A associação lipídio/citocromo c é importante e deve ser estudada, pois repercute na atividade peroxidática da proteína abordada e pode contribuir para o processo apoptótico, ou morte programada da célula, e também desempenha um papel significativo na cadeia respiratória. A natureza e a especificidade da interação do citocromo c com bicamadas lipídicas têm sido bastante investigadas ultimamente, mas informações detalhadas e precisas sobre tais assuntos ainda não existem. É aceito que ocorre primeiramente uma interação eletrostática entre a proteína citocromo c e as membranas fosfolipídicas. Em seguida, há uma interação hidrofóbica. Entretanto, ainda não é bem compreendido o papel da cadeia fosfolipídica. A associação do citocromo c com membranas lipídicas induz mudanças no estado de spin do átomo de ferro. A interação entre as vesículas carregadas e o citocromo c induz mudanças estruturais na proteína, as quais são refletidas no seu centro ativo, ou grupo heme. As mudanças do campo cristalino no sítio do ferro hemínico de forte para fraco são acompanhadas por mudanças do estado de spin de baixo para alto, respectivamente. Neste trabalho, estuda-se sistematicamente a natureza da interação entre o citocromo c e a cadeia fosfolipídica. As mudanças estruturais no grupo heme foram correlacionadas com a natureza do lipídio, ou seja, com a carga da cabeça e com o tamanho e o tipo da cadeia fosfolipídica. Foram utilizados treze lipídios diferentes, naturais e sintetizados, com cabeças polares negativas e neutras e com cadeias carbônicas saturadas e insaturadas de diferentes comprimentos. Para tal investigação, utilizamos as técnicas: Ressonância Paramagnética Eletrônica (RPE) Onda Contínua (CW) e Pulsada (PW) e Dicroísmo Circular Magnético (MCD). As técnicas enunciadas avaliam as mudanças de estado de spin e a simetria do citocromo c nos seus estados férrico e ferroso. A interação lipoprotéica lipídio/citocromo c foi avaliada com lipídios diferentes, inclusive com o lipossomo PCPECL, que mimetiza a membrana interna da mitocôndria nos eucariontes. A partir dos resultados experimentais, sugerimos um modelo para esse tipo de associação. / This association lipid/cytochrome c is interesting to study in order to understand the peroxidase activity of this protein, that plays an important role in the respiratory chain and in the apoptosis process or the programmed cell death. The nature and specificity of the interaction of cytochrome c with lipid bilayers have been major goals in recent studies, but detailed information on that issue is not yet widely available. In this regard, it is generally accepted that the electrostatic interaction is an important factor in the association of cytochrome c with phospholipid membranes, followed by a hydrophobic interaction. However, the role played by the phospholipid chain is not well understood. The association of cytochrome c with negative membranes induces a change in the heme iron spin state. The interaction between the charged vesicles and cytochrome c leads to structural changes in the active central or heme group. The changing of the crystalline field of the heme iron from strong to weak is accompanied by spin states changes from low to high spin, respectively. These facts concerned us to investigate more systematically the nature of the interaction between cytochrome c and the phospholipid chains. The lipid-induced effects in the heme iron crystalline field are correlated to the nature of the charged head group and to the size and type of the phospholipid chain. Thirteen different lipids, nature and synthetic, were used, with negative and neutra1 polar head group and saturated and unsaturated acyl chains with different length. This work investigates the change of heme iron spin state and symmetry of ferric cytochrome c using Continuous Wave (CW) and pulsed (PW) Electron Paramagnetic Resonance (EPR) and Magnetic Circular Dichroism (MCD) techniques. These techniques analyze the spin state change and the symmetry of the iron cytochrome c in its ferric and ferrous states. The effect of the different lipids were analyzed, including PCPECL membrane that mimetics the inner mitocondrial membrane in eukaryotes.

Nos últimos anos, um estilo de vida celular vem ganhando destaque no mundo científico: o biofilme. O biofilme é uma comunidade celular em que as células permanecem aderidas a um substrato e envoltas em uma matriz de biopolímeros. Bactérias no estado de biofilme possuem algumas características alteradas, como o aumento da resistência a antibióticos e a facilidade de troca de genes de resistência, sendo um grande inconveniente na área médica e industrial. O patógeno humano Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram-negativa causadora de infecções associadas a pacientes que apresentam o sistema imune debilitado, sendo muito comum em casos de fibrose cística. Além disso, P. aeruginosa é um organismo modelo no estudo de formação de biofilme, podendo produzir três tipos distintos de exopolissacarídeos: alginato, PSL e PEL. Devido ao pouco conhecimento do polissacarídeo PEL, a cepa P. aeruginosa PA14 vem sendo amplamente estudada, uma vez que essa é a única cepa em que PEL é o principal polímero responsável pela estabilidade da matriz de polissacarídeos. No processo de produção e exportação de PEL, sete proteínas são necessárias: Pel(A-G). Segundo predições computacionais e comparações com outros tipos de complexos biossintéticos de exopolissacarídeos, um modelo de arranjo molecular das proteínas Pel foi proposto, embora algumas proteínas não possuam uma função bem determinada no processo de síntese de PEL. Nesse contexto, o trabalho buscou estudar as proteínas envolvidas na formação de PEL para a melhor elucidação do mecanismo de ativação, produção e exportação desse polissacarídeo, com destaque para a enzima glicosiltransferase PelF e a investigação de uma possível interação de PelF com a proteína reguladora de produção do polissacarídeo, PelD, e a transportadora de membrana interna, PelG. Foram realizados diversos testes de interação entre PelF, PelG e construções solúveis de PelD por cromatografia de exclusão molecular, crosslinking e pull-down que não apresentaram interações entre tais construções, indicando que frações de membrana de PelD ou outros parceiros de interação podem ser necessários para a formação do complexo de síntese e exportação de PEL da membrana interna. Adicionalmente, mutantes de PelD sítio-dirigidos foram construídos em P. aeruginosa PA14 e tiveram sua capacidade de formação de biofilme avaliadas para investigação do mecanismo de ativação de PelD. A diminuição da formação de biofilme de mutantes de algumas regiões de PelD como a hélice S (resíduos 158-176), o core hidrofóbico ocupado pela hélice S e resíduos que estabilizam a ligação de c-di-GMP nos levou a propor um mecanismo de ativação desse importante regulador proteico de formação de biofilme em P. aeruginosa nunca descrito anteriormente. / In the last years, a cellular lifestyle has been in the spotlight in the scientific world: the biofilm. Biofilm is a cellular community in which cells are attached to a substrate and surrounded by a biopolymeric matrix. Bacteria in a biofilm lifestyle has some altered characteristics, as a higher antibiotics tolerance and facility in resistance genes exchange, turning them into a big problem in medical and industrial fields. The human pathogen Pseudomonas aeruginosa is a gram-negative bacterium which causes infections associated to patients with an impaired immune system, as frequently found in patients with cystic fibrosis. Moreover, P. aeruginosa is a model organism in biofilm formation studies, producing three distinct types of exopolysaccharides: alginate, PSL and PEL. Since there is few information about PEL polysaccharide, the strain PA14 has been broadly studied because this is the unique strain in which PEL is the main polymer that gives stability of the polysaccharide matrix. In the process of PEL production and exportation, seven proteins are required: Pel(A-G). Computational predictions and comparison with other similar exopolysaccharides biosynthetic complexes led to a model of molecular complex of Pel proteins, though some proteins do not have a clear role in the PEL synthesis process. In this context, the work aimed to study the proteins related to PEL synthesis for a better understanding of the mechanism of production and exportation of this polysaccharide, focusing on the glycosyltransferase PelF and the investigation of its possible interaction with PelD, the regulatory protein of the polysaccharide production, and PelG, the putative inner membrane transporter. Several interaction assays were performed with PelF, PelG and soluble constructs of PelD using size exclusion chromatography, crosslinking and pull-down. No interaction was detected, showing that membrane fractions of PelD or other interaction partners can be required to the inner membrane complex of synthesis and export of PEL. Additionally, site-directed mutants of PelD in P. aeruginosa PA14 were constructed to evaluate their biofilm formation ability and investigate PelD activation mechanism. Mutants in regions as S-helix (residues 158-176), hydrophobic core occupied by the S-helix and residues of c-di-GMP stabilization presented a decrease of biofilm formation compared to the wild type strain. Those results allowed us to propose an activation mechanism of this important regulator of biofilm formation in P. aeruginosa never described before.

Submitted by Lucelia Lucena (lucelia.lucena@ufpe.br) on 2015-03-13T17:37:58Z No. of bitstreams: 2 dissertacao Cristiane Araujo Simoes.pdf: 819117 bytes, checksum: 0a57c0b1fda36c45fbb123fbb3de1e94 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T17:37:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao Cristiane Araujo Simoes.pdf: 819117 bytes, checksum: 0a57c0b1fda36c45fbb123fbb3de1e94 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-05-02 / A pesquisa do vírus da Hepatite C (HCV) em outros fluidos corporais além do sangue é importante quando se avalia a existência de outras possíveis vias de transmissão, afinal cerca de 40% dos pacientes contaminados não apresentam história de exposição por via parenteral. A presença do RNA do HCV (RNA-HCV) na saliva de indivíduos infectados foi observada em alguns trabalhos e esta vem sendo sugerida como uma possível via de transmissão. No entanto, o papel dos fluidos orais na transmissão do HCV permanece controverso. O objetivo deste trabalho foi identificar o HCV-RNA na saliva e no soro de pacientes anti-HCV positivos. Foi realizado um estudo transversal com uma amostra de conveniência composta por 50 pacientes atendidos no Setor de Gastroenterologia do Hospital das Clínicas de Pernambuco (HC-UFPE) no período de junho a setembro de 2011. Amostras de sangue e saliva foram coletadas e processadas. O HCV-RNA foi extraído e uma alíquota utilizada na RT-PCR. O HCV-RNA foi detectado em 82% (41/50) das amostras de soro e em 0% das amostras de saliva. Pela metodologia empregada neste trabalho, não houve presença do HCV-RNA em saliva.

Orientador: Fernando Galembeck / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:11:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MirandaeBritto_AndreiaGoncalves_M.pdf: 3688378 bytes, checksum: 62a326372d2a0139c22b57dd76dbc498 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Dois catalisadores, denominados nesta dissertação por A e B, contendo 9% de paládio suportados em carvão ativado foram produzidos pelo mesmo método em escala industrial, porém em anos diferentes. O catalisador A apresentou uma atividade catalítica de hidrogenação do ácido cinâmico 40% inferior ao catalisador B e a hidrogenação de nitrato para formação de hidroxilamina, conhecido como teste Hyam, 31% inferior. Testes adicionais para caracterização dos dois catalisadores foram realizados, como determinação quantitativa do teor metálico via ICP-OES, área superficial e volume de poros calculados pelas técnicas propostas por Brunauer-Emmett-Teller (BET) e Barrett-Joyner-Halenda (BJH) através da isoterma de N2 e quimissorção de CO. Porém esses resultados foram insuficientes para justificar a diferença de atividade na hidrogenação do ácido cinâmico. Microscopia eletrônica de transmissão foi utilizada para investigar essa diferença catalítica. Com as imagens de campo claro e campo escuro obtidas, foi observado que o catalisador A continha aglomerados de cristalitos de paládio que se correlacionavam com as regiões de oxigênio presentes no carvão obtidas pelas imagens de mapeamento elementar. Porém um maior contraste no mapeamento de oxigênio do catalisador A foi observado confirmando a relação existente entre os grupos oxigenados e a dispersão dos nanocristais de paládio. Com as análises de Temperatura Programada de Dessorção (TPD) e Ponto Isoeletrônico (PI) foi constatado que o carvão A¿ continha grupos oxigenados mais ácidos que o carvão B¿. Estes resultados mostraram que o grau e padrão de oxidação do carvão usado como suporte têm grande importância na morfologia e propriedades finais dos catalisadores. / Abstract: Two catalysts, named in this dissertation A and B, containing 9% of palladium supported on active carbon were produced by the same method in an industrial scale, but in different years. Catalyst A had a catalytic activity of cinnamic acid hydrogenation 40% lower than catalyst B and nitrate hydrogenation to hydroxylamine formation, known as Hyam test, 31% lower. Additional tests for the characterization of the two catalysts were performed, such as metal content by ICP-OES, surface area and pore volume obtained from N2 isotherm and Barrett-Joyner-Halenda (BJH) and Brunauer-Emmett-Teller (BET) techniques and CO chemisorption. However, these results were insufficient to justify the difference in activity of cinnamic acid hydrogenation. Transmission electron microscopy was used in order to investigate this catalytic difference. Through the images of bright field and dark field obtained it was observed that the catalyst A contained clusters of palladium crystallites, which are correlated with the oxygen map present in the carbon obtained by energy-loss spectroscopy imaging (ESI). However, a marked contrast in oxygen map for the catalyst A was observed confirming the existing relationship among the oxygen groups and palladium nanocrystals dispersion. Analysis Temperature Programmed Desorption (TPD) and Isoeletric Point (IEP) measurements were performed on the carbon support and it was verified that carbon A¿ contained oxygen groups which are more acid than those in carbon B¿. These results demonstrated that the degree and oxidation pattern in the carbon used as support has great influence in the morphology and final proprieties of the catalyst. / Mestrado / Físico-Química / Mestre em Química

Orientador: Sara Terezinha Olalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T12:26:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borges_Luciene_D.pdf: 3990737 bytes, checksum: 7c865de830ecbe5f830e992e6c69fb2c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Estímulo mecânico é um dos principais eventos envolvidos na hipertrofia cardíaca que afeta vários componentes de vias de sinalização do miocárdio. Recentemente, um novo transcrito altamente expresso em músculo cardíaco, denominado de ARHGAP21, foi descrito como um membro da família de proteínas Rho GAP, que demonstrou atividade catalítica sobre Cdc42 e interação com ARF1, ARF6 e a-catenina, proteínas importantes do remodelamento do citoesqueleto e junções aderentes. No presente estudo, tivemos como objetivo analisar a expressão da ARHGAP21 em resposta ao estresse mecânico agudo em corações de ratos adultos, e sua associação com FAK e PKC?. Utilizando-se fracionamento subcelular, microscopia confocal e eletrônica, demonstramos que ARHGAP21 relocaliza-se das regiões nucleares e miofilamentos para linhas Z, discos intercalares e costâmeros de cardiomiócitos submetidos à sobrecarga de pressão, sugerindo que esta roteína pode desenvolver uma importante função no remodelamento cardíaco. Além do mais, ensaio de imunoprecipitação mostrou que ARHGAP21 interage com PKC? e FAK em ratos controle, submetidos à coarctação da aorta e espontaneamente hipertensos (SHR). Três diferentes regiões de FAK, contendo cauda de GST acoplada, foram utilizadas em ensaio de ligação in vitro, demonstrando que ARHGAP21 se liga à porção carboxi terminal de FAK. Além disso, ARHGAP21 associa-se à PKC? fosforilada em Thr410 em o-imunoprecipitados de extratos protéicos de ratos controle e SHR. Entretanto, ARHGAP21 associa-se apenas à FAK fosforilada em Tyr925 em SHR. Também foi verificado que PKC? é fosforilada por estímulo mecânico. Estes resultados sugerem que ARHGAP21 pode atuar como uma molécula sinalizadora ou proteína adaptadora das vias de sinalização de FAK e PKC? em cardiomiócitos, provavelmente desempenhando importante função durante estresse cardíaco / Abstract: Mechanical stimulus is one of the major events involved in cardiac hypertrophy, and affects components of essential myocardium signaling pathways. Recently, we described a highly expressed mRNA in the cardiac muscle as a member of the RhoGAP family of proteins, ARHGAP21, which demonstrated GAP activity over Cdc42 and interacted with ARF1, ARF6 and a-catenin important proteins of the cytoskeleton assembly and adherent junctions. In the present work, we aimed to analyze the expression of ARHGAP21 in response to acute mechanical stress in the adult rat heart and its association with FAK and PKC? proteins. By subcellular fractionation, confocal and immunoelectron microscopy, we demonstrated that ARHGAP21 is relocated from the nucleus to the plasma membrane, Z-lines and costameres of cardiomyocytes submitted to pressure overload conditions, suggesting that this protein may develop a role in cardiac remodeling. Furthermore, immunoprecipitation assay showed that ARHGAP21 interacted with PKC? and FAK in control rats, rats submitted to aortic clamping and spontaneously hypertensive rats (SHR). Using three different GST-tagged regions of FAK, we found that ARHGAP21 binds to the carboxyl terminal portion of FAK. Moreover, ARHGAP21 binds to PKC? phosphorylated on Thr410 in co-immunoprecipitates of protein extracts from sham control rats and SHR. However, ARHGAP21 only binds to FAK phophorylated on Tyr925 of SHR. We have also shown that PKC? is phosphorylated by mechanical stimuli. Altogether, these results suggest that ARHGAP21 may act as a signaling molecule or scaffold protein of FAK and PKC? signaling pathways in cardiomyocytes, probably developing an important function during cardiac stress / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Marcelo Alexandre Prado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-15T06:21:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RaquelGrandode_D.pdf: 1576825 bytes, checksum: 7999d2afafc08d24b6e5611694936446 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O presente estudo buscou aperfeiçoar e validar metodologias de análise de ácido ascórbico e flavonóides em geléias de frutas. A identificação e a quantificação do ácido ascórbico se deram por três formas: (1) método colorimétrico, utilizando o reagente 2,6- diclorofenol-indofenol, (2) Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, (3) Eletroforese Capilar. O primeiro e o segundo método foram aplicados em 10 geléias naturais. Em vista dos resultados obtidos, o fabricante modificou a formulação das geléias para aumentar a quantidade de ácido ascórbico. Posteriormente, seis novas geléias foram analisadas pelo segundo e terceiro método. Os resultados foram comparados entre si e a Eletroforese Capilar foi considerada mais adequada. O ácido ascórbico presente nas geléias variou de ¿não detectado¿ a 608 mg em 100 g de amostra. A identificação e a quantificação de flavonóides se deram por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência e também pela Eletroforese Capilar. Os flavonóides quantificados foram: (+)-catequina, (-)-epicatequina, rutina, narirutina, kaempferol, miricetina e quercetina. Os métodos mostraram boa aptidão para a análise em questão. A verificação da composição dos flavonóides nas amostras exige uma etapa extrativa complexa, com isso, o estudo englobou o aperfeiçoamento dessa extração visando resultados mais precisos. Os flavonóides foram encontrados em concentrações de até 23,3 mg por kg de geléia, sendo que a amostra acerola e maracujá foi a que apresentou menor quantidade total e a contendo acerola e rosela foi a de maior valor. Quanto à capacidade antioxidante, os testes foram realizados utilizado o radical livre difenilpicrazil-hidrazina (DPPH¿). Entre os compostos analisados, a quercetina foi aquela que apresentou maior capacidade antioxidante isolada. Foram realizadas combinações em pares dos antioxidantes estudados e apenas a composição de (+)-catequina com ácido ascórbico apresentou sinergismo. Reações antagônicas foram verificadas para as combinações, entre elas: (+)-catequina e (-)-epicatequina, (+)-catequina e rutina, (-)- epicatequina e rutina, (-)-epicatequina e ácido ascórbico. Das amostras analisadas, aquela que apresentou maior capacidade antioxidante foi a geléia de acerola com abacaxi / Abstract: The aims of this study were improving and validate methods to analyze ascorbic acid and flavonoids in fruit jellies. The identification and quantification of ascorbic acid occurred in three ways: (1) a colorimetric method, using the 2,6-dichlorophenolindophenol, (2) a method using the High Performance Liquid Chromatography and, (3) a method by Capillary Electrophoresis. The first and the second methods were applied in 10 natural jellies. In view of the results, the manufacturer modified the formulation of the jellies to increase de amount of the acid ascorbic. Later, six new jellies were analyzed by the second and the third methods. The results were compared with each other and the Capillary Electrophoresis was considered most appropriate. The ascorbic acid in the jellies varied between ¿not detected¿ and 608 mg per gram of sample, considering all samples. The identification and quantification of flavonoids occurred by High Performance Liquid Chromatography and Capillary Electrophoresis. The flavonoids quantified were: (+)- catechin, (-)-epicatechin, rutin, narirutin, kaempferol, myricetin and quercetin. Both methods showed good performance for this analysis. The composition verification of flavonoids in the samples requires a complex extraction step, and then, this study included the improvement of this extraction for more accurate results. The antioxidant capacity was analyzed employing the free radical diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH¿). Between the analyzed compounds, the quercetin was the one that showed the highest antioxidant capacity. Combinations were performed in pairs of antioxidant studied and only the composition of (+)-catechin with ascorbic acid showed synergism. Antagonistic reactions were verified to these combinations: (+)-catechin and (-)-epicatechin, (+)-catechin and myricetin, (+)-catechin and rutin, (-)-epicatechin and rutin, (-)-epicatechin and ascorbic acid, kaempferol and rutin, myricetin and rutin, myricetin and ascorbic acid. Between the samples, the acerola with pineapple was the one that showed the greatest antioxidant capacity / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Infecções por Neisseria meningitidis estão associadas a altos índices de morbimortalidade no mundo. Na Região da Grande São Paulo a Doença Meningocócica (DM) causada por Neisseria meningitidis sorogrupo C começou a se tornar prevalente em 2001 , representando, em 2003, 62,7% de todos os casos de DM sorogrupados sendo que aproximadamente 88,5% dessas cepas eram não sorotipados e não sorosubtipados (C:NST:NSST). Estes dados sugeriam que um fenótipo, C: NST:NSST, tinha emergido na Grande São Paulo e, considerando-se a importância histórica da doença na região, iniciamos o presente estudo com o objetivo de esclarecer a mudança na dinâmica da DM pela determinação das características fenotípicas e genotípicas destas cepas. Para tanto, analisamos por sorotipagem, tipagem das regiões Variáveis da PorA e PorB e do gene 16S RNA ribossomal, 753 cepas de N. meningitidis C isoladas de casos de DM provenientes da Grande São Paulo, no período de 1990 a 2003. Dado a impossibilidade de caracterização do novo fenótipo pelos anticorpos monoclonais disponíveis mundialmente, objetivamos também a produção de hibridomas produtores desses anticorpos para caracterização do fenótipo C:NST:NSST. Foram selecionadas duas linhagens celulares híbridas, produtoras de anticorpos monoclonais que reconhecem as proteínas PorA e PorB deste novo fenótipo. Entre as 255 cepas de N. meningitidis C inicialmente caracterizadas como NST:NSST, 75% (n=191) tomaram-se completamente sorotipadas como 23:P1.14-6. A análise da similaridade do gene 16S RNA ribossomal das cepas analisadas demonstrou um único padrão genético, sugerindo a clonalidade deste novo fenótipo. Os dados obtidos neste trabalho, demonstram a introdução, na Região da Grande São Paulo, de um novo clone de Neisseria meningitidis C apresentando o fenótipo C:23:P1.14-6 e que está sendo responsável pelo aumento dos casos de DM causada por este sorogrupo. / Neisseria meningitidis (Men) is an important cause of morbidity and mortality and is a leading cause of bacterial meningitis and septicemia in children and young adults in Brazil. Meningococcal disease caused by MenC started becoming the most prevalent serogroup in 2001, representing 62.7% of all MD cases serogrouped in 2003 in Greater Sao Paulo and approximately 88.5% of MenC isolates were nonserotypeable and non-serosubtypeable (NST:NSST). This data suggested that a novel invasive isolate (C:NT:NSST) had emerged in GSP, and considering the historical importance of MenC disease in the region, we initiated this study to better understand the dynamics of MD looking at the phenotypic and molecular characteristics of these isolates. To accomplish this goal, we characterized 753 MenC isolates recovered during the period of 1990 to 2003 by serotyping, PorS and PorA VR typing, 16S rRNA gene typing and produced new serotyping monoclonal antibodies (MAbs) to characterize the C:NST:NSST isolates. We were able to select two hybridoma cells that recognizes PorB and PorA proteins. Among the 255 strains initially characterized as NST:NSST, 75% (n=191) of them became completely serotyped as 23:P1 .14-6. Sy 16S RNA ribossomal typing, these strains showed the same pattern suggesting strain clonality. Our data demonstrate the introduction of a new clone of Neisseria rneningitidis C presenting the phenotype C:23:P1.14-6 and that is being responsible for the increase of the cases of DM caused by this serogroup in Great Sao Paulo.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os complexos trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+ (CNpy = 4-Cianopiridina, 1,4- dt = 1,4-ditiano), trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(pyS)]2+ (pyS = 4-mercaptopiridina) e trans- [Ru(CNpy)(NH3)4(Tio)]2+ (Tio = tionicotinamida) foram sintetizados e caracterizados por Cromatografia LÃquida de Alta EficiÃncia, anÃlise elementar, eletroquÃmica e espectroscopias eletrÃnica e vibracional. Os espectros de absorÃÃo eletrÃnica e os resultados de eletroquÃmica evidenciaram uma interaÃÃo do tipo π back-bonding do centro metÃlico RuII para os ligantes piridÃnicos. Os valores dos potenciais formais de meia onda (E1/2) observados para os complexos trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+, trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(pyS)]2+ e trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(Tio)]2+: 1,00, 0,67 e 1,03 V vs ENH, respectivamente, indicam a estabilizaÃÃo do estado reduzido do centro metÃlico em relaÃÃo ao complexo de partida trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(OH2)]2+ (E1/2 = 0,35 V vs ENH). Esse resultado indica, tambÃm, a forte capacidade π retiradora do ligante CNpy que, no caso do complexo trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+, à tÃo intensa que facilita comparativamente o processo de oxidaÃÃo do centro metÃlico. Podese concluir, portanto, que a capacidade π retiradora dos ligantes CNpy, pyS e Tio à similar. O deslocamento na freqÃÃncia de estiramento da ligaÃÃo C≡N do ligante Cnpy livre de 2239 para ∼2200 cm-1 apÃs coordenaÃÃo ao centro metÃlico [Ru(NH3)4]2+ nos espectros vibracionais indica que a coordenaÃÃo do ligante CNpy ocorre pelo grupamento nitrila. Para os ligantes pyS e Tio, a observaÃÃo das bandas atribuÃdas aos νC=S e νSH, respectivamente, indica que a coordenaÃÃo ocorre pelo Ãtomo de nitrogÃnio do anel piridÃnico. Os espectros SERS ex situ das superfÃcies modificadas com os compostos isolados permitem a classificaÃÃo destes como molÃculas modificadoras bifuncionais, onde o Ãtomo de enxofre dos ligantes pyS, 1,4-dt e Tio atuam como sÃtio de adsorÃÃo e o Ãtomo de nitrogÃnio piridÃnico do ligante CNpy atua como grupo funcional terminal. AlÃm disso, os resultados SERS sugerem uma conformaÃÃo trans para o complexo trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(pyS)]2+ e gauche para os complexos trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+ e trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(Tio)]2+ sobre ouro. A dependÃncia nas intensidades das bandas com o potencial aplicado aos eletrodos modificados ilustra o efeito π back-bonding dos Ãons metÃlicos dos adsorbatos inorgÃnicos, uma vez que observa-se uma relaÃÃo direta com os valores dos potenciais formais de meia onda dos complexos estudados. Os valores dos potenciais de dessorÃÃo redutiva observados para as SAMs dos complexos isolados refletem a capacidade π retiradora do ligante CNpy que se encontra na posiÃÃo para em relaÃÃo ao sÃtio de adsorÃÃo. Esse efeito à bem mais intenso no complexo trans- [Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+, uma vez que a capacidade de interaÃÃo π back-bonding do ligante 1,4-dt à significativamente menor que as dos ligantes pyS e Tio. Sugere-se, para esse complexo, uma oxidaÃÃo parcial do centro metÃlico o que implica em uma intensificaÃÃo da interaÃÃo σ com o ligante 1,4-dt (RuII-S) e, conseqÃentemente, um enfraquecimento da ligaÃÃo Au-S. A reaÃÃo hTE da metaloproteÃna cyt c foi observada em valor consistente com seu estado in natura indicando que as SAMs estudadas acessam satisfatoriamente o processo hTE do cyt c alÃm de evitar a desnaturaÃÃo desta proteÃna. A forma das curvas voltamÃtricas, entretanto, apresentou uma dependÃncia com a configuraÃÃo dos complexos sobre a superfÃcie. Curvas de melhor definiÃÃo foram obtidas com a SAM do complexo trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(pyS)]2+ que apresenta uma configuraÃÃo trans em relaÃÃo à superfÃcie. / Trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(L)]2+ type complexes, where CNpy (4- Cyanopyridine), L= 1,4-dt (1,4-dithiane), pyS (4-mercaptopyridine), and Tio (thionicotinamide), were synthesized and characterized by HPLC, microanalysis, eletrochemistry and vibrational and eletronic spectroscopies. The eletrochemical and eletronic absorption results are indicative of a π back-bonding interaction, L(nπ*) ← RuII(dπ) for which L is the pyS, CNpy and Tio ligands. The half-wave formal potentials (E1/2) observed for the trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(pyS)]2+, trans- [Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+ and trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(Tio)]2+ complexes: 1.00, 0.67 and 1.03 V vs NHE, respectively, are indicative of the stabilization of the metal in the reduced state comparatively to the start complex, trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(OH2)]2+ (E1/2 = 0.35 V vs NHE). This result indicates, also, the strong π withdraw capability of the CNpy ligand. The shift observed for the νC≡N mode from 2239 cm-1 in the vibrational spectra of the CNpy free ligand to ∼2200 cm-1 upon coordination suggests that the coordination occurs through the nitrile fragment. For the pyS and Tio ligands, the observation of the signals assigned to the νC=S and νSH modes, respectively, in the vibrational spectra os the complexes indicates that the coordination occurs through the nitrogen atom os the pyridine ring. The SERS ex situ spectra of the gold surfaces modified with the isolated complexes allow the classification of these species as binfunctional molecules in which the sulfur atom of the pyS, 1,4-dt and Tio ligands is the adsorption site and the nitrogen atom of the CNpy pyridine ring is the functional terminal group. Also, the SERS results point for a trans conformation for the trans- [Ru(CNpy)(NH3)4(pyS)]2+ complex and for a gauche configuration for the trans- [Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+ and trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(Tio)]2+ complexes on gold. The intensity dependence of some signals in the SERS spectra with the applie potential reflects the π back-bonding effect on surface since this behavior is observed to be strongly related to the E1/2 values of the complexes. The reductive desorption potentials of the SAMs formed with the isolated compounds reflects the π withdraw capability of the CNpy ligand. This effect is much more intense for the trans-[Ru(CNpy)(NH3)4(1,4-dt)]2+ complex since the π back-bonding interaction of the 1,4-dt ligand is lower than the CNpy, pyS and Tio ligands. The heterogeneous electron transfer reaction of the cytochrome c metalloprotein was satisfactorily assessed with the SAMs formed by the isolated complexes (E1/2 = 0.05 V vs Ag⏐AgCl⏐Cl-). The Best voltammetric response was observed with the SAM of the trans- [Ru(CNpy)(NH3)4(pyS)]2+ complex due to the trans conformation on surface.

Introdução: A estimativa de sobrevida de pacientes com HIV/aids aumentou após a terapia antirretroviral de alta potência: no entanto, a mortalidade por doenças hepáticas também cresceu. Objetivos: Estimar a probabilidade acumulada de sobrevida após o diagnóstico de aids entre pacientes coinfectados HIV/HCV e realizar análise exploratória para investigar fatores relacionados à sobrevida desses pacientes. Metodologia: Estudo de coorte não concorrente, utilizando sistemas de Informações: o de Agravos de Notificação, o de informação laboratorial e o de informação da vigilância epidemiológica do Centro de Referência e Treinamento DST/AIDS-SP, de pacientes com aids maiores de 13 anos, acompanhados no ambulatório geral. As variáveis estudadas foram: hepatite C, hepatite B, categoria de exposição, contagem de células T CD4+, faixa etária, escolaridade, cor, sexo e períodos de diagnóstico de aids: 1986 a 1993, 1994 a 1996, 1997 a 2002 e 2003 a 2010. Foi utilizado o estimador de Kaplan-Meier, o modelo de Cox e as estimativas das hazard ratio (HR) com os respectivos intervalos de confiança (IC 95 por cento ). Resultados: De um total de 2.864 pessoas incluídas, com idade mediana de 35 anos, 219 foram a óbito (7,5 por cento ). De 358 (12,5 por cento ) coinfectados, 159 (45,1 por cento ) eram usuários de drogas injetáveis (UDI) e de 2.506 não coinfectados, 96 (3,9 por cento ) eram UDI. A probabilidade acumulada de sobrevida entre coinfectados, a partir do diagnóstico de aids, foi 100 por cento aos 60 meses no período de 1986 a 1993; 27,8 por cento aos 168 meses no período de 1994 a 1996; 76,3 por cento aos 168 meses no período de 1997 a 2002 e 92,8 por cento aos 96 meses no período de 2003 a 2010. As curvas de sobrevida foram diferentes entre coinfectados e não coinfectados no período de 1994 a 1996 (log rank = 19,8; p < 0,001) e no período de 1997 a 2002 (log rank = 38,8; p < 0,001). No modelo de Cox multivariado, mostraram-se preditores de óbito, independentemente das outras variáveis: ter hepatite C (HR = 2,9; IC 2,1-3,9), ter hepatite B (HR = 2,5; IC 1,7-3,6), ter até 3 anos de estudo (HR = 2,3; IC 1,5-3,6), ter 50 anos ou mais de idade (HR = 2,1; IC 1,3-3,2). Ter diagnóstico de aids no período entre 1997 a 2002 mostrou-se fator de proteção ao óbito (HR = 0,4; IC 0,3-0,5). Conclusões: Coinfectados HIV/HCV apresentaram menor sobrevida quando comparado com não coinfectados nos períodos de diagnóstico de aids 1994 a 1996 e 1997 a 2002. A partir do período 1994 a 1996, observou-se aumento significativo na probabilidade acumulada de sobrevida entre coinfectados, sendo que no período 2003 a 2010, essa probabilidade foi semelhante entre coinfectados e não coinfectados, refletindo possível impacto do tratamento da hepatite C / Introduction: The estimated survival of patients with HIV/AIDS has increased after highly active antiretroviral therapy; mortality due to liver diseases, however, has also increased. Objectives: To estimate the accumulated probability of survival after AIDS diagnosis among HIV/HCV co-infected individuals and to perform an exploratory analysis to investigate factors related to the survival of these patients. Method: Non-concurrent cohort study, using data from the National Disease Reporting Information System, the laboratory and epidemiological surveillance information systems of the SP-STD Reference and Training Center-CRT, of patients over 13 years of age, followed at the general outpatient clinic. The following variables were studied: hepatitis C, hepatitis B, exposure category, T CD4+ cell count, age group, schooling, color, sex, and AIDS diagnostic periods: 1986 to 1993, 1994 to 1996, 1997 to 2002 and 2003 to 2010. Survival analysis was performed using the Kaplan-Meier estimator and the Cox model, with estimates of the hazard ratio (HR) and respective confidence intervals (95 per cent CI). Results: Of a total of 2,864 individuals included, with a median age of 35 years, 219 died (7.5 per cent ). Of the 358 (12.5 per cent ) HIV/HCV co-infected individuals, 159 (45.1 per cent ) were injecting drug users (IDU), and of the non-co-infected 2,506, 96 (3.9 per cent ) were IDU. The accumulated probability of survival among HIV/HCV co-infected individuals at 60, 168, 168 and 96 months as of AIDS diagnosis, was 100 per cent in the 1986 -1993 period; 27,8 per cent in the 1994-1996 period; 76,3 per cent in the 1997-2002 period; and 92,8 per cent in the 2003-2010 period. The survival curves were different between co-infected and non-co-infected individuals in the 1994-1996 (log rank = 19,8; p < 0,001) and in the 1997-2002 (log rank = 38,8; p < 0,001). In the multivariate model, regardless of other variables, the following were predictors of death: having hepatitis C (HR = 2.9; CI 2.1-3.9); having hepatitis B (HR = 2.5; CI 1.7-3.6); being 50 years old or over (HR = 2.1; CI 1.3-3.2) and having up to 3 years of schooling (HR = 2.3; CI 1.5-3.6). AIDS diagnosis between 1997 and 2010 was shown to be a protective factor for death (HR = 0.4; CI 0.3-0.5). Conclusions: HIV/HCV co-infected individuals had shorter survival, when compared to non-co-infected individuals in the 1994-1996 and in the 1997-2002 AIDS diagnostic periods. As of the 1994-1996 period, a significant increase in the accumulated probability of survival among HIV/HCV co-infected individuals was observed. In the 2003-2010 period, the probability was similar between co-infected and non-coinfected individuals, showing the possible impact of hepatitis treatment

Orientador: Maria Aparecida Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-12T09:12:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_PauloHenriquedaSilva_M.pdf: 952543 bytes, checksum: edad37345f0330f31e3c1fffddb3e0cf (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O processo convencional de secagem tem como principal objetivo a retirada de água do produto. Entretanto, na secagem de determinados alimentos como frutas, ocorre também a degradação de importantes nutrientes que devem obrigatoriamente estar presentes na alimentação humana. Dentre esses nutrientes está a vitamina C (ácido ascórbico) que além de evitar doenças como o escorbuto, desempenha no organismo a função de anti-oxidante biológico. Sendo assim, realizou-se um estudo da secagem de abacaxi com a modificação da atmosfera de secagem para se verificar a influência desta na cinética de degradação da referida vitamina. Esta matéria-prima (abacaxi) foi escolhida, por ser uma fruta tropical com significativa produção no Brasil e por possuir grande preferência do consumidor. Em uma etapa inicial, o estádio de maturação do abacaxi foi correlacionado com seu teor de sólidos solúveis, acidez titulável e conteúdo de vitamina C (ácido Lascórbico). Em seguida, os experimentos de secagem ocorreram em um secador com recirculação do gás de secagem, onde a composição deste foi modificada pela adição de etanol. A modificação da atmosfera de secagem promoveu uma evaporação mais intensa de água, o que reduziu o tempo de secagem, e reteve maiores teores de ácido L-ascórbico no produto seco. Determinou-se a cinética de degradação do nutriente para uma das condições estudadas e o modelo de Weibull ajustou adequadamente os dados. / Abstract: The water removal is the main objective of drying processes. evertheless, degradation reactions of important nutrients can occur during drying of foodstuffs since the products are exposed to high temperature for a long period. Among them is vitamin C (ascorbic acid), which avoids diseases like scurvy and plays the role of biological anti-oxidant. Thus, the objective of this work was to study the degradation kinetics of ascorbic acid during the drying of pineapple in both a normal and a modified atmosphere. Pineapple was chosen since it is a tropical fruit with a large production in Brazil with great acceptance by the consumers. In the first step, the soluble solids content, the titrable acidity and ascorbic acid content was determined and correlated with the pineapple ripening stage. Secondly, the drying experiments were carried out in a tunnel dryer in which the atmosphere was modified by the addition of ethanol. The presence of ethanol in the drying atmosphere promoted a more intense water evaporation compared to the conventional process, which reduced drying time. Higher ascorbic acid retention was observed in sample dried under modified atmosphere. Moreover, the degradation kinetics of ascorbic acid during drying of pineapple was determined and Weibull model was applied to fit the data. / Mestrado / Engenharia de Processos / Mestre em Engenharia Química