Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-08-13T18:01:14Z : No. of bitstreams: 1 000734578_20141213.pdf: 582180 bytes, checksum: 39bc1ce8faae49b36e5f6872f7230f69 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:48Z: 000734578_20141213.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:35Z : No. of bitstreams: 1 000734578.pdf: 6353831 bytes, checksum: 2085747c5839b745c38dd84ed2d34826 (MD5) / Ainda nos dias de hoje, o envenenamento ofídico é um problema de saúde pública, afetando sobretudo, regiões de clima tropical, subtropical e áreas rurais de países da África, Ásia, Oceania e América Latina. No Brasil, os gêneros de serpentes Bothrops e Crotalus são responsáveis por quase 90% dos acidentes ofídicos, sendo que os acidentes provocados por este último apresentam relativa alta taxa de mortalidade. O veneno das serpentes do gênero Bothrops possuem uma classe de fosfolipases A2, as Lys49-PLA2s, que não possuem atividade catalítica, mas são capazes de induzir a mionecrose por uma mecanismo não catalítico que não é totalmente conhecido. Com relação às fosfolipases A2 veneno das serpentes do gênero Crotalus, o complexo crotoxina, formado pela crotoxina A (não catalítica) e a crotoxina B (catalítica) pode constituir até cerca de 60% do veneno desses animais, como no caso da subespécie Crotalus durissus terrificus, e é uma potente neurotoxina que provoca um grande bloqueio da transmissão neuromuscular. Neste trabalho, utilizando diversas técnicas teóricas e experimentais, sobretudo cristalografia de raios X, são apresentados diversos resultados que visam aprofundar o conhecimento acerca do funcionamento destas proteínas. Com relação à crotoxina, é apresentado a estrutura cristalográfica da crotoxina B de Crotalus durissus colillineatus, a expressão heteróloga da isoforma CBa2 da crotoxina B de Crotalus durissus terrificus para a posterior produção de formas mutantes sítio-dirigidas e resultados da análise do espalhamento de raios X a baixo ângulo da crotoxina e de suas subunidades isoladas, gerando informações relevantes e inéditas acerca da oligomerização destas proteínas. No caso das Lys49-PLA2s isoladas do veneno botrópico, são apresentadas duas novas estruturas cristalográficas dessa classe de proteínas isolada da serpente amazônica B. brazili. A análise ... / Snakebite is a very serious public health problem still today, affecting tropical and subtropical countries, especially the rural areas of Africa, Asia, Oceania and Latin America. In Brazil, Bothrops and Crotalus snake genus are responsible of almost 90% of snakebites. The venoms of Bothrops snakes have a class of phospholipases A2, known as Lys49-PLA2s, which do not have catalytic activity. However, they are able to induce myonecrosis by a non-catalytic mechanism that is not fully understood. In the venom of Crotalus snakes, a phospholipase A2, known as crotoxin constitutes about 60% of the venom from these animals. This protein is a potent neurotoxin that causes a large block of neuromuscular transmission formed by complexation of crotoxin A (non-catalytic) and crotoxin B (catalytic). In this work, it was used several theoretical and experimental techniques, in particular X-ray protein crystallography, to generate information to extend the knowledge of the action of these proteins. Regarding to crotoxin, the crystal structure of crotoxin B isolated from Crotalus durissus colillinetaus was solved and the heterologous expression of isoform CBa2 of crotoxin B from Crotalus durissus terrificus was performed, in order to, subsequently, produce site-directed mutants. Furthermore, it is presented small angle X-ray scattering experiments with the crotoxin and its isolated subunits that provided intriguing and novel information about the oligomerization of these proteins. Regarding to Lys49-PLA2s from Bothrops snakes, it is presented two new crystal structures of this class isolated from Amazonian snake B. brazili. The analysis of these structures and the structural comparison to other Lys49-PLA2s crystallographic structures generated new information about the position of hydrophobic residues in C-terminal portion of these proteins. This information led us to a new proposition of the mechanism of action of these proteins. It is also presented ...

Resumo: O veneno da serpente Crotalus durissus terrificus (C.d.t.) é constituído pelas toxinas: Crotoxina, Crotamina, Giroxina e Convulxina. A crotamina possui ação miotóxica, sendo que esta toxina pode ser expressa ou não por animais de uma mesma região. Variações bioquímicas, enzimáticas e farmacológicas dos venenos, podem estar associadas a fatores geográficos, clima, sexo, idade, dieta, bem como tempo decorrido de cativeiro e entre extrações. Esta pesquisa teve como objetivo caracterizar o veneno de C.d.t, da micro-região de Botucatu (São Paulo) pela determinação de suas propriedades bioquímicas, farmacológicas e enzimáticas. Para isto, foi realizada a comparação de venenos de serpentes recém capturadas da natureza com o de cativeiro, para verificar a influência da variação sexual, ambiental (tempo de cativeiro) e ontogenética na sua composição. Foram utilizadas técnicas de dosagem protéica, eletroforese (SDS-PAGE), perfil cromatográfico (HPLC-RP), atividade coagulante e índice de coagulação, atividade proteolítica sobre a caseína, tóxica(DL50) e atividade da crotamina. As atividades das 93 amostras de veneno foram comparadas com as do Veneno Referência Nacional. A dosagem protéica não evidenciou variação entre os grupos formados por adultos (75%), mas mostrou diferença quando comparada a do grupo de filhotes (60%). A análise eletroforética (SDS-PAGE 15%) evidenciou que a variação da presença da crotamina não teve relação com a distribuição dos grupos, sendo que 65% das amostras foram crotaminanegativa. O perfil cromatográfico corroborou os resultados da eletroforese, a respeito da variação da crotamina, mostrando grandes variações nas concentrações das proteínas, além de evidenciar grande quantidade de isoformas de crotoxina. Na caracterização coagulante dos venenos, não houve variação entre os grupos formados por adultos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Crotalus durissus terrificus (C.d.t.) venom is composed by the following toxins: crotoxin, crotamine, gyroxin and convulxin. Crotamine possess a myotoxic action that can be expressed or not by snakes from the same region. Biochemical, enzymatic and pharmacological variations of venoms may be associated with geographic factors, climate, gender, age, and diet as well as length of captivity and venom extractions. The present study was carried out in order to characterize the C.d.t. venom of Botucatu micro-region, São Paulo State, by defining its biochemical, pharmacological and enzymatic properties. A comparative characterization of venoms from newly captured snakes and already-captured animals was performed to verify the sexual, environmental (length of captivity) and ontogenetic variations that influence the venom composition. Protein concentration, electrophoresis (SDS-PAGE), chromatographic profile (RPHPLC), coagulant activity and coagulation index, proteolytic activity upon casein, toxic (LD50) and crotamine activity were employed. The venom activities of 93 samples were compared with the National Reference Venom. Protein concentrations did not evidence a variation among the groups of adults (75%), but revealed some difference when compared with newborn groups (60%). The electrophoresis analysis (SDS-PAGE 15%) presented a crotamine variation that had no relation with the distribution of groups, which showed that 65% of the samples were crotamine negative. The chromatographic profile confirmed the results of electrophoresis regarding crotamine variation, and also showed great variation in the protein concentration, besides revealing a high quantity of crotoxin isoforms. Concerning coagulant characterization, there was no variation among adult groups; however, the National Reference Venom and newborn groups presented higher coagulant activities. Toxic (LD 50) and proteolytic activicties... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Coorientador: Andreimar Martins Soares / Banca: Daniel Carvalho Pimenta / Banca: Patrick Kack Spencer / Mestre

Orientador: Otavio Augusto Vuolo Marques / Banca: Marcio Roberto Martins / Banca: Selma Maria de Almeida Santos / Resumo: A atividade diária é um aspecto pouco estudado entre as serpentes neotropicais. Essa região abriga grande riqueza de espécies com ecologia extremamente diversificada. Nesse contexto, este estudo buscou fornecer informações sobre padrões de atividade de várias espécies de dipsadídeos, o grupo de serpente mais diversificado da região neotropical. Foram observados 49 indivíduos de nove espécies, pertencentes a diferentes linhagens: Atractus pantostictus, Sibynomorphus mikanii, Apostolepis assimilis, Erythrolamprus aesculapii, Liophis miliaris, Oxyrhopus guibei, Philodryas patagoniensis, Thamnodynastes strigatus e Tomodon dorsatus. Os espécimes foram mantidos em cativeiro e monitorados por dez dias consecutivos por sistema de circuito interno. As espécies apresentaram atividade predominantemente diurna, com exceção de A. pantostictus, S. mikanii e O. guibei. Apostolepis assimilis, L. miliaris e O. guibei apresentaram padrão de atividade bimodal, além de E. aesculapii, que individualmente apresentou dois picos de atividade diários, embora o horário de tais picos tenha diferido entre os indivíduos. A análise de similaridade sugere que o padrão de atividade seja conservado em alguns grupos (E. aesculapii e L. miliaris, da tribo Xenodontini, e os dipsadíneos A. pantostictus e S. mikanii). Disponibilidade de alimento no ambiente natural e fatores climáticos também parecem influenciar a atividade, além do estado reprodutivo e variação ontogenética / Abstract: Daily activity is an understudied aspect among Neotropical snakes. This region possesses high species richness, and bears an extremely diverse ecology. In this context, the present study sought to provide information on activity patterns of several species of dipsadids, which is the most diverse group of snakes at the neotropical region. A total of 49 individuals were observed, comprising nine species, from different lineages: Atractus pantostictus and Sibynomorphus mikanii, Apostolepis assimilis, Erythrolamprus aesculapii, and Liophis miliaris, Oxyrhopus guibei, Philodryas patagoniensis, and Tomodon dorsatus and Thamnodynastes strigatus. The specimens were housed in captivity for 10 consecutive days and monitored by CCTV system. Most species presented predominantly diurnal activity, except A. pantostictus, S. mikanii and O. guibei. Apostolepis assimilis, L. miliaris and O. guibei showed bimodal activity pattern, as specimens of E. aesculapii individually presented two daily peaks of activity, even so the time of such peaks has differed among the individuals. The analysis of similarity suggests that the pattern of activity is preserved in some groups (E. aesculapii and L. miliaris, tribe Xenodontini, and the Dipsadini A. pantostictus and S. mikanii). Availability of food in the natural environment and climatic factors also seem to influence activity, beyond the reproductive state, and ontogenetic variation / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-06Bitstream added on 2014-06-13T19:12:06Z : No. of bitstreams: 1 cunha_rm_me_botib.pdf: 829808 bytes, checksum: 0d58883f9479527d834af5abe27ce09a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os acidentes botrópicos representam cerca de 87% dos envenenamentos ofídicos registrados no Brasil e se destacam pelas graves seqüelas que limitam a vida do acidentado. O principal efeito tóxico local destes é a mionecrose, que pode levar à perda tecidual permanente e à amputação. A mionecrose pode ser decorrente da isquemia do tecido muscular, causada por fatores hemorrágicos presentes nestes venenos (metaloproteases), ou da presença de miotoxinas (PLA2s) que afetam diretamente o tecido muscular. O método mais eficaz para o tratamento dos envenenamentos ofídicos é a soroterapia passiva. No entanto, esta é limitada devido à relativa ineficácia do soro em neutralizar a mionecrose dos venenos botrópicos, além de muitas comunidades não terem acesso à soroterapia. Estes fatores conduzem a busca de métodos alternativos, como o uso de extratos vegetais. Evidências mostram que o extrato aquoso da Casearia sylvestris, conhecida popularmente como “guaçatonga, é capaz de neutralizar efeitos tóxicos de venenos brutos e de suas miotoxinas isoladas. A Casearia sylvestris apresenta diversos outros efeitos terapêuticos como: anti-séptico, antiinflamatório, anestésico local, anti-tumoral, anti-úlcera e cicatrizante. Devido à escassez de estudos experimentais para avaliar a eficácia de extratos vegetais na redução dos danos locais ocasionados pelo envenenamento botrópico, torna-se importante avaliar a potencial atividade antiofídica da Casearia sylvestris. O presente estudo teve por objetivo investigar o uso do extrato aquoso da Casearia sylvestris, como terapêutica tópica dos efeitos locais do envenenamento botrópico experimental em camundongos. Foi avaliada a capacidade do extrato bruto da planta em neutralizar a mionecrose induzida pelo veneno da Bothrops jararacussu e/ou acelerar o processo de regeneração... / Bothrops accidents represent about 87% of snakebites recorded in Brazil and account for serious the consequences that affect the life of the victim with social and economic repercussions. Its main toxic effect is myonecrosis, which can lead to permanent tissue loss and amputation. Myonecrosis may result from muscle tissue ischemia, hemorrhage caused by factors present in these venoms (metalloproteases), or the presence of myotoxins (PLA2s) that directly affect muscle tissue. The most effective treatment is passive serotherapy. However, this is limited due the relative ineffectiveness of the serum to neutralize the myonecrosis of Bothrops venoms and the lack of access to serotherapy by many communities. These factors lead to alternative methods such as the use of plant extracts. Evidence shows that the aqueous extract of Casearia sylvestris, known popularly as guaçatonga, is able to neutralize the toxic effects of venom and their crude myotoxins isolated. Casearia sylvestris presents several other therapeutic effects such as, antiseptic, antiinflammatory, local anesthetic, anti-tumor, anti-ulcer and wound healing. Due to the scarcity of experimental studies to evaluate the efficacy of plant extracts in reducing the harm caused by Bothrops envenomation, it is important to evaluate the potential activity of antiophidic Casearia sylvestris as a complement to conventional serum therapy. The present study aimed to investigate the use of aqueous extract of Casearia sylvestris, topical therapy as complementary to local effects of Bothrops envenomation in experimental mice. We evaluated the ability of the crude extract of the plant to neutralize myonecrosis induced by the venom of Bothrops jararacussu and / or accelerate the process of muscle regeneration. The onset of myonecrosis and the regenerative process... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2014-12-02T11:21:33Z : No. of bitstreams: 1 000796026_20150701.pdf: 159832 bytes, checksum: 09209d9c65475570237fe3814b7ab633 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-01T11:47:25Z: 000796026_20150701.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-01T11:48:08Z : No. of bitstreams: 1 000796026.pdf: 2743984 bytes, checksum: 7d898c5b85ad9a3a3ffa1bff8165adfc (MD5) / A atividade diária é um aspecto pouco estudado entre as serpentes neotropicais. Essa região abriga grande riqueza de espécies com ecologia extremamente diversificada. Nesse contexto, este estudo buscou fornecer informações sobre padrões de atividade de várias espécies de dipsadídeos, o grupo de serpente mais diversificado da região neotropical. Foram observados 49 indivíduos de nove espécies, pertencentes a diferentes linhagens: Atractus pantostictus, Sibynomorphus mikanii, Apostolepis assimilis, Erythrolamprus aesculapii, Liophis miliaris, Oxyrhopus guibei, Philodryas patagoniensis, Thamnodynastes strigatus e Tomodon dorsatus. Os espécimes foram mantidos em cativeiro e monitorados por dez dias consecutivos por sistema de circuito interno. As espécies apresentaram atividade predominantemente diurna, com exceção de A. pantostictus, S. mikanii e O. guibei. Apostolepis assimilis, L. miliaris e O. guibei apresentaram padrão de atividade bimodal, além de E. aesculapii, que individualmente apresentou dois picos de atividade diários, embora o horário de tais picos tenha diferido entre os indivíduos. A análise de similaridade sugere que o padrão de atividade seja conservado em alguns grupos (E. aesculapii e L. miliaris, da tribo Xenodontini, e os dipsadíneos A. pantostictus e S. mikanii). Disponibilidade de alimento no ambiente natural e fatores climáticos também parecem influenciar a atividade, além do estado reprodutivo e variação ontogenética / Daily activity is an understudied aspect among Neotropical snakes. This region possesses high species richness, and bears an extremely diverse ecology. In this context, the present study sought to provide information on activity patterns of several species of dipsadids, which is the most diverse group of snakes at the neotropical region. A total of 49 individuals were observed, comprising nine species, from different lineages: Atractus pantostictus and Sibynomorphus mikanii, Apostolepis assimilis, Erythrolamprus aesculapii, and Liophis miliaris, Oxyrhopus guibei, Philodryas patagoniensis, and Tomodon dorsatus and Thamnodynastes strigatus. The specimens were housed in captivity for 10 consecutive days and monitored by CCTV system. Most species presented predominantly diurnal activity, except A. pantostictus, S. mikanii and O. guibei. Apostolepis assimilis, L. miliaris and O. guibei showed bimodal activity pattern, as specimens of E. aesculapii individually presented two daily peaks of activity, even so the time of such peaks has differed among the individuals. The analysis of similarity suggests that the pattern of activity is preserved in some groups (E. aesculapii and L. miliaris, tribe Xenodontini, and the Dipsadini A. pantostictus and S. mikanii). Availability of food in the natural environment and climatic factors also seem to influence activity, beyond the reproductive state, and ontogenetic variation

Orientador: Marcos Hikari Toyama / Banca: Selma Dzimidas Rodrigues / Banca: Luciana Reitz de Carvalho / Resumo: Os estudos na área de biotecnologia marinha vêm crescendo nas ultimas décadas e os trabalhos recentes têm revelado inúmeros compostos com potencial farmacológico. O Brasil apresenta um extenso litoral, bastante diversificado em espécies e recursos abundantes para uma pesquisa tecnológica dos organismos marinhos. Os polissacarídeos sulfatados de algas já vêm sendo utilizados em diversas aplicações, principalmente inibindo a atividade de determinadas enzimas, como aquelas relacionadas à cascata de coagulação. Este estudo teve como objetivo mostrar a relevância destas moléculas na modulação das atividades enzimática e inflamatórias das Fosfolipases A2 secretórias extraídas do veneno da Crotalus durissus terrificus. O estudo mostrou que os efeitos biológicos e farmacológicos estão relacionados com a fonte dos polissacarídeos sulfatados, ou seja, a macroalga de origem, mas também com sua estrutura química, a composição dos açucares e a massa molecular. Através da cromatografia por exclusão molecular foi possível identificar as massas moleculares aproximadas dos açucares e também pode revelar a interação existente entre a Fosfolipase A2 e os polissacarídeos sulfatados. Os testes enzimáticos revelaram que a ação fosfolipásica é dose dependente do açúcar, ou seja, em baixas doses de polissacarídeos sulfatados das macroalgas Botryocladia occidentalis e Codium isthmocladum, a atividade da Fosfolipase A2 diminuiu e aumentou, respectivamente. Porém, em altas doses, a atividade enzimática aumentava e diminuía, respectivamente, para as mesmas algas. A atividade enzimática diminuiu ao longo do tempo para o polissacarídeo sulfatado da Caulerpa racemosa. Para esta clorófita, a atividade edematogênica aumentou enquanto para as outras diminuíam, bem como para o teste de miotoxicidade / Abstract: Studies in the field of marine biotechnology have been growing in recent decades, and recent studies have revealed numerous compounds with pharmacological potential. Brazil has an extensive coastline, quite diverse in species and abundant resources for technological research of marine organisms. The sulfated polysaccharides of algae have already been used in several applications, mainly by inhibiting the activity of certain enzymes, such as those related to the coagulation cascade. This study aimed to show the relevance of these molecules in the modulation of inflammatory and enzymatic activities of Phospholipase A2 secretory extracted from the venom of Crotalus durissus terrificus. The study showed that the biological and pharmacological effects are related to the source of sulfated polysaccharides, or origin of the seaweed, but also their chemical structure, composition and molecular weight of sugars. Through molecular exclusion chromatography was possible to identify approximate molecular masses of sugars and can also reveal the interaction between the phospholipase A2 and sulfated polysaccharides. The tests revealed that the enzyme phospholipase action is dose-dependent sugar, or low doses of sulfated polysaccharides of macroalgae and Codium isthmocladum, Botryocladia occidentalis, the phospholipase A2 activity decreased and increased, respectively. However, at high doses, the enzyme activity increased and decreased, respectively, for the same algae. The enzyme activity decreased over time for the sulfated polysaccharide the Caulerpa racemosa. For this seaweed, the enzymatic activity increased while the edema decreased / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29Bitstream added on 2014-06-13T19:49:19Z : No. of bitstreams: 1 gomes_ca_me_sjrp.pdf: 926724 bytes, checksum: e9b41eae78efd1d63fed2a2a6e39e0f5 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Serpentes dos gêneros Echinanthera e Taeniophallus pertencem à família dipsadidae e estão alocadas na tribo Echinantherini. Esses gêneros possuem características morfológicas similares entre si, incluindo o porte médio (comprimento total < 850 mm) e o corpo delgado, a dentição áglifa e a pupila circular. Além disso, compartilham semelhanças ecológicas como o hábito critozóico e diurno, a dieta baseada em anfíbios anuros e a reprodução, aparentemente restrita à estação chuvosa (setembro a março). O reconhecimento de Echinanthera e Taeniophallus como linhagens filogenéticas distintas tem sido controverso, mas a hipótese mais recente considera a existência de ambos os gêneros. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar de forma mais detalhada a história natural de Echinanthera e Taeniophallus para avaliar semelhanças e possíveis diferenças entre esses gêneros. Foram examinados e dissecados espécimes preservados depositados em coleções herpetológicas para coleta de dados de dieta e reprodução. Foi analisado um total de 240 espécimes de E. undulata para caracterização do ciclo reprodutivo e dieta. Outras espécies (T. affinis e T. occipitalis) tiveram exemplares dissecados somente para exame do conteúdo alimentar. Dados da literatura disponíveis para outras espécies também foram incluídos para comparação. Echinanthera undulata apresentou dimorfismo sexual, com fêmeas apresentando comprimento rosto-cloacal maior e tamanho relativo da cauda menor que machos. Duas características (comprimento da cabeça e diâmetro do olho) são similares entre os sexos. Essa serpente apresentou cauda longa, correspondente a cerca de 45% do tamanho total. Com relação à dieta foram encontrados 12 itens, todos anfíbios anuros. A dieta de espécies do gênero Taeniophallus foi mais diversificada. Apenas três... / Dipsadid snakes of the genera Echinanthera and Taeniophallus belong to the Echinantherini tribe. These genera have similar morphological features, including the medium size (total length < 850 mm) and slender body, the aglyph dentition, and round pupil. Furthermore, they share ecological similarities such as the cryptozoic habit and day time activity, diet based on amphibians anurans and reproduction apparently restricted to the rainy season (September to March). The recognition Echinanthera and Taeniophallus as distinct phylogenetic lineages has been controversial, but the most recent hypothesis considers the existence of both genera. The objective of this study was to describe the natural history of Echinanthera and Taeniophallus to evaluate possible similarities and differences between these genera. This study was based on the dissection of preserved specimens from herpetological collections. We analyzed a total of 240 specimens of E. undulata to characterize the reproductive cycle and diet. Individuals of the other species (T. affinis and T. occipitalis) were dissected only to examine gut contents. Literature data for other species were included for comparison. Echinanthera undulata presented sexual dimorphism, females have larger snout vent-length and smaller tail than males. Two variables (head length and eye diameter) are similar between the sexes. This snake had long tail, corresponding to about 45% of the total size. All the prey items (n = 12) found in the gut of E. undulata were anurans. The diet of species from the genus Taeniophallus was more diverse. Only three specimens of T. affinis contained food vestiges (one lizard, one amphibians anurans and one rodent). In T. occipitalis were 12 items (one amphibians anurans and 11 lizards). The reproduction of both genera is similar. Testicular volume... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:50:16Z : No. of bitstreams: 1 salvador_ghm_me_botib_parcial.pdf: 205572 bytes, checksum: ea2da7983b8e624b8fb6f242a2874147 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-03-16T11:30:15Z: salvador_ghm_me_botib_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-03-16T11:31:00Z : No. of bitstreams: 1 000709624.pdf: 1507151 bytes, checksum: e7624c11b3bf8ce0e311b5d40988f595 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Serpentes do gênero Bothrops são responsáveis pela maioria dos acidentes ofídicos que ocorrem no Brasil. Uma das principais complicações deste tipo de acidente é o dano muscular, que muitas vezes pode evoluir para necrose. Estes danos podem estar relacionados à ação de fosfolipases A2 (Asp49- PLA2) e fosfolipases A2 homólogas (dentre as quais se encontram as Lys49-PLA2s) presentes nos venenos botrópicos. Esta complicação relacionada ao envenenamento ofídico não é atualmente contornada pela administração de soro antiofídico e, por isso, diversos trabalhos vêm sendo realizados na tentativa de se conhecer os sítios farmacológicos destas toxinas com o intuito de, no futuro, desenvolver tratamentos complementares à soroterapia. Neste trabalho, por meio de estudos utilizando a técnica de cristalografia de raios X, realizamos estudos comparativos entre a BmooPLA2-I e outras Asp49-PLA2s que inibem a agregação plaquetária e sugerimos que outras regiões além do sítio proposto anteriormente são responsáveis por esta atividade biológica. Estudos com a MjTX-II e outras Lys49-PLA2s também foram realizados e propuseram que moléculas de cadeia longa, como ácidos graxos e os polietilenoglicóis (PEGs), possuem contribuição direta para a cristalização destas toxinas. Além disso, estes compostos interagem com o sítio ativo, causando, em alguns casos, a hiperpolarização dos resíduos Cys29/Gly30 pelo Lys122, reforçando assim a teoria que propõe que a atividade catalítica das Lys49-PLA2s não é somente inibida pela presença da cadeia lateral da Lys49 junto ao loop de ligação de cálcio, mas também por outros fatores estruturais. Por fim, estudos com a MjTX-I revelaram que esta toxina é diferenciada das outras Lys49-PLA2s, visto que sua estrutura cristalográfica apresenta quatro moléculas na unidade... / Bothrops snakes are responsible for the most part of the snakebites that occur in Brazil. A major complication of this type of accident is muscle damage, which can often progress to necrosis. This damage may be related to the action of phospholipases A2 (Asp49-PLA2s) and homologue phospholipases A2 (including Lys49-PLA2s) present in Bothrops venoms. This complication related to snakebite is not currently solved by the administration of ophidic serum and, therefore, several studies have been conducted in attempt to understand the pharmacological sites of these toxins and to develop complementary treatments to serum therapy. In this work, we performed a comparative crystallographic study between BmooPLA2-I and other Asp49-PLA2s which present inhibitingplatelet aggregation activity using protein crystallography. The results suggest that some regions distinct from the site proposed by prior works could be responsible by this biological activity. Studies with MjTX-II and other Lys49-PLA2s were also performed and it was proposed that long-chain molecules, such as fatty acids and polyethylene glicols (PEGs), contribute to the crystallization of these toxins. Besides, these compounds interact with the active site, thus causing the hyperpolarization of the Cys29/Gly30 residues via Lys122. These findings reinforce the theory which establishes the catalytic activity of Lys49-PLA2s is not abolish only by the presence of the Lys49 sidechain close to the calcium binding loop, but also due to other structural features. Finally, studies with the MjTX-I revealed that this toxin is different from other Lys49-PLA2s since its crystal structure presents four molecules in the asymmetric unit and a distinct configuration of the myotoxic site as previously proposed for other Lys49-PLA2s. Other studies with MjTX-I using spectroscopy... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: José Luiz de Mello Nicoletti / Coorientador: Yara Cury / Banca: Renée Lauffer Amorim / Banca: Paulo Sérgio Lacerda Beirão / Resumo: A crotoxina, uma neurotoxina isolada do veneno de serpente Crotalus durissus terrificus, apresenta efeito antiinflamatório, imunomodulador e analgésico. Neste trabalho, o efeito da crotoxina sobre o desenvolvimento do neuroma e dor neuropática foi investigado. Para a indução da lesão nervosa, o nervo ciático de ratos foi submetido à transecção e remoção de um fragmento de 0,5 cm. Para avaliação da hiperalgesia foi utilizado o teste de pressão de pata. A formação do neuroma foi determinada por estudos histopatológicos. A hiperalgesia foi detectada 2 h após a cirurgia persistindo por 64 dias. O grupo controle desenvolveu neuroma no coto proximal do nervo transeccionado, a partir do 7o dia, sendo que 80 % dos animais apresentaram neuromas ao final do experimento (64o dia). A crotoxina aplicada nos cotos proximais e distais imediatamente após a transecção do nervo promoveu o bloqueio da hiperalgesia. O efeito analgésico foi observado 2 h após a administração da crotoxina, persistindo por 64 dias. A analgesia induzida pela crotoxina foi bloqueada pela administração de atropina e pela administração de zileuton, e inibida parcialmente pela administração de ioimbina e metisergida. Estudos histopatológicos mostram que a crotoxina retarda em 7 dias o desenvolvimento do neuroma. Estes resultados demonstram que a crotoxina promove analgesia de longa duração e retarda o desenvolvimento do neuroma. O efeito analgésico da crotoxina neste modelo de dor neuropática é mediado por ativação de receptores muscarínicos centrais e parcialmente, por receptores -adrenérgicos e serotoninérgicos. Mediadores lipídicos derivados da via da 5-lipoxigenase, participam da modulação destes efeitos / Abstract: Crotoxin (CTX), a neurotoxin isolated from Crotalus durissus terrificus snake venom(CdtV) induces analgesia, anti-inflammatory and immunomodulation effects. However, CTX effects on neuropathic pain have never been showed. For induction of neuropathic pain, the sciatic nerve of male Wistar rats was transected in two locations at the mid-thigh level and 0.5 cm of the nerve was removed. Pain-related behavior and development of neuromas were analyzed over a 64-day period after surgery. The rat paw pressure test was used for hyperalgesia evaluation. The presence of neuromas was determined by histological analysis of the nerves. Hyperalgesia was detected 2 h after surgery and persisted for 64 days. Control group showed neuromas until day 7, however 80% of the rats presented neuromas on day 64. CTX applied to the proximal and distal nerve stumps, immediately after nerve transection, blocked hyperalgesia. The analgesic effect was observed 2 h after CTX treatment and persisted for 64 days. CTX-induced analgesia was blocked by administration of atropine and administration of zileuton and partially inhibited by yohimbine and methysergide. Histological analysis showed that CTX delays for about 7 days the development of neuromas. The results indicate that CTX induces a long-lasting analgesic effect on neuropathic pain of transected sciatic nerve and inhibits the development of the neuropathy. The analgesic effect is mediated by central muscarinic receptors and partially by -adrenoceptors and serotonergic receptors. 5-lipoxygenase lipidic mediators are involved in this modulation / Mestre

Orientador: Otavio Augusto Vuolo Marques / Banca: Marcio Roberto Costa Martins / Banca: Denise de Cerqueira Rossa Feres / Resumo: Foram analisados exemplares das cinco espécies de Chironius (C. bicarinatus, C. exoletus, C. foveatus, C. fuscus e C. laevicollis), provenientes da Floresta Atlântica na Serra do Mar, incluindo os estados do Paraná, São Paulo e Rio de Janeiro. Todas as espécies foram caracterizadas em relação à morfologia, dieta e uso do ambiente. O dimorfismo sexual no tamanho de corpo é variável entre as espécies: machos de C. bicarinatus e C. foveatus são maiores que as fêmeas conspecíficas, ao passo que em C. fuscus e C. laevicollis não existe dimorfismo sexual de tamanho, e em C. exoletus, as fêmeas são maiores. Essas diferenças sugerem que o comportamento de combate ritual, registrado em algumas espécies não esteja difundido em todos representantes do gênero. A comparação interespecífica evidência diferenças marcantes na morfologia e dieta: Chironius laevicollis tem corpo grande, maior robustez, a menor cauda e dieta baseada em anfíbios terrestres, características condizentes com o hábito terrestre; C. fuscus, tem corpo pequeno, robustez intermediária e alimenta-se principalmente de anuros terrestres, indicando hábito predominantemente terrestre; C. bicarinatus tem corpo médio, robustez intermediária e dieta baseada em anuros arborícolas e terrestres, sugerindo que forrageia freqüentemente nos dois ambientes; C. exoletus possui corpo pequeno, é pouco robusta e apresa principalmente anuros arborícolas, indicando que forrageia principalmente no substrato arbóreo, e por fim, C. foveatus possui o maior tamanho corporal, menor robustez, a maior cauda e dieta baseada em anuros arborícolas, o que indica ser a espécie mais arborícola do grupo. O ancestral hipotético desse grupo possuía tamanho médio de corpo e cauda, era semi-arborícola e alimentava-se de anfíbios terrestres e arborícolas. / Abstract: We explored the relationship of morphology, diet and habitat use in five sympatric species of Chironius (C. bicarinatus, C. exoletus, C. foveatus, C. fuscus and C. laevicollis) from Serra do Mar, eastern Brazil. Sexual dimorphism in body length varies among species: males C. bicarinatus and C. foveatus are larger than conspecific females, whereas no sexual dimorphism in body size is recorded for C. fuscus and C. laevicollis, and female C. exoletus is the larger sex. Such differences suggest that ritual combat (already recorded in the genus Chironius) may be absent in some species. Interespecific comparison shows differences in morphology and diet: Chironius laevicollis has large body size and the smallest tail, is more stout, and prey on terrestrial anurans, characters that may reflect terrestrial habit; C. fuscus, has small body length, medium stoutness and feed on terrestrial anurans, indicating a predominant terrestrial habit; C. bicarinatus has medium body size and stoutness, preying on terrestrial and arboreal anurans, suggesting a semi arboreal habit; C. exoletus has small and slender body and prey on arboreal anurans, indicating an arboreal habit, and finally C. foveatus has the largest body size and tail length, is more slender, and feed on arboreal anurans, thus may been the most arboreal species of the group. Hypothetic ancestor of this clade had medium body and tail length, was semi arboreal and fed on terrestrial and arboreal anurans. / Mestre