Orientadores : Lauro Tatsuo Kubota, Graciliano de Oliveira Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T21:27:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gil_EricdeSouza_D.pdf: 3719554 bytes, checksum: 4a5dbf00022a1f0cada99c229b3eac22 (MD5) Previous issue date: 2000 / Doutorado

Orientador : Michael Georges Albert Vincentz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:14:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kobarg_ClaudiaBandeira_M.pdf: 5569874 bytes, checksum: d8bc63a3af210b4a8a1791986eacb57e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O gene Opaco2 (02) é um fator de regulação da transcrição do tipo bZIP envolvido no controle da síntese de proteínas de reserva no endosperma do milho. Um cDNA de Arabidopsis thaZiana que codifica uma proteína do tipo bZIP homóloga ao fator de transcrição 02 de milho denominado BZ02Hl masic Leucine Zipper Opaque2 Homologous) foi isolado e caracterizado. A seqüência do gene BZ02Hl foi identificada nos bancos de dados do projeto genoma de Arabidopsis thaZiana. O gene BZ02Hl é composto por sete exons e seis íntrons e está presente em cópia única no genoma de Arabidopsis thaZiana. A estrutura do gene BZ02Hl, assim como a alta similaridade entre as seqüências do domínio bZIP de BZ02Hl e 02 confirmaram que BZ02Hl pertence à Fanulia Multigênica de 02. Transcritos de RNA mensageiro de BZ02Hl foram detectados em todos os tecidos investigados e a incidência ou ausência de luz sobre as plantas jovens pareceu não afetar a expressão do gene. O domínio bZIP da proteína BZ02Hl foi produzido em E. coZi para determinar sua especificidade de ligação ao DNA. O domínio bZIP de BZ02Hl reconhece seqüências relacionadas ao sítio GCN4 como GLM (5'- TGACTA-3') e a seqüência palíndrome (5'-GACATGTC-3'), além dos motivos G-box e, menos intensamente, C-box. A especificidade de ligação do domínio bZIP de BZ02Hl foi comparada com a da proteína 02 de Coix e as diferenças encontradas foram discutidas. / Abstract: The gene Opaque2 (02) encodes a bZIP transcription factor involved in storage protein synthesis control in maize endosperm. An Arabidopsis thaliana cDNA that encodes a bZIP protein homologous to the 02 transcription factor, named BZ02Hl (Basic Leucine Zipper Opaque2 Homologous) has been isolated and characterized. The BZ02Hl gene sequence was identified in the databases of the Arabidopsis thaZiana genome project. The BZ02Hl gene is composed of seven exons and six introns and is present as a single copy in the genome of Arabidopsis thaliana. The gene structure and the high sequence similarity of the bZIP domain shared by BZ02Hl and 02 deftned BZ02Hl as a member ofthe 02 multigene family. BZ02Hl mRNA was detected in alI tis sues analyzed, but no differences of the expression levels were observed when comparing young plants exposed to light or darkness. The bZIP domain ofBZ02Hl protein was expressed in E. coZi to begin the characterization of its DNA binding specificity. The bZIP domain of BZ02Hl binds to the GCN4-related DNA binding site sequences GLM (5'- TGACTA-3') and "palindrome" (5'-GACATGTC 3 '), as well as to the G-box and to a lesser extend to the C-box. The binding specificity of the BZ02Hl bZIP domain was compared to 02 Coix bZIP domain and the differences observed were discussed. / Mestrado / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Christine Hackel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T10:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_MarceloLima_M.pdf: 25882676 bytes, checksum: 47051f9bf317354ef0825ee8d0068829 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Dentre os fatores predisponentes ao câncer de próstata, existem evidências que suportam a hipótese de etiologia hormonal decorrente da ação dos andrógenos. A testosterona, sintetizada a partir do colesterol por uma série de reações envolvendo enzimas do citocromo P450, é convertida em dihidrotestosterona (DHT) sob ação enzimática da 5a-redutase (8RD5A2), em alguns tecidos andrógenos dependentes. A DHT liga-se ao receptor de andrógenos (AR), e o complexo DHT-AR promove a transcrição dos genes que contém elementos responsivos aos andrógenos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a distribuição de polimorfismos nos genes AR (CAG, 81/82, GGN) e SRD5A2 (Ala49Thr, VaI89Leu), de considerada relevância no estabelecimento do risco de câncer de próstata, em 200 doadores de sangue de duas cidades do estado de São Paulo e 92 pacientes com câncer de próstata, por PCR, PCR-RFLP e A80H. Nossos dados indicam que as freqüências desses marcadores assemelham-se aos resultados ob servados em populações Norte Americanas e Européias. Dessa forma, pode-se concluir que os fatores genéticos relacionados ao risco de câncer de próstata, considerados relevantes na maioria das populações, também podem ser aplicados a essas populações urbanas brasileiras, onde contribuições significativas de "pools" gênicos de europeus e de africanos podem ser encontradas. Em relação aos pacientes, os resultados obtidos sugerem que o número de repetições GGN parece ser o melhor marcador molecular para o risco de câncer de próstata / Abstract: There is evidence to support the hypothesis of hormonal etiology of prostate cancer involving androgen action. Testosterone is synthesized from cholesterol by a series of reactions involving cytochrome P450 enzymes and is converted to dihydrotestosterone (DHT), a more potent androgen, by 5a-reductase type 2 (SRD5A2) in many androgen-dependent target tissues. DHT binds to androgen receptor (AR), and the DHT-AR complex transactivates a number of genes with AR-responsive elements. The aim of this study was to evaluate the distribution of polymorphisms for the AR (CAG, S1/S2, GGN), and SRD5A2 (Ala49Thr, Val89Leu) genes that are considered of relevance for prostate cancer risk, among 200 individuais from two cities of the Sao Paulo state, and in 92 prostate cancer patients by PCR, PCRRFLP and ASOH techniques. Our data shows that the allelic frequencies of these markers are very similar to those described in North American and European populations. Thus, the prostate cancer genetic risk factors that are considered of relevance in most populations can also be taken into account in Brazilian urban populations, where significant contributions from European and African gene pools can be found. Concerning the prostate cancer patients, our results suggest that the number of GGN repeats seems to be the most reliable marker for prostate cancer risk / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-29T01:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PellegrinoJunior_Jordao_D.pdf: 19309699 bytes, checksum: 1f1f8e41e2e7506cbc57707ef2e868a6 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Com a finalidade de avaliarmos se as técnicas moleculares, atualmente utilizadas na genotipagem de grupos sanguíneos, poderiam ser utilizadas com segurança em uma população com antecedentes étnicos diversos, foram estudadas 250 amostras de DNA de doadores voluntários de sangue, atendidos no Centro de Hematologia e Hemoterapia da Unicamp, previamente fenotipadas para os sistemas Rh, Kell, Duffy e Kidd. Nossos resultados demonstraram concordância entre o fenótipo e o genótipo, indicando que os primers utilizados e que foram desenhados de acordo com as sequências genômicas obtidas de indivíduos com ancestrais caucasianos, podem ser empregados na determinação dos genótipos de grupos sanguíneos em populações com antecedentes étnicos diversos. No sistema Duffy, 66% das amostras genotipadas como FY B foram fenotipadas como Fy(b-), devido à mutação no promotor eritróide GATA, o que demonstra que estes indivíduos são de fato FY B e, expressam a proteína Fyb em outros tecidos. Com o objetivo ainda de correlacionar os resultados dos fenótipos e genótipos dos sistemas Rh, Kell, Duffy e Kidd, em pacientes politransfundidos, e pelo fato de acreditarmos que a genotipagem molecular pode ser uma alternativa importante na determinação do perfil antigênico de pacientes portadores de anemias, em esquema de transfusão de sangue fenotipado, selecionamos dez pacientes portadores de 'beta' talassemia homozigótica e quarenta pacientes portadores de anemia falciforme. A fenotipagem eritrocitária foi realizada por testes de hemaglutinação em gel, enquanto que a genotipagem foi realizada pelas técnicas de AS-PCR e PCR-RFLP. Discrepâncias entre o fenótipo e o genótipo foram encontradas em nove dos dez pacientes portadores de 'beta' talassemia (90%) e, em seis dos quarenta pacientes portadores de anemia falciforme (15%). Para uma maior segurança de nossos resultados, em todos os pacientes que apresentaram resultados discrepantes entre a fenotipagem e a genotipagem, novas análises foram realizadas empregando-se DNA extraído de células do epitélio bucal e, todas confirmaram os resultados previamente obtidos em DNA extraído de leucócitos de sangue periférico. Nestes casos, tivemos a oportunidade de realizar nova determinação do fenótipo nas amostras das unidades de sangue transfundidas e pudemos verificar que os fenótipos pertenciam aos doadores e não aos receptores. Nossos resultados sugerem que a genotipagem de grupos sanguíneos contribui, substancialmente,na qualidade da transfusão de sangue fenotipado, sobretudo em pacientes que necessitam de transfusões de repetição, como por exemplo, pacientes portadores de anemia falciforme ou thalassemia. Nos casos onde a discrepância de resultados foi identificada, a nova conduta hemoterápica possibilitou um aumento na sobrevida das hemácias transfundidas e um aumento nos níveis de hemoglobina dos pacientes. Em conclusão, a genotipagem de grupos sanguíneos deve ser recomendada em pacientes dependentes de transfusão pois permite a seleção correta do sangue a ser transfundido. Auxilia portanto, na prevenção da aloimunização podendo diminuir os efeitos de potenciais reações hemolíticas / Abstract: Accurate phenotyping of red blood cells (RBCs) can be difficult in transfusiondependent patients such as those with thalassemia and sickle celIs anemia because of the presence of previously transfused RBCs in the patient's circulation. Recently,the molecular basis associated with the expression of many blood group antigens was established. This allowed the development of a plethora of polymerase chain reaction (PCR)-based tests for identification of the blood group antigens by testing DNA. These new technologies complement phenotyping by overcoming some of the limitations of hemagglutination assays. These molecular assays were developed on the basis of DNA sequences of individuals of Caucasian ancestry. The present study addresses the concern that these genotyping assays may not be suitable to populations of highly diverse ancestry because of variability in intronic regions or because of unrecognized alleles. We determined both, phenotype and genotype for RHD, RH C/c, RH E/e, KEL 1/KEL 2, JK A/JK B, FY A/ FY B (nt -33) in 250 normal blood donors using PCR. Phenotype and genotype results agreed in 100% of the cases, indicating that molecular genotyping protocols can be effectively applied to populations with a highly diverse genetic background. Furthermore" genotyping for Duffy antigens provided information that could not be obtained by phenotyping. Essentially, 30.5 % ofthe donors with the FY B gene typed as Fy(b-) due to mutation in the GATA box. This information is very useful for the management of transfusion dependent patients. We also evaluated the usefulness of DNA genotyping for red blood cell antigens as a tool for the management of polytransfused patients with 'beta' thalassemia and Sickle Cell disease (SCD) to overcome the limitations of hemagglutination assays. We studied blood samples ftom 10 patients with 'beta' thalassemia and 40 SCD patients by hemagglutination and by Polymerase Chain Reaction/Restriction Fragment Length Polymorphism (pCR-RFLP) for the Rh (D, C/c, E/e), Kell, Kidd and Duffy systems. We found discrepancies between hemagglutination and DNA typing test results in nine of the ten patients with 'beta' thalassemia (90%) and in six of the forty SCD patients (15%). In these 15 patients, DNA typing results by PCR-RFLP from buccal cells were identical with those from peripheral blood leukocytes, ruling out a potential role for microchimerism due to contaminating donor leukocytes. DNA typing of samples from segments of transfused units confinned the blood group phenotype of blood donors to these patients. In conclusion, DNA typing of blood groups by PCR-RFLP in peripheral blood leukocytes contributes to the man~gement of transfusions in patients with 'beta' thalassemia and in SCD patients by allowing more accurate selection of donor units with consequent prevention of alloimmunizationand potential hemolytic reactions / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Anete Pereira de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T01:37:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_SandraMarthaGomes_M.pdf: 7578353 bytes, checksum: 742e89735a431a4c7c34d2d5348b7bb4 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Com o objetivo de identificar e clonar um gene novo do DNA mitocondrial (DNAmt) de Coix lacryma-jobi L. (coix), utilizou-se a estratégia da hibridização heteróloga. Para tanto amplificou-se por PCR um fragmento correspondente a um quadro de leitura aberto ("open reading frame"-oif), denominado orf167, presente no DNAmt da briófita Marchantia polymorpha, e tido como um possível gene. Marcou-se radioativamente e utilizou-se esta sequência como sonda em hibridizações com o DNAmt de coix digerido com várias enzimas. Identificou-se um fragmento homólogo Bgl II/ Bgl II de 1,4 kb, o qual foi clonado em pBluescript. Elaborou-se o mapa de restrição deste fragmento e localizou-se nele a exata região de homologia com a orf167. A região de homologia estava presente em um fragmento interno de 0,5 kb Spe I / Pvu II. Este fragmento de 0,5 kb, homólogo à orf167, foi utilizado em hibridizações com o DNArmt de várias espécies de plantas superiores (alfafa, batata, coix, couve-flor, ervilha, milho e soja), verificando-se que o mesmo correspondia a uma seqüência altamente conservada. Este mesmo fragmento foi também hibridizado em membranas contendo o RNAmt tota de oix e de outras espécies de plantas superiores (milho e couve flor). Os resultados revelaram que ele é transcrito na mitocôndria das espécies analisadas. O fragmento original de 1,4 kb Bgl II / Bgl II foi divido em 5 subfragmentos, os quais foram clonados e sequenciados. Após a análise da homologia desta sequência com outras presentes nos bancos de dados, verificou-se que o fragmento de 1,4 kb Bgl II./ Bgl II, isolado do DNAmt de coix, contém um "cluster" gênico onde estão presentes o gene que codifica o tRNA serina (tRNAScr), um pseudo-gene provavelmente originado do tRNA fenilananina (tRNAPhe), os genes nad3 e rps12. Tais genes presentes em coix são muito similares àqueles presentes em trigo e milho, os quais se organizam também em um "c1uster" gênico muito similar ao existente em coix. Estudos de expressão realizados através de "Northern Blotting" e RT ¿PCR mostraram que os genes tRNA ser, nad3 e rps12 são transcritos, sendo os dois últimos cotranscritos. Vinte e três elones de cDNA dos transcritos dos genes nad3 e rps12 foram seqüenciados, e tiveram suas sequências comparadas com a seqüência genômica. Encontrou-se 21 sítios de edição nos transcritos do gene nad3 e 8 sítios nos transcritos do gene rps12. Após comparações entre a sequência de aminoácidos predita a partir do clone genômico e do cDNA, observou-se que todas as edições modificam o aminoácido especificado pelo codon onde O evento de edição foi detectado, tornando a sequência de aminoácidos editada diferente da prevista pela sequência genômica. Vinte sítios de edição no gene nad3, e 6 no gene rps12, alteram a identidade do codon, de modo a especificar um aminoácido mais conservado durante a evolução entre diferentes espécies vegetais. Os outros três sítios, sendo I no gene nad3 e 2 no gene rps12, acarretam mudanças raras, espécie-específicas e não conservativas. Todos os 23 elones de cDNA investigados estavam diferentemente editados, predominando os cDNAs com sítios parcialmente editados. Não foi encontrada nenhuma orientação preferencial (5' para 3', ou 3' para 5') para o processamento da edição. Discute-se os motivos do reconhecimento do gene nad3 de coix pela orf167 de M. polymorpha / Abstract: We have cloned and sequenced the nad3 and rps12 mithocondrial genes from Coix lacryma-jobi L., whose sequence were found to be similar to the corresponding genes in wheat and maize. In addition, we have indentified a tRNA Ser and a pseudo-tRNA genes on the 5¿ upstream of nad3, generating a locus organization which is identical to what has been observed in wheat and maize. The locus identification was performed with a heterologous hibridization using the mitochondrial probe orf167 from Marchantia polymorpha. The gene expression was analysed using NoI1hern hybridization and RT -PCR, indicating that nad3 and rps12 gene were cotranscribed in a 1.3 kb RNA molecule. Concernig the RNA editing, we have found 21 and 8 sites in the nad3 and rps12 genes respectively. In general terms, the observed coix mRNA editing has changed the codon identities in such a way that the NAD3- and RPS12- protein aminoacid sequence was kept closer to the corresponding ones in other organisms. However, we have detected three specie-specific editing sites which were not conservative. As for the editing processing, we have analysed 23 cDNA clones which showed different editing pattems. A predominance of partial editing was observed where the edited sites were randomly distributed. / Mestrado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Renato Bonatelli Junior, Maristela O. Azevedo, Maria Sueli S. Felipe / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T12:10:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borges_MariaInes_M.pdf: 3158563 bytes, checksum: 95181fed446ecc980e54a78f146a546a (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: Foram estabelecidas neste trabalho, duas metodolo-gias para linhagens de Aspergillus niger com o interesse voltado para sua utilização na Tecnologia do DNA Recombi- nante (TDR). A primeira delas teve por objetivo o melhoramento da técnica de produção de protoplastos para esta linhagem, assim como a definição de melhores condições de regenera-ção. As melhores preparações de protoplastos provieram do micélio desenvolvido _na presença de Tween 80. Durante a produção foi possível obter até 2,1 x 108 protoplastos/ml quando o sulfato de magnésio 0,5M foi utilizado como estabilizador nesta etapa. A associação do sorbitol ao MgSO4, em baixa concentração (50 mM) possibilitou um aumento signifi-cativo da taxa de regeneração (de até, aproximadamente 20%) quando o sorbitol foi mantido como único estabilizador. Os clorotoplastos obtidos pelo método de GAMBINO e col. (1984) por nós adaptado, apresentaram-se túrgidos e permitiram uma análise cito lógica com visualização de numerosos núcleos. A segunda metodologia objetivou a melhoria do pro-cedimento da extração de DNA deste fungo resultando em uma preparação rápida (3,5 horas de manipulação) em que o DNA apresentou as seguintes características: - peso molecular elevado ( 50Kb) quando comparado ao mar-cador fago ?. -alto grau de pureza (A260: A280= 1,8 - 2,0) . - susceptibilidade à ação de enzimas de restrição (Eco RI e Pst I) e de ligação (T4 DNA-ligase) A determinação da quantidade de DNA obtido após extra-ção, utilizando-se a metodologia desenvolvida durante o trabalho, foi feita por dosagem colorimétrica da difenila-mina (DF A). A recuperação do DNA extraído foi de 70% e sua alta reprodutibilidade permitiu inclusive, autilização desta metodologia para extração desta macromolécula de ou-tros fungos filamentosos / Abstract: This research was done aiming the improvement of two methods of great relevanceto the Recombinant DNA Tech-nology (RDT) in Aspergillus niger. Firstly, the method of production and regeneration of protoplasts was improved. The best protoplasts preparations (2. 1 x 108 protoplasts/ml) were obtained when the my-celium was grown in medium containing Tween 80 and magne-sium sulphate 0.5M, the latter used as an osmotic stabili-zer. However, regeneration could only be significantly im-proved when magnesium sulphate was used at a lower concen-tration (50 mM) associated with sorbitol (1.2 M) during the production of protoplasts. Cytological analysis with protoplasts isolated by using the method of GAMBINO et alii (1984)revealed that up to 32 nuclei can be counted per protoplast. The method for isolation of DNA from this species was also improved. The final procedure is rapid (3.5 hours of manipulation before cesium chloride ¿ ethidium bromide gradient) and DNA isolated has showed the following characteristics: - high molecular weight; approximately 50 Kb. ¿ low level of proteic contamination (A260: A280= 1,8 - 2,0).- susceptibility to restriction (Eco RI and Pst I) and ligation (T4 DNA - ligase) enzymes. The DFA method was -.applied to estimate the recovery of DNA by using this improved procedure. DNA yields as high as 70% (ratio between final and inicial DNA concentrations) were obtained. The improved procedure has also proved to be suita-ble for extraction of DNA from others species of filamen-tous fungi / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Nelson Eduardo Duran Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T07:07:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guillo_LidiaAndreu_M.pdf: 5052389 bytes, checksum: 6f8a6cc046843c027b599d58aa65df17 (MD5) Previous issue date: 1982 / Mestrado

Orientador : Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T12:11:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MariaJoseLimada_D.pdf: 2843931 bytes, checksum: 344a27bcd26f8370e4d444434ff98e09 (MD5) Previous issue date: 1984 / Resumo: A cinética de hidrólise de Feulgen foi estudada em espermatozóides de composição diferente em complexos DNA - proteína. Espermatozóides de Bos taurus (proteína nuclear rica em arginina e cistina), Pichropus bergi, Triatoma infestans (proteína nuclear rica em arginina ), Lytechinus variegatus e Apis mellifera ( proteína nuclear rica em lisina ) foram submetidos à reação de Feulgen, variando-se a fixação e os tempos de hidrólise. Valores Feulgen ¿ DNA foram, então, obtidos por citofotometria de varredura automática. Os resultados demonstraram diferenças na cinética de hidrólise em função dos diferentes complexos DNA ¿ proteína presentes na cromatina. Diferenças nos padrões de cinética em função da fixação foram bem nítidas para espermatozóides de touro, gafanhoto e barbeiro e menos intensas para espermatozóides de ouriço-do-mar e abelha. As diferentes cinéticas de hidrólise da cromatina de espermatozóides de barbeiro comparada à de gafanhoto, e de ouriço-do-mar, comparada à de abelha, sugerem que, embora as proteínas nucleares básicas "germinativas" dos dois primeiros sejam ricas em arginina e as dos dois últimos sejam ricas em 1isina, há diferenças nessas proteínas conforme a espécie considerada. A depurinação do DNA foi a1cançada mais rapidamente para espermatozóides de T. infestans ( 20 min. ) e P. bergi ( 10 min. ) quando fixados em etanol-ácido acético. Os espermatozóides anômalos de touro quando fixados em etanol-ácido acético apresentaram uma depurinação mais rápida ( 30 min. ) que os normais ( 1 h.) indicando sua maior labilidade frente à hidrólise ácida. Isto se deve certamente a anomalias de sua proteína nuclear básica ¿germinativa¿. Dos materiais fixados em formol, o máximo de depurinação alcançado mais cedo o foi em material de touro ( espermatozóides normais e com anomalias de cabeça) (30 min.), seguidos de P. bergi, T. infestans, L. variegatus ( todos com 1 h. de hidrólise ) e finalmente Apis mellifera ( 2h. de hidrólise ). A presença de picos secundários na porção descendente das curvas de hidrólise de espermatozóides de gafanhoto e ouriço-do-mar indicam para estes mais de um tipo de complexo ácido apurínico-proteína. Os espermatozóides cuja proteína nuclear "germinativa" é do tipo rica em arginina e/ou, cistina apresentam um complexo ácido apurínico-proteína mais facilmente solubilizável. Dadas as diferenças na cinética de hidrólise da cromatina de espermatozóides portadores de proteína nuclear ¿germinativa¿ diferente, este tipo celular não é recomendável como controle haplóide em avaliações de conteúdo Feulgen DNA de células somáticas diplóides e poliplóides / Abstract: The Feulgen hydrolysis kinetics was investigated in spermatozoa with different composition in DNA ¿ protein complexes. The species used were : Bos taurus ( arginine and cystine-rich nuclear protein ), Pichroplus bergi, Triatoma infestans ( arginine-rich nuclear protein ), Lyteahinus variegatus and Apis mellifera ( lysine-rich nuclear protein ). The spermatozoa were subjected to Feulgen's reaction, by varying the fixative type and the hydrolysis times. Feulgen - DNA values were obtained with an automatic scanning cytophotometric procedure. Differences were demonstrated in the hydrolysis kinetics as a function of differences in composition of the DNA - protein complexes being present in the spermatozoon chromatin. Differences in the profiles of Feulgen hydrolysis curves, having for basis the fixation, were rather clear for bull, grasshopper and blood-sucking insect spermatozoa than for sea-urchin and bee spermatozoa. The different hydrolysis kinetics of chromatin of bloodsucking insect spermatozoa compared to that of grasshopper, sea-urchin and bee sperm cells suggests that, although the first two materials contain an arginine-rich ¿germinative¿ protein and the latter two ones contain a lysine-rich protein, these differ to each other. The DNA depurination was obtained more quickly for T. infestans ( 20min. ) and P. bergi. ( 10min. ) spermatozoa when they were fixed in the ethanol-acetic acid mixture.. Morphologically anomalous bull spermatozoa fixed in the EA mixture presented a quicker depurination ( 30 min ) as compared to the normal cells ( 1 h.). The fast lability to acid hydrolysis in the abnormal cells is certainly due to anomalies in their basic nuclear ¿germinative¿ protein. In the formalin fixed materials the maximal depurination was obtained earlier 1n bull spermatozoa ( 30min. ) followed by sperm cells of P. bergi, T. infestans, L. varie gatus ( all of them one-hour hydrolysis ) and finally Apis mellifera ( two-hours hydrolysis ). The presence of secondary peaks at the descending branch of the hydralysis curves of grasshopper and sea-urchin spermatozoa, indicate for these, more than one kind of apurinic-acid protein complexes. The spermatozoa bearing arginine-and/or cystine-rich nuclear protein contain a more easily soluble apurinic acid protein complex. Due to the differences in hydrolysis kinetics chromatin in spermatozoa bearing different nuclear ¿geminative¿ proteins, this cellular type is not commended as haploid control for evaluation of Feulgen - DNA contents diploid and polyp1oid somatic cells / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências

Orientador: Nelson Eduardo Duran Cabellero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-07-16T15:02:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mei_LuciaHelenaInnocentini_D.pdf: 5275209 bytes, checksum: b714d6c027bd57b7a6ae5a048a69919c (MD5) Previous issue date: 1986 / Doutorado

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:32:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lourenco_LucianaBolsoni_D.pdf: 8123596 bytes, checksum: c6d43d99a9aefb098cf547f839462ccf (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A proximidade entre Paratelmatobius e Scythrophrys é apontada por vários autores, embora esses gêneros estejam atualmente classificados em duas subfamílias de Leptodactylidae. No presente trabalho, as espécies consideradas viventes de Paratelmatobius, P. cardoso i e P. poecilogaster, e do gênero monotípico Scythrophrys, S. sawayae, foram analisadas citogeneticamente. Alguns sítios de restrição do gene ribossomal 28S dessas espécies também foram investigados. A análise cariotípica forneceu dados indicativos da existência de wna nova espécie de Paratelmatobius, Paratelmatobius sp. (aft: cardosoi), e de dois grupos de Scythrophrys, propostas apoiadas também por dados anatômicos e relativos à vocalização desses anUfOS obtidos por outros autores. O complemento diplóide de todas essas espécies e aquele já descrito para P. lutzii apresentam 24 cromossomos, vários deles com morfologia semelhante nesses diferentes cariótipos, especialmente aqueles de P. poecilogaster, P. lutzii e grupo IT de Scythrophrys. Essa caracteristica pode ser utilizada para agrupar os gêneros em estudo, visto que o número diplóide 2n=24 é raro dentre leptodactilídeos e os cariótipos das espécies com esse número diplóide apresentam pouca semelhança com aqueles de Paratelmatobius e Scythrophrys. A análise das regiões organizadoras de nucléolo (NORs) permitiu sugerir que a presença da NOR em um cromossomo metacêntrico pequeno, como observado em P. poecilogaster, Paratelmatobius sp. (aff. cardosoi) e grupo IT de Scythrophrys, representa um estado plesiomórfico de localização da NOR nesses gêneros. O bandamento C permitiu sugerir algumas sinapomorfias de P. cardosoi e Paratelmatobius sp. (arr cardosoi) e outras que reúnem os dois grupos de Scythrophrys. Esse método revelou, ainda, a presença de heterocromatina não-centromérica no braço curto dos cromossomos do par 1 de todos os cariótipos em análise, embora essa região apresente variados tamanhos nas diferentes espécies. A análise molecular do DNA ribossomal mostrou um sítio Pvu IT exclusivo das duas populações do grupo I de Scythrophrys, corroborando a proposta da existência de dois grupos taxonômicos nesse gênero. As espécies de Paratelmatobius e Scythrophrys, bem como Cyc/oramphus izeckshoni e Hylodes asper, não apresentam um sítio Bst EIT considerado na literatura uma possível sinapomorfia das subfamilias Leptodactylinae e Telmatobiinae, lançando questionamentos acerca daquela hipótese. Além disso, os mapas de restrição obtidos para as espécies de Paratelmatobius e Scythrophrys mostraram variações interespecíficas no tamanho de alguns fragmentos, indicando que tais regiões podem ser úteis em futuras análises moleculares / Abstract: The proximity between Paratelmatobius and Scythrophrys has been suggested by several authors, even though these genera are currently classified in two subfamilies of Leptodactylidae. In the present work, the living species of Paratelmatobius, P. cardoso i and P. poecilogaster, and of the monotypic genus Scythrophrys, S. sawayae, were studied cytogenetically. Some restriction enzyme sites of ribosomal gene 28S were also analyzed. The karyotypic study indicated the presence of a new species of Parate/matobiu.'i;, Parate/matobius sp. (aff cardoso i), and two groups of Scythrophrys, a finding supported by some morphological and bioacoustical analyses carried out by others. The diploid complement of all these species and that already described for P. lutzii consists of 24 chromosomes, several of which were similar in morphology, especially those of P. poeci/ogaster, P. /utzii and group II of Scythrophrys. A diploid number of 2n=24 is rare among leptodactylids and the karyotypes of species with this chromosome number share fewer similarities with Paratelmatobius e Scythrophrys. Analysis of the nucleolus organizer regions (NORs) suggested that the presence of an NOR in a short metacentric chromosome, as seen in P. poecilogaster, Parate/matobius sp. (aff cardosoi) and group II of Scythrophrys, is a plesiomorphic state relative to the NOR location in these genera. The C-banding suggested possible sinapomorphies between P. cardosoi and Parate/matobius sp. (aff. cardoso i), and between the groups of Scythrophrys. This technique also revealed non-centromeric heterochromatin in the short arm of chromosome 1 in all the karyotypes, a1though this region showed interspecific variation in size. Molecular analysis of ribossomal DNA revealed a Pvu II site exclusive to populations of group I of Scythrophrys, which agrees with the proposal for two taxonomic groups in this genus. The species of Paratelmatobius and Scythrophrys, as well as Cycloramphus izeckshoni and Hylodes asper, failed to show a Bst ElI site considered by others to be indicative of possible synapomorphy between the subfamilies Leptodactylinae and Telmatobiinae. The restriction maps for Paratelmatobius and Scythrophrys showed interspecific variation in the size of some rDNA fragments, indicating that such regions may be useful in future molecular studies / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural