O hormônio do crescimento (GH) age sobre tecidos periféricos e está relacionado com várias funções do organismo como, o controle do metabolismo, crescimento somático e processos celulares. Existem evidências que o GH pode exercer efeitos sobre o sistema nervoso central (SNC). Neurônios que co-expressam o neuropeptideo Y (NPY) e a proteína relacionada agouti (AgRP) estão localizados na parte ventromedial do núcleo arqueado do hipotálamo (ARH). Com intuito de estudar a ação do GH especificamente em neurônios NPY/AgRP, iremos utilizar o sistema Cre-LoxP que permite a manipulação gênica de maneira tecido-específica. Sendo assim, inativamos o receptor de GH em neurônios NPY/AgRP em animais fêmeas (GHR/AgRP KO). Como já é bem sabido, essa população de neurônios é conhecida como um potente estimulador do apetite, objetivamos verificar se a falta do receptor de GH (GHR), pode impactar fatores metabólicos. Na validação do modelo observamos que os neurônios NPY/AgRP são responsivos ao GH. As fêmeas GHR/AgRP KO não apresentam diferença no peso corporal. Além disso, não foram observadas diferenças na avaliação metabólica, como, tolerância à glicose, sensibilidade à insulina ou na resposta à leptina. Assim como não observamos diferenças significativa no gasto energético. Quando desafiadas à restrição alimentar, as fêmeas GHR/AgRP KO apresentam maior dificuldade de sustentar a glicemia e perdem mais peso que as fêmeas controles. Por outro lado, a resposta contra regulatória à hipoglicemia é similar entre os animais GHR/AgRP KO e os controles. Ainda, quando expostas ao estresse por contenção, as fêmeas GHR/AgRP KO apresentaram consumo alimentar similar aos animais do grupo controle. Um segundo grupo foi gerado com o intuito de analisarmos o equilíbrio energético e homeostase da glicose durante a gestação e lactação. Os grupos responderam de forma similar tanto ao que se refere ao equilíbrio energético, quanto em relação a glicemia. Por fim, após os aspectos relacionados ao metabolismo energético, utilizando a técnica de ensaio de flexão de três pontos, que analisa parâmetros relacionados ao metabolismo ósseo, observamos que o grupo controle e GHR/AgRP KO não apresentaram diferenças significantes nos parâmetros ósseos analisados. Nossos resultados sugerem que o GH exerce efeito sobre o metabolismo via neurônios NPY/AgRP apenas durante situações de estresse crônico como por exemplo, em situação de privação alimentar. / Growth hormone (GH) acts on peripheral tissues and is related to various functions of the organism such as metabolism control, somatic growth and cellular processes. There is evidence that GH may exert effects on the central nervous system (CNS). Neurons co-expressing the neuropeptide Y (NPY) and related protein agouti (AgRP) are located in the ventromedial part of the arcuate nucleus of the hypothalamus (ARH). In order to study the action of GH specifically on NPY/AgRP neurons, we will use the Cre-LoxP system that allows a genetic manipulation in a tissue-specific manner. Thus, we inactivate the GH receptor in NPY/AgRP neurons in female animals (GHR/AgRP KO). It is well established that this population of neurons is known as a potent stimulator of appetite, so we aim to verify if the lack of the GH receptor (GHR) can impact metabolic factors. In the validation of the model we observed that NPY/AgRP neurons are responsive to GH. GHR/AgRP KO females shown no difference in body weight. In addition, no differences were observed in metabolic evaluation, such as glucose tolerance, insulin sensitivity or leptin response. As well as we didn\'t observe significant differences in energy expenditure. When challenged with dietary restriction, GHR/AgRP KO females presented greater difficulty in sustaining glycemia and lost more weight than control females. On the other hand, the counter-regulatory response to hypoglycemia is similar between the GHR/AgRP KO and control animals. Also, when exposed to containment stress, the GHR/AgRP KO females presented similar food consumption to the control animals. A second group was generated with the purpose of analyzing the energy balance and glucose homeostasis during pregnancy and lactation. The groups responded similarly to both energy balance and glycemia. Finally, after the aspects related to energy metabolism, using the three-point flexural test technique, which analyzes parameters related to bone metabolism, we observed that the control and GHR/AgRP KO groups didn\'t present significant differences in the analyzed bone parameters. Our results suggest that GH exerts an effect on the metabolism via NPY/AgRP neurons only during situations of chronic stress such as food deprivation.

Thesis advisor: Michael Numan / This paper will review research from our laboratory dealing with the neural basis of maternal behavior in rats. Specifically, my work investigates hypothalamic interaction with the mesolimbic dopamine system and the regulation of maternal responsiveness. Recent evidence has shown that increased dopamine activity in the nucleus accumbens, a major terminus of the mesolimbic dopamine pathway, results in a facilitation of maternal behavior in female rats who have been partially primed by hormones. However, the way in which dopamine and hormones act on these neural circuits is unclear. We hypothesize that one of these hormones, estradiol, acts on the MPOA and mesolimbic dopamine system through similar intracellular mechanisms as dopamine. My research goals are twofold: (1) to discern which G-protein coupled pathway dopamine utilizes to act in the nucleus accumbens and (2) to investigate whether estradiol is having rapid effects at the cell membrane and whether these effects are mediated by G-protein coupled receptors. / Thesis (BA) — Boston College, 2008. / Submitted to: Boston College. College of Arts and Sciences. / Discipline: Psychology. / Discipline: College Honors Program.

Na puberdade ocorrem mudanças significativas na organização de circuitos neurais com ajuda da ação dos hormônios esteroidais, levando a dimorfismos sexuais relevantes para a promoção de comportamentos adultos. A porção ventrolateral do núcleo ventromedial do hipotálamo (VMHvl) é o sítio neural que mais exerce controle do comportamento sexual feminino a partir da ação dos hormônios ovarianos. Dentre os núcleos que o aferentam, destaca-se o núcleo medial da amígdala (MEA), transmitindo informações essenciais para iniciar tal comportamento. Investigamos a densidade das projeções do núcleo MEA para o VMHvl, em ratas ooforectomizadas pré-ppuberes e em ratas controle. Foi feita a ooforectomia em ratas Sprague-Dawley com 35 dias de idade. Ao atingirem idade de 90 dias, injetamos por iontoforese o traçador anterógrado Phaseolus vulgaris no MEA. Sugerimos uma diferença na densidade de projeções e varicosidades do MEA para o VMHvl entre os grupos. Aparentemente, os hormônios ovarianos contribuem na organização das conexões do MEA com estruturas do circuito do comportamento sexual feminino. / During puberty, significant changes occur to organize neural circuits, with steroid hormones action, leading to significant sexual dimorphism to promote adults behaviors. The ventrolateral portion of the ventromedial nucleus of the hypothalamus (VMHvl) is the major neural site controlling this behavior with the ovarian hormones action. One of outputs to VMHvl, the medial amygdala nucleus (MEA) transmit essential information to start such behavior. We investigate the projections density of MEA to VMHvl, in ovariectomized rats at early puberty. We performed ovariectomy Sprague-Dawley rats with approximately 35 days of age, when they reach the age of 90 days, we perform unilateral iontophoretic injections of anterograde tracer Phaseolus vulgaris in MEA. Our results suggest a possible difference in projections density of the MEA to VMHvl, between ovariectomized rats the onset of puberty and control. Apparently, ovarian hormones are important factors that contribute to the organization of MEA connections with structures of the circuit of female sexual behavior during puberty.

Os efeitos dos canabinoides em algumas áreas encefálicas que expressam receptores endocanabinoides, como é o caso dos núcleos hipotalâmicos, não são ainda muito bem definidos. Vários estudos têm demonstrado o papel de alguns núcleos hipotalâmicos na organização das reações induzidas pelo medo inato e pelo pânico. As respostas de defesa induzidas pelo medo instintivo caracterizam-se por serem mais elaboradas e dirigidas para algum abrigo ou rota de fuga. O estado de pânico pode ser provocado experimentalmente em animais de laboratório através da diminuição da atividade do sistema GABAérgico. O objetivo deste trabalho foi estudar os padrões comportamentais de fuga elaborada induzidos pelo bloqueio de receptores GABAérgicos do tipo A, com microinjeções intra-hipotalâmicas de bicuculina (BIC), especificamente na divisão dorso-medial do hipotálamo ventro-medial (VMHDM), assim como estabelecer o envolvimento endocanabinoides e o papel do receptor canabinoide do tipo 1 (CB1) na modulação das respostas defensivas organizadas pelo hipotálamo medial. Os resultados mostraram que a administração prévia de doses intermediárias (5pmol) de anandamida (AEA) atenuaram as respostas defensivas induzidas pela microinjeção intra-VMHDM de bicuculina (40ng), efeito este prevenido pelo pré-tratamento intra-hipotalâmica com antagonista de receptores CB1. Os resultados indicam que a AEA pode modular os efeitos pró-aversivos da bicuculina no VMHDM por meio do recrutamento de receptores CB1. / The effects of cannabinoids in some brain areas that express endocannabinoid receptors, such as some hypothalamic nuclei, are not yet well known. Several studies have demonstrated a role of hypothalamic nuclei in the organisation of behavioural responses induced by innate fear and panic attacks. The defensive responses induced by instinctive fear are more elaborated and oriented toward a burrow or alternative route of escape. Panic-prone states are able to be experimentally induced in laboratory animals decreasing the GABAergic system activity. The aim of this work was to study panic-like elaborated defensive behaviour evoked by GABAA receptor blockade with bicuculline (BIC) in the dorsomedial division of the ventromedial hypothalamus (VMHDM), we also aimed to establish the involvement of endocannabinoids and the role of CB1 cannabinoid receptor in the modulation of elaborated defense behavioural responses organised by medial hypothalamus. The results showed that intra-hypothalamic administration of anandamide (AEA) at the intermediate dose (5pmol) attenuated defensive responses induced by intra-VMHDM microinjection of bicuculline (40ng). This effect, however, was prevented by the pre-treatment of VMHDM with the CB1 receptor antagonist AM251. These results indicate that AEA can modulate the pro-aversive effects of bicuculline into the VMHDM, recruiting CB1 receptors.

A gestação é um período em que a fêmea é transitoriamente submetida a uma série de alterações em todo o organismo, resultando num quadro semelhante à síndrome metabólica, mas que são cuidadosamente reguladas de modo a fornecer o suprimento adequado de substratos para a mãe e para o feto. A gravidez caracteriza-se como modelo fisiológico e temporalmente definido de resistência à insulina. Já durante a lactação, observa-se hipersensibilidade sistêmica à ação da insulina. A ativação de vias de sinalização da insulina no cérebro, em particular no núcleo arqueado do hipotálamo (ARC), tem importante papel na regulação da homeostasia glicêmica. Já está bem estabelecido que a Ang-II é capaz de induzir a fosforilação em serina do IR, do IRS e da subunidade regulatória p85 da PI3K. No entanto, ainda não foi esclarecido se ocorrem alterações na via de sinalização da insulina em áreas do sistema nervoso central (SNC) responsáveis pelo controle da homeostasia glicêmica, como é o caso do ARC, do núcleo hipotalâmico ventromedial (VMH) e do núcleo paraventricular (PVN) durante a gestação, que poderia contribuir para o quadro de resistência à insulina nesta situação. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão das proteínas de sinalização intracelular da insulina IRS1-2, PI3K (p85<font face=\"Symbol\">&#945;, p55<font face=\"Symbol\">&#945;, p50<font face=\"Symbol\">&#945;), AKT, p-Ser473 AKT e dos receptores IR, e AT1a no hipotálamo total e no ARC, VMH e PVN na gravidez e na lactação. Investigou-se também o possível cross-talk da via de sinalização da insulina e da Angiotensina-II (Ang-II) no hipotálamo. Observou-se a redução da expressão do IRS-2, da AKT e da p-Ser473 AKT, concomitante com o aumento da expressão das subunidades regulatórias p85<font face=\"Symbol\">&#945;, p55<font face=\"Symbol\">&#945;, p50<font face=\"Symbol\">&#945; da PI3K e do receptor AT1a no hipotálamo na gravidez. No ARC, VMH e PVN observou-se co-localização da p85<font face=\"Symbol\">&#945; e do receptor AT1a, bem como aumento da expressão de ambos nessas regiões, nas ratas grávidas. O tratamento crônico com antagonista AT1 (losartan) produziu, nas grávidas redução significativa da expressão deste receptor, sem causar alteração na expressão da p85<font face=\"Symbol\">&#945;. A disfunção das vias da Ang-II e da insulina em graus variados pode levar a duas condições patológicas de alta prevalência e que muitas vezes são concomitantes: diabetes mellitus e hipertensão arterial. A melhor compreensão das alterações hipotalâmicas nas vias de sinalização da insulina e da Ang-II, bem como a caracterização molecular dessa interação, tanto nas situações fisiológicas (por exemplo na gravidez) como nas situações patológicas, poderá revelar alvos para futuras intervenções terapêuticas para diversas condições clínicas como a obesidade, o diabetes, a hipertensão arterial, a pré-eclâmpsia/eclâmpsia, etc... / Pregnancy is a period in which the female is temporarily exposed to a series of changes throughout the body, resulting in a condition similar to the metabolic syndrome, but that are carefully regulated to provide an adequate supply of substrates for the mother and the fetus. Pregnancy is characterized as defined in time and a physiological model of insulin resistance. Although during lactation, there is a systemic hypersensitivity to insulin. Activation of the insulin signaling pathways in the brain, particularly in the arcuate nucleus of the hypothalamus (ARC), plays an important role in glucose homeostasis. It is well established that angiotensin II (Ang-II) cross-talking to the insuling signaling pathway is capable of inducing serine phosphorylation of IR, IRS and the p85 regulatory subunit of PI3K. However, it is not clear whether there are changes in the insulin signaling pathway in areas of the central nervous system (CNS) responsible for homeostasis and glycemic control, such as the ARC, the ventromedial hypothalamic nucleus (VMH) and the paraventricular nucleus (PVN) during pregnancy, which could contribute to the symptoms of insulin resistance in this situation. The objective of this study was to evaluate the expression of intracellular insulin signaling proteins such as IRS1-2, PI3K (p85<font face=\"Symbol\">&#945;, p55<font face=\"Symbol\">&#945;, p50<font face=\"Symbol\">&#945;), AKT, p-Ser473 AKT and the expression of IR and AT1a receptors in the hypothalamus, and also specifically in the ARC, VMH and PVN during pregnancy and lactation. We also investigated the possible cross-talk of the insulin and Ang II signaling pathways within the hypothalamus. There was a reduction in IRS-2, AKT and p-Ser473AKT expression concomitant with increased expression of regulatory subunits p85<font face=\"Symbol\">&#945;, p55<font face=\"Symbol\">&#945;, PI3K p50<font face=\"Symbol\">&#945; and AT1a receptor in the hypothalamus in late pregnant rats. In the ARC, VMH and PVN it was observed co-localization of p85<font face=\"Symbol\">&#945; and AT1a receptor, and increased expression of both in these regions in pregnant rats. Chronic treatment with AT1 antagonist (losartan) produced a significant reduced expression of this receptor, without causing any changes in the expression of p85<font face=\"Symbol\">&#945;. The dysfunction of the Ang-II and insulin pathways can lead in different degrees to two conditions of high prevalence and often concomitant diseases such as diabetes mellitus and hypertension. A better understanding of the hypothalamic changes in insulin signaling pathways, the cross-talk with Ang-II and the molecular characterization of this interaction both in physiological (for example in pregnancy) and pathological situations may provide targets for future therapeutic intervention for various clinical conditions such as obesity, diabetes, hypertension, pre-eclampsia/eclampsia, etc...

Os comportamentos agonísticos sociais dispostos por animais dominantes e subordinados podem ser notados no paradigma residente intruso. No hipotálamo há o núcleo pré-mamilar ventral (PMv) ligado a um sistema sexualmente dimórfico e relacionado a reprodução e comportamentos agonísticos. A cópula é fundamental para a modulação do comportamento de dominância e aumenta os níveis de CART (Cocaine and Amphetamine Regulated Transcript) no PMv. Animais knockout de Sintase do Óxido Nítrico (NOS) apresentam agressão acentuada. Através da hibridização in situ estudamos a expressão de CART e de NOS nos animais com experiência sexual prévia ao encontro agonístico e sem experiência sexual (naive). No grupo que copulou foi visto aumento na expressão de CART e comportamento diferente do grupo naive visto que buscam a dominância e não apresentam posturas de submissão. Este aumento não foi observado nos níveis de NOS. Sugere-se que a experiência sexual esteja relacionada ao aumento de CART no PMv e possivelmente perda do comportamento subordinado e aumento da busca da dominância. / Aggressive behavior occurs when the interests of one or more individuals conflict. Territory is one of these interests, and the resident intruder paradigm is widely used to observe the expression of social agonistic behaviors. The dominance behavior has been studied under several views and it was shown that it can be raised by the presence of the female, its olfactory clues and by the sexual behavior. In the hypothalamus there is the premammillary ventralis nucleus (PMv) connected to a sexual dimorphic system and related to reproduction and agonistic behaviors. This nucleus was suggested as being involved in the modulation of aggressive behavior, and PMvs neuropeptides can have a direct relation with the expression of those agonistic behaviors. Males exposed to females olfactory clues show an increase in the expression of CART (C Cocaine and Amphetamine Regulated Transcript) in the PMv. Nitric oxide synthase (NOS) knockout animals show increased aggression. In the present investigation, using in situ hybridization we studied the expression of the mRNA of CART and NOS on intruders exposed to the resident-intruder paradigm. Two experimental groups were examined: one with sexual experience before the agonistic encounter and other naïve. It was observed increased expression of CART in the PMv in the sexual-experienced intruder. More, these animals behaved differently from naive intruders, and did not display submissive postures and start searching for dominance. Sexual experienced intruders presented increased expression of CART, but not NOS, mRNA. Thus, suggesting that the sexual experience is related to an increase in CART expression in the PMv and possibly with the lost of submissive behavior and increased search for dominance status.

Há evidências que o treinamento induz alterações plásticas e funcionais na alça suprabulbar do controle autonômico cardiovascular, mediados pelos barorreceptores arteriais. O presente estudo objetivou verificar os efeitos da desnervação sino-aórtica associada ou não ao treinamento (T) na expressão de neurônios noradrenérgicos, ocitocinérgicos e vasopressinérgicos, assim como o efeito temporal induzido pelo T. Foi possível constatar que o T aumenta a expressão de dopamina beta-hidroxilase e ocitocina, sem alteração a expressão de vasopressina, e que essas alterações neuropeptídicas precedem ao surgimento das alterações benéficas induzidas pelo T como o aumento da sensibilidade barorreflexa e bradicardia de repouso. Foi possível observar que a desnervação sino-aórtica bloqueia todos esses efeitos benéficos induzidos pelo T, diminuindo a expressão de dopamina beta hidroxilase, vasopressina e ocitocina no PVN. Contudo, esses dados sugerem que a via aferente Noradrenérgica, via barorreceptor, é essencial para ajustes benéficos cardiovasculares. / There is evidence aerobic training (T) determines plastic and functional changes in the suprabulbar modulatory loop of the cardiovascular autonomic control, many of them mediated by arterial baroreceptors. The present study aim to investigate the effects of sinoaortic denervation associated or not to T on noradrenergics, oxitocinergics, vasopressinergics neurons expression, as temporal effects induced by T. It was possible find augment on dopamine beta-hydroxilase and oxytocin expression, without changes on vasopressin expression, and that neuropeptidergic changes preceding appearance of beneficial training-induced, as well the increases baroreflex sensitivity and resting bradycardia. Data also indicate that sinoaortic denervation blocks all of these effects training-induced, decreases of dopamine beta-hidroxylase, vasopressin and oxytocin on the PVN. Therefore, those data suggests that noradrenergic afferents driven by barorreceptors are essencial to trigger beneficial training-induced cardiovascular adjustments.

Sepse induz exagerada produção de mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO), e causa alterações cardiovasculares, neuroendócrinas e de temperatura corporal (Tc). Na fase tardia da sepse existe liberação basal de vasopressina (AVP), apesar da hipotensão persistente. Uma hipótese para isso seria a inibição da síntese de AVP pelo aumento da produção de NO. Nosso objetivo foi investigar a possível participação do NO, produzido centralmente pelas isoformas de NO sintase (NOS), na expressão de AVP e ocitocina (OT), na resposta cardiovascular e de Tc durante sepse experimental. Ratos Wistar receberam injeção i.c.v. de L-NAME, inibidor não seletivo de NOS (250g/L), ou de aminoguanidina (AG,250g/L), inibidor seletivo da isoforma induzida (NOSi). Outro grupo recebeu inibidor da guanilato ciclase solúvel (ODQ,0,25g/L). Grupos controles receberam veículos (salina ou DMSO1%). Trinta minutos após as injeções, foi induzido sepse por ligadura e perfuração cecal (CLP) ou operação fictícia. Os animais foram divididos em 4 grupos: 1) avaliação da sobrevida, 2) determinação da Tc, 3) aferição da pressão arterial (PAM) e frequência cardíaca (FC) e 4) avaliação de parâmetros hidroeletrolíticos e secreção de AVP e OT. A CLP promoveu alta mortalidade, aumentou NO progressivamente, diminuiu PAM e aumentou FC. A concentração plasmática de AVP (AVPp) aumentou na fase inicial da sepse e por seu efeito antipirético pode ter contribuído para a hipotermia observada. A razão de expressão para ambos os hormônios diminuiu nos núcleos supraóticos (SON) e paraventriculares (PVN). Na fase tardia AVPp estava basal e sua expressão nos SON e PVN mais diminuída do que na fase inicial. A expressão de OT diminuiu somente no SON. O pré-tratamento com L-NAME aumentou a sobrevida, reduziu a produção de NO até 20h, aumentou PAM e Tc, e manteve a FC semelhante ao grupo veículo. AVPp aumentou simultaneamente à diminuição da razão de expressão em ambos os núcleos. Na fase tardia, o grupo L-NAME apresentou NO aumentado e expressão de AVP diminuída, aparentemente contribuindo para AVPp basal e hipotensão. O L-NAME diminuiu a razão de expressão de OT na fase inicial, mas aumentou na fase tardia. A inibição de NOSi pela AG aumentou ainda mais a sobrevida e Tc. Apesar de não bloquear a produção de NO a AG aumentou a expressão de AVP e OT e manteve AVPp constante e acima da basal. Injeção i.c.v de AG aumentou PAM somente na fase inicial da sepse. O pré-tratamento com ODQ foi o mais eficiente em aumentar a sobrevida e Tc após CLP. Entretanto, não alterou o aumento progressivo de NO, e ainda diminuiu a expressão de AVP e OT. A AVPp basal após ODQ contribuiu para a hipotensão observada durante todo o período. Esses resultados mostram que aumento central de NO após CLP inibe a expressão de AVP e OT independente de GMPc no SON e parcialmente dependente no PVN. A inibição da expressão de AVP na fase tardia da sepse resulta em concentração basal do hormônio contribuindo para a hipotensão. Em nossos experimentos o controle da temperatura corporal teve maior contribuição no aumento da sobrevida durante sepse polimicrobiana do que a regulação neuroendócrina e/ou cardiovascular. / Sepsis induces massive production of inflammatory mediators, such as nitric oxide (NO), and causes cardiovascular, neuroendocrine and body temperature (Tb) alterations. In the late phase of sepsis there is a basal vasopressin (AVP) release despite the persisting hypotension. One reason could be the inhibition of AVP synthesis by the increase in NO production. Our aim was to investigate the possible involvement of NO, produced centrally by NO synthase (NOS) isoforms, on AVP and oxytocin (OT) expression, cardiovascular response and Tb during experimental sepsis. Male Wistar rats received an i.c.v. injection of the non-selective NOS inhibitor L-NAME (250g/L), or of aminoguanidine (AG,250g/L), a selective inhibitor of its inducible isoform (iNOS). Another group received soluble guanylate cyclase inhibitor (ODQ,0.25µg/L). Control groups received vehicles (saline or DMSO1%). Thirty minutes after the injections, sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP), or the rats were sham operated. The animals were divided into 4 groups for: 1) assessment of survival, 2) determination of Tb, 3) measurement of blood pressure (MAP) and heart rate (HR), and 4) evaluation of hydroelectrolytic parameters and AVP and OT secretion. The CLP promoted high mortality and progressive increase in NO levels. It also decreased MAP and increased HR. The AVP plasma concentration (AVPp) increased in the early phase of sepsis and its antipyretic effect may have contributed to the observed hypothermia. The expression ratio of both hormones was reduced in the supraoptic (SON) and paraventricular (PVN) nuclei. In the late phase, AVPp was basal and its expression decreased in both nuclei more than in the initial phase. The OT expression decreased only in the SON. L-NAME pretreatment increased the survival and reduced the NO production until 20h. MAP and Tb were increased, while HR remained similar to that observed in the vehicle control group. AVPp increased simultaneously to the decrease of its expression ratio in both nuclei. In the late phase, the L-NAME group showed NO levels increased and decreased AVP expression, apparently contributing to basal AVPp and hypotension. The L-NAME decreased OT expression ratio in the initial phase, but increased in the late phase. Inhibition of iNOS by AG further increased the survival and Tb. Even though AG did not block NO production, it increased AVP and OT expression and kept AVPp constant and above the baseline. AG pretreatment increased MAP only in the initial phase of sepsis. The ODQ pretreatment was more efficient to increase survival and Tb after CLP. However it neither altered the progressive NO increase nor the decrease in AVP and OT expression ratio. The basal AVPp after ODQ contributed to hypotension observed during the studied period. These results show that the increased central NO levels observed after CLP inhibit cGMP-independent hormone expression in the SON and partially dependent in the PVN. Inhibition of AVP expression, in the late phase of sepsis, results in basal concentrations of this hormone further contributing to hypotension. In our experiments the control of body temperature during polymicrobial sepsis had greater contribution in survival than the neuroendocrine and/or cardiovascular regulation.

A parte ventral da área pré-óptica medial (MPOA) apresenta o RNAm do prépró-hormônio concentrador de melanina (ppMCH) e o MCH apenas durante a lactação, especialmente entre os dias 19º e 21º. Fibras imunorreativas ao MCH (MCH-ir) e ocitocinérgicas (OT-ir) de origem desconhecida transitam na lâmina interna da eminência mediana (MEi) e na hipófise posterior (PPit). Utilizamos ratas lactantes da linhagem Long-Evans para identificar a origem dessas fibras, caracterizar sua relação na MEi e PPit e quantificar o ppMCH e OT na PPit. A imuno-histoquímica mostrou que não há colocalização entre as fibras MCH-ir e OT-i e há uma proximidade entre suas fibras na MEi e PPit. A dupla hibridização in situ e imuno-histoquímica mostrou que os neurônios retrogradamente marcados com FG após injeção intravascular expressam o RNAm do ppMCH na MPOA e no núcleo paraventricular do hipotálamo. O Western Blotting mostrou uma maior presença do ppMCH na PPit no 19º dia de lactação. Os dados sugerem que o MCH atua no controle neuroendócrino para o término do período de lactação. / The ventral part of the medial preoptic area (MPOA) has been described as the novel harbor of the expression of prepro-melanin-concentrating hormone (ppMCH) mRNA and MCH peptide, only during the end of lactation, especially between the 19th and 21st days. MCH-ir and OT-ir fibers are described as passing in the internal layer of the median eminence (MEi). However, the origin of MCH-ir fibers and its possible relationship with the OT-ir fibers are not known. Long-Evans rats were used to identify the origin of these fibers and characterize their relationship into MEi and PPit and quantify ppMCH and OT in PPit. Immunohistochemistry showed no colocalization between MCH-ir and OT-ir fibers, but a closeness between these fibers into MEi and PPit. Using a combination of in situ hybridization and immunohistochemistry we have showed that neurons retrogradely labeled with FG after intravascular injection express the ppMCH mRNA into MPOA and paraventricular nucleus of the hypothalamus. The Western blotting showed an increase of ppMCH in the PPit parallel with a decrease of OT-ir on the 19th day of lactation. The data suggest that MCH acts on the neuroendocrine control towards the end of the lactation period.

O hipotálamo modula comportamentos relacionados à motivação, recompensa e punição através de projeções para a área tegmental ventral (VTA), o núcleo dorsal da rafe (DR) e o núcleo tegmental rostromedial (RMTg). Nesse estudo, investigamos através de métodos de rastreamento retrógrado as entradas hipotalâmicas da VTA, do DR e do RMTg e, se neurônios hipotalâmicos individuais inervam mais do que uma dessas regiões. Também determinamos uma possível assinatura GABAérgica ou glutamatérgica das aferências hipotalâmicas, através de rastreamento retrógrado combinado com métodos de hibridação in situ. Observamos que VTA, DR e RMTg recebem um padrão bastante semelhante de entradas hipotalâmicas originando de neurônios de projeção glutamatérgicas e GABAérgicas, a maioria deles (> 90%) inervando somente um desses três alvos. Nossos achados indicam que entradas hipotalâmicas são importantes fontes de sinais homeostáticos para a VTA, o DR e o RMTg. Eles exibem um alto grau de heterogeneidade que permite de excitar ou inibir as três estruturas de forma independente ou em conjunto. / The hypothalamus modulates behaviors related to motivation, reward and punishment via projections to the ventral tegmental area (VTA), dorsal raphe nucleus (DR), and rostromedial tegmental nucleus (RMTg). In this study we investigated by retrograde tracing methods hypothalamic inputs to the VTA, DR, and RMTg, and whether individual hypothalamic neurons project to more than one of these structures. We also determined a possible GABAergic or glutamatergic phenotype of hypothalamic afferents, by combining retrograde tracing with in situ hybridization methods. We found that VTA, DR, and RMTg receive a very similar set of hypothalamic afferents originating from glutamatergic and GABAergic hypothalamic projection neurons, the majority of them (> 90%) only innervating one of these structures. Our findings indicate that hypothalamic inputs are important sources of homeostatic signals for the VTA, DR, and RMTg. They exhibit a high degree of heterogeneity which permits to activate or inhibit the three structures either independently or jointly.