Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-28Bitstream added on 2014-06-13T21:00:38Z : No. of bitstreams: 1 mendes_rg_me_rcla.pdf: 2173784 bytes, checksum: da4f26247f298c7898f225180d206b86 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A diversidade das serpentes é ampla, com aproximadamente três mil espécies descritas. Esta diversidade é agrupada, tanto por evidências morfológicas como moleculares, em dois clados: Alethinophidia (~2660 espécies) e Scolecophidia (~400 espécies). Comparativamente aos Alethinophidia, poucos estudos foram realizados até o momento com Scolecophidia, estudos estes dificultados tanto pelos hábitos furtivos como pela raridade destas serpentes. O clado Scolecophidia é reconhecido por agrupar serpentes pequenas, com olhos vestigiais e hábito subterrâneo. Atualmente são reconhecidas cinco famílias: Anomalepididae, Gerrhopilidae, Leptotyphlopidae, Xenotyphlopidade e Typhlopidae. A família Typhlopidae possui ampla distribuição, ocorrendo em todos os continentes incluindo diversas formações insulares. Dos cinco gêneros que compõem a família, o genêro Typhlops é o mais especioso, com aproximadamente 145 espécies descritas que ocupam uma variedade de hábitats, desde desertos até florestas tropicais. Na América do Sul são reconhecidas oito espécies, sendo Typhlops brongersmianus a espécie que apresenta a maior distribuição, ocorrendo em diversos domínios morfoclimáticos. Em geral, vertebrados com estilo de vida subterrâneo são de difícil observação, e muitos aspectos de sua biologia evolutiva são mal compreendidos, incluindo o modo prevalente de especiação e os padrões de diversificação, bem como a estrutura geográfica da variabilidade genética e morfológica. Sendo assim, este trabalho visa dirimir estas lacunas tendo por objetivo estudar os padrões filogeográficos e demográficos, tentando contribuir para a elucidação da história evolutiva e taxonômica de T. brongersmianus bem como compreender as relações filogenéticas desta espécie com outras congêneres que ocorrem em... / The diversity of snakes is vast, with approximately three thousand described species. This diversity is grouped by both morphological and molecular evidence, in two clades: Alethinophidia (~2660 species) and Scolecophidia (~400 species). Compared to Alethinophidia, few studies have been conducted so far with Scolecophidia, these studies hampered both by furtive habits as the rarity of these snakes. The clade Scolecophidia group is recognized by small snakes with vestigial eyes and subterranean. Currently, five families are recognized: Anomalepididae, Gerrhopilidae, Leptotyphlopidae, and Xenotyphlopidade Typhlopidae. The family Typhlopidae has a wide distribution, occurring in all continents including several island formations. Of the five genera in the family, the genre is the most specious Typhlops, with about 145 described species that occupy a variety of habitats, from deserts to tropical rainforests. In South America are recognized eight species, Typhlops brongersmianus the species with the widest distribution, occurring in various areas morphoclimatic. In general, vertebrates with underground lifestyle are difficult to observe, and many aspects of their evolutionary biology are poorly understood, including the prevalent mode of speciation and diversification patterns and the geographical structure of genetic and morphological variability. Thus, this study aims to resolve these shortcomings have been studying the phylogeographic and demographic patterns, trying to contribute to the elucidation of evolutionary history and taxonomic T. brongersmianus well as understand the phylogenetic relationships of this species with other congeners that occur in sympatry in South America To do this, we performed an extensive analysis of morphological revision through a survey of meristic and morphometric characters, totaling... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1763_1.pdf: 7224900 bytes, checksum: a45df66ab6cb50efe0d902c354613b7e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Serpentes mantidas em cativeiro estão susceptíveis a diversas alterações cutâneas, incluindo descoloração das escamas devido a múltiplos fatores. O presente trabalho se propôs analisar a pele de 15 serpentes da subespécie Crotalus durissus cascavella mantidas em cativeiro na UFPE durante 31 meses, investigar a possibilidade de contaminação bacteriológica desses animais, bem como comparar ultraestruturalmente as referidas lesões com escamas pretas, brancas e marrons de espécimes saudáveis. Dentre os 15 animais experimentais, sete já apresentavam lesões acrômicas cutâneas no início do estudo, as quais foram primeiramente visualizadas em cativeiro. Tanto as amostras de sangue quanto às de pele foram submetidas aos procedimentos de investigação bacteriológica e análise em microscopia eletrônica de transmissão, respectivamente. Ao final da análise, o número de serpentes enfermas aumentou de forma linear, atingindo 14 animais; enquanto o número de lesões do plantel aumentou exponencialmente (618%). A maioria das lesões foi observada no dorso da região rostro-cloacal das serpentes, surgindo em média com 0,45 cm² e alcançando 20,70 cm². As lesões cutâneas em sua fase inicial apresentaram-se discrômicas, originando-se na borda e entre as escamas e se expandindo horizontalmente, principalmente, na região dorsal. Os resultados das análises do soro das serpentes descartaram a possibilidade de contaminação por bactérias do gênero Treponema. Os resultados ultraestruturais das escamas controles evidenciaram diferenças no perfil epidérmico-dérmico de acordo com a coloração das mesmas, variação na densidade de melanóforos e a presença de guanóforos restritos a derme nas escamas marrom e branca. Nas escamas acrômicas observou-se desarranjo nas células da epiderme, destruição nuclear progressiva dos melanócitos epidérmicos e dérmicos, a presença de corpúsculos de inclusão intranucleares semelhantes a colônias virais e diversas partículas intranucleares e intracitoplasmáticas em células epidérmicas anucleadas. Os resultados revelam um processo crônico de despigmentação, semelhante ao vitiligo, que pode ter sido causado por um agente viral

Orientador: Sergio Marangoni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T03:14:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_MaristelaFreitas_D.pdf: 2808897 bytes, checksum: 76995e83de7c8efb20af2307e7a092b9 (MD5) Previous issue date: 1995 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Julia Prado Franceschi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_RejaneMariaLirada_D.pdf: 35252135 bytes, checksum: d8fa4a7fb76a10643309ff440ecc76fc (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Este trabalho trata do estudo farmacológico do veneno de Bothrops leucurus, conhecida como jararaca-do-rabo-branco. Objetivou-se caracterizar suas atividades bioquúnicas e imunobiológicas, como forma de avaliar o grau de soroproteção conferido pelos anti-venenos produzidos no Brasil e anti-B. leucurus, produzido na Argentina. Utilizou-se venenos de duas regiões geográficas da Bahia (Região Metropolitana do Salvador - RMS e Sul/Sudeste baiano - SB) e de machos e remeas, a fim de se estabelecer possíveis variações geográficas e sexuais. Procedeu-se a determinação da dosagem protéica, perfil cromatográfico e eletroforético, das atividades tóxica, proteolítica, edemaciante, hemorrágica, necrosante, defibrinante, pró-coagulante, miotóxica e sobre a junção neuromuscular, caracterização imunoquúnica e neutralização das atividades biológicas da peçonha, frente aos soros antibotrópico-crotálico (SABC) do Instituto Butantan (IB), Instituto Vital Brazil (IVB), Fundação Ezequiel Dias (FUNED) e Soro anti- B. leucurus do Instituto Carlos Malbrán. O perfil eletroforético do veneno caracterizou-se pela presença de 4 bandas e o perfil cromatográfico por 7 picos, sendo semelhantes nos diferentes pools. Houve variação regional e sexual, nas atividades biológicas, já que o veneno das serpentes do SB apresentou atividades tóxica, hemorrágica, necrosante e miotóxica maior que da RMS, no entanto, a atividade coagulante desta última foi maior que o da primeira. O veneno das remeas foi mais coagulante que o dos machos. Todas as amostras induziram mionecrose, caracterizada por "balonização", vacuolização, lesões "delta", hipercontração, condensação das miofibrilas e áreas de degeneração muscular. As amostras, em concentrações a partir de 50 J.!glrnl,inibirama transmissão neuromuscular, de maneira dose-dependente e irreversível(com exceção do veneno dos machos), devido às suas ações pós-juncionais. Na dose de 10 µg/ml,veneno de machos e remeas induziu aumento na amplitude das respostas musculares, demonstrando ação pré-sináptica. A peçonha de espécimens da RMS foi mais potente em provocar 50% do bloqueio da resposta contrátil que os da SB, assim como o veneno das remeas foi mais potente que dos machos. Observou-se inibição da resposta acetilcolínica nas preparações tratadas com 50 e 100 µg/mldas diferentes amostras e da amplitude da resposta muscular, de maneira dose-dependente e irreversível, com variação geográfica e sexual. O ELISA demonstrou que todos os pools apresentaram títulos de anticorpos frente a todos os anti-soros testados, sendo maiores frente ao soro específico, com exceção do pool da RMS, cuja titulação do soro específico foi equivalente a do SABC do IB. Dentre os soros inespecíficos,o do IB foi o que apresentou maior titulação, seguido do SABC da FUNED e do IVB. Houve variação na capacidade neutralizante dos soros frente às amostras, e o SABC/IB apresentou maior reatividade cruzada frente ao veneno de machos e da RMS. Os SABCIFUNED e IVB foram melhor reconhecidos pelo veneno de machos, da RMS e SB. O Westemblot demonstrou que o veneno desta espécie apresentou reação cruzada tanto frente ao soro anti-B. leucurus quanto ao SABC do IB e que a reação foi mais intensa quando utilizou-se o soro específico. Todos os anti-venenos foram capazes de neutralizar as atividades hemorrágica, necrosante e hemolítica das duas amostras de veneno, apesar da variação regional observada nesta soroneutralização / Abstract: The present work was a phannacological study of the action Bothrops leucurus venoro, popular known as "white-tailed lancehead". Venom effects (males and females from 1v1RSand South/Southeast region - SSR, Bahia, Brazil) were examined to establish geographical and sexual variability. The venom was characterized based on biochemical (total protein content, chromatographic and electrophoretic pattern), biological (lethal - LDso, proteolytic, venom-induced oedema - ED3o, haemorrhagic - MHD, necrotizing - MND, procoagulant - MCD, defibrinogenating- MDD, myotoxic and neurotoxic activities), imunochemical (ELISA, Westemblot) properties and neutralization of the toxic activities (haemorrhage, necrosis and coagulation). The antibothropic antivenom was provided Instituto Butantan, Instituto Vital Brazil and Fundação Ezequiel Dias (Brazil) and anti-Bothrops leucurus antivenom provided Instituto Malbrán (Argentina). The electrophoretic pattem showed 4 bands and chromatographic pattem 7 peaks without sexual and geographical variability. Lethal, haemorrhagic, necrotizing and myotoxic activities are more intense in snakes proceeding of the SSR than MRS. The coagulant activity of the female's venom is more coagulant than male. All samples induced myonecrosis characterized by swollen, vacuolization, "delta" lesions, myofilament hypercontraction and areas of the muscular damage. Results indicated that by indirect stimulation, B. leucurus venom induced neuromuscular blockade dose-dependent and is irreversible under concentration upper of 50 µg/ml, with exception of the male's venom (upper 100 µg/ml). This occurred probably due to postsynaptic action (depolarizing the cellular membrane, characterized for the severe contracture in 100 µg/ml e 200µg/ml concentrations) of the venom proceeding of the 1v1RSand SSR regions and moderated contracture in 200 µg/ml concentration of the males and females venoro. A males and females venom-induced effect on presynaptic activity was suggested by the marked increase in the twitch tension in 10 µg/ml concentration. The female's B. leucurus venom and proceeding of the 1v1RS region were more potent than male's venom of the SSR region in provocked 50% of the neuromuscular blockade (P<0.05) / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:43:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_SilviaElainedeSousaFerreiraCarvalhode_M.pdf: 20518302 bytes, checksum: 2c61842087a09767e6486f92531be39b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Venenos de serpentes do gênero Bothrops produzem efeitos locais (dor, edema, inflamação, hemorragia, necrose), e sistêmicos (coagulopatias, hemorragia, hipotensão/choque, insuficiência renal aguda). Neste estudo, avaliamos a ação hipotensora do veneno da B. altematus em ratos anestesiados e investigamos os mediadores envolvidos neste fenômeno. Ratos Wistar machos anestesiadoscom pentobarbital sódico (40 mg/kg, Lp.) foram canulados para medição da pressão arterial (artéria carótida) e administração de veneno e de drogas (veia femora!). A pressão arterial e a freqüência cardíaca foram registradas continuamente durante o experimento. O veneno, suas frações e as drogas foram dissolvidos em salina e administrados in bolus (0,1 ml) após 15 minutos para a estabilização da pressão. Em alguns experimentos o veneno foi dialisado utilizando-se membranas de celulose (limites de filtração de 2 kDa e 12 kDa) antes de ser administrado aos ratos. Para identificar a fração hipotensora, o veneno foi fracionado por gel filtração em resina Superdex 75 e as frações testadas na pressão arterial. O veneno causou hipotensão de ormadose-dependente(1-100j.lg/kg)com quedamáximade 69,8.:!::6,2%na maior dose (média:t desvio padrão, n=5) e com retorno da pressão a 80% dos níveis basais em 30 minoO pré-tratamento de ratos com atropina (antagonista muscarínico; 4 mg/kg, Lv.) ou glibenclamida (antagonista de canais de K+ ATP-dependentes; 50 mg/kg, Lv.) não alterou de forma significativa a hipotensão causada pelo veneno (100 j.lg/kg, Lv.). Por outro lado, o N'úJ-L-nitro-argininameti! éster (L-NAME, 20 mg/kg, Lv.), inibidor da biossíntese de óxido nítrico (NO), reduziu a hipotensão máxima causada pelo veneno (100 j.lg/kg) de 69,8.:!:6,2%para 29,1.:!::16,6%(n=5, p<0,05). Ratos prétratados com captopril (2 mg/kg), um inibidor da enzima conversora da angiotensina e potencializador do efeito da bradicinina, apresentaram acentuação da hipotensão máxima causada pelo veneno (50 j.lg/kg) de 51,2:t5,5% para 80,8:t9,4% (n=5, p<0,05). A indometacina (inibidor da ciclooxigenase, 10 mg/kg, Lv.) causou pequena redução na hipotensão máxima, e potencializou a recuperação da pressão para níveis basais; também aumentou a resistência dos ratos a doses maiores. A pré-incubação do veneno com antiveneno comercial aboliu totalmente a atividade hipotensora enquanto que a administração separada do antiveneno antes ou após o veneno não afetou a hipotensão subseqüente. O veneno dialisado produziu hipotensão de 46,9::t6,8% e 30,3::t5,5% com a dose de 100 ~g/kg após diálise em membranas com limites de filtração de 2 kDa e 12 kDa, respectivamente (p<0,05 comparados à queda de 69,8:!:6,2% com veneno não dialisado). Das frações obtidas por gel filtração do veneno, nenhuma sozinha (100 ~g/kg) reproduziu o efeito observado com o veneno total. Na combinação de frações, apenas as frações 2 e 4 reproduziram o quadro hipotensor do veneno, sendo que a fração 4 potencializou a fração 2. A ação da fração 2 também foi potencializada (p<0,05) pelo captopril enquanto que a fração 4 potencializou (p<0,05) a hipotensão causada pela bradicinina (1 mg/kg, Lv.). Estes resultados mostram que o veneno da B. altematus produziu resposta hipotensora dose-dependente em ratos que foi parcialmente mediada por NO, o qual pode ter sido liberado pela bradicinina proveniente da atividade cininogênica do veneno e presente na fração 2. A ação potencializadora da fração 4 sugere a presença de peptídeos potencializadores da bradicinina no veneno. Metabólitos do ácido araquidônico parecem estar envolvidos mais na manutenção da hipotensão do que na queda inicial. A via muscarínica e os canais de K+ATPdependentes parecem não estar envolvidos na hipotensão induzida pelo veneno / Abstract: The venoms of Bothrops snakes produce systemic effects characterized by disseminated bleeding, coagulopathies, shock and acute renal failure. In this study, we investigated the mediators involved in hypotension induced by Bothrops altematus snake venom. Male Wistar rats anesthetized with sodium pentobarbital were cannulated for measurement of blood pressure and heart rate, and for administration of drugs and venom. Venom (1-100 j.!g/kg) produced dosedependent hypotension with no effect on heart rate; a higher dose (200 j.!g/kg)also produced progressive cardiac depression. L-NAME attenuated the venom-induced hypotension whereas captopril potentiated the fali in blood pressure. Indomethacin enhanced the recovery to normal values and prolonged the survival of rats at venom doses up to 200 og/kg, but atropine and glibenclamide had no effect on the hypotensive response. Preincubating venom with commercial antivenom abolished the hypotensive activity. Fractionation of venom by gel filtration chromatography resulted in four peaks, of which only peaks 2 and 4 in combination reproduced the hypotension caused by whole venom. Peak 2 was also potentiated by captopril while peak 4 potentiated the response to bradykinin. These results indicate that the hypotension produced by B. altematus venom is mediated partly by nitric oxide whose formation may be stimulated by bradykinin and potentiated by captopril. Arachidonic acid metabolites may contribute to sustaining the hypotension whereas muscarinic receptors and ATP-dependent K+channels are not involved. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-25T20:52:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Acconci_Cesar_M.pdf: 4878752 bytes, checksum: e676df1bdd00cf82ca88caa85c4d33f2 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Apesar das medidas preventivas serem tomadas durante as etapas de produção ou purificação de soros hiperimunes, esses podem vir a ser contaminados com endotoxinas (ET), um tipo de pirogênio liberado pela parede de bactérias Gram-negativas. Endotoxinas produzem uma reação febril quando injetado em humanos ou outros mamíferos., podendo ocasionar a morte em alguns casos. Desta forma, a sua concentração em soluções a serem administradas parenteralmente deve ser reduzida a níveis toleráveis pelo organismo. Neste trabalho, para a remoção de ET de soros antiofidicos, utilizou-se o método de filatrção em membranas de afinidade com o aminoácido histidina imobilizado em fibras ocas de álcool poli etileno vinílico (PEV A). Histidina imobilizada neste tipo de suporte apresentou pseudo-bioafinidade por anticorpos (IgG) do soro e ET. Para evitar competições entre estas duas moléculas pelo ligante imobilizado, foi avaliada a adsorção de anticorpos do soro nestas membranas de afinidade a fim de determinar as melhores condições nas quais ET pudessem ser removidas sem implicar em adsorção significativa de anticorpos do soro antiofidico. As condições menos favoráveis para a adsorção de anticorpos ocorreram nas soluções tamponantes acetato a pH 6,0 e fosfato pH 6,5. Testes foram realizados para determinar qual destas soluções promoveria uma maior remoção de ET, porém em presença de tampão acetato, obteve-se uma redução mais significativa. Encontrada a solução que favoreceu a remoção deste pirogênio, estudou-se a influência das variáveis QF/Qr (vazão do filtrado/vazão da alimentação) e da concentração inicial de ET na etapa de retenção através de um planejamento estatístico experimental. A razão QF/QI não apresentou efeito significativo na retenção de ET e a quantidade deste pirogênio retida nas membranas aumentou de acordo com a sua concentração inicial na solução (quanto maior a concentração de ET (1000 EU/rnL), maior a quantidade retida por unidade de área de membrana (190 EU/cm2». A remoção média de ET alcançada no processo foi de 92%, sequida de uma recuperação total de anticorpos em tomo de 90%. Constatou-se também que a quantidade máxima de adsorção das membranas de afinidade não foi atingida e que para baixas concentrações de pirogênios, a remoção foi quase total (99%), enquanto que o aumento na concentração de anticorpos na solução não provocou alterações na quantidade de ET removida / Abstract: Contamination by pyrogens may occur during the production and purification of hiperimum serum. Endotoxins (ET) or lipopolysaccharides (LPS) are a kind of pyrogens present at the cell wall of gram-negative bacteria. LPS are able to induce fever reaction when injected in to mammals. In some cases, even death may occur. Thus, endotoxins should be removed to be reduced to tolerable levels for the host organismo There are several methods for ET removal as ultrafiltration, adsorption on activated charcoal and on ion-exchange resins, and chromatography. In the present study, adsorption on histidine-linked hollow fiber membrane (His-PEVA) was used to remove ET from anti snake serum. Immobilized histidine presents pseudobioaffinity to horse antibodies (IgG) and to ET. The adsorption of serum IgG in the His-PEV A membranes was analysed to determine the best conditions for ET removal without a significant adsorption of antibodies. The lowest adsorption of IgG was obtained with acetate (pH 6,0) and phosphate (pH 6,5) buffers. Both conditions removed LPS, but the highest efficient was found to acetate buffer. This buffer was used to determine the optimal combination of ET concentration and ratio (QF,/QI) to reach high LPS removal without significant loss of IgG. Removal of 92% of ET and recuperation of90% of IgG was obtained with this processo In low pirogen concentrations, the remotion was 99% and higher antibodies concentrations didn't induce changes in the quantity of removed ET / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador : Aldo Focesi Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T00:42:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ogo_SatieHatsushika_D.pdf: 5032096 bytes, checksum: 329361bf2d7474504add3e156ab07a61 (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: O estudo de hemolisados de H.modestus e L.miliaris, duas serpentes aquáticas com diferentes graus de adaptação a esse ambiente mostraram por focalização isoelétrica em gradiente de sacarose (intervalo de pH do anfólito: 7,0 - 9,0), 3 e 5 componentes de hemoglobina. A pureza dos componentes foi controlada por técnica de imunodifusão dupla em gel de agarose. As propriedades funcionais foram estudadas com solução de hemoglobina, em ausência e em presença de ligantes fisiológicos e não fisiológicos. Na ausência de moduladores, as hemoglobinas de H.modestus apresentaram maior afinidade pelo oxigênio do que de L.miliaris, tendo valores de ?P IND. 50?, 1,0mm de Hg e 1,41mm de Hg respectivamente, em pH 7,0. Em presença de fosfatos orgânicos tais como ATP, GTP, 2,3DPG e IHP, esses valores tornaram-se maiores: 8,95, 10,0, 4,16 e 25,48mm de Hg em H.modestus e 17,81, 16,98, 9,11 e 25,70mm de Hg em L.miliaris, indicando menor afinidade Hb-?O IND. 2?. O efeito Bohr passou de -0,07 na hemoglobina desionizada de H.modestus a -0,38 e a -0,55 na presença de GTP e ATP respectivamente e na L.miliaris, de -0,30 na hemoglobina desionizada a -0,60 na presença de GTP e a -0,90 na presença de ATP. Entre os ânions polifosfatos, apenas o ATP e o GTP parecem ser fisiologicamente importantes nas serpentes, visto que apenas esses nucleosídeos trifosfatos foram encontrados no sangue das serpentes, em nossas determinações por cromatografia em Dowex 1-?X IND. 8?... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The study of the hemolysate of H.modestus and L.miliaris, two water snakes with different degrees of aquatic adaptations, by isoelectric foccusing using a pH gradient between 7,0 and 9,0 showed 3 and 5 haemoglobin components respectively. The homogenity of the components was checked by double immunodifusion in agarose gel. The functional properties were studied with haemoglobin solutions either in the presence or not of physiological and non physiological ligands. Stripped haemoglobin of H.modestus presented higher oxygen affinity than that of L.miliaris, where ?P IND. 50? values found were 1,0mm Hg and 1,41mm Hg respectively, in pH 7,0. In the presence of organic phosphates such as ATP, GTP, 2,3DPG and IHP, these values increased, showing lower oxygen affinity: 8,95mm Hg, 10,0mm Hg, 4,16mm Hg and 25,48mm Hg respectively in H.modestus and 17,81mm Hg, 16,98mm Hg, 9,11mm Hg and 25,70mm Hg in L.miliaris. The Bohr effect increased from -0,07 to -0,38 and -0,55 in the presence of GTP and ATP in H.modestus and from -0,30 in stripped haemoglobin to -0,60 in the presence of GTP and to -0,90 in the presence of ATP in L.miliaris. Among polyphosphate anions studied, ATP and GTP seems to be physiologicaly important, since only these nucleotides were found by Dowex 1-?X IND. 8? chromatography determination... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Tese (livre-docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T01:30:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ogo_SatieHatsushika_LD.pdf: 2059896 bytes, checksum: 647191a2a16e40bc2fc188b51087c98f (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: As serpentes aquáticas Helicops modestus e Liophis miliaris apresentaram nos hemolisados totais 3 e 5 componentes respectivamente que pareceram ser formas diferentes da mesma hemoglobina. As curvas de equilíbrio com oxigênio da hemoglobina "stripped" de ambas as serpentes mostraram alta afinidade pelo oxigênio, de cerca de 1,0 mm Hg em pH 7,0, pequeno efeito Bohr alcalino, cerca de -0,7 em H. modestus e -0,30 em L. miliaris bem como baixa cooperatividade (nH cerca de 1,0) e pronunciado efeito de fosfatos orgânicos sobre ambos, afinidade pelo oxigênio e efeito Bohr. Assim, os valores de P50 encontrados em presença de efetor alostérico como ATP foram 17,8 mm Hg e 8,93 mm Hg, os valores do efeito Bohr foram cerca de-0,90 e -0,55 em Hb de L limiaris e H. modestus, respectivamente. Os valores dos coeficientes de Hill em pHs menores que 7,5 foram cerca de 2,0, enquanto que em pHs maiores foram de cerca de 1,0 mostrando ausência de cooperatividade entre as sub-unidades nestas condições...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The complete abstract is avaiable with the full eletronic digital theses or dissertations / Tese (livre-docencia) - Univer / Bioquimica / Livre-Docente em Ciencias Biologicas

Orientador : Aldo Focesi Jr / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T08:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BonillaRodriguez_GustavoOrlando_D.pdf: 3394092 bytes, checksum: dc7551f8bd66cbe33cc0f1a289f744b7 (MD5) Previous issue date: 1992 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Lucilene Delazari dos Santos / Banca: Nanci Nascimento / Resumo: A giroxina isolada do veneno de Crotalus durissus terrificus apresenta atividades coagulante e neurotóxica, caracterizada pelo "rolamento em barril". É uma serinoprotease do tipo trombina-símile que tem a capacidade de converter o fibrinogênio em fibrina. Visando a atenuação destas atividades, a irradiação com 60Co aparece como uma importante ferramenta. O presente estudo teve por objetivo isolar e purificar a giroxina e avaliar o efeito da irradiação com 60Co sobre suas atividades coagulante e tóxica. O isolamento da giroxina envolveu duas etapas cromatográficas: gel filtração em coluna Sephadex G-75 e afinidade em coluna Benzamidina-Sepharose 6B. O alto grau de pureza foi confirmado por RP-HPLC C2/C18 e pela análise eletroforética, que revelou uma massa molecular de aproximadamente 30 kDa. A giroxina nativa catalisou a hidrólise dos substratos cromogênicos S-2238 e S-2288, demonstrando tratar-se de uma serinoprotease pertencente à subclasse das enzimas trombina-símile, estável em diferentes pHs (5,5 a 8,5), sensível aos metais Mn2+ e Cu2+ e aos inibidores de serinoprotease PMSF e benzamidina. Apresentou melhor atividade coagulante sobre o plasma humano entre os pHs 6,0 e 7,4. A irradiação da giroxina nas doses de 0,5; 1,0 e 2,0 kGy anulou completamente suas atividades coagulante e tóxica. Os ensaios de toxicidade in vivo mostraram apenas alterações comportamentais sem demonstrar o rolamento em barril. Este fato sugere que as toxinas purificadas são mais sensíveis à irradiação, pois não há proteção mútua entre as proteínas presentes no veneno total. A giroxina nativa também não causou o bloqueio da contração neuromuscular in vitro sugerindo que a sua ação não tem efeito sobre o sistema nervoso periférico nas concentrações utilizadas / Abstract: Gyroxin isolated from Crotalus durissus terrificus venom presents coagulant and neurotoxic activities. It belongs to the thrombin-like enzyme group capable of converting fibrinogen into fibrin. To reduce these toxic activities, the irradiation with Cobalt-60 appears to be an important tool. The present study was carried out in order to isolate and purify the gyroxin and evaluate the effects of irradiation with Cobalt-60 on coagulant and toxic activities. The gyroxin isolation consisted of two chromatographic steps: gel filtration (Sephadex G-75) and affinity (Benzamidine-Sepharose 6B). The high purity level of gyroxin was confirmed by RP-HPLC C2/C18 and electrophoretic analysis that showed a molecular weight of 30 kDa. The native gyroxin hydrolyzed the chromogenic substrates S-2238 and S-2288, indicating that this enzyme is a serine proteinase that belongs to the group of thrombin-like enzymes, stable when submitted to pHs from 5.5 to 8.5 and inhibited by Mn2+, Cu2+, PMSF and benzamidine. It was capable of coagulating human plasma at pH 6.0 and 7.4. The gyroxin irradiated at 0.5, 1.0 and 2.0 kGy doses neutralized the coagulant and toxic activities. The in vivo toxic study showed only behavioral alterations with no barrel rotation. This fact suggests that purified toxins are more sensitive to the irradiation because they e mutual protection with the other proteins present in the total venom. The native gyroxin was not able to block in vitro neuromuscular contraction, suggesting that the action of gyroxin, in the concentration used in this study, has no effect on the peripheral nervous system / Mestre