Orientador: Jose Camillo Novello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T20:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_DanielaDiogenesde_M.pdf: 3678329 bytes, checksum: b2979d9021832e5cf620da29d174d33d (MD5) Previous issue date: 1979 / Resumo: As lectinas constituem um grupo de proteínas que possuem a capacidade de se ligarem especificamente e reversivelmente a determinados carboidratos. Identificadas em vegetais e animais, são também encontradas em venenos ofídicos. Quando isoladas de venenos de serpentes, essas proteínas ligam-se a 'beta¿-galactosídeos e induzem aglutinação de eritrócitos, agregação de plaquetas e são mitogênicas para linfócitos. Uma lectina específica para 'beta¿galactosídeos foi purificada do veneno de Bothrops jararacussu através de cromatografia de afinidade em D-galactose, e foi denominada BjcuL. A análise do perfil de massa molecular em SDS-PAGE a 15% mostrou que BjcuL é um homodímero composto de subunidades de 15kDa. Quando submetido à coloração para carboidratos após SDS-PAGE, a proteína mostrou reação negativa, sugerindo que BjcuL não é uma glicoproteína. BjcuL aglutina eritrócitos tripsinizados de porco e boi, em concentrações mínimas de 0,5 'mu¿g/ml e 2,0 'mu¿g/ml, respectivamente. A hemaglutinaçao de eritrócitos porcinos induzida por 4,0 'mu¿g/ml de BjcuL é inibida especificamente por lactose 0,8 mM, galactose 3,2 mM e rafinose 3,2 mM. EDTA 0,2 mM e EGTA 0,1 mM também inibem a atividade hemaglutinante de BjcuL, o que revela a dependência de cátions divalentes. A associação das subunidades da lectina de B. jararacussu é essencial para sua atividade hemaglutinante, pois BjcuL reduzida com DTT não exibem esta atividade sobre eritrócitos porcinos... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Lectins are polyvalent carbohydrate-binding proteins which agglutinate red blood cells. Identified in plants and animals, have also been found in snake venoms. These proteins bind to lactose moieties and induce agglutination of erythocytes, aggregation of platelets and are mitogenic to lymphocytes. A galactose-specific lectin in Bothrops jararacussu venom (BJcuL) was adsorbed on a immobilized D-galactose column and eluted with 0.1 M lactose. On SDS-PAGE, under reducing conditions (0.1 M DTT), the fraction eluted showed a single band of 15 kDa, and under non reducing conditions, a major band of 30 kDa. This protein appeared not to be a glycoprotein because it gave negative reaction to the Schiff¿s reagent following treatment with periodate. Trypsined erythrocytes from pig and cow were agglutinated by BJcuL, with end points of approximately 0.5 'mu¿g/ml and 2.0 'mu¿g/ml, respectively. The hemagglutination of trypsined pig erythrocytes induced by 4.0 'mu¿g/ml of BJcuL was inhibited specifically in the presence of 0.8 mM lactose, 3.2 mM galactose, 3.2 mM raffinose. BJcuL demonstrated a requirement for divalent cation, since 0.2 mM EDTA or 0.1 mM EGTA, completely inactivated the lectin induced hemagglutination activity. The association of subunits via interchain disulfide bonds is essencial for lectin activity, since DTT-reduced BJcuL showed no hemagglutination activity against pig erythrocytes... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T18:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guimaraes_AlessandradeQueiroz_M.pdf: 16488672 bytes, checksum: 60d60725663ca1fee278966dc0ff2ea0 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: É bem conhecida a capacidade dos venenos de serpentes do gênero Bothrops induzirem intensos efeitos locais, tais como edema, hemorragia e necrose. Neste trabalho investigou-se os possíveis mediadores da resposta inflamatória local (edema) e hemorrágica induzida pelo veneno de Bothrops lanceolatus (VBL) em ratos. O edema foi induzido por injeção subplantar de VBL (12,5 - 100 ~g/pata) e quantificado com hidropletismógrafo. Em todas as doses testadas, a resposta edematogênica foi máxima aos 15 minutos, caindo, progressivamente, até desaparecer após 24 horas. As drogas metisergida, ciproheptadina, dexametasona, HOE 140 e associação HOE 140 -metisergida reduziram significativamente a atividade edematogênica induzida pelo VBL (50 ~g), o que não ocorreu com a indometacina e mepiramina. O efeito edematogênico pareceu ser independente da presença de aminas biogênicas ou outras substâncias de baixo peso molecular no veneno, uma vez que a diálise não alterou significativamente este quadro. Investigando a atividade hemorrágica, tratamos o VBL com EDTA. O tratamento inibiu a atividade hemorrágica, bem como reduziu significativamente o edema. Nos animais iIljetados com VBL tratado com EDT~ o edema residual mostrou-se mediado pela serotonina, histamina, bradicinina e possivelmente, metabólitos do ácido araquidônico. A análise histopatológica das patas injetadas com o VBL demonstrou aumento da região dérmica e dos espaços intercelulares, característicos do edema, além da presença de moderado fufiltrado inflamatório e intensa hemorragia. O tratamento prévio dos animais com dexametasona reduziu o infiltrado celular e o edema, sem interferência na atividade hemorrágica. O estudo das patas injetadas com VBL tratado com EDTA demonstrou redução do número de hemáceas extravasculares e do edema, sem aparente alteração do infiltrado leucocitário. Além dos efeitos locais, a injeção subplantar do VBL provocou alterações sistêmicas detectadas nos rins. Os túbulos distais apresentaram diâmetro aumentado; nos túbulos proximais, restos celulares provavelmente de natureza protéica, foram vistos ao lado de vasos sangüíneos congestos. Nos corpúsculos renais houve aumento do espaço capsular de filtração, além de alterações na lobulação do tufo de capilares. O tratamento do veneno com EDTA reverteu alguns dos efeitos glomerulares e tubulares produzidos pelo envenenamento, o que não se observou em animaispré-tratados com dexametasona. "' uo soro anti-VBL parcialmente purificado previamente incubado com o VBL eliminou completamente a atividade hemorrágica e parcialmente a atividade edematogênica do veneno, não demonstrando eficácia superior quando os resultados foram comparados àqueles obtidos com o soro anti-VBL total. A inoculação intravenosa soro anti-VBL total ou parcialmente purificado, imediatamente após injeção do VBL, foi ineficaz na neutralização dos dois fenômenos / Abstract: Phannacological modulation of the rat hind-paw edema induced by subplantar injections of Bothrops lanceolatus venom (BLV) was investigated. The edema induced by subplantar injections of 12.5; 25; 50; 75 and 100 Ilg of BLV was quantified by hydroplethysmography. Wrth all of the venom doses tested, the edematogenic response were maximal within 15 min and disappeared over 24 h. Edema is not due to the presence of edematogenic amines or other small molecules, since dialysis did not change the edema. Part of edema induced by BLV is due to hemorrhagic components (metalloproteinases) since prior incubation of BLV 50 Ilg and 5 mM EDTA for 30 min at room temperature, caused a partia! inhibition of its edematogenic activity. However, liberation of phannacological active substance at the site of injection such as arachidonate metabolites, serotonin and bradykinin may play an important role in the BLV-induced edematogenic effect, since dexamethasone, methysergide and HOE 140 reduced significantlythe edema formation. Histological examination showed that BLV (50 Ilg) caused a marked edema and hemorrhage, characterized by extensive intercellular spaces and presence of extra vascular red blood cells. In addition, there was infiltration of inflammatory cells, particularly neutrophils. The chelating agent EDTA reduced moderately the edema, reduced partially the hemorrhage, but did not affect the presence of inflammatory cells at tOOsite of venom injection. The ability of antiserum to Bothrops lanceolatus venom and of a partially I purified antibody fraction ftom this serum in neutralizing tOOlocal effects produced by BLV in rats was a1so investigated. Preincubation-type experiments showed that BLVinduced edema was neutra1ized by globulin-rich fraction 2 h, or more, afier venom administration. Macroscopically, the hemorrhagic activity was completely neutralized. When BLV-antiserum and the globulin-rich fraction were administered i.v. afier venom injection, no significant edema and hemorrhage neutralization was observed. BLVantiserum and globulin rich fraction neutraIized the venom-induced edema and hemorrhage to similar extents. This finding indicated that the globulin-rich fraction obtained by ammonium sulfate precipitation offers no significant advantages in neutralization compared to the unfractionated antiserum / Mestrado / Mestre em Farmacologia

OGATA, Miriam Camargo Guarnieri, também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: GUARNIERI, Miriam Camargo / Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-05T20:11:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Rafaela Mota Gonzaga.pdf: 2557106 bytes, checksum: 947b0b8999788f6e9f90333ff5ea6877 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T19:23:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Rafaela Mota Gonzaga.pdf: 2557106 bytes, checksum: 947b0b8999788f6e9f90333ff5ea6877 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Rafaela Mota Gonzaga.pdf: 2557106 bytes, checksum: 947b0b8999788f6e9f90333ff5ea6877 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / CAPES / Crotalus durissus cascavella é uma subespécie endêmica da região Nordeste do Brasil, cuja peçonha difere das demais subespécies do país pela ausência de crotamina e alta concentração de fosfolipases A₂ (PLA₂) ácidas. Neste estudo, duas novas PLA₂s ácidas, denominadas Cdca-I-PLA₂ e Cdca-II-PLA₂, foram purificadas da peçonha de C. d. cascavella através de duas e três etapas cromatográficas, respectivamente. A pureza e homogeneidade de ambas fosfolipases foram determinadas por SDS-PAGE e espectrometria de massa, apresentando uma banda única e massa de 14.247 Da (Cdca-IPLA₂) e 14.418 Da (Cdca-II-PLA₂). Ambas fosfolipases foram ativas sobre 4-nitro-3- ácido octanoil benzóico, apresentando atividade específica de 11,51 ± 0,50 U/mg e 26,75 ± 0,15 U/mg, Km = 0,2280 mM e 0,3993 mM e Vmax = 13,15 nmol×min⁻¹mg⁻¹ e 39,68 nmol×min⁻¹mg⁻¹, respectivamente. Ambas não apresentaram atividade sobre BApNA. A Cdca-I-PLA₂ apresentou atividade hemaglutinante na dose de 15 μM, enquanto a Cdca- II-PLA₂ apresentou atividade sobre substrato fluorogênico de trombina nas doses de 15 μM e 30 μM. As Cdca-I-PLA₂ e Cdca-II-PLA₂ reduziram a agregação plaquetária induzida por colágeno, adrenalina e ácido araquidônico, porém as duas enzimas (20 μM) não reduziram a agregação quando ADP foi utilizado como agonista. Cdca-I-PLA₂ apresentou atividade dose resposta como agonista de agregação em plaquetas lavadas e reduziu significativamente a atividade agregante plaquetária da trombina. Cdca-I-PLA₂ apresentou maior atividade anticoagulante, prolongando os tempos de protrombina (TP; 30 μM; R = 22) e tromploplastina parcial ativada (TTPa; 30 μM; R = 10), porém não promoveu alteração do tempo de trombina (TT) na dose de 10 μM. Cdca-II-PLA₂ prolongou discretamente o TP (30 μM; R = 2) e TTPa (30 μM; R = 1,5) e significativamente o TT (20 μM; R = 7). Desta forma, nossos resultados sugerem que a Cdca-I-PLA₂ é uma quimerolectina anticoagulante com importante atividade sobre agregação plaquetária, enquanto Cdca-II-PLA₂ possui alta atividade enzimática, inibe tanto a agregação plaquetária quanto a coagulação, agindo como inibidor de trombina por meio da sua ligação com o fibrinogênio. / Crotalus durissus cascavella is ana endemic subspecie from Northeast region of Brazil, whose venom differs from the other subspecies of the country due to the absence of crotamine and high concentration of acidic phospholipase A₂ (PLA₂). In this study, two new acidic PLA₂s, named Cdca-I-PLA₂ and Cdca-II-PLA₂, were purified from C. d. cascavella venom by two and three chromatographic steps, respectively. The purity and homogeneity of both phospholipases were determined by SDS-PAGE and mass spectrometry, showing a single band and molecular mass of 14.247 Da (Cdca-I-PLA₂) and 14.418 Da (Cdca-II-PLA₂). Both PLA₂s were active on 4-Nitro-3-(octanoyloxy) benzoic, presenting specific activity of 11,51 ± 0,50 U/mg and 26,75 ± 0,15 U/mg, Km = 0,2280 mM and 0,3993 mM and Vmax = 13,15 nmol×min⁻¹mg⁻¹ and 39,68 nmol×min⁻¹mg⁻¹, respectively. Both had no activity on BApNA. The Cdca-I-PLA₂ showed hemagglutinating activity at the dose of 15 μM, while Cdca-II-PLA₂ showed activity on fluorogenic thrombin substrate at the doses of 15 μM e 30 μM. The Cdca-I-PLA₂ and Cdca-II-PLA₂ reduced platelet aggregation induced by collagen, adrenaline and arachidonic acid, but the two enzymes (20 μM) did not reduce aggregation when ADP was used as an agonist. Cdca-I-PLA₂ showed dose response activity as agonist of aggregation in washed platelets and significantly reduced thrombin platelet aggregation activity. Cdca-I-PLA₂ presented higher anticoagulant activity, prolonging prothrombin time (PT; 30 μM; R = 22) and activated partial thromboplastin time (aPTT; 30 μM; R = 10), but did not promote a change in thrombin time (TT) at a dose of 10 μM. Cdca-IIPLA₂ prolonged discreetly the PT (30 μM; R = 2) and the aPTT (30 μM; R = 1.5) and significantly prolonged the TT (20 μM; R = 7). Thus, our results suggest that Cdca IPLA₂ is an anticoagulant chimerolectin with important activity on platelet aggregation, while Cdca-II-PLA₂ has high enzymatic activity, inhibit both platelet aggregation and cloagulation, acting as thrombin inhibitor through its biding to fibrinogen.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-12T15:53:19Z No. of bitstreams: 2 Tese - Habdel Nasser.pdf: 15126039 bytes, checksum: 87f29159443eecef88032880bd6b9dce (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-12T15:53:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Habdel Nasser.pdf: 15126039 bytes, checksum: 87f29159443eecef88032880bd6b9dce (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-12T15:53:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Habdel Nasser.pdf: 15126039 bytes, checksum: 87f29159443eecef88032880bd6b9dce (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2007-08-10 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Most of the snakebite incidents in the Amazon region involve the Bothrops atrox, whose venom presents the most potent edematogenic and necrotic activities in the genus. This work describes the studies of isolation of the chemical constituents and antiedematogenic activity of the species Peltodon radicans (Lamiaceae), which is used in the treatment of snakebites and scorpion stings in the region. The extracts presented aliphatic hydrocarbons, 3-OH,-amirin (1), 3-OH,-amirin (2), -sitosterol (3), stigmasterol (4), ursolic acid (5), 2,3,19-trihydroxy-urs-12-en-28-oic acid (tormentic acid, 6), methyl 3-hydroxy,28-methyl-ursolate (7), sitosterol-3-O--D-glucopyranoside (8), and stigmasterol-3-O--D-glucopyranoside (9). The flower extracts presented the largest antiedematogenic activity. This is the first report on the study of the flowers, stem, and roots of this plant. / A maioria dos acidentes com serpentes na região Amazônica envolve a espécie Bothrops atrox, cujo veneno apresenta as atividades edematogênica e necrótica mais potentes no gênero. Este trabalho descreve o estudo do isolamento dos constituintes químicos e da atividade antiedematogênica de Peltodon radicans (Lamiaceae), espécie vegetal que é usada no tratamento de picadas de serpentes e escorpiões na região. O extrato apresentou hidrocarbonetos alifáticos, 3-OH,-amirina (1), 3-OH,-amirina (2), -sitosterol (3), estigmasterol (4), ácido ursólico (5), ácido 2,3,19-tri-hidroxi-urs-12-en-28-óico (ácido tormêntico 6), 3-hidroxi,28-metil-ursolato de metila (7), 3-O--D-glicopiranosíl-sitosterol (8) e 3-O--D-glicopiranosíl-estigmasterol (9). Os extratos das flores apresentaram maiores atividades edematogênicas. Este é o primeiro registro do estudo das flores, caules e raízes dessa planta.

Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T18:31:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valerio_AmandaAbdalla_M.pdf: 13631091 bytes, checksum: 614bd6add75c50691b0684d8afeade9b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Peçonhas de serpentes contêm enzimas que quebram ligações fosfáticas (ATPases, 5'-nucleotidases, fosfatases e fosfodiesterases ou PDE) e que agem sobre ácidos nucléicos (PDE, DNase e RNase). Nesse trabalho, purificou-se e caracterizou-se a PDE da peçonha de Bothrops alternatus. A PDE foi isolada da peçonha, usando-se uma combinação de cromatografias de gel filtração e troca iônica. Em SDS-PAGE, a enzima é constituída de uma única cadeia polipeptídica com uma massa molecular de 105 kDa, a qual foi inalterada pela presença do ß- mercaptoetanol, indicando assim que a proteína não possui subunidades. A enzima foi reconhecida por anti-soro botrópico comercial, tanto no ELlSA como no immunoblotting. A enzima purificada era desprovida de nucleotidase, fosfatase alcalina e atividade proteolítica. O pH ótimo da PDE foi de 7.5 a 9.5, com temperatura ótima de 60°C. Houve perda rápida de atividade, após 1 minuto a 70°C. O Kmda enzima foi de 2.69 mM. A atividade da PDE foi potencializada pelo cobalto e, em grau menor pelo cálcio, enquanto que o cobre, manganês, zinco, EDTA and ß-mercaptoetanol foram inibitórios. Esses resultados mostram que esta enzima é pertence à família de proteínas da PDE isoladas de outras peçonhas ofídicas / Abstract: A phosphodiesterase was purified from the venom of the snake Bothrops alternatus by a combination of gel filtration and ion exchange chromatographies. In SDS-PAGE, the enzyme gave a single band with a molecular mass of 105 kDa which was unaltered in the presence of ß -mercaptoethanol, indicating that the protein contained no subunits. There were no contaminating 5'-nucleotidase, alkaline phosphatase and protease activities. The enzyme was recognized by commercial bothropic antiserum and gave a single band in immunoblotting. The enzyme had a pH optimum in the range of 7.5-9.5 and the optimum temperature was 60°C, with activity being rapidly lost within 1 min at 70°C. The Kmof the enzyme was 2.69 mM. PDE activity was potentiated by cobalt and, to a lesser extent, by calcium, whereas copper, manganese, zinc, EDTA and ß-mercaptoethanol were inhibitory. These properties show that this enzyme is very similar to that isolated from other snake venoms.4 / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CarolineRibeirodeBorja_D.pdf: 22434258 bytes, checksum: 1032d29d7d3da47c988623e5cd6780bc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Os efeitos neuromusculares do veneno de Bothrops neuwiedi pauloensis foram estudados através de preparações biventer cervicis de pintainho e nervo frênico-diafragma de camundongo. Em preparação de ave, o veneno produziu bloqueio irreversível e dependente da concentração das contrações musculares em resposta à estimulação elétrica indireta. Com 1-20 µgde veneno/ml, as respostas ao KCI (13,4 mM) foram parcialmente ou completamente inibidas, enquanto que as respostas à ACh (110 M)não foram afetadas. Com 50 µg/ml,as respostas à ACh, ao KCI e à estimulação direta foram inibidas. O veneno induziu também contraturas dependentes da concentração a partir de 10 µg/ml. À 20-24°C, o veneno (50 µg/ml)produziu somente um bloqueio parcial (30,7 ± 8,0%, média ± SEM; p < 0,05; n = 3) após 120 min sem afetar as respostas à ACh e ao KCI. Em preparação de camundongo, 50 µg de veneno/ml causaram bloqueio total das respostas à estimulação indireta e direta, e, quando o Ca2+(1,8 mM) da solução nutritiva foi substituído pelo sr2+ (4.0 mM), somente um bloqueio parcial da resposta à estimulação indireta foi obtido (40.3 ±7.8%; P < 0,05; n = 3) após 120 min de incubação. Estes resultados indicam que o veneno de B. n. pauloensis é neurotóxico, atua preferencialmente em sítios pré-sinápticos, e que sua atividade farmacológica está relacionada a sua atividade enzimática. O veneno foi fracionado por HPLC de exclusão molecular e sua atividade neuromuscular foi recuperada no primeiro, segundo e terceiro picos (pico 1, pico 2 e pico 3, respectivamente) do perfil cromatográfico. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Snakes of the genus Bothrops are the most important cause of snakebites in Brazil. The main complications in lethal cases are acute renal failure, shock, acute respiratory failure and sepsis. The neuromuscular effects of Bothrops neuwiedi pauloensis (jararaca-pintada) venom were studied in chick biventer cervicis and mouse phrenic nerve-diaphragm preparations. In chick preparations, venom concentrations of 5-50 µg/ml produced an initial inhibition and a secondary augmentation of the twitches evoked indirectly followed by a progressive concentration-dependent and irreversible neuromuscular blockade. At venom concentrations of 1-20 µg/ml, the responses to KCI (13.4 mM) were partially or completely inhibited whereas those to acetylcholine (110 µg/Mw) ere unaffected. At venom concentrations higher than 50 µg/ml, there was pronounced muscle contracture with inhibition of the responses to acetylcholine, KCI and direct stimulation. At 20-24°C, the venom (50 µg/ml)produced only partial neuromuscular blockade (30.7± 8.0% blockade, mean:t SEM; p < 0.05; n = 3) atter 120 min and the initial inhibition and the secondary augmentation of the twitch responses caused by the venom were prolonged and pronounced and the response to KCI was unaltered. In mouse preparation, At 20 µg/ml,the venom irreversibly inhibited (60 ±10% inhibition, mean ± SEM; p< 0.05; n = 6) indirectly evoked twitches. At 50 µg/ml, the venom blocked the indirectly (n = 5) and directly (n = 6) evoked twitches in mouse hemidiaphragms. In the absence of Ca2+, at 50 µg/ml,only partiaI blockade (40.3v ± 7.8% inhibition; p < 0.05; n = 3) was observed atter a 120 min incubation.These results indicated that B. n. pauloensís venom was neurotoxic, acting primarily at presynaptic sites, and that enzymatic activity could be involved in that pharmacological action. The venom was fractionated by HPLC molecular exclusion (Protein Pack 300SW column). The neuromuscular activity of the venom was recovered in the first, second and third peaks (peak 1, peak 2 and peak 3, respectively) of the elution profile.Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_RicardoStellati_M.pdf: 5516057 bytes, checksum: f929e67e4834278cb9de83d60737c788 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O objetivo deste estudo foi comparar os efeitos do veneno de Crotalus durissus terrficus adulta e juvenil, do Vale do Paraíba/SP, sobre a junção neuromuscular. Para tanto, avaliou-se a atividade neurotóxica dos venenos de Cdt, através da técnica miográfica, em preparações biventer cervicis de pintainho e realizou-se análise bioquímica comparativa de todos os venenos utilizados. Foram ensaiadas diferentes doses do veneno total de Cdt, no estudo miográfico (0,5, 1,0, 5,0, 10,0 e 20,0 'mu¿g/ml), sendo que a partir da curva dose-efeito obtida, elegeu-se a concentração de 1 'mu¿g/ml para os ensaios posteriores. A 37°C os venenos estudados produziram bloqueio neuromuscular irreversível da resposta contrátil, em tempo inferior a 120 min e afetaram as respostas contraturantes à ACh (55 e 110 'mu¿M)e ao KCI (20 mM). O tempo necessário para a obtenção de 50% de bloqueio neuromuscular, na concentração de 1 'mu¿g/ml, foi significativamente menor (p<0.05) para o 1° e 2° meses de vida das serpentes de Cdt juvenis. Os dados mostraram que há diferença significativa quanto à toxicidade dos venenos estudados in vitro, não havendo uma relação direta entre a atividade bloqueadora neuromuscular e os valores da DL50. Por meio da análise da Cromatografia de exclusão molecular em HPLC e da confirmação pela análise do padrão eletroforético dos venenos de Crotalus juvenis, do 1° ao 7° mês de extração, pode-se afirmar que ocorre variação na composição dos principais componentes do veneno total e dos componentes que compõem a crotoxina (três isoformas de crotapotina e uma de 'PLA IND. 2¿), fato este também verificado na tabela de composição do veneno de Crotalus durissus terrificus, nos diferentes meses de extração. Diante do exposto, pode-se concluir que: 1) Ocorre variação ontogenética no veneno de Crotalus durissus terrificus, proveniente do Vale do Paraíba/SP. 2) A variação na potência dos venenos de Cdt juvenis observada, em comparação com a potência do veneno de Cdt adulta, leva a acreditar que, ao menos nos dois primeiros meses de vida, as serpentes de Cdt produzam isoformas mais tóxicas de crotoxina (alta toxicidade com baixa atividade enzimática), sendo doravante substituída por isoformas menos tóxicas (moderada toxicidade com alta atividade fosfolipase 'A IND. 2') / Abstract: The objective of this study was to compare the effects of the poison Crotalus durissus terrificus adult and juvenile, from Vale do Paraíba/SP, on the neuromuscular junction. For so much, we decided to evaluate the neurotoxic activity of the poisons of Cdt, through the miographic technique, in chick isolated biventer cervicis muscle preparations and accomplish comparative biochemical analysis of all of poisons used. Five concentration (0.5, 1.0, 5.0, 10 and 20 'mu¿g/ml) of Cdt were researched, and starting from the curve dose-effect obtained, the concentration of 1 'mu¿g /ml was chosen for the subsequent rehearsals. At 37°C all of the poisons studied produced irreversible neuromuscular blockade, in least time at 120 minutes and they affected the contractures to exogenous ACh (55 and 110 mM) and KCI (20 mM). The time for obtaining 50% of neuromuscular blockade, at concentration of 1 'mu¿g/ml, was significantly smaller (p<0.05) for the '1 POT. ST¿ and '2 POT. ND¿ months life of the snakes juvenile Cdt, results these in consonance with the literature. Through the analysis of Molecular Exclusion Cromatography in HPLC and of the confirmation for the analysis of the pattern eletrophoretic of the poisons juvenile Crotalus, of the '1 POT. ST¿ to the '7 POT. ND¿ month extraction, we believe that it happens variation in the composition of the main components of the total poison and of the components that compose the crotoxin (three crotapotine isoforms and one of 'PLA IND. 2); fact this also verified in the table of composition of the poison of Crotalus durissus terrificus, in the different extraction months. Before the exposed, it can be ended that: 1) it happens ontogenetic variation in the poison of Crotalus durissus terrificus, from Vale do Paraíba/SP. 2) the variation in the potency of the paisons of juvenile Cdt observed, in comparison with the potency of the poison of Adult snakes, in the group to believe that, at least in the first two life months, snakes of Cdt produce more poisonous isoforms of crotoxin (High toxicity with low enzymatic activity), being substituted from now on by less poisonous isoforms (Moderate toxicity with high activity 'PLA IND. 2') / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Sergio Marangoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T13:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kassab_BaykiHussein_M.pdf: 2921430 bytes, checksum: ce6acbd70d8b56f04ccb974ccdfe3c4f (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: As lectinas são proteínas ou glicoproteínas com a capacidade de aglutinar eritrócitos e outras células, precipitar polissacarídeos e outras glicoproteínas por possuírem um (ou mais) centro de ligação, específico e reversível, a carboidratos. As lectinas podem ser encontradas em animais, vegetais e microorganismos. BMooL é uma lectina específica para galactosídeos, e foi purificada do veneno da serpente Bothrops moojeni através da cromatografia de afinidade em D-Iactose. O perfil eletroforético (SDS-P AGE) mostrou que BMooL é um homodímero com subunidades de 14 kDa. A proteína apresentou reação positiva quando submetida a coloração para carboidrato, sendo portanto uma glicoproteína. Dentre os eritrócitos testados, BMooL apresentou maior afinidade por eritrócitos humanos tripsinizados do tipo A, B e O, em concentrações mínimas respectivas de 0,50 ug/ml, 0,96 /. ug/ml e 0,96 ug/ml. Eritrócitos tripsinizados de cavalo e pato não foram aglutinados na presença desta lectina. A atividade hemaglutinante com 2,0 ug/ml de BMooL sobre eritrócitos humanos tripsinizados do tipo A é inibida com 0,8 mM de lactose, 1,56 mM de galactose e 1,56 mM de rafinose. A atividade hemaglutinante de BMooL demonstrou ser dependente de Ca²+, pois foi inibida na presença de EDT A e EGT A. A associação das subunidades é uma condição fundamental para a atividade hemaglutinante de BMooL, pois quando reduzida com DTT, a lectina não mantém tal atividade. A composição de aminoácidos da lectina permitiu verificar que BMooL é uma proteína que contém em maior proporção resíduos de aminoácidos hidrofílicos como Asx (14%), Glx (13%) e Lys (8,0%) e aminoácidos não polares como Leu (8,1%). Em testes de agregação plaquetária com plasma humano, na presença de colágeno como agonista das agregações, a lectina não demonstrou nenhuma modulação significante nas plaquetas em concentrações de até 40,0 ug/ml. A função das lectinas em venenos ofidicos ainda não está bem esclarecida, a atividade hemaglutinante não reflete diretamente o papel dessas proteínas. O estudo da estrutura e de outras atividades biológicas que as lectinas apresentam, faz-se necessário para um melhor entendimento das interações lectina-carboidrato, que participam da grande maioria das interações biológicas existentes / Abstract: Lectins are proteins or glycoproteins which agglutinate erythrocytes and other cells and polysaccharides, since they have one or more specific carbohydrate-binding sites. Lectins are widely distributed in plants, as well as in animaIs and microorganisms. They have also been found in the venom of snakes. A lactose-specific lectin, BMooL, was purified from the crude venom of Bothrops moojeni by affinity chromatography on an immobilized D-Iactose column. The SDS-P AGE, under reduction conditions, showed that BMooL is a homodimer of 14kDa subunits. The protein appeared to be a glycoprotein once it showed a positive reaction to the Schiff' s reagent. Among the assayed erythrocytes, BMooL had more affinity to trypsined A, B and O types of human erythrocytes with end points of approximately 0.50 ug/ml, 0.96 ug/ml and 0.96 ug/ml, respectively. On the other hand, trypsined erythrocytes from horses and ducks did not agglutinate in the presence of this lectin. The hemagglutination of trypsined A type human erythrocytes induced by 2.0 ug/ml of BMooL was inhibited specifically in the presence of 0.8 mM lactose, 1.56 mM galactose and 1,56 mM raffinose. BMooL activity is a Ca²+dependence since EDTA and EGTA inactivated the lectin induced hemagglutination. Subunits association is a fundamental condiction for the hem agglutination activity of the lectin, since when reduced by DTT, BMooL have no effect on trypsined human erythrocytes. The detennination of BMooL aminoacid composition showed that it have a high content of acidic residues such as Asx (14%), Glx (13%) and Lys (8%) and non-polar amino acids as Leu (8,1 %). On collagen-induced platelet aggregation assays with human plasma, 40,0 ug/ml lectin showed no significant modulation in the platelet. The role of these lectins in the snake venoms remains unc1ear, the hemagglutination activity does not direct reflect the function of these proteins. Strucutural and other biological activities studies are needed for a more detailed understanding about the carbohydrate-Iectin interactions, which take part in the majority of the biological interactions described up to now / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Lea Rodrigues Simioni, Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T04:47:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CarolineRibeirodeBorja_M.pdf: 5449096 bytes, checksum: 7eb8220b0b381160bd94216b8f82b5fd (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O objetivo desta pesquisa foi comparar a neurotoxicidade de dezesseis lotes de venenos de B. neuwiedi, sendo sete procedentes de São Paulo, oito do Rio Grande do Sul e um de Minas Gerais, visando verificar a existência de um lote de veneno mais ativo, do qual se isolaria parcialmente o componente neurotóxico. Para avaliar a atividade neurotóxica dos vários venenos estudados, foi realizado um 'screening', utiljzando-se a preparação biventer cervicis de pintainho sob estimulação elétrica indireta. Avaliou-se também o efeito do veneno mais ativo sobre o músculo de ave sob estimulação elétrica direta, bem como sobre a preparação nervo frênico-diafragma de camundongo submetida a estimulação direta e indireta. Nesses casos a preparação foi previamente curarizada. Os diversos lotes de veneno foram comparados também por meio de eletroforese (PAGE-básica). O lote que apresentou efeito neuromuscular mais acentuado foi fracionado por meio de cromatografia líquida. Realizou-se, em seguida, o ensaio das frações resultantes nas preparações neuromu..sculares de ave e camundongo. Os venenos de B. neuwiedi exibiram diferenças notáveis quanto a sua atividade bloqueadora neuromuscular e, de modo geral, os venenos procedentes do Estado de São Paulo e o de Minas Gerais mostraram-se mais ativos que as amostras oriundas do Rio Grande do Sul. Apesar da diversidade demonstrada (2 o que indicou sua miotoxicidade. Quatorze entre os dezesseis lotes preservaram a resposta contraturante à ACh em doses inferiores a 50 ~g/ml (10 e 20 ~g/ml), ainda que na eminência do bloqueio, indicando a integridade dos receptores nicotínicos pós-sinápticos. Os padrões eletroforéticos de 5 entre os 6 venenos mais ativos apresentaram uma banda de caráter básico que não estava presente nos demais venenos. O veneno mais potente também foi eficaz em inibir a resposta contrátil a estímulo elétrico direto e indireto do músculo de camundongo, bem como a contração a estímulo elétrico direto em músculo de ave. Seu efeito bloqueador foi significantemente diminuído a 24°C ou na ausência de cálcio; nessa condição, não houve inibição da resposta ao 1<. Sob estimulação indireta, a preparação de pintainho foi mais sensível à ação do veneno do que a de camundongo; na exposição à estimulação direta, observou-se o inverso. Após o fracionamento, a atividade neuromuscular foi recuperada nos picos 2 e 3 do perfil cromatográfico. Essas frações causaram bloqueio mais intenso do que o produzido pelo veneno bruto, com total manutenção da resposta ao agonista. Enquanto o pico 2 bloqueou totalmente a contratura à adição de 1<, o pico 3 causou somente uma inibição parcial da mesma, sugerindo que a miotoxicidade esteja mais concentrada no pico 2. Em temperatura ambiente (24°C), a atividade neuromuscular de ambas as frações ativas foi reduzida e seu efeito inibidor sobre a resposta ao ~ foi abolida. Os resultados apresentados corroboram as suposições de que o veneno de B. neuwiedi age preferencialmente em sítios pré-sinápticos, além de possuir atividade sobre a membrana muscular, e que essas ações estão relacionadas com sua atividade enzimática. Sugere-se ainda que essas ações podem variar de acordo com a procedência do veneno e que são devidas a componente( s) neurotóxico(s) e/ou miotóxico(s) / Abstract: The venoms showed notable differences regarding their neuromuscular The objective of this research was to compare the neurotoxicity of B. neuwiedi venoms from São Paulo, Rio Grande do Sul and Minas Gerais States, aiming to the partia I isolation of the neurotoxic component from the more active crude venom. To evaluate the neurotoxic activity of the studied venoms we carried out a screening using the indirectly stimulated chick biventer cervicis preparation. We evaluated also the effect of. the more active venom on directly stimulated chick muscle and on the directly and indirectly stimulated mouse phrenic nerve diaphragm preparation. In these cases, the muscle was previally curarized. The various crude venoms were also compared by electrophoresis. The more active venom was fractionated by molecular exclusion. Afterwards, we carried out the assay of the resulting fractions in chick biventer cervicis preparation. blocking activity and the venoms from São Paulo and Minas Gerais States were more active than those from Rio Grande do Sul. In spite of the evident diversity (2 90% of blockade at 20 llg/ml), ali the venoms induced dose-dependent and irreversible blockade, besides contractures, and inhibited the response to KCI. Fourteen out of sixteen venoms preserved ACh response at concentrations up to 20 llg/ml, after 120 min of incubation, even when blockade persisted. The Our results confirm the previous assumption that B. neuwiedi venom acts electrophoretic patterns showed a band that was present only in some of the six more active crude venoms. The other venoms didn't showed that bando The more potent venom inhibited the directly and indirectly stimulated mouse muscle as well as the directly stimulated chick muscle. At room temperature or in the absence of Ca++, the effect on evoked twitch-tension and KCI response was significantly reduced. Under indirect stimulation, chick muscles were more sensitive to venom activity than mouse preparations; under direct stimulation, mouse muscle was more sensitive. After fractionation, the neuromuscular activity was recovered in fractions P2 and P3, corresponding to p~aks 2 and 3 of the elution profile. These fractions induced a higher and faster twitch-tension blockade than crude venom, with total maintenance of ACh response. While P2 blocked totally the contracture to K", P3 caused a partia I blockade. At room temperature, the effect of both active fractions on twitch-tension and KCI response were reduced preferably at presynaptic sites, and at muscle cells. These actions are probably related to its enzimatic activity and they can vary according to the venom origino The venom neuromuscular activity is presumely due to one or more neurotoxic components that correspond to peaks 2 and 3 of the elution profile / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Ivan Sazima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:21:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Strussmann_Christine_M.pdf: 7559188 bytes, checksum: a5e1e8a066ac1602c891f9ca1e796c8a (MD5) Previous issue date: 1992 / Mestrado / Ecologia / Mestre em Ciências Biológicas