Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The fatty acids (FA) are important constituents of brain phospholipid membranes and play important roles in the central nervous system (CNS) may modify the plasticity and fluidity, and act decisively in the development of cognitive and neuropsychiatric disorders. During the last decades, we observed changes in eating habits, which enabled increased consumption of trans fatty acids at the expense of consumption of polyunsaturated fatty acids (PUFA), especially omega-3. Furthermore, frequent situations of stress due to pressure of the outside world may also be associated with the development of diseases involving CNS and changes in metabolic function, particularly in the metabolism of fatty acids. In this study, two sequential generations of rats were supplemented with soybean oil (C-SO), fish oil (FO) and hydrogenated vegetable fat (HVF) during pregnancy and lactation. At 41 days of age, half of the male animals of each group were exposed to acute stress (AE-2h) and evaluated in the open field and elevated plus maze, followed by euthanasia for biochemical analysis. The HVF supplemented group had higher anxiety symptoms, while groups C-SO and FO did not show these behaviors. Among the groups exposed to AE, the HVF showed greater locomotion and symptoms similar to anxiety, but this was not observed in the FO. Biochemical analyzes showed higher levels of lipid peroxidation and reduced cell viability in the cortex of HVF group. Furthermore, the HVF treated rats showed reduced catalase activity in the striatum and hippocampus, and increased generation of reactive species in the striatum, while FO was associated with increased cell viability in the hippocampus. Among the groups exposed to AE, the HVF group showed increased generation of reactive species in the brain, decreased cell viability in the cortex and striatum, and decreased catalase activity in the striatum and hippocampus. The results show that the presence of FA for the development and growth over two generations is capable of modifying parameters of oxidative status and behavior of the brain. Taken together, our data support the idea that regular consumption of a diet rich in monounsaturated fatty acids (MUFA) and PUFA, and particularly low in processed foods, can help prevent the development of emotional disorders, and suggest the influence harmful consumption of trans fat over generations, which is able to increase parameters of emotion and nervousness after stressful situations of everyday life can trigger neurological and neuropsychiatric conditions more severe. / Os ácidos graxos (AG) são constituintes importantes das membranas fosfolipídicas cerebrais e desempenham importantes funções no sistema nervoso central (SNC) podendo modificar a plasticidade e fluidez, além de atuar de forma decisiva no desenvolvimento de patologias cognitivas e neuropsiquiátricas. Durante as últimas décadas, foram observadas mudanças nos hábitos alimentares, as quais possibilitaram o aumento do consumo de ácidos graxos trans, em detrimento do consumo de ácidos graxos poliinsaturados (AGPI), principalmente o ômega-3. Além disso, situações frequentes de estresse devido a pressão do mundo exterior também podem estar associadas com o desenvolvimento de doenças que envolvem o SNC e alterações na função metabólica, particularmente no metabolismo dos ácidos graxos. Neste estudo, duas gerações sequenciais de ratas foram suplementadas com óleo de soja (C-OS), óleo de peixe (OP) e gordura vegetal hidrogenada (GVH) durante a gestação, lactação e após o desmame. Aos 41 dias de idade, parte dos animais machos, da segunda geração, foram expostos ao estresse agudo (EA-2h), enquanto a outra metade foi utilizada como controles, e avaliados em campo aberto e labirinto em cruz elevado, seguido por eutanásia para análises bioquímicas. O grupo suplementado com GVH, não expostos ao estresse, apresentou maiores sintomas de ansiedade, enquanto os grupos C-OS e OP não mostraram esses comportamentos. Entre os grupos expostos ao EA, o GVH mostrou maior locomoção e sintomas semelhantes à ansiedade, mas isso não foi observado no grupo OP. As análises bioquímicas mostraram níveis mais elevados de peroxidação lipídica e menor viabilidade celular no córtex do grupo GVH. Além disso, os ratos tratados com GVH mostraram reduzida atividade da catalase no estriado e hipocampo, bem como aumento da geração de espécies reativas no estriado, ao passo que OP foi associado com aumento da viabilidade celular no hipocampo. Entre os grupos expostos ao EA, o grupo GVH mostrou aumento da geração de espécies reativas no cérebro, diminuição da viabilidade celular no córtex e estriado, e diminuição da atividade da catalase no estriado e hipocampo. Os resultados mostram que a presença de AG durante o desenvolvimento e crescimento ao longo de duas gerações é capaz de modificar parâmetros de comportamento e status oxidativo do cérebro. Tomados em conjunto, nossos dados suportam a ideia de que o consumo regular de uma dieta rica em ácidos graxos monoinsaturados (AGM) e AGPI, e particularmente pobre em alimentos processados, pode ajudar a prevenir o desenvolvimento de distúrbios emocionais, além de sugerir a influência nociva do consumo de gordura trans ao longo de gerações, a qual é capaz de aumentar parâmetros de emocionalidade e ansiedade após situações estressantes da vida cotidiana podendo desencadear condições neurológicas e neuropsiquiátricas mais graves.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fatty acids (FA) are constituent important of the neuronal phospholipids membranes and they carry out important functions in the development and function of the brain During the last decades changes were observed in the feeding habits of western countries, with an increase of the trans FA and omega-6 (n-6) and detriment of omega-3 fatty acids (n-3) consumption, contributing to increase the oxidative stress (OS) generation and development of neuropsychiatric disorders. The influence of FA supplementation containing n-6 (soybean oil-SO), trans (hydrogenated vegetable fat-HVF) and n-3 (fish oil-FO) on behavioral parameters and OS were studied in an animal model of mania. Rats were orally treated for 8 weeks with suspensions of SO, HVF and FO in place of drinking water, and treated with seven daily administrations of amphetamine (AMPH-mg/kg, ip) or vehicle, in the last week of oral treatment. Locomotor activity, vitamin C (VIT C) levels, protein oxidation and mitochondrial slices in striatum and cortex were evaluated. HVF supplemented rats showed an increase in the locomotor activity, higher levels of carbonyl protein in the cortex, and lower mitochondrial viability in the striatum and cortex, showing harmful effects per se. AMPH treatment increased the locomotor activity of all groups, but this effect showed greater intensity in the rats orally treated with HVF (456%). Similarly, AMPH increased the carbonyl protein levels in striatum (39.5%) and cortex (78%) of the animals orally treated with HVF, while SO and FO prevented it in the cortex. AMPH treatment decreased the mitochondrial viability in cortex and striatum of supplemented rats with all the FA; however the HVF group showed greater damage (46 and 44% of viability in the striatum and cortex, respectively). AMPH reduced the VIT C plasma levels of the HVF and SO groups (22.5 and 22.4% respectively), and this antioxidant parameter has not been changed in the FO treated rats. Here, we suggest that the trans FA contained in the HVF may increase the oxidative damages per se, leaving the rats more vulnerable to AMPH damage. FA n-3 contained in the FO showed subtle protecting effects, which were observed by preservation of the VIT C levels and lower levels of carbonyl protein in the cortex. Further studies should be conducted to evaluate the influence of the trans fatty acids consumption on neuronal activity, and consequently on the susceptibility to psychiatric disorders development among them the bipolar disorder. / Ácidos graxos (AG) são constituintes importantes das membranas fosfolipídicas neuronais e desempenham importantes funções no desenvolvimento e funcionamento do cérebro. Durante as últimas décadas foram observadas mudanças nos hábitos alimentares de países ocidentais, com aumento do consumo de AG trans e ômega-6 (n-6) em detrimento do consumo de ácidos graxos ômega-3 (n-3), cujas conseqüências podem estar relacionadas a um aumento dos danos oxidativos, facilitando o desenvolvimento de doenças neuropsiquiátricas. A influência da suplementação com AG n-6 (óleo de soja-OS), trans (gordura vegetal hidrogenada-GVH) e n-3 (óleo de peixe-OP) sobre parâmetros comportamentais e de estresse oxidativo (EO) foram estudados em um modelo animal de mania. Ratos tratados oralmente com suspensões de OS, GVH e OP, junto à água de beber durante 8 semanas, receberam nos últimos sete dias administrações diárias de anfetamina (ANF-4mg/kg, ip) ou veículo. Atividade locomotora, os níveis de vitamina C (VIT C) plasmático, marcadores de oxidação de proteínas e a viabilidade de fatias do estriado e córtex foram determinados. Animais suplementados com GVH mostraram um aumento da atividade locomotora, maior nível de proteínas carbonil no córtex, e menor viabilidade nas fatias do estriado e córtex, demonstrando efeitos prejudiciais per se. O tratamento com ANF aumentou a atividade locomotora dos animais de todos os grupos experimentais, porém este efeito mostrou maior intensidade nos animais que receberam a suplementação com GVH (456%). Semelhante, a ANF aumentou a carbonilação de proteínas no estriado (39.5%) e córtex (78%) dos animais suplementados com GVH, enquanto OS e OP preveniram o dano causado pela ANF no córtex. O tratamento com ANF diminuiu a viabilidade mitocondrial nos tecidos cerebrais de todos os grupos, entretanto o grupo suplementado com GVH apresentou maiores danos (46 e 44% de viabilidade no estriado e córtex, respectivamente). A ANF diminuiu os níveis de VIT C no plasma dos animais suplementados com OS e GVH (22.5 e 22.4%, respectivamente), e este parâmetro antioxidante não foi alterado nos ratos tratados com OP. Os resultados do presente estudo sugerem que os ácidos graxos trans presentes na GVH podem aumentar os danos oxidativos per se, deixando os animais mais expostos aos danos da ANF. A suplementação com ácidos graxos n-3 presentes no OP mostraram efeitos protetores sutis, representados pela preservação dos níveis de VIT C plasmático e menor oxidação de proteínas no córtex. Maiores estudos devem ser realizados para determinar a influência do consumo de ácidos graxos trans sobre a atividade neuronal, e conseqüentemente sobre a suscetibilidade para o desenvolvimento de desordens psiquiátricas entre estas, o transtorno bipolar.

A ingestão de ácidos graxos trans tem sido consistentemente mostrada ter efeitos adversos nos lipídeos sanguíneos, principalmente na razão LDL:HDL colesterol, que é um forte marcador de risco cardiovascular. De acordo com a Resolução RDC (Resolução da Diretoria Colegiada) de número 360 da ANVISA, de 23 de dezembro de 2003 da ANVISA, (Agência Nacional de Vigilância Sanitária), após 1 de agosto de 2006 as indústrias de alimentos devem declarar o conteúdo de ácidos graxos trans por porção do produto. O objetivo deste trabalho foi analisar a composição de ácidos graxos trans em margarinas e cremes vegetais após a nova legislação. As margarinas e cremes vegetais foram adquiridos na cidade de São Paulo, perfazendo um total de 40 amostras, 17 margarinas cremosas, 8 margarinas light, 1 margarina culinária cremosa, 2 margarinas culinária duras, 1 margarina culinária líquida, 2 alimentos a base de margarina, 8 cremes vegetais e 1 creme vegetal light foram analisados. Os lipídeos foram extraídos por hidrólise ácida, derivatizados com BF3 e em seguida analisados em cromatógrafo gasoso, equipado com coluna capilar SP- 2560 de 100 m a 180C. Os teores de trans totais das margarinas interesterificadas sofreram aumento significativo no período compreendido entre os anos 2000 a 2006, variando de 0 2,17% e 0,71 2,32% respectivamente. Nas margarinas hidrogenadas também foi observado aumento de 11,56 20,55% para 12,63 26,00% em 2006. As margarinas culinárias duras foram o tipo de margarina que apresentou concentrações elevadas de trans, variando de 19,38 a 30,35%. A margarina culinária cremosa e a margarina culinária líquida continham baixos teores de trans, 1,62 e 3,32% respectivamente. Os cremes vegetais interesterificados não sofreram mudança significativa, passando de 0 1,70% para 0 1,66%. No creme vegetal hidrogenado ocorreu redução acentuada dos teores médios de trans totais de 20,55 para 12,63%. A mudança na legislação não foi suficiente para reduzir totalmente os teores de ácidos graxos trans nas margarinas e cremes vegetais. Apesar disto, foi observado um aumento da disponibilidade de margarinas e cremes vegetais zero trans, que são aqueles que contém teores ≤ 0,2 g/porção de 10 g. / Intake of trans fatty acids (TFA) has been consistently shown to have adverse effects on blood lipids, most notably on the LDL:HDL cholesterol ratio, which is a strong marker of cardiovascular risk. According to RDC (Resolução de Diretoria Colegiada) resolution number 360 of the ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária National Agency for Sanitary Vigilance), after August 1, 2006, food industries must declare the trans fatty acid (TFA) content per product serving. The objective of this work was to analyzer the composition of trans fatty acid in margarines and fat spreads after the new legislation. The margarines and fat spread were obtained in the city of São Paulo, making a total of 40 samples, seventeen tub margarines, eight light tub margarines, one culinary tub margarine, two culinary hard margarines, one culinary liquid margarine, two margarine-based foods, eight fat spreads and one light fat spread were analyzed. The lipids were extracted by acid hydrolysis, derivatizados with BF3 and then analyzed by gas chromatograph, equipped with capillary column SP-2560 of 100 m a 180 C. The total TFA content in interesterified margarines significantly increased between 2000 and 2006, rising from 02.17% to 0.712.32%. For hydrogenated margarines, an increase was also observed, from 11.5620.55% to 12.6326.00% by 2006. The culinary hard margarines were the type of margarine that had high concentrations of trans, ranging from 19.38 to 30.35%. Culinary tub margarine and culinary liquid margarine contained low levels of trans, 1.62 and 3.32% respectively. Interesterified fat spreads did not significantly change, from 0 1.70% to 01.66%. In hydrogenated fat spreads, a sharp reduction was seen, with average levels of total trans fats falling from 20.55% to 12.63%. Changes in the legislative regulation were not sufficient to significantly reduce the levels of TFA in margarines and fat spreads. Nevertheless, an increased availability of zero trans fat margarines and fat spreads on the market was observed (levels ≤ 0.2 g per 10 g serving).

Introdução: A quantidade e o tipo de gordura alimentar exercem importante influência no desenvolvimento de doença cardiovascular (DCV) e podem contribuir para o desenvolvimento de esteatose hepática. Os ácidos graxos saturados e trans são consensualmente apontados como aterogênicos; já os poli-insaturados parecem exercer ação antiaterogênica. Com relação a esteatose hepática, sabe-se que os ácidos graxos saturados estão associados com o seu desenvolvimento; porém, a ação dos ácidos graxos trans na gênese e no desenvolvimento de esteatose hepática não está totalmente elucidada. Neste estudo, avaliou-se o efeito do consumo de dietas enriquecidas com ácidos graxos saturados (SAT), poli-insaturados (POLI) ou trans (TRANS) sobre componentes envolvidos na indução e na progressão da placa aterosclerótica, bem como sobre o desenvolvimento da doença hepática gordurosa não alcoólica. Métodos: Camundongos com ablação gênica para o receptor de LDL (LDLr-KO) foram alimentados com dietas hiperlipídicas (40% do valor calórico total sob a forma de gordura), enriquecidas com ácidos graxos SAT, POLI ou TRANS por 16 semanas e ao final submetidos a: 1) análises plasmáticas: colesterol total (CT), triglicérides (TG), insulina, glicose, aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT), interleucina-6 (IL-6), fator de necrose tumoral-? (TNF-alfa) e perfil de lipoproteínas; 2) determinação da lesão aterosclerótica: área de lesão (Oil Red-O), conteúdo de ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) e infiltrado de macrófagos (imuno-histoquímica), colocalização de ABCA1 e macrófagos (microscopia confocal) e conteúdo de colágeno (Picrosirius-Red) na raiz aórtica; 3) conteúdo de CT, colesterol éster (CE) e colesterol livre (CL) na aorta total; 4) macrófagos peritoneais foram tratados com lipopolissacarídeo (LPS), e IL-6, TNF-alfa e interleucina-10 (IL-10) medidas no meio de cultura; 5) no fígado: grau da doença hepática gordurosa não alcoólica, concentração de CT e TG e expressão de RNA mensageiro (mRNA) de PPAR-gama, PPAR-gama, SREBP-1c, MTP, CPT-1 e ABCA1 por RT-qPCR; 6) determinação do conteúdo de tecido adiposo visceral e subcutâneo na carcaça. Resultados: O consumo de dieta não diferiu entre os grupos; comparado à dieta POLI, TRANS induziu menor ganho de peso refletido por menor conteúdo de tecido adiposo. TRANS induziu hepatomegalia, desenvolvimento de esteato-hepatite não alcoólica (NASH) e piora da sensibilidade insulínica (evidenciada pelo índice HOMAIR). As concentrações de AST e ALT não diferiram entre os grupos. A dieta TRANS elevou a expressão de mRNA de genes relacionados à lipogênese hepática (PPAR-gama e SREBP-1c) comparada à SAT e POLI e reduziu a expressão de MTP comparada à dieta POLI. Não houve diferença entre os grupos com relação à expressão de genes envolvidos na oxidação hepática de lípides (PPAR-gama e CPT-1). As concentrações plasmáticas de CT e TG foram maiores no grupo TRANS comparado a SAT e POLI. POLI apresentou menor área de lesão, infiltrado de macrófagos e conteúdo de ABCA1 comparados a SAT e TRANS. Macrófagos e ABCA1 não se colocalizaram na área de lesão. O conteúdo de CT na parede arterial foi menor no grupo POLI comparado a TRANS; CL foi menor no grupo POLI comparado a SAT e TRANS; CE não diferiu entre os grupos. Comparado a POLI, SAT e TRANS apresentaram maior conteúdo de colágeno e núcleos necróticos na placa aterosclerótica. A concentração plasmática de IL-6 não diferiu entre os grupos; já a concentração de TNF-alfa foi maior nos grupos POLI e TRANS em comparação a SAT. Em relação à resposta inflamatória de macrófagos ao LPS, POLI e TRANS apresentaram maiores concentrações de IL-6 e TNF-alfa comparadas a SAT. POLI apresentou menores concentrações de IL-10 em comparação aos demais grupos. A expressão hepática de ABCA1 não diferiu entre os grupos. Conclusão: O consumo de dieta TRANS induziu perfil lipídico proaterogênico, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hiperglicemia e severo desenvolvimento de aterosclerose, além de hepatomegalia, maior acúmulo hepático de lípides e desenvolvimento de NASH. Por outro lado, POLI preveniu o desenvolvimento de aterosclerose, independentemente de sua ação inflamatória. / Introduction: The amount and type of dietary fat play important roles on the development of cardiovascular disease (CVD) and on the development of hepatic steatosis. Saturated (SAT) and trans (TRANS) fatty acids are known as pro-atherogenic, while the polyunsaturated (POLY) fats seem to exert an antiatherogenic action. Regarding hepatic steatosis, it is known that SAT are associated with its development, however, the role of TRANS in the genesis and development of hepatic steatosis is not fully undestood. This study evaluated the effect of the intake of diets enriched with SAT, POLY or TRANS on the parameters involved in the progression of the atherosclerotic plaque and also on the development of the nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods: LDL receptor knock-out (LDLR-KO) male mice were fed for 16 weeks a high fat diet (40% of calories as fat) enriched with SAT, POLY or TRANS, for 16 weeks. The following parameters were mesured: 1) plasma: total cholesterol (TC), triglyceride (TG), insulin, glucose, aspartate aminotransferase (AST) and alanine amino transferase (ALT), interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor- ? (TNF-?) and lipoprotein profile; 2) atherosclerotic lesion - lesion area (Oil Red-O), ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) content and macrophage infiltration (immunohistochemistry), co-localization of ABCA1 and macrophages (confocal microscopy) and collagen content (Picrosirius-Red); 3) TC, cholesteryl ester (CE) and free cholesterol (FC) content of the total aorta; 4) interleukin-6 and 10 (IL-6 and IL-10) and TNF-alfa in the culture medium of peritoneal macrophages after treatment with lipopolysaccharide (LPS); 5) liver: degree of fat liver disease, concentration of TC and TG and mRNA expression (RT-qPCR) of PPAR-gama, PPAR-gama, SREBP-1c, MTP, ABCA1 and CPT-1; 6) visceral and subcutaneous adipose tissue contents in the carcass of the animals. Results: Food intake did not differ amongst the groups, however, compared to POLY, TRANS induced less weight gain, due to lower adipose tissue content. TRANS induced hepatomegaly, nonalcoholic steatohepatitis (NASH) and worsening of insulin sensitivity, as evidenced by the index HOMAIR. The concentrations of ALT and AST did not differ among groups. TRANS increased the mRNA expression of the hepatic lipogenic genes (PPAR-gama and SREBP-1c) compared to the SAT and POLY and reduced the mRNA expression of MTP compared to POLI. There was no difference among the groups regarding the mRNA expression of genes involved in hepatic lipid oxidation (PPAR-gama and CPT-1). Plasma concentrations of TC and TG were higher in TRANS compared to SAT and POLY. POLY showed lower arterial lesion area, macrophage infiltration and ABCA1 content compared to SAT and TRANS. ABCA1 and macrophages did not colocalize in the lesion area. The TC content in the arterial wall was lower on POLY compared to TRANS; FC was lower on POLY compared to SAT and TRANS; CE did not differ among groups. Compared to POLY, SAT and TRANS showed higher collagen content and necrotic core in atherosclerotic plaques. The plasma concentration of IL-6 did not differ among groups, however, TNF-alfa plasma concentration was higher in POLY and TRANS compared to SAT. Regarding the macrophage inflammatory response to LPS, POLY and TRANS showed higher concentrations of IL-6 and TNF-alfa compared to SAT. Moreover, POLY had the lowest concentration of the anti-inflammatory cytokine IL-10. The hepatic expression of ABCA1 did not differ amongst the groups. Conclusion: TRANS induced pro-atherogenic lipid profile, hypercholesterolemia, hypertriglyceridemia, hyperglycemia, and severe atherosclerosis, and in addition, elicted hepatomegaly, increased hepatic lipid accumulation and NASH. On the other hand, POLY prevented the development of atherosclerosis, independently of their pro-inflammatory activity.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2018-03-05T14:14:06Z No. of bitstreams: 1 JÚLIA GONÇALVES MAYER.pdf: 2883327 bytes, checksum: 6ae955490e1664e27d2c9669ad07a02c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T14:14:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JÚLIA GONÇALVES MAYER.pdf: 2883327 bytes, checksum: 6ae955490e1664e27d2c9669ad07a02c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os métodos analíticos utilizados para medir o percentual de ácido graxo trans (AGT) em alimentos envolvem cromatografia em fase gasosa com detecção de ionização de chama (CG-DIC), espectrometria de massas (CG-EM) e espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier e refletância total atenuada (FT-IR-ATR). O presente estudo teve como objetivo investigar a viabilidade e a aplicabilidade do uso das técnicas de FT-IR-ATR, sem extração, com extração prévia da gordura e após hidrólise e metilação dos ácidos graxos, para avaliar o conteúdo de AGT em biscoitos recheados e comparar os resultados obtidos com os encontrados para a determinação de ácido elaídico pela técnica de CG-EM. Foram escolhidas 9 marcas de biscoitos recheados sabor chocolate e 1 pacote de gordura vegetal hidrogenada, para ser usada como padrão secundário para análise de AGT por FT-IR-ATR. As amostras foram analisadas, inicialmente, quanto aos seus conteúdos de umidade e lipídeos totais. Para todas as amostras não foi observada concentração de umidade superior a 6,03 g/100 g. Os lipídeos totais variaram de 12,51±0,58 a 23,84±0,09 g/100 g. A presença de AGT foi identificada por FT-IR-ATR pela visualização da banda próxima a 966 cm−1 e confirmada com adição de padrão às amostras. Ao analisar as amostras de biscoito homogeneizadas e sem outro preparo, não foi viável a utilização do método de FT-IR-ATR, visto que a absorção de radiação infravermelha de substâncias da amostra se sobrepõe à absorção na região das ligações duplas trans, o que demonstra que a matriz do alimento pode influenciar na análise. Quanto a presença dos AGT, ácido elaídico (C18:1, n-9 trans) foi identificado e confirmado em todas as amostras através de CG-EM. Ao comparar a quantificação pelos métodos CG-EM e FT-IR-ATR em amostras de extratos e na forma de ácidos graxos metilados (FAME), foram observadas concentrações baixas de ácido elaídico/ácidos graxos trans (de 0,03±0,01 a 0,86±0,01 g/100 g de biscoito) obtidas pelos diferentes métodos. Não foram encontradas diferenças significativas entre as concentrações de AGT determinadas pelos três métodos testados para oito das nove amostras analisadas. O presente trabalho mostrou que a técnica de FT-IR-ATR, analisando o extrato lipídico e as amostras em forma de FAME foi adequado para estimar os teores de AGT em biscoito recheado de chocolate, visto que proporciona uma análise mais rápida, com um menor número de etapas e menor consumo de reagentes em relação às análises por CG-EM / The analytical methods used to measure the percentage of trans fatty acids in foods involve gas chromatography with flame ionization detection (GC-FID), mass spectrometry (GC-MS) and attenuated total reflectance fourier transform infrared spectroscopy (ATR-FT-IR). The aim of the present study was to investigate the feasibility and applicability of ATR-FT-IR techniques, without extraction, with previous extraction of fat and after hydrolysis and methylation of fatty acids to evaluate the content of TFA in filled biscuits, and compare the results obtained with those found for the determination of elaidic acid by the CG-MS technique. Were chosen 9 marks of chocolate filled biscuit and 1 packet of hydrogenated vegetable fat to be used as a secondary standard for AGT analysis by ATR-FT-IR. The samples were initially analyzed for their moisture contents and total lipids. For all samples, no moisture content higher than 6.03 g/100 g. Total lipids ranged from 12.51 ± 0.58 to 23.84 ± 0.09 g/100g. The presence of TFA was identified by ATR-FT-IR through the visualization of the band near 966 cm−1 and confirmed with addition of standard to the samples. When analyzing the homogenized cookie samples and without further preparation, the use of the ATR-FT-IR method was not feasible because the absorption of infrared radiation from sample substances overlaps the absorption in the region of the trans double bonds, which demonstrates that the food matrix may influence the analysis. Regarding the presence of TFA, elaidic acid (C18: 1, n-9 trans) was identified and confirmed in all samples by GC-MS. When comparing quantification by GC-MS and ATR-FT-IR in samples of extracts and in the form of fatty acids methly esters (FAME), low concentrations of elaidic acid / trans fatty acids were observed (0.03 ± 0.01 to 0.86 ± 0.01 g / 100 g of biscuit) obtained by the different methods. No significant differences were found between the concentrations of TFA determined by the three methods tested for eight of the nine samples analyzed. The present study showed that the ATR-FT-IR technique, analyzing the lipid extract and the samples in the form of FAME, was adequate to estimate the TFA contents in chocolate filled biscuit, because it provides a faster analysis with a smaller number of steps and lower toxic chemicals in relation to GC-MS analyzes

Introdução: A quantidade e o tipo de gordura alimentar exercem importante influência no desenvolvimento de doença cardiovascular (DCV) e podem contribuir para o desenvolvimento de esteatose hepática. Os ácidos graxos saturados e trans são consensualmente apontados como aterogênicos; já os poli-insaturados parecem exercer ação antiaterogênica. Com relação a esteatose hepática, sabe-se que os ácidos graxos saturados estão associados com o seu desenvolvimento; porém, a ação dos ácidos graxos trans na gênese e no desenvolvimento de esteatose hepática não está totalmente elucidada. Neste estudo, avaliou-se o efeito do consumo de dietas enriquecidas com ácidos graxos saturados (SAT), poli-insaturados (POLI) ou trans (TRANS) sobre componentes envolvidos na indução e na progressão da placa aterosclerótica, bem como sobre o desenvolvimento da doença hepática gordurosa não alcoólica. Métodos: Camundongos com ablação gênica para o receptor de LDL (LDLr-KO) foram alimentados com dietas hiperlipídicas (40% do valor calórico total sob a forma de gordura), enriquecidas com ácidos graxos SAT, POLI ou TRANS por 16 semanas e ao final submetidos a: 1) análises plasmáticas: colesterol total (CT), triglicérides (TG), insulina, glicose, aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT), interleucina-6 (IL-6), fator de necrose tumoral-? (TNF-alfa) e perfil de lipoproteínas; 2) determinação da lesão aterosclerótica: área de lesão (Oil Red-O), conteúdo de ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) e infiltrado de macrófagos (imuno-histoquímica), colocalização de ABCA1 e macrófagos (microscopia confocal) e conteúdo de colágeno (Picrosirius-Red) na raiz aórtica; 3) conteúdo de CT, colesterol éster (CE) e colesterol livre (CL) na aorta total; 4) macrófagos peritoneais foram tratados com lipopolissacarídeo (LPS), e IL-6, TNF-alfa e interleucina-10 (IL-10) medidas no meio de cultura; 5) no fígado: grau da doença hepática gordurosa não alcoólica, concentração de CT e TG e expressão de RNA mensageiro (mRNA) de PPAR-gama, PPAR-gama, SREBP-1c, MTP, CPT-1 e ABCA1 por RT-qPCR; 6) determinação do conteúdo de tecido adiposo visceral e subcutâneo na carcaça. Resultados: O consumo de dieta não diferiu entre os grupos; comparado à dieta POLI, TRANS induziu menor ganho de peso refletido por menor conteúdo de tecido adiposo. TRANS induziu hepatomegalia, desenvolvimento de esteato-hepatite não alcoólica (NASH) e piora da sensibilidade insulínica (evidenciada pelo índice HOMAIR). As concentrações de AST e ALT não diferiram entre os grupos. A dieta TRANS elevou a expressão de mRNA de genes relacionados à lipogênese hepática (PPAR-gama e SREBP-1c) comparada à SAT e POLI e reduziu a expressão de MTP comparada à dieta POLI. Não houve diferença entre os grupos com relação à expressão de genes envolvidos na oxidação hepática de lípides (PPAR-gama e CPT-1). As concentrações plasmáticas de CT e TG foram maiores no grupo TRANS comparado a SAT e POLI. POLI apresentou menor área de lesão, infiltrado de macrófagos e conteúdo de ABCA1 comparados a SAT e TRANS. Macrófagos e ABCA1 não se colocalizaram na área de lesão. O conteúdo de CT na parede arterial foi menor no grupo POLI comparado a TRANS; CL foi menor no grupo POLI comparado a SAT e TRANS; CE não diferiu entre os grupos. Comparado a POLI, SAT e TRANS apresentaram maior conteúdo de colágeno e núcleos necróticos na placa aterosclerótica. A concentração plasmática de IL-6 não diferiu entre os grupos; já a concentração de TNF-alfa foi maior nos grupos POLI e TRANS em comparação a SAT. Em relação à resposta inflamatória de macrófagos ao LPS, POLI e TRANS apresentaram maiores concentrações de IL-6 e TNF-alfa comparadas a SAT. POLI apresentou menores concentrações de IL-10 em comparação aos demais grupos. A expressão hepática de ABCA1 não diferiu entre os grupos. Conclusão: O consumo de dieta TRANS induziu perfil lipídico proaterogênico, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hiperglicemia e severo desenvolvimento de aterosclerose, além de hepatomegalia, maior acúmulo hepático de lípides e desenvolvimento de NASH. Por outro lado, POLI preveniu o desenvolvimento de aterosclerose, independentemente de sua ação inflamatória. / Introduction: The amount and type of dietary fat play important roles on the development of cardiovascular disease (CVD) and on the development of hepatic steatosis. Saturated (SAT) and trans (TRANS) fatty acids are known as pro-atherogenic, while the polyunsaturated (POLY) fats seem to exert an antiatherogenic action. Regarding hepatic steatosis, it is known that SAT are associated with its development, however, the role of TRANS in the genesis and development of hepatic steatosis is not fully undestood. This study evaluated the effect of the intake of diets enriched with SAT, POLY or TRANS on the parameters involved in the progression of the atherosclerotic plaque and also on the development of the nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods: LDL receptor knock-out (LDLR-KO) male mice were fed for 16 weeks a high fat diet (40% of calories as fat) enriched with SAT, POLY or TRANS, for 16 weeks. The following parameters were mesured: 1) plasma: total cholesterol (TC), triglyceride (TG), insulin, glucose, aspartate aminotransferase (AST) and alanine amino transferase (ALT), interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor- ? (TNF-?) and lipoprotein profile; 2) atherosclerotic lesion - lesion area (Oil Red-O), ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) content and macrophage infiltration (immunohistochemistry), co-localization of ABCA1 and macrophages (confocal microscopy) and collagen content (Picrosirius-Red); 3) TC, cholesteryl ester (CE) and free cholesterol (FC) content of the total aorta; 4) interleukin-6 and 10 (IL-6 and IL-10) and TNF-alfa in the culture medium of peritoneal macrophages after treatment with lipopolysaccharide (LPS); 5) liver: degree of fat liver disease, concentration of TC and TG and mRNA expression (RT-qPCR) of PPAR-gama, PPAR-gama, SREBP-1c, MTP, ABCA1 and CPT-1; 6) visceral and subcutaneous adipose tissue contents in the carcass of the animals. Results: Food intake did not differ amongst the groups, however, compared to POLY, TRANS induced less weight gain, due to lower adipose tissue content. TRANS induced hepatomegaly, nonalcoholic steatohepatitis (NASH) and worsening of insulin sensitivity, as evidenced by the index HOMAIR. The concentrations of ALT and AST did not differ among groups. TRANS increased the mRNA expression of the hepatic lipogenic genes (PPAR-gama and SREBP-1c) compared to the SAT and POLY and reduced the mRNA expression of MTP compared to POLI. There was no difference among the groups regarding the mRNA expression of genes involved in hepatic lipid oxidation (PPAR-gama and CPT-1). Plasma concentrations of TC and TG were higher in TRANS compared to SAT and POLY. POLY showed lower arterial lesion area, macrophage infiltration and ABCA1 content compared to SAT and TRANS. ABCA1 and macrophages did not colocalize in the lesion area. The TC content in the arterial wall was lower on POLY compared to TRANS; FC was lower on POLY compared to SAT and TRANS; CE did not differ among groups. Compared to POLY, SAT and TRANS showed higher collagen content and necrotic core in atherosclerotic plaques. The plasma concentration of IL-6 did not differ among groups, however, TNF-alfa plasma concentration was higher in POLY and TRANS compared to SAT. Regarding the macrophage inflammatory response to LPS, POLY and TRANS showed higher concentrations of IL-6 and TNF-alfa compared to SAT. Moreover, POLY had the lowest concentration of the anti-inflammatory cytokine IL-10. The hepatic expression of ABCA1 did not differ amongst the groups. Conclusion: TRANS induced pro-atherogenic lipid profile, hypercholesterolemia, hypertriglyceridemia, hyperglycemia, and severe atherosclerosis, and in addition, elicted hepatomegaly, increased hepatic lipid accumulation and NASH. On the other hand, POLY prevented the development of atherosclerosis, independently of their pro-inflammatory activity.