Orientador: Fernando Luis Fertonani / Coorientador: Ricardo J. N. Bettencourt da Silva / Banca: Igor Renato Bertoni Olivares / Banca: Assis Vicente Benedetti / Banca: Elcio Cruz de Oliveira / Banca: Wanessa Melchert Mattos / Resumo: Este trabalho apresenta metodologias de desenvolvimento, otimização, e validação de procedimentos de medição eletroquímica de parâmetros bioquímicos em fluidos biológicos. As ferramentas desenvolvidas foram aplicadas à medição voltamétrica, simples e de baixo custo de ácido úrico (AU) em soro humano que se apresenta como uma alternativa confiável às medições realizadas pelo método de referência espectrofométrico. Foi estudada a medição de AU no soro visto a ser utilizada no diagnóstico de várias doenças, tais como gota, doenças cardiovasculares e neoplasias. O eletrodo de trabalho modificado desenvolvido e otimizado é composto por 25 % de lignina, 60 % de nanografite, 15 % de óleo mineral e cobre metálico eletrodepositado. As medições foram realizadas por um método de adição cumulativa de padrão (MAP-C), recorrendo a um novo tratamento estatístico dos dados de calibração, que permite a calibração da instrumentação num pequeno volume de soro. A incerteza da medição foi estimada recorrendo a diversas abordagens bottom-up desenvolvidas e usando abordagens pragmáticas top-down apresentadas na bibliografia. As componentes de incerteza foram combinadas usando a Lei de Propagação de Incertezas ou os métodos numéricos de Kragten e Monte Carlo. Procedeu-se igualmente a uma avaliação bayesiana da incerteza da medição que envolve a atualização de dados da prevalência de ácido úrico na população com o resultado da medição do soro específico analisado. Os modelos metrológicos desenvolvidos... / Abstract: This work presents methodologies for the development, optimization and validation of procedures for the electrochemical measurement of biochemical parameters in biological fluids. The developed tools were applied to voltammetric, simple and low-cost measurements of uric acid (AU) in human serum, which proved to be a reliable alternative to the spectrophotometric reference method. It was studied the measurement of AU in serum since it is used in the diagnosis of various diseases, such as gout, cardiovascular diseases and neoplasms. The developed and optimized modified working electrode is composed of 25 % lignin, 60 % nanocarbon, 15 % mineral oil and electrodeposited copper. The measurements were performed using a cumulative standard addition method (MAP-C), using a new statistical treatment of the calibration data, which allows the calibration of the instrumentation in a small volume of serum. The measurement uncertainty was estimated using developed bottom-up approaches and using pragmatic top-down approaches presented in the literature. The uncertainty components were combined using the Uncertainty Propagation Law or the numerical Kragten and Monte Carlo methods. A bayesian evaluation of the measurement uncertainty was performed, involving the updating of uric acid prevalence in the population with the result of the measurement of AU in the specific serum sample. The developed metrological models were implemented in user-friendly MS-Excel spreadsheets. The bottom-up ... / Doutor

Orientador: Helena Redigolo Pezza / Banca: Emanuel Carrilho / Banca: Aline Theodoro Toci / Resumo: O nitrogênio está presente no organismo humano principalmente como constituinte das proteínas e ácidos nucleicos. O catabolismo dessas substâncias forma compostos nitrogenados conhecidos como não - proteicos. Dentre os vários compostos nitroge nados não - proteicos conhecidos, o ácido úrico e a creatinina podem ser utilizados como biomarcadores da função renal em humanos. A creatinina é proveniente da reação não enzimática de desidratação da creatina ou da desfosforilação da fosfocreatina durante o processo de contração muscular; sua concentração é utilizada como marcador clínico para avaliar a função renal. O ácido úrico é formado a partir do metabolismo das bases purínicas, por ser um composto pouco solúvel, sua deposição nas juntas das extremida des ou em outros tecidos moles gera o caso clínico conhecido como gota. Dessa forma, a creatinina e o ácido úrico são constantemente dosados em exames laboratoriais de urina. As metodologias utilizadas para a dosagem desses dois compostos vão desde os méto dos clássicos, até a utilização de HPLC, eletroforese e análise em fluxo, ou seja, técnicas pouco portáteis e algumas de alto custo. Assim, a proposta do trabalho é o desenvolvimento de dispositivos analíticos microfluídicos em papel (μPAD) para a determin ação de creatinina e ácido úrico. Foram selecionados os reagentes cromogênicos para os dois analitos em estudo. Sendo o ácido pícrico em meio alcalino o reagente cromogênico para a creatinina e o Fe 3+ e 1,10 - Fenantrolina para o ácido úrico. As condições ex perimentais das duas reações foram otimizadas utilizando o planejamento fatorial do tipo 2³ e o planejamento composto central. Foram otimizados os fatores concentrações dos reagentes e tempo de aquecimento. A curva de calibração para o ácido úrico foi repe titiva, com equação de reta igual a A = 0,01651 + 0,0003864 C AU, com... / Abstract: Nitrogen is present in human organism mainly as a nucleic acid and proteins constituent. The catabolism of these substances forms nitrogen compounds known as nonproteinaceous. Amon g the many nonproteinaceous nitrogen compounds, uric acid and creatinine can be used as biomarkers of renal function in humans. Creatinine is derived from a non - enzymatic reaction of creatine dehydretion or dephosphorylation of phosphocreatine in the muscl e contraction process; creatinine concentration is used as clinic marker to evaluate the renal function. Uric acid is formed from metabolism of purine bases and, by being a slightly soluble compound, its deposition in the joints of the extremities or other soft tissues creates a case known as gout. In this way, creatinine and uric acid are constantly dosed in urine laboratory exams. The methodologies used to determine these two compounds range from classic methods, to the used of HPLC, electrophoresis and i n flow analysis, in other words, slightly portable techniques and, some of them, very expensive. Thus, this work proposes the development of microfluidic paper - based analytical devices (μPAD) to determinate creatinine and uric acid. Chromogenic reagents we re selected for both analytes in study. Picric acid in alkaline medium was chose for creatinine determination and Fe 3+ and 1,10 - phenantroline were chose for uric acid. Experimental conditions were optimized for both reactions using 2 3 factorial design and a central composite design. The factores optimized were reagents concentration and time of heating. The analytical curve to uric acid were repetitive, with a line equation equal to A = 0,01651 + 0,00038764 C AU, with determination coefficient (R²) equal to 0,997, and limit of detection equal to 16,5 mg L - 1 and limit of quantification equal to 54,9 mg L - 1 . Of the interferents tested, only ascorbic acid was shown to be interfering the reaction and... / Mestre

Orientador: Roberto Carlos Burini / Banca: Luis Carlos Giarola / Banca: Wilson Luvizotto Medina / Resumo: Verificar quais os principais fatores associados com os maiores valores de uricemia, analisando a dieta, composição corporal e marcadores bioquímicos. Foram estudados 1075 indivíduos, de ambos os sexos, com idade entre 21 e 82 anos, participantes de projeto de mudança de estilo de vida. Ácido úrico, glicose, triglicerídios, colesterol total, uréia, creatinina, gama-GT, albumina e cálcio e HDL-c foram quantificados no soro pelo método de química seca. LDL-c foi calculado pela fórmula de Friedewald. Glóbulos brancos, linfócitos e leucócitos foram quantificados por automação. Proteína C-reativa ultra-sensível (PCR-US) pelo método de imunoquimioluminecência. A avaliação antropométrica foi composta pelas medidas de peso e estatura, com posterior cálculo do IMC. Também mediu-se a circunferência abdominal. Massa muscular e % de gordura pela bioimpedância. A ingestão dietética foi realizada através do recordatório de 24 horas, com posterior cálculo das porções da pirâmide e IAS adaptado. Os testes foram realizados utilizando o programa SAS versão 9.1 e o STATISTICA 6.0 e descritos em média + DP. Foi realizado o teste de ANOVA one-way. A nomalidade da amostra foi avaliada pelo teste de Shapiro-Wilk. Correlação de Pearson simples e parcial. Regressão linear (odds ratio), com intervalo de confiança (IC) de 95%, para observar a razão de chance de apresentar o AU acima do útimo quartil (♂AU > 6,5mg/dL e ♀ AU > 5mg/dL). Análise de regressão múltipla "backward stepwise" para determinação dos principais componentes responsáveis pelo aumento do AU.Os resultados foram discutidos com base no nível de significância de p<0,05. IMC e CA correlacionaram-se positivamente e IMM negativamente com as concentrações de AU ajustadas por sexo, idade e antropometria. Dos componentes dietéticos, apenas % de lipídio polinsaturado apresentou correlação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: To evaluate the main dietetic, anthropometric and blood chemistry factors associated with the highest uricemia quartile. One thousand and seventy-five male and female individuals were studied. They were 21 to 82 years old and clinically selected to participated in the lifestyle-change program. Uric acid (UA), glucose, triglycerides (TG), total cholesterol, urea, creatinine, gamma-Gt, albumin, calcium and HDL-c were quantified in serum by the dry chemistry method. LDL-c was calculated by the Friedewald's formula. White cells, lymphocytes and leukocytes were quantified by automation. Ultra-sensitive C-reactive protein (US-CRP) was measured by the immunochemiluminescence method. Anthropometric evaluation consisted of weight and height measurements, which was followed by estimation of the body mass index (BMI). Waist circumference (WC) was also measured. Muscle mass (MM) and fat percentages were estimated by bioimpedance. Dietary intake was evaluated by a 24-hour food recall, and the pyramid servings and the adapted health eating index (HEI) were then calculated. Tests were performed by using the SAS software, version 9.1, and STATISTICA and described by mean + SD. The one-way ANOVA test was also carried out. The sample's normality was evaluated by the Shapiro-Wilk's test, and simple and partial Pearson's correlation was also used. Linear regression (odds ratio) with a confidence interval (CI) of 95% was utilized to observe the odds ratio for presenting UA in the last quartile (♂UA > 6.5mg/dL and ♀UA > 5mg/dL). Backward stepwise multiple regression analysis was used to determine the main components responsible for UA increase. Results were discussed based on the level of significance of p<0.05. BMI and WC were positively correlated and the muscle mass index (MMI) was negatively correlated with UA concentrations adjusted for gender, age and anthropometry. Of the dietary components... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000443764-Texto+Completo-0.pdf: 1879751 bytes, checksum: a84345f48429752c882a6b33df97af04 (MD5) Previous issue date: 2012 / Objective: To evaluate the association of maternal serum uric acid (UA) and proteinuria with clinical and demographic data of pregnant women with preeclampsia syndrome (PES) complicated by HELLP syndrome. Methods: One hundred and nine pregnant women were divided into two groups: group 1 - HELLP – pregnant women with PES complicated by HELLP syndrome (n=64); group 2 – PES – pregnant women with PES but no HELLP syndrome (n=105).Results: Age, ethnicity, parity, delivery mode and perinatal mortality were not statistically different between groups. Systolic and diastolic blood pressure, protein to creatinine (P/C) ratio, uric acid, creatinine and maternal complications were statistically different between groups; values were higher and events, more frequent among pregnant women with HELLP syndrome. The newborns of pregnant women with HELLP syndrome were more premature, had a lower birth weight and a lower APGAR score. Conclusion: Uric acid equal to or higher than 6. 0 gm/dL and P/C ratio equal to or higher than 5 were more frequent in gestations with HELLP syndrome, which suggests that elevated proteinuria and uric acid levels in pregnant women with PES may increase the chances of developing HELLP syndrome. / Objetivo: Avaliar a associação dos níveis maternos de ácido úrico sérico (AU) e proteinúria e os dados clínicos e demográficos em gestações complicadas por síndrome de pré-eclâmpsia (SPE), com síndrome de HELLP.Métodos: Cento e sessenta e nove gestantes foram divididas em dois grupos: Grupo 1 - HELLP – gestantes com SPE complicada pela síndrome de HELLP (n=64); Grupo 2 – SPE – gestantes com SPE sem síndrome de HELLP (n=105).Resultados: Não ocorreram diferenças estatisticamente significativas quanto às variáveis idade, cor, paridade, via de parto e mortalidade perinatal entre os grupos. Pressão arterial sistólica, pressão arterial diastólica, índice proteinúria/creatininúria (P/C), ácido úrico, creatinina e complicações maternas apresentaram diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos, sendo mais elevados e mais frequentes nas gestantes com síndrome de HELLP. Observou-se que os RN de gestantes com síndrome de HELLP foram mais prematuros, apresentaram menor peso ao nascimento e menor índice de APGAR. Conclusão: Ácido úrico igual ou maior do que 6,0 mg/dL e índice P/C igual ou maior do que 5 foram mais frequentes nas gestações com síndrome de HELLP, o que permite supor que maiores valores de ácido úrico e de proteinúria em gestantes com SPE aumentam a chance de desenvolvimento de síndrome de HELLP.

SILVA, Agmael Mendonça. Estudo teórico das propriedades estruturais, eletrônicas e vibracionais de pontos quânticos de silício e grafeno e cálculos no formalismo DFT aplicados a cristais de ácido úrico. 2010. 148 f. Dissertação (Mestrado em Física) - Programa de Pós-Graduação em Física, Departamento de Física, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Edvander Pires (edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-15T18:26:42Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_amsilva.pdf: 13243236 bytes, checksum: 7a9affef7c51dfd265b97f3957b677d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvander Pires(edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-21T20:33:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_amsilva.pdf: 13243236 bytes, checksum: 7a9affef7c51dfd265b97f3957b677d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-21T20:33:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_amsilva.pdf: 13243236 bytes, checksum: 7a9affef7c51dfd265b97f3957b677d3 (MD5) Previous issue date: 2010 / There is a great interest in understanding the electronic properties of nano-structured materials aiming the development of new nano devices, especially how to modify the electronic properties of nano structures already known in a controlled manner. This work shows our studies, which were made in a pure atomistic way by computational simulation, on the electronic, optical and vibrational properties of (a) spherical quantum dots, silicon solid and hollow ones, (b) graphene nanoflakes and (c) crystals of uric acid, anhydrous, mono and dihydrate ones, using methods of Molecular Dynamics, Semiempirical, DFTB+ and DFT. We used the software called AMPAC and the modules of Materials Studio (Accelrys), the Forcite, CASTEP, Gulp and Dmol3 that are states of art in atomistic simulations. From the classical point of view we used Brenner force fields, which allow the formation and breaking of covalent bonds; and from the quantum dots of view, we used the method of density functional and DFTB+. In the study of silicon quantum dots, it was obtained a decrease of the energy gap due to the increase of the radius for massive dots, and contrary behavior to the hollow dots, when we fixed one point and varied only the radius of the hole. In relation to the graphene nanoflakes, it was obtained the stability of structures by the Dynamics Molecular, verifying that they keep their flattened form up to 1000 K; over 3400 K structures begin to have their links broken. The HOMO-LUMO energy gaps are sensitive to edges. Analysis of spin states revealed that only the triangular nanoflakes with zigzag edge have excess of electrons with alpha spin, however symmetry dependent. The modes of vibration for structures with nC ~ 50 were obtained and it was observed that rectangular nanoflake displays absorption bands in common with zigzag nanoflakes in two ranges of the infrared spectrum. Finally for the uric acid crystals, we observed that the lattice parameters for the dihydrate crystal are less consistent with experimental values. The gap of the crystal of uric acid, anhydrous and mono ones, is direct (~ 3.18 eV and 3.16 eV, respectively) and of the dihydrate is indirect (~ 2.89 eV). The 2p orbitals are the largest contributors to the density of states. Water has great influence in the conduction band of the dihydrate crystal. There is an anisotropic behavior in relation to the study of the optical properties of these crystals along four directions of incidence of the electric field, where the anisotropy is more accentuated to the dihydrate. The studies fit in the theme of the role of Instituto de NanoBioEstruturas & Simulação NanoBioMolecular [NANO(BIO)SIMES], one of the National Institutes of Science and Technology funded by CNPq from the beginning of 2009, which aims to develop research activities and high-quality human resource training in nanobiostructures and nanobiomolecular simulation. / Com a finalidade do desenvolvimento de novos nanodispositivos, há um grande interesse em conhecer as propriedades eletrônicas de materias nanoestruturados. Sobretudo, como modificar as propriedades eletrônicas de nanoestruturas já bem conhecidas de forma controlada. Com este objetivo, muitas metodologias e experimentos tem sido desenvolvidos. Neste trabalho, estudamos de forma inteiramente atomística através de simulação computacional as propriedades eletrônicas, ópticas e vibracionais de (a) pontos quânticos esferéricos maciços e ocos de silício, (b) nanoflocos de grafeno e (c) cristais de ácido úrico anidro, mono e dihidratado utilizando métodos de Dinâmia Molecular, Semiempírico, DFTB+ e DFT, para tanto utilizamos o programa AMPAC e os módulos do Materials Studio (Accelrys), o Forcite, CASTEP, Gulp e o Dmol3 que são estados de arte em simulações atomísticas. Do ponto de vista clássico utilizamos campos de força Brenner, que permite a formação e rompimento de ligações covalentes; do ponto de vista quântico, utilizamos o método do funcional da densidade e DFTB+ . No estudo dos pontos quânticos silício obteve-se uma diminuição do gap de energia em função do aumento do raio para os pontos maciços, e comportamento contrário para os pontos ocos, quando fixamos um ponto e variamos tão somente o raio do buraco. Para os nanoflocos de grafeno obteve-se por meio de Dinâmica Molecular a estabilidade das estruturas, averiguando que até 1000K elas conservam sua forma plana; acima de 3400K as estruturas começam a ter suas ligações rompidas. Os gaps de energia HOMO-LUMO são sensíveis às bordas. A análise dos estados de spins revelou que somente os nanoflocos triangulares com borda zigzag possuem excesso de elétrons com spin alfa, dependente no entanto da simetria. Os modos de vibração para estruturas com nC ~ 50 foram obtidas e observou-se que nanofloco retangular exibe bandas de abosorção em comum com nanoflocos zigzag em dois intervalos do espectro infravermelho. Finalmente para os cristais de ácido úrico, observou-se que os parâmetros de rede para o cristal dihidratado são menos coerentes com valores experiemntais. O gap do cristal de ácido úrico anidro e mono é direto (~ 3.18 eV e 3.16 eV, respectivamente) e do dihidratado é indireto (~ 2.89 eV). Os orbitais 2p são os maiores contribuintes à densidade de estados. A água tem bastante influência na banda de condução do cristal dihidratado. Há um comportamento anisotrópico quando do estudo das propriedades ópticas destes cristais ao longo de quatro direções de incidência do campo elétrico, sendo a anisotropia mais acentuada para o dihidratado. As pesquisas realizadas enquadram-se na temática de atuação do Instituto de NanoBioEstruturas & Simulaçãoao NanoBioMolecular [NANO(BIO)SIMES], um dos Institutos Nacionais de Ciência e Tecnologia financiados pelo CNPq a partir do início de 2009, que visa desenvolver atividades de pesquisa e formação de recursos humanos de alto nível em nanobioestruturas e simulação nanobiomolecular.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000401828-Texto+Completo-0.pdf: 432779 bytes, checksum: 3773335c19ab717d6f080b6e3d0f79c2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Temperament relates to the emotional nature and the quality of the prevailing mood. We have proposed an integration of emotional and affective temperament constructs based on the principle that activation (anger and drive/pleasure) and inhibition (fear) are the two main emotional forces, which are integrated by the control system (attention and duty). Their interaction would result in the prevailing mood or affective temperaments. Uric acid (UA) is the end-product of purine metabolism and has been associated with psychological features such as high energy/drive, positive affect, achievement, good performance, higher social status and leadership. In this study we evaluated 129 subjects (44 males, 85 females) with the Combined Emotional and Affective Temperaments Scale, serum UA levels and a general health questionnaire. In the whole sample, serum UA levels were significantly correlated with disinhibition (r=0. 36, p<0. 001) and drive (r=0. 25, p<0. 01), but not with control, anger or any of the affective temperament scores. Among males, we found correlations at trend level (p >0. 05 and <0. 07) for control (r=0. 27), irritable (r=0. 29) and hyperthymic (r=0. 27) affective temperaments. Among females, a significant correlation was found only with disinhibition (r=0. 34, p=0. 001). The top tertile of males (serum UA>6. 0 mg/ml, n=16) had significantly higher drive (29. 9±5. 9 X 26. 0±3. 6, p=0. 01) and higher control at trend level (21. 2±3. 1 X 19. 3±2. 9, p=0. 054) than the rest of the sample. Among women, the top tertile (serum UA>4. 0 mg/ml, n=29) showed higher disinhibition scores (20. 7±4. 9 X 17. 9±3. 6, p<0. 01) and more choices of hyperthymic (8/26 X 6/59, p=0. 023) and irritable temperaments (7/26 X 5/59, p=0. 031) than the rest of the sample. In conclusion, these results confirm that externalized traits of temperament are associated with higher serum UA levels both in men and women. / O temperamento diz respeito à natureza emocional e ao humor basal. Propusemos uma integração dos construtos de temperamentos emocional e afetivo baseado no princípio de ativação (vontade e raiva) e inibição (medo) como as duas forças emocionais principais, que são reguladas por um sistema de controle (atenção e dever). A interação dessas forças resultaria no padrão de humor basal ou temperamento afetivo. O ácido úrico (AU) é o produto final do metabolismo de purinas e já foi associado com variáveis psicológicas como alta energia/vontade, afeto positivo, sucesso, alto desempenho, status social mais elevado e liderança. No presente estudo avaliamos 129 voluntários (44 homens e 85 mulheres) com a Escala de Temperamento Afetivo e Emocional, níveis séricos de AU e um questionário geral de saúde. Na amostra total, os níveis séricos de AU foram significativamente correlacionados com desinibição (r=0. 36, p<0. 001) e vontade (r=0. 25, p<0. 01), mas não com controle, raiva ou qualquer dos temperamentos afetivos. Entre homens, encontramos tendências de correlação (p>0. 05 and <0. 07) para controle (r=0. 27) e os temperamentos afetivos irritável (r=0. 29) e hipertímico (r=0. 27). Entre mulheres, uma correlação significativa foi observada somente com desinibição (r=0. 34, p=0. 001). O tertil mais alto dos homens (AU sérico>6. 0 mg/ml, n=16) apresentou significativamente mais vontade (29. 9±5. 9 X 26. 0±3. 6, p=0. 01) e controle no nível de tendência (21. 2±3. 1 X 19. 3±2. 9, p=0. 054) do que o resto da amostra. Entre mulheres, o tertil superior (AU sérico>4. 0 mg/ml, n=29) apresentou maiores escores de desinibição (20. 7±4. 9 X 17. 9±3. 6, p<0. 01) e mais frequentemente escolheram os temperamentos afetivos hipertímico (8/26 X 6/59, p=0. 023) e irritável (7/26 X 5/59, p=0. 031) do que o resto da amostra. Em suma, esses resultados confirmam que traços externalizados de temperamento estão associados com níveis mais altos de AU tanto em homens como em mulheres.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina si la hiperuricemia es un factor de riesgo para enfermedad cerebrovascular. Realiza un estudio prospectivo, transversal y analítico, de casos y controles pareados por edad y sexo. Participan pacientes mayores de 35 años, en las primeras 72 horas de evolución de la enfermedad y que aceptaron participar en el estudio. Se excluyó a los pacientes con antecedentes de ictus, gota, insuficiencia renal o consumo de diuréticos. Los casos estuvieron conformados por pacientes con diagnóstico clínico y tomográfico de ECV y los controles por pacientes con enfermedad distinta. A ambos grupos se les realizó dosaje sérico de ácido úrico en las primeras 24 horas de su ingreso. La muestra está conformada por 170 pacientes (85 casos y 85 controles). Se determinó que el 64,7% de los casos fueron del género masculino y el 74,1% presentaron isquemia cerebral. La hiperuricemia se presentó con mayor frecuencia en los pacientes con enfermedad cerebrovascular entre los 35 a 64 años y en el género masculino. El Odds ratio entre los casos y controles demuestra que la hiperuricemia incrementa el riesgo para enfermedad cerebrovascular en 3 veces (OR = 3,218; IC 95%: 1,56 – 6,614). Los antecedentes más frecuentes en los casos y controles fueron la hipertensión arterial y la dislipidemia. / Tesis

Orientador: Lauro Tatsuo Kubota, Graciliano de Oliveira Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T17:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_JulioCesarBastos_D.pdf: 8256851 bytes, checksum: fe67a3b542ab30ededfd5dab3f214ce0 (MD5) Previous issue date: 2000 / Doutorado

Orientadores: Marilda Mazzali, José Butori Lopes de Faria / Tese ( doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T18:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mazali_FernandaCristina_D.pdf: 2274720 bytes, checksum: ce2fe44ee92ab230ab3a6648462a850b (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A nefrotoxicidade por ciclosporina caracteriza-se, do ponto de vista histológico, por fibrose intersticial em faixa, atrofia tubular e hialinose de arteríolas aferentes glomerulares, ou seja, um quadro compatível com doença renal isquêmica. Esta isquemia provocada pela ciclosporina leva a redução da taxa de filtração glomerular, com consequente elevação dos níveis séricos de ácido úrico. Além disto, a ciclosporina altera o transporte tubular de urato, favorecendo o desenvolvimento de hiperuricemia. No modelo experimental de nefropatia pela ciclosporina, a elevação dos níveis de ácido úrico apresenta associação com lesão túbulo intersticial mais severa, além de maior frequência de hialinose de arteríola aferente. Em estudos anteriores demonstramos que a hiperuricemia agrava a nefrotoxicidade pela ciclosporina e também que, a administração concomitante de agentes hipouricemiantes previne a lesão renal pela CsA. Assim, consideramos a hipótese de que, em um modelo experimental de nefropatia crônica pela ciclosporina, instalada, a normalização dos níveis de ácido úrico com alopurinol ou benzbromarona poderia reverter a lesão renal estabelecida. Nefropatia pela ciclosporina foi induzida em ratos Sprague Dawley com injeções subcutâneas diárias de ciclosporina, em associação com dieta hipossódica, por 5 semanas. Ao final deste período, grupos experimentais foram divididos com interrupção da ciclosporina, tratamento com CsA isolada ou em associação com alopurinol ou benzbromarona por um período adicional de 4 semanas. Ao final de 9 semanas de estudo, foram realizadas avaliações funcionais e histológicas. Neste modelo, a co-administração de alopurinol ou benzbromarona cursou com redução dos níveis de ácido úrico e minimizou o quadro de nefrotoxicidade estabelecida por ciclosporina, através da redução de hialinose arteriolar, glomeruloesclerose e fibrose intersticial, além da melhora da função renal, do estresse oxidativo e da apoptose, porém sem efeito anti inflamatório, avaliado pelo infiltrado de macrófagos e pela expressão de osteopontina. Os resultados mais significativos no grupo tratado com alopurinol sugerem que, além do efeito hipouricemiante, o alopurinol pode também apresentar um mecanismo antioxidante, conforme demonstrado pela redução da peroxidação lipídica e da geração de radicais livres, resultando em menor intensidade de apoptose de células tubulares renais. Assim, a redução dos níveis de ácido úrico neste modelo atuou como protetor na progressão da lesão de microvasculatura e na redução da área de fibrose intersticial, mas não da lesão inflamatória. No modelo de nefropatia pela ciclosporina, assim como no de hiperuricemia, ocorre elevação da atividade de renina, sugerindo a participação do sistema renina angiotensina aldosterona na fibrose renal. Para determinar este efeito, um segundo estudo utilizou a associação de um inibidor de enzima conversora da angiotensina (enalapril), um bloqueador de receptor AT1 de angiotensina (losartan) ou um inibidor competitivo da aldosterona (espironolactona) ao tratamento com ciclosporina, após a instalação da lesão. Os animais experimentais receberam ciclosporina por 5 semanas, e após a instalação da nefropatia, foram divididos em um dos grupos experimentais e acompanhados por um período adicional de 4 semanas. A utilização de moduladores do SRAA também cursou com melhora funcional e histológica da nefropatia pela ciclosporina, sem alteração dos marcadores de inflamação intersticial. A melhora da vasculopatia pode ser atribuída à redução do remodelamento vascular com estas drogas, porém com efeito limitado sobre a geração de radicais livres de oxigênio e apoptose de células tubulares. Em resumo, os resultados do presente estudo indicam que em modelo experimental de nefrotoxicidade por CsA, o uso de hipouricemiantes ou de modeladores do sistema-renina-angiotensina-aldosterona apresentaram um importante efeito renoprotetor, comparável, do ponto de vista funcional, à interrupção do tratamento com ciclosporina. As duas abordagens terapêuticas foram eficientes na limitação da progressão da nefropatia, com reversão parcial da fibrose intersticial, provavelmente mediada por melhora de oxigenação tecidual secundária à redução da vasculopatia e do remodelamento vascular. A manutenção do estímulo tóxico da ciclosporina, com manutenção da inflamação, da geração de radicais livres de O2 e da apoptose de células tubulares, entretanto, não foi completamente neutralizado pela intervenção farmacológica / Abstract: Chronic allograft nephropathy is characterized by stripped tubular atrophy and interstitial fibrosis, in presence of arteriolar hyalinosis, resembling an ischemic pattern of chronic kidney disease. Chronic ischemia is associated with reduced glomerular filtration rate, and increase in serum uric acid levels. Cyclosporine per se also has a direct effect on tubular urate handling that facilitates the development of hyperuricemia. Hyperuricemia exacerbates chronic cyclosporine nephropathy, with a more severe tubulointerstitial fibrosis and atrophy, as well as worsening of arteriolar hyalinosis. In a previous study we have shown that concomitant treatment with uric acid lowering agents limits the development of experimental CsA nephropathy. The hypothesis of the present study was that treatment with uric acid lowering agents, after the development of CsA nephropathy could reverse or reduce the severity of tubulointerstitial disease. Male Sprague Dawley rats received daily SC injections of cyclosporine in presence of low salt diet, during 5 weeks. At the end of this period, experimental groups were assigned for CsA withdrawal, maintenance of daily CsA alone or associated with allopurinol or benzbromarone in drinking water for an additional period of 4 weeks. At the end of 9 weeks of study, rats were sacrificed for functional and morphological analysis of kidneys. In this model, concomitant treatment with allopurinol or benzbromaroes was associated with reduction of serum uric acid levels, improvement in renal function and renal disease, characterized by lower arteriolar hyalinosis index, less glomerulosclerosis and significant reduction in interstitial fibrosis area. Other findings included reduction in oxidative stress markers and apoptotic cells, despite of maintenance of inflammatory status, quantified by macrophage infiltration and osteopontin expression. Allopurinol treatment was associated with more significant changes, with reduction of free radical generation, and lower grade of apoptotic cells in renal cortex, suggesting a participation of antioxidant effects in association with uric acid reduction. Taken together, these datsa suggests that reduction of serum uric acid in the stablished model of CsA nephropathy has a protective effect in microvascular lesions and progression of interstitial disease, despite the maintenance of interstitial inflammation. In cyclosporine nephropathy, as well as in the experimental hyperuricemia model, renal disease is associated with increased renin activity, suggesting the participation of renin angiotensin aldosterone system (RAS) in the mechanism of disease. In order to analyze the effect of RAS in CsA nephropathy model, a second study tested the treatment with angiotensin converting enzyme inhibitor (enalapril), a angiotensin II AT1 receptor blocker (losartan) or an aldosterone inhibitor (espironolactone) in association with cyclosporine after the development of chronic nephropathy. Experimental animals were treated with cyclosporine and low salt diet for 5 weeks, and then assigned for one treatment group, including cyclosporine withdrawal, cyclosporine alone, CsA and enalapril, CsA and losartan or CsA and espironolactone for an additional period of 4 weeks. RAS blockade in the established model of CsA nephropathy was associated with improvement in renal function and interstitial fibrosis, despite the maintenance of interstitial inflammation. The most striking finding was the improvement of arteriolar hyalinosis and glomerulosclerosis, suggesting that the most important effect was protecting against vascular remodeling. The improvement in vasculopathy was associated with reduction in tissue hypoxia, with a partial reduction in oxidative stress and tubular cell apoptosis. Both therapeutic interventions proved to be efficient in limiting progression of renal disease, with a partial reversion of interstitial fibrosis. The main mechanism is associated with improvement in renal tissue O2 delivery, as a consequence of recovery of arteriolar hyalinosis and control of vascular remodeling. However, maintenance of CsA therapy was associated with a persistent toxic effect, with maintained interstitial inflammation, free radical generation and tubular cell apoptosis that was not neutralized by intervention / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

O trabalho apresentado nesta Dissertação de Mestrado descreve o desenvolvimento e aplicação de eletrodos de pasta de carbono modificados eletroquimicamente em soluções de guanina e de eletrodos de grafite pirolítico modificados em soluções de dopamina. Estes eletrodos foram empregados na detecção e, a quantificação, por voltametria de pulso diferencial (VPD), de alguns compostos de importância biológicas tais como NADH, NADPH, 8-oxo-guanina, ácido úrico (AU), ácido ascórbico (AA), dopamina (DA) e xantina (XA). No primeiro caso, os eletrodos de pasta de carbono foram modificados em solução de guanina por aplicação de um potencial de 1,1 V (vs Ag/AgCl, KClsat) ao eletrodo de trabalho por 12 minutos sob sat agitação constante. Com estes eletrodos detectaram-se NADH, NADPH, 8-oxo-guanina e AU, com limites de detecção de 3,3, 3,7, 2,0 e 6,6 x 10-6 mol L-1 respectivamente, na faixa de concentração de 7,5 x 10-6 a 8,1 x 10-4 mol L-1 . No segundo caso, eletrodos de grafite pirolítico, previamente tratados em solução de NaOH, foram modificados eletroquimicamente em solução de DA por aplicação de um potencial 1,5 V (vs Ag/AgCl, KClsat ) ao eletrodo de trabalho durante 2 minutos. Com estes eletrodos foi possível a determinação simultânea de AA, AU e DA. Para obtenção das curvas analíticas variou- se a concentração do analito de interesse, mantendo-se constante a concentração dos possíveis interferentes nos valores de 1,0 x 10-4 mol L-1 (DA), 5,0 x 10-5 mol L-1 (AU) e 1,0 x 10-3 mol L-1 (AA). Os limites de detecção calculados para AU, AA e DA foram respectivamente de 1,4 x 10-6 mol l-1 , 2,5 x 10-5 mol l-1 e 1,1 x 10-7 mol l-1 . Ácido úrico foi determinado em amostras de urina, sangue e soro humano com 92 a 103 % de recuperação, sem a necessidade de tratamento prévio das amostras. / Chemically Modified Carbon Paste and Pyrolitic Graphite Electrodes were prepared via electrochemical deposition from guanine and dopamine solutions. Carbon paste electrodes were modified in guanine solutions under an applied potential of 1.1 V (vs Ag/AgCl, KClsat ) during 12 minutes under constant stirring. They were used for sat electrochemical detection of NADH, NADPH, uric acid and 8-oxoguanine. Detection limits were 3.3, 3.7, 6.6 and 2.0 10-6 mol L-1 respectively, with sensitivity of 0.13, 0.10, 0.26 and 0.40 A mol-1 L cm-2 , respectively. The electrodes showed high reproducibility and absence of surface poisoning effects. Good analytical performance was attributed to the formation of superficial dimer or trimers species of guanine during the modification process. Pyrolitic graphite electrodes, previously submitted an electrochemical treatment in NaOH solution, were modified in dopamine solution (phosphate buffer, pH 10) under an applied potential of 1.5 V (vs Ag/AgCl, KClsat ) during 2 minutes under constant sat stirring and, further used for the simultaneous determination of ascorbic acid (AA), uric acid (AU) and dopamine (DA). The analytical curves were obtained changing the concentration of the wished analyte, at constant concentration levels of the interferences: 1.0 x 10-4 mol L-1 (DA), 5.0 x 10-5 mol L-1 (UA) and 1.0 x 10-3 mol L-1 (AA). Detection limits were 1.4 x 10-6 mol L-1 , 2.5 x 10-5 mol L-1 and 1.1 x 10-7 mol L-1 for UA, AA and DA, respectively. Uric acid was determined in human urine, blood and serum samples without any previous treatment. Recovering percentages of 92 to 103 % were obtained.