strain metacyclic forms and is identified by monoclonal antibody (MAb) 3F6. Firstly, we investigated the molecular basis of the non-virulence of T. cruzi clone CL-14 metacyclic forms in vivo and in vitro. We found that the low infectivity of these parasites is associated with reduced expression of surface gp82, reinforcing the role of this molecule in T. cruzi infection. In addition, our data suggested that instead of gp82, metacyclic forms of clone CL-14, like G strain, preferentially engage gp35/50 glycoproteins to interact with the host cell. Secondly, we analyzed the expression and cellular localization of molecules of the gp82 family in T. cruzi metacyclic forms of G and CL strains. We cloned a new member of this family, designated C03, which lacks the MAb 3F6 epitope, in contrast to the previously described gp82 cDNA clones J18 (G strain) and R31 (CL strain). The predicted amino acid sequence of the C03 clone displayed 59,1% identity to J18 clone and 60,2% to R31 clone. When the amino acid sequences of C03 and Tc-85 (tissue culture trypomastigote gp85) clones were aligned, the identity was 57,2%, indicating that this new clone belongs to the gp85/trans-sialidase family. Using anti-J18 and anti-C03 polyclonal antibodies, as well as MAb 3F6, we demonstrated that members of the gp82 family are localized on the cell surface and intracellularly in metacyclic forms, and some members have different cellular localization in parasites from T. cruzi I and II groups. As opposed to metacyclic stage-specific gp82 identified by MAb 3F6, other gp82 fami ly molecules were also detected in tissue culture trypomastigotes and amastigotes by polyclonal antibodies. Thirdly, we investigated the effect of gp82, as a recombinant protein (J18), on the murine melanoma lineage Tm5. We observed that J18 binds to these cells disrupting actin filaments similarly to cytochalasin-D, drug that induces apoptosis in mammalian cells. Based on these information, we comparatively analyzed alterations in actin cytoskeleton and apoptotic events in J18-treated Tm5 cells, and in the melanocyte lineage melan-a, from which Tm5 is derived. J18 selectively induced apoptosis in Tm5 melanoma cells. Our results show an activity of a protein from gp82 family that has not been described for any other T. cruzi molecule. / TEDE

A inexistência de um agente terapêutico único satisfatório para o tratamento do melanoma metastático e a potencialidade do quimioterápico 5FU (5-fluorouracil) motivou esta pesquisa, a qual teve por objetivo o desenvolvimento tecnológico de sistemas carreadores micro-/ e nanoestruturados contendo 5FU a fim de aumentar sua eficácia terapêutica e reduzir a toxicidade por meio da administração pulmonar. Duas formulações pulverulentas foram desenvolvidas com polímeros naturais, sulfato de condroitina e hidroxipropil-metil-celulose, denominadas 5FU-MS e 5FU-NS, utilizando as técnicas de aspersão e atomização vibracional piezoelétrica, respectivamente. Ambas as formulações foram avaliadas quanto às características físicas e químicas, perfil toxicológico in vivo (C. elegans e em ratos Wistar), e penetração e biodisponibilidade no tecido pulmonar pela quantificação da fração livre de fármaco por microdiálise pulmonar. A análise físico-química revelou a obtenção de partículas micrométricas para 5FU-MS e submicrométricas para 5FU-NS, com diâmetros médios de partícula de 2,546 ± 0,07 m e 0,652 ± 0,03 m, e fração respirável (FR%) de 55,12 ± 2,98 e 76,84 ± 0,07, respectivamente. Ambas demonstraram características e propriedades adequadas para administração pulmonar, com capacidade de deposição nas porções média e profunda. A toxicidade das formulações avaliada em C. elegans considerou o percentual de morte, desenvolvimento, DL50 e produção de ROS para os nematodos sob tratamento agudo e crônico. Os resultados evidenciaram redução significativa da toxicidade proporcionada pela redução da taxa de morte e maior desenvolvimento dos grupos tratados com as formulações 5FU-MS e 5FU-NS em comparação ao fármaco livre, sugerindo perfis de segurança satisfatórios para administração. Além disso, 5FU-MS revelou-se um agente pró-oxidante, representando um diferencial promissor deste sistema, podendo alcançar maior sensibilização das células tumorais com menores doses. A toxicidade pulmonar aguda foi avaliada pela análise de LDH e proteínas totais no fluido de lavagem bronco-alveolar (BALF) após a administração combinada das formulações 5FU-MS e 5FU-NS para administração como um sistema terapêutico único (5FU-MS/NS), e análise de dano tecidual pulmonar em ratos. Os resultados da análise bioquímica e histológica indicaram o baixo potencial de indução de lesão tecidual a partir da administração pulmonar combinada das formulações, em relação ao fármaco livre. A análise do perfil farmacocinético por microdiálise pulmonar evidenciou o êxito no desenvolvimento dos sistemas carreadores, tornando possível duplicar o t1/2 do 5FU e aumentar significativamente a biodisponibilidade no tecido pulmonar. Os resultados obtidos indicam a eficiência das formulações 5FU-MS e 5FU-NS em alcançar os benefícios terapêuticos do fármaco 5FU com menores doses e maiores intervalos de administração. Este trabalho de tese apresenta uma abordagem promissora na terapia de neoplasias com recorrência de metástase pulmonar. / The absence of a single therapeutic agent suitable for the treatment of metastatic melanoma and the potential of 5FU chemotherapy (5-fluorouracil) motivated this study, which aimed the development of carrier systems based on micro-/ and nanostructures containing 5FU to increase the therapeutic efficacy and reduce toxicity of this drug by pulmonary administration. Two different formulations of dry powders were developed with natural polymers, chondroitin sulfate and hydroxypropyl-methyl-cellulose, denomined 5FU-MS and 5FU-NS, using the spray-drying and vibrational piezoelectric atomization techniques, respectively. Both formulations were evaluated in terms of physico-chemical characteristics, in vivo toxicological behaviors (C. elegans and in Wistar rats), bioavailability and penetration in the lung tissue by quantifying of drug free fraction by lung microdialysis. The physicochemical analysis showed that were obtained as micrometric (5FU-MS) and submicron particles (5FU-NS), with average diameters of particle 2.546 ± 0.07 m and 0.652 ± 0.03 m, and respirable fraction (FR%) of 55.12 ± 2.98 and 76.84 ± 0.07, respectively. Both showed suitable characteristics and properties for pulmonary delivery, with deposition capacity in the middle and deep lung portions. The toxicity of the formulations evaluated in C. elegans considered the death rate, body development, DL50 and production of ROS to nematodes under acute and chronic treatment. The results showed significant reduction of toxicity, reducing the death rate and greater development of the groups treated with 5FU-MS and 5FU-NS formulations compared to the free drug, suggesting satisfactory safety profile for administration. In addition, 5FU-MS proved to be a pro-oxidant agent, representing a promising differential of this system which can achieve greater sensitization of tumoral cells with lower doses. Acute pulmonary toxicity was evaluated by analyzing LDH, and total protein in the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) after combined administration of 5FU-MS formulations and 5FU-NS for administration as a single therapeutic system (5FU-MS/NS) and analysis of lung tissue damage in rats. The results of biochemical and histological analysis indicated the low potential to induce tissue damage from the pulmonary administration of combined formulations, compared to free drug. Analysis of the pharmacokinetic profile for pulmonary microdialysis showed the successful development of carrier systems, making it possible to double the t1/2 of 5FU and significantly increase bioavailability in lung tissue. The results indicate the effectiveness of the formulations 5FU-MS and 5FU-NS in achieving the therapeutic benefits of the drug 5FU at lower doses and higher dosing intervals. This thesis work presents a promising approach to cancer therapy with lung metastasis recurrence.

Melanoma é um tipo maligno de lesão de pele pigmentada, e atualmente está entre os tipos de câncer existentes mais perigosos. Entretanto, diferenciar casos malignos de benignos é uma tarefa difícil mesmo para experientes especialistas, e um sistema de diagnóstico auxiliado por computador pode ser uma ferramenta bastante útil. Normalmente, este sistema inicia por um pré-processamento da imagem, isto é, remoção de artefatos indesejados, como pelos, sardas ou efeitos de sombreamento. A seguir, o sistema executa uma etapa de segmentação, identificando as bordas da lesão. Por fim, baseando-se na área da imagem identificada como lesão, diversas feições são computadas e uma classificação é gerada. Neste tese, apresentada na forma de uma coleção de artigos publicados, nós apresentamos técnicas para automaticamente executar todos estes passos, resultando em um pré-diagnóstico para uma lesão de pele pigmentada baseado apenas em uma imagem convencional (uma simples fotografia). Nós testamos nossos métodos em bases de imagens públicas e atingimos melhores resultados de segmentação e classificação que os demais métodos presentes na literatura. / Melanoma is a type of malignant pigmented skin lesion, and currently is among the most dangerous existing cancers. However, differentiating malignant and benign cases is a hard task even for experienced specialists, and a computer-aided diagnosis system can be an useful tool. Usually, the system starts by pre-processing the image, i.e. removing undesired artifacts such as hair, freckles or shading effects. Next, the system performs a segmentation step to identify the lesion boundaries. Finally, based on the image area identified as lesion, several features are computed and a classification is provided. In this Thesis, presented as a collection of published papers, we detail approaches to automatically execute all these steps, resulting in a pre-diagnosis for a pigmented skin lesion based only in a standard camera image (i.e. a simple color photograph). We tested our methods on publicly available datasets and achieved better segmentation and classification results than methods previously proposed in the literature.

Transduction of melanoma cells with the aim to induce avidine expression on tumor cell surface was studied. Subsequently the method enabling quantification of binding of ligands to the cell surface was developed.

The aim of this thesis was to study the mechanisms of innate imunity involved in the degradation of tumor cells on which the ligands of phagocytic receptors were installed. For this purpose both in vivo experiments using immunodeficient mice, and in vitro experiments based on monitoring the levels of inflammatory cytokines produced in the tumor tissue and on measuring the level of myeloperoxidase released during neutrophil degranulation were performed.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Elétrica, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T21:23:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319746.pdf: 1244982 bytes, checksum: 8064efbd795154d4f2ceba297dcf0733 (MD5) / Modelos matemáticos tem sido desenvolvidos visando o auxílio no diagnóstico e tratamento de diversos tipos de câncer. No caso de melanomas, estes modelos podem auxiliar a programação de cirurgia para remoção. Nestas cirurgias, há criação de um ambiente inflamatório, o que pode favorecer a migração celular, devido à presença de Fator de Necrose Tumoral-a (TNF-a), aumentando as chances de reincidência do câncer e desenvolvimento de metástases. Neste trabalho, três diferentes modelos matemáticos foram utilizados para modelar a migração de células de melanoma in vitro, em controle e tratadas com TNF-a. O primeiro é um modelo baseado em difusão pela Lei de Fick. Foi observada uma diferença entre os valores de coeficiente de difusão de células de câncer utilizados em modelos matemáticos (0,01 - 1 mm2 dia-1 aproximadamente) e obtidos experimentalmente (50 - 80 mm2 dia-1 aproximadamente). Uma explicação seria estes modelos não considerarem, a princípio, a migração coletiva de células. O segundo foi um modelo contínuo elástico, desenvolvido com base em aspectos da migração coletiva. Matematicamente os resultados foram satisfatórios, com coeficiente de determinação superior a 0,89 para os dois casos, porém eles sugerem que a migração celular diminui com o aumento da adesão célula-superfície, o que não está de acordo com resultados de trabalhos experimentais da área. No terceiro, foi proposta uma mudança no modelo contínuo elástico, para permitir uma taxa de proliferação variável no tempo. Mais uma vez, os resultados foram matematicamente satisfatórios, mas biologicamente diferente do esperado. Os resultados sugerem novamente que a migração celular diminui com o aumento da adesão célula-superfície e que a força criada pela formação de pseudópodes teria sentido contrário à migração. Sendo assim, conclui-se que estes resultados ocorrem devido ao equacionamento e propõe-se um estudo mais aprofundado da influência da constante de adesão nos resultados, para futura proposta de alteração do modelo contínuo elástico <br>

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-27Bitstream added on 2014-06-13T20:44:51Z : No. of bitstreams: 1 nai_ga_dr_botfm.pdf: 3030402 bytes, checksum: 8e4cb8d3e8bdba62388efa31559314a0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O aumento da expressão de ciclina D1, demonstrado em melanomas cutâneos, provavelmente está relacionado ao potencial invasivo do tumor. A diminuição da proteína ROC1, envolvida na degradação da ciclina D1, pode constituir uma alternativa para explicar o aumento desta proteína na ausência de superexpressão gênica. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação da proteína ROC1 com a expressão de ciclina D1 em melanomas cutâneos. Foram estudados 62 casos de melanomas primários de pele e 58 nevos melanocíticos compostos. Realizou-se imuno-histoquímica com marcação para os anticorpos ciclina D1 e ROC1, e hibridação “in situ” fluorescente para avaliação da expressão do gene CCND1. Em 87,9% dos nevos melanocíticos, a expressão da proteína ROC1 foi evidenciada em mais de 50% das células, enquanto nos melanomas ocorreu em 45,2% dos casos (p=0,0014). A correlação entre a expressão da proteína ROC1 e da proteína ciclina D1 foi significativa e negativa em todos os casos estudados (p=0,0008985). Nos nevos melanocíticos, o aumento de expressão de ROC1 em relação à ciclina D1 ocorreu em 86,2% dos casos e nos melanomas em 45,2% (p<0,001). A relação ROC1/ciclina D1 não está associada à medida de Breslow (p=0,166), nem ao tipo histológico de melanoma (p=0,605). Entre os melanomas não amplificados, 50% daqueles que apresentaram expressão de ciclina D1 em mais de 50% das células mostraram expressão de proteína ROC1 em menos de 25% delas. A expressão da proteína ROC1 está correlacionada negativamente à expressão da proteína ciclina D1 nos melanomas, mostrando sua importância para degradação da ciclina D1 nestas neoplasias. / Complete abstract click electronic access below

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-09-06Bitstream added on 2014-06-13T20:44:52Z : No. of bitstreams: 1 castoldi_l_dr_botfm.pdf: 333700 bytes, checksum: 7139d9c9e9e928960d3f14914d89b6c7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Animais selecionados de acordo com a intensidade da sua resposta inflamatória aguda (AIR) à poliacrilamida, foram inoculados s.c. com células de melanoma B16F10 ou S91. Aos 7, 14 ou 30 dias, os animais foram sacrificados para obtenção do baço e avaliação do número de células T, Treg, NK e NKT, por citometria de fluxo, e do perfil de algumas citocinas (ELISpot). Os resultados demonstraram que os animais AIRmax apresentaram maior incidência do melanoma B16F10, associado ao aumento do número de células Treg, e também incidência elevada do melanoma S91, associada ao aumento da produção IL-10 e redução de IFN-g, em relação aos animais AIRmin. Estes resultados permitem inferir que a sensibilidade ao desenvolvimento de melanomas pode ser resultado de alterações nos mecanismos regulatórios da resposta imune, que neste caso, inibiram o desenvolvimento de uma resposta eficiente nos animais AIRmax. / Not available.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-10Bitstream added on 2014-06-13T20:05:15Z : No. of bitstreams: 1 missima_f_dr_botfm.pdf: 414878 bytes, checksum: 80e5d9e5757dfd19a67c11d8093a66a8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Several studies have shown that stress affects the immune system, promoting the progression of cancer. Since propolis is a honeybee product showing immunomodulatory and antitumoral activities, the goal of this work was to evaluate propolis effect on Th1 (IL-2 and IFN-) and Th2 (IL-4 and IL-10) cytokines’ expression and production by melanoma-bearing mice submitted to immobilization stress. In groups without melanoma, stress did not affect IL-2, IL-4 and IL-10 gene expression. Propolis treatment of stressed animals did not influence these cytokines expression as well. On the other hand, IL-2 and IL-10 expression was inhibited in melanoma-bearing mice, stressed or not. Th1 cytokines production was also inhibited in melanoma-bearing mice. Propolis administration to melanoma-bearing mice submitted to stress stimulated IL-2 expression, as well as Th1 (IL-2 and IFN-) production, indicating the activation of antitumor cell-mediated immunity. Propolis also stimulated IL-10 expression and production, what may be related to immunoregulatory effects. Our data indicate that propolis showed an immunomodulatory activity in this assay, what may be related to its antitumoral action in vivo. Further investigation will help to understand propolis usefulness during stress.

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