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Caracterização genética da resistência antimicrobiana em isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa provenientes de um Hospital Universitário em Recife, PernambucoALVES, Lilian Rodrigues 08 March 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-03-08 / Propesq-UFPE, CNPq e CAPES / Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista associado a infecções relacionadas à assistência a saúde (IRAS), cuja principal característica é a capacidade de desenvolver resistência a diversos antimicrobianos através da produção de enzimas metalo-β-lactamases (MβLs) e KPC (Klebsiella pneumoniae-carbapenemase), além da hiperexpressão dos sistemas de efluxo multidroga. O objetivo do estudo foi caracterizar o perfil de fenotípico e genético de resistência, bem como determinar o grau de similaridade genética de isolados clínicos de P. aeruginosa provenientes de um hospital universitário em Recife, Pernambuco, no período de abril a agosto de 2011 e maio a setembro de 2012. O perfil de susceptibilidade dos isolados de P. aeruginosa foi determinado pela técnica de disco-difusão, segundo critérios do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2012). A pesquisa dos genes mexA, mexE e mexX foi realizada em isolados multidroga resistentes (MDR) e a pesquisa dos genes blaSPM, blaIMP, blaVIM e blaKPC foi realizada em isolados que apresentaram resistência a cefalosporinas e carbapenêmicos. Os genes descritos foram detectados pela Reação em Cadeia da Polimerase. Todos os isolados foram submetidos à tipagem molecular através da técnica de amplificação de sequências de consenso intergênicas repetitivas de enterobactérias (ERIC-PCR). Cento e vinte isolados de P. aeruginosa apresentaram taxas de resistência variando de 7,5% para polimixina e 52,5% para cefotaxima. Não foram observados genes MβL nos 17 isolados resistentes a ceftazidima e imipenem ou meropenem. O gene blaKPC foi encontrado em 4/33 isolados resistentes aos carbapenêmicos. Os genes mexA e mexE foram detectados em 67/69 isolados MDR e o mexX em 66/69. A ERIC-PCR demonstrou 82 perfis genéticos distintos entre os 120 isolados. Neste estudo, concluiu-se que os sistemas de efluxo e a KPC parecem contribuir para a resistência de isolados de P. aeruginosa. A heterogeneidade genética observada pode estar relacionada com a variabilidade genética desta espécie bacteriana oriunda de mutações não letais e recombinações, como a conjugação e transformação.
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Investigação do antagonismo entre Pseudomonas aeruginosa e bactérias do grupo coliformeVasconcelos da Rocha Gomes, Ulrich January 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005 / A interferência da bactéria P. aeruginosa sobre o grupo coliforme é conhecida nas análises de água e sua enumeração tem sido questionada durante os últimos anos por ser considerada apenas um patógeno oportunista não habitante do trato intestinal de animais de sangue quente. No entanto, a grande versatilidade metabólica, daria vantagens à bactéria P. aeruginosa sobre outros microrganismos presentes na água. Neste trabalho, foi investigada a ação antagonista de 16 linhagens da bactéria P.aeruginosa, isoladas de diferentes amostras de águas de consumo humano e águas residuárias, contra bactérias do grupo coliforme. A existência de antagonismo foi observada em todas as linhagens no teste em meio sólido. As três linhagens mais agressivas foram submetidas ao teste em meio líquido. O contato se deu entre a bactéria P. aeruginosa com 72h de vantagem de crescimento, contra bactérias do grupo coliforme com inóculo inicial cerca de 102UFC/mL em caldo Műeller-Hinton em uma concentração de 10% da composição original. Entre 24h e 96h após o contato, o NMP/100mL das duas populações foi estimado utilizando a técnica dos tubos múltiplos em série de cinco. O fenômeno de antagonismo foi observado quando os inóculos iniciais partiram de 102UFC/mL e evidenciado quando a piocianina estava presente. E. aerogenes se mostrou mais sensível que E. coli. Este trabalho reascende uma discussão sobre a inclusão da bactéria P. aeruginosa como uma ferramenta adicional nas análises de água de consumo
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Toxicidade de Microcystis aeruginosa (Cyanobacteria) produtora de microcistinas em cladóceros tropicais : investigação sob diferentes vias de exposiçãoSANTOS, Alane Silva de Aquino dos 27 July 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-07-27 / Cyanobacteria can produce various toxic metabolites such as bioactive alkaloids and peptides. Among these, the microcystins are the most reported, and may interfere with the quality of the water body, causing ecological damages such as changes in the food chain, local biodiversity decline, and impacts on public health. Microcystins may be retained within the cell or be released by cell lysis in the senescence phase of flowering in the aquatic environment where the animals are exposed to these two routes of exposure in the environment. Therefore, the toxicity of intact cells and crude aqueous extract of microcystin-LR-producing cells Microcystis aeruginosa NPLJ-4 on cladocerans was estimated. The effects on mortality, age of first reproduction, mean fecundity, total neonates, survival, somatic and population growth of Ceriodaphnia cornuta and Macrothrix spinosa were evaluated. The animals were more sensitive to intact cells. The two routes of exposure affected the population parameters of cladocerans, but the intact cells were more toxic. The somatic growth rate of the animals was not affected by the crude extract, and there were no significant differences between treatments and control. These results show that intake of intact cells is more toxic to cladocerans than exposure to toxins released into the water. With this study, it is hoped to contribute to the knowledge of the interactions between zooplankton and toxic cyanobacteria, especially under blooming events. / As cianobactérias podem produzir vários metabólitos tóxicos como alcaloides e peptídeos bioativos. Dentre estes, as microcistinas são os mais reportados, podendo interferir na qualidade do corpo d’água, causando danos ecológicos tais como alterações na cadeia trófica, declínio da biodiversidade local, bem como impactos na saúde pública. As microcistinas podem estar retidas dentro da célula ou serem liberadas através de lise celular em fase de senescência da floração no ambiente aquático, onde os animais são expostos a essas duas vias de exposição no ambiente. Diante disso, foi estimada a toxicidade de células intactas e extrato bruto aquoso de células da linhagem Microcystis aeruginosa NPLJ-4 produtora de microcistina-LR, sobre cladóceros. Foram avaliados os efeitos sobre a mortalidade, idade da primeira reprodução, fecundidade média, total de neonatos, sobrevivência, crescimento somático e populacional de Ceriodaphnia cornuta e Macrothrix spinosa. Os animais foram mais sensíveis a células intactas. As duas vias de exposição afetaram os parâmetros populacionais dos cladóceros, porém as células intactas foram mais tóxicas. A taxa de crescimento somático dos animais não foi afetada pelo extrato bruto, não havendo diferenças significativas entre os tratamentos e controle. Esses resultados mostram que a ingestão de células intactas é mais tóxica para os cladóceros que a exposição às toxinas liberadas na água. Com este estudo, espera-se contribuir para o conhecimento das interações entre o zooplâncton e as cianobactérias tóxicas, sobretudo sob eventos de florações.
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Influência do pH e carbono inorgânico na competição entre as cianobactérias Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis aeruginosa / Influence of pH and inorganic carbon on competition between cyanobacteria Cylindrospermopsis raciborskii and Microcystis aeruginosaBRITO, Maiara Tábatha da Silva 20 February 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cyanobacterial bloom in freshwater are mainly associated with the nutritional enrichment of the water, but currently, high concentration of atmospheric carbon dioxide (CO2) is also favoring its dominance. During bloom, the consumption of free CO2 and nutrients increases the pH of the water. Thus, when it diffuses in water, atmospheric CO2 becomes available as bicarbonate (HCO3-) and carbonate (CO32-), promoting changes in the phytoplankton community due to the competitive advantage that some species present in use of HCO3-. Cylindrospermopsis raciborskii and Microcystis aeruginosa are cyanobacteria widely distributed in freshwater aquatic ecosystems, bloom forming and known to make use of HCO3-. This study was carried out in order to investigate the competitive relationship between these species due to changes in pH and availability of inorganic carbon. Were performed cultures with and without aeration, with and without bicarbonate and in three different pH conditions (free, 6.8 and 8.2) with the strains ITEP-A1 of C. raciborskii and NPLJ4 of M. aeruginosa. Cultures started with the same biovolume and had their exponential growth phase extended from reinoculation into new culture medium (returning to the initial biovolume). For the mixed cultures the species with the lowest growth was considered. The growth rates (μ.day -1) and species yield, pH, alkalinity and inorganic carbon of the cultures were evaluated by repeated measures ANOVA. Isolate M. aeruginosa presented higher growth rates at pH 8.2 and free, and reduced growth at pH 6.8 while C. raciborskii was not influenced by pH. Both species promoted significant changes in pH in the non-buffered cultures (free pH). Aeration and bicarbonate were determinant factors for the response of the species in the competition cultures. In non-buffered cultures, with aeration and without addition of bicarbonate C. raciborskii was better competitor than M. aeruginosa, whereas this was best competitor in the cultures without aeration and with addition of bicarbonate. It was possible to observe changes in the competitive responses of the species to changes in pH and alkalinity and, consequently, to the proportions of dissolved inorganic carbon. Thus, with increased eutrophication of aquatic ecosystems associated with increased alkalinity and pH, changes in the competitive relationships of species are likely to occur, since the relief of inorganic carbon limitation may favor the dominance of potentially toxic cyanobacteria such as those of the genus Microcystis. / Florações de cianobactérias em ambientes límnicos são associadas principalmente ao enriquecimento nutricional dos mananciais porém, atualmente, altas concentração de dióxido de carbono (CO2) atmosférico também vem favorecendo sua dominância. Durante a floração, o consumo de CO2 livre e de nutrientes elevam o pH das águas. Assim, ao se difundir na água o CO2 atmosférico torna-se disponível como bicarbonato (HCO3-) e/ou carbonato (CO32-), promovendo mudanças na comunidade fitoplanctônica devido a vantagem competitiva que algumas espécies apresentam no uso do HCO3-. Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis aeruginosa são cianobactérias amplamente distribuídas nos ecossistemas aquáticos dulciaquícolas, formadoras de florações e conhecidas por fazer uso do HCO3-. Este estudo foi realizado a fim de investigar a relação competitiva entre estas espécies diante de mudanças no pH e disponibilidade de carbono inorgânico. Foram realizados cultivos com e sem aeração, com e sem adição de bicarbonato e em três diferentes condições de pH (livre, 6,8 e 8,2) com as cepas ITEP-A1 de C. raciborskii e NPLJ-4 de M. aeruginosa. Os cultivos iniciaram-se com o mesmo biovolume e tiveram a sua fase de crescimento exponencial estendida a partir de reinoculação em novo meio de cultura (retornando ao biovolume inicial). Para os cultivos mistos considerou-se a espécie com o menor crescimento. As taxas de crescimento (μ.dia -1) e rendimento das espécies, o pH, alcalinidade e carbono inorgânico dos cultivos foram avaliados por ANOVA Fatorial de medidas repetidas. Isoladamente, M. aeruginosa apresentou maiores taxas de crescimento em pH 8,2 e livre, e crescimento reduzido em pH 6,8, enquanto C. raciborskii não foi influenciada pelo pH. Ambas as espécies promoveram mudanças significativas no pH nos cultivos não tamponados (pH livre). A aeração e o bicarbonato foram fatores determinantes para a resposta das espécies nos cultivos em competição. Nos cultivos não tamponados, com aeração e sem adição de bicarbonato C. raciborskii foi melhor competidora que M. aeruginosa, enquanto que esta foi melhor competidora nos cultivos sem aeração e com adição de bicarbonato. Foi possível constatar mudanças nas respostas competitivas das espécies diante de alterações no pH e alcalinidade e, consequentemente, das proporções de carbono inorgânico dissolvido. Assim, com o aumento da eutrofização dos ecossistemas aquáticos associado a um aumento da alcalinidade e pH, mudanças nas relações competitivas das espécies estão propensas a ocorrer, visto que o alivio da limitação por carbono inorgânico pode favorecer a dominância de cianobactérias potencialmente tóxicas como as do gênero Microcystis.
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Efeitos da disponibilidade de luz e limitação de nutrientes sobre a competição entre cepas de Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis aeruginosaOliveira, Marina Junqueira Melgaço de 14 June 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007-06-14 / O aumento da ocorrência e dominância de Cylindrospermopsis raciborskii em
ecossistemas aquáticos continentais, observado em todo o mundo tem resultado, em
muitos casos, na substituição de outras espécies de cianobactérias, como Microcystis
aeruginosa. Os fatores relacionados a essa dominância ainda não são bem
compreendidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da luz e nutrientes na
competição entre C. raciborskii e M. aeruginosa. Foram realizados experimentos em
cultivos unialgais visando determinar a dinâmica de absorção de nitrogênio (N) e
fósforo (P) por 4 cepas (2 cepas de C. raciborskii, 2 de M. aeruginosa). As habilidades
competitivas das duas espécies foram avaliadas em cultivos mistos em 3 condições de
intensidade luminosa (alta, média e baixa) e de limitação de N e P. As quatro cepas
estudadas apresentaram a mesma dinâmica na assimilação de nutrientes,absorvendo
rapidamente N e P (ca. 24hs) e com taxas de crescimento, tempo de duplicação e
rendimento máximo da cultura semelhantes. Nos experimentos de competição as
cepas de M. aeruginosa foram dominantes na maior intensidade luminosa nas
condições P-limitada e controle e na limitação por N apenas no ultimo bloco. Na menor
intensidade foi dominante apenas nos dois últimos blocos na condição controle. Na
intensidade média foi dominante na condição controle no ultimo bloco, com limitação
de fósforo e nitrogênio nos dois últimos blocos. Enquanto que apenas uma cepa C.
raciborskii foi dominante na condição controle na menor intensidade luminosa. Na
condição N-limitada, C. raciborskii foi dominante apenas na menor intensidade no
primeiro bloco e na maior intensidade no segundo bloco de experimentos. Na condição
P-limitada, C. raciborskii não foi dominante em nenhum momento. Fica evidente
portanto, a influência e interação da disponibilidade de luz e nutrientes na competição
entre C. raciborskii e M. aeruginosa, contudo, as respostas são dependentes das cepas, e as generalizações específicas devem ser avaliadas com cuidado. / The increase in occurrence and dominance of the cyanobacteria Cylindrospermopsis
raciborskii in freshwater ecosystems, observed worldwide, has resulted, in many
cases, in a replacement of other species like Microcystis aeruginosa. The factors
related with this dominance are still unknown. The aim of this work was to evaluate the
influence of light and nutrients in the competition between C. raciborskii and M.
aeruginosa. Experiments with 4 strains (2 strains of C. raciborskii, 2 strains of M.
aeruginosa) in unialgal cultures have been accomplished to determine the nitrogen (N)
and phosphorus (P) uptake dynamics. Competitive abilities of the two species have
been evaluated in mixed cultures under 3 light intensities (high, medium and low) and
under N and P limitation. The 4 studied strains presented the same nutrient uptake
dynamics, absorbing N and P quickly (ca. 24 hours) and similar growth rates, mean
doubling time and maximum yield of the cultures. At competition experiments M.
aeruginosa was dominant in P-limited and control conditions under high and medium
light intensities. C. raciborskii strains presented different responses: one of them was
dominant in all conditions under low light intensity and also N-limited condition under
medium light intensity. The other was dominant only in the N-limited and control
conditions under low light intensity. It’s then evident the influence of the availability of
light and nutrients in the competition between C. raciborskii and M. aeruginosa,
however, the responses rely on the strains and specific generalization should be
carefully evaluated.
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Desinfecção de água contaminada por Pseudômonas Aeruginosa via radiação ultravioleta: modelagem e desenvolvimento cinéticoJohn Pereira Neves, Henrique 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O lançamento no meio ambiente de esgotos sanitários, em estados brutos ou
parcialmente tratados, tem constituído uma ameaça à população. A irradiação por luz
UV-C é uma técnica de ponta para desinfecção de águas de consumo e residuárias. A
bactéria Pseudomonas aeruginosa é resistente ao tratamento convencional por cloração,
devido à sua fisiologia oposta via de regra por uma cápsula extracelular, sendo
responsável por infecções hospitalares em pacientes imunodeprimidos. Este trabalho
está relacionado com o estudo da cinética do processo de desinfecção de água
contaminada com a bactéria Pseudomonas aeruginosa por meio de Radiação UV-C. Os
estudos cinéticos foram realizados em um fotorreator anular operando em batelada
dentro de um ciclo contínuo. A fonte de radiação UV-C utilizada foi a lâmpada
germicida, marca Philips modelo TUV 36W. Dois tipos de água modelo foram
utilizados: a) água-modelo sem nutriente: suspensão de bactéria em água destilada
previamente esterilizada, para processo com e sem radiação, b) água-modelo com
nutriente: suspensão de bactéria em água destilada previamente esterilizada e meio
asparagina, fazendo-se o estudo com radiação. A concentração de Pseudomonas
aeruginosa foi quantificada por meio da técnica de contagem em placas. Concentração
inicial da bactéria na água-modelo variou na faixa de 200 a 1600 UFC/cm3. Os
parâmetros óticos da Pseudomonas aeruginosa, do meio Asparagina e da suspensão
tratada foram medidos de faixa de comprimento de onda de 254 nm. A pressão e
temperatura foram a 1 atm e 25ºC, respectivamente. As evoluções dinâmicas da
concentração da bactéria e dos parâmetros óticos foram obtidas. Observou-se que o
tempo de processo para que esta concentração chegasse a zero aumentou de acordo com
a concentração inicial de bactéria, em ambas as situações. Para água-modelo sem
nutriente obteve-se a esterilização da água (eficiência de inativação de 100%), no
entanto para água-modelo com nutriente obteve-se água desinfetada. Os parâmetros
para água-modelo sem nutriente foram invariantes com o tempo, porém para o sistema
com nutriente decrescia ao longo do processo. A modelagem do processo foi feita com
base nos princípios da conservação da matéria e energia variante. Assumiu-se que o
modelo cinético simplificado para a inativação da bactéria em que a taxa de inativação é
uma função direta do rendimento quântico, do parâmetro LVRPA, e da concentração
inicial de bactéria. O método de Runge-Kutta de quarta ordem foi utilizado para
solucionar a equação diferencial do perfil de concentração. Os parâmetros cinéticos
foram estimados utilizando-se rotina de otimização Box-Simplex
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Utilização de marcadores de rDNA-PCR e tDNA-PCR para tipagem de isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosaSPACOV, Isabel Cristina Guerra January 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005 / Pseudomonas aeruginosa é uma bacteria Gram-negativa ubíqua e oportunista. Na rotina
hospitalar, os marcadores fenotípicos nem sempre revelam a diversidade das bactérias
distribuídas nos diversos setores, assim, aplicamos três métodos moleculares baseados na
amplificação por PCR do locus de rDNA e tDNA para caracterizar a diversidade genética de
linhagens de P. aeruginosa isoladas em um hospital público em Recife-PE, Brasil. O rDNA-PCR
detectou 15% de variabilidade genética, contra 23% do tDNA-PCR e 23% do Duplex-PCR. O
setor com maior diversidade genética foi a Unidade de Tratamento Intensivo do hospital, o qual
apresentou quatro genótipos bacterianos diferentes. A ocorrência de linhagens de P. aeruginosa
pertencentes ao mesmo genótipo e mesmo perfil de resistência a múltiplas drogas (MDR), em
diferentes setores do hospital, sugere que há infecção cruzada entre pacientes. Os dados
apresentados pelo rDNA-PCR, tDNA-PCR e Duplex-PCR, em associação ao perfil de
susceptibilidade antimicrobiana provêem valiosas informações epidemiológicas para o controle
de infecções hospitalares causadas por P. aeruginosa
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Pseudomonas aeruginosa: estudo epidemiológico e da ação do óxido nítrico sobre biofilmes de amostras mucoides de pacientes com fibrose císticaPIRES, Eduardo José Valença Cordeiro 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Atualmente, a Pseudomonas aeruginosa é o bacilo Gram-negativo mais reportado em casos
de infecções hospitalares. Sua elevada resistência a antimicrobianos e desinfetantes
químicos pode ser explicada, em parte, pela forma de crescimento em biofilmes. A variante
mucóide da P. aeruginosa, comumente isolada de pacientes com fibrose cística, é capaz de
produzir grandes quantidades de alginato, resultando em biofilmes extremamente
complexos. O presente estudo objetivou realizar um levantamento da prevalência da P.
aeruginosa, bem como seu perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos no Hospital das
Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco (HC), assim como avaliar a ação do óxido
nítrico sobre biofilmes de amostras mucóides da mesma bactéria oriundas de pacientes com
fibrose cística do Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP),
Recife-PE. Para a análise da prevalência, foi realizado um estudo retrospectivo baseado no
livro de registros de secreções diversas do laboratório de bacteriologia do HC. Biofilmes de
amostras mucóides e não-mucóides de pacientes com fibrose cística do IMIP foram
analisados sobre microscopia eletrônica de varredura. As bactérias mais freqüentes,
isoladas das secreções diversas, foram P. aeruginosa (26%) e S. aureus (25%). Quanto à
origem, a P. aeruginosa parece ser um patógeno essencialmente respiratório, uma vez que
33% das amostras positivas para esta bactéria foram de secreções traqueais e 21% nasais.
Os antimicrobianos mais eficazes contra a P. aeruginosa foram Amicacina, Imipenem,
Meropenem e Aztreonam. Biofilmes de amostras mucóides da P. aeruginosa são muito
mais complexos se comparados aos das amostras não-mucóides. No primeiro caso, as
bactérias se agregam em estruturas que lembram teias de aranha que se fixam ao substrato
formando grandes estruturas complexas no interior das microcolônias. Portanto, apesar da
elevada prevalência no HC, a P. aeruginosa mostrou boa sensibilidade aos antimicrobianos
testados naquele hospital. Ainda concluindo, biofilmes desta bactéria apresentam grande
complexidade e necessitam de estudos mais aprofundados. Apesar de mais complexos,
biofilmes mucóides da P. aeruginosa podem ser inibidos na presença de concentrações
nanomolares do nitroprussiato de sódio
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Caracterização de Pseudomonas aeruginosa encontradas colonizando e/ou infectando pacientes queimados internados em um hospital público da cidade do Rio de JaneiroSilva, Keila de Cássia Ferreira de Almeida 13 March 2017 (has links)
Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-03-13T18:09:59Z
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Silva, Keila de Cássia Ferreira de Almeida [Dissertação, 2016].pdf: 1387702 bytes, checksum: 5161fb19d344833ea4e10e115c322cf4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T18:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Silva, Keila de Cássia Ferreira de Almeida [Dissertação, 2016].pdf: 1387702 bytes, checksum: 5161fb19d344833ea4e10e115c322cf4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pseudomonas aeruginosa é um dos principais patógenos causadores de infecções graves em pacientes queimados, estando associado a elevadas taxas de mortalidade e morbidade. A alta plasticidade de seu genoma confere a este microrganismo a capacidade de tornar-se multirresistente a antimicrobianos, dificultando o tratamento devido à redução de opções terapêuticas. Este estudo teve como objetivo analisar 35 cepas de P. aeruginosa isoladas de pacientes queimados e da mesa onde era realizada a balneoterapia em um centro de tratamento de queimados (CTQ), determinando o perfil de resistência aos antimicrobianos, os fatores genéticos relacionados à virulência e resistência antimicrobiana, a capacidade de produzir biofilme e ação de biocidas sobre o mesmo, além de realizar tipificação molecular das cepas envolvidas. A suscetibilidade antimicrobiana foi verificada utilizando o método de disco-difusão, segundo os critérios do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). A pesquisa de genes de resistência que codificassem β-lactamases (blaPER-1, blaCTX-M, blaOXA-10, blaGES-1, blaVIM, blaIMP, blaSPM-1, blaKPC, blaNDM e blaSIM) e dos genes de virulência exoS e exoU, foi realizada através da técnica de Polymerase Chain Reaction (PCR). O teste fenotípico Carba NP, foi utilizado com a finalidade de detectar atividade hidrolítica enzimática à carbapenemas. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada em placa para microtitulação e em cupom de aço inoxidável, sendo este último utilizado para verificar a eficácia de três agentes biocidas (hipoclorito de sódio 1%, peróxido de hidrogênio 5% e clorexidina 4%) na remoção dos biofilmes formados. As cepas foram tipificadas através da técnica de Multilocus Sequence Typing (MLST). De acordo com o teste de suscetibilidade antimicrobiana, foi observado um elevado padrão de resistência, com 71,5% (25/35) das cepas sendo resistentes a multidrogas (MDR). O maior percentual de resistência foi para o ciprofloxacino (94,3%; 33/35), seguido da gentamicina (88,6%; 31/35). Também foi observada resistência aos β-lactâmicos, inclusive à carbapenemas (22,9%; 8/35). Com relação aos genes de resistência pesquisados foi encontrado em 34,3% (12/35) das cepas o blaGES-1 e em uma única cepa o blaCTX-M. Nenhum gene codificador de carbapenemases pesquisado foi encontrado. Da mesma forma, nenhuma atividade hidrolítica enzimática ao imipenem foi detectada através do teste Carba NP, sugerindo que outros mecanismos de resistência possam estar envolvidos, como superexpressão de bomba e perda de porina de membrana externa (OprD). O gene de virulência exoS foi o mais prevalente estando presente em 71,4% (25/35) das cepas, enquanto o gene exoU foi detectado em 14,3% (5/35), porém todas as cepas que abrigavam este gene eram carbapenemas resistentes. Onze (31,4%) das 35 cepas, foram formadoras de biofilme utilizando a placa de microtitulação, sendo estas em sua maioria (81,8%) pertencentes ao clone A (obtido através de tipificação por PFGE em estudo prévio), o qual era o mais prevalente infectando/colonizando pacientes e contaminando a mesa de balneoterapia. A remoção do biofilme formado em superfície de cupom de aço inoxidável foi eficaz para os três biocidas testados (hipoclorito de sódio 1%, peróxido de hidrogênio 5% e clorexidina 4%), não havendo contagem de células viáveis das cepas analisadas após contato com os mesmos. A tipificação por MLST originou dois tipos de sequenciamentos novos, ST2236 e ST2237. Conclui-se com este estudo, que a redução de opções terapêuticas associada à presença de genes de virulência, pode agravar a situação destes pacientes. Assim como a presença de genes como blaGES-1 e blaCTX-M é preocupante, pois podem ser difundidas entre as demais cepas por transmissão horizontal, se não houver um controle adequado. Entretanto, o teste de remoção dos biofilmes mostrou que se a desinfecção for realizada de maneira correta, a contaminação cruzada entre pacientes pode ser evitada. / Pseudomonas aeruginosa is major causative pathogens of serious infections in burn patients and is associated with high mortality and morbidity rates. The high plasticity of its genome confers to this organism the ability to become multiresistant to antibiotics, difficulting the threathment due to reduced therapeutic options. This study aimed to analyze 35 strains of P. aeruginosa isolated from burn patients and the tank where balneotherapy was held in a burn treatment center (BTC), determining the resistance profile to antimicrobial agents, genetic factors related to virulence and antimicrobial resistance, the ability to produce biofilms and biocide action thereon and perform molecular typing of the strains involved. Antimicrobial susceptibility was assessed using the disk diffusion method, according to the criteria of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). The research for resistance genes encoding β-lactamases (blaPER-1, blaCTX-M, blaOXA-10, blaGES-1, blaVIM, blaIMP, blaSPM-1, blaKPC, blaNDM and blaSIM) and the virulence genes exoS and exoU was performed using the Polymerase Chain Reaction (PCR). The phenotypic test Carba NP, was used in order to detect enzymatic hydrolytic activity to carbapenems. Biofilm formation ability was evaluated through plate for microtitration and stainless steel coupon, the latter being used to verify the efficacy of three biocides (sodium hypochlorite 1%, hydrogen peroxide 5% and chlorhexidine 4%) to remove formed biofilms. The strains were typed by Multilocus Sequence Typing technique (MLST). According to the antimicrobial susceptibility test, a high resistance pattern was observed in which 71.5% (25/35) of strains were multidrug resistant (MDR). The highest percentage of resistance was to ciprofloxacin (94.3%; 33/35), followed by gentamicin (88.6%; 31/35). It was also observed resistance to β-lactams antibiotics, including the carbapenems (22.9%; 8/35). Regarding the resistance genes investigated were found the blaGES-1 in 34,3% (12/35) of the strains and the blaCTX-M in a single strain. None of the searched genes encoding carbapenemases was found. Similarly, no enzymatic hydrolytic activity to imipenem was detected by Carba NP test, suggesting that other resistance mechanisms may be involved, such as pump over expression and loss of outer membrane porin (OprD). The exoS virulence gen was the most prevalent being present in 71.4% (25/35) of the strains, while exoU was detected in 14.3% (5/35), however all strains that harbored this gene were carbapenems resistant. Eleven (31.4%) of 35 isolates were biofilm formers using the plate for microtitration, which mostly (81.8%) belonging to clone A (obtained in a previous study by PFGE) that was the most prevalent infecting/ colonizing patients and contaminating balneotherapy tank. Removal of biofilm formed in stainless steel coupon surface was effective for all three biocides tested (sodium hypochlorite 1%, hydrogen peroxide 5% and chlorhexidine 4%), with no viable cell count after contact with biocides solutions. The MLST originated two new sequencing types, ST2236 and ST2237. It is concluded from this study that the reduction of therapeutic options associated with the presence of virulence genes, can aggravate the situation of these patients. As well as the presence of genes as blaGES-1 and blaCTX-M is worrying as they may be spread among the other strains by horizontal transmission, if there is no adequate control. However, the removal test of biofilms showed that, if the disinfection is carried out in a correct way, cross-contamination between patients can be avoided.
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Effets de la pollution lumineuse sur l'écophysiologie de Microcytis aeruginosaPoulin, Carina January 2012 (has links)
La pollution lumineuse, résultat de l'éclairage nocturne anthropique, est un problème répandu dans le monde. Elle affecte une grande variété d'êtres vivants dans les milieux où elle est présente. Les effets exacts qu'elle peut avoir sur les organismes n'ont pas été beaucoup explorés . À ce sujet, rien n'est connu de son influence sur le phytoplancton. En l'occurrence, les cyanobactéries sont des organismes unicellulaires du phytoplancton. Dans cette étude, une cyanobactérie, Microcystis aeruginosa , a été cultivée en turbidostat en absence et en présence d'éclairage nocturne tel qu'observé à la surface d'un lac urbain éclairé. Plusieurs mesures ont été réalisées des intervalles de deux heures sur trois périodes de 48h afin d'observer les changements sur l'écophysiologie des cyanobactéries en présence de pollution lumineuse. Certaines de ces mesures montrent un effet de la pollution lumineuse,. comme le rendement quantique de photosynthèse, la quantité de chlorophylle a et de protéines photosynthétiques par cellule, démontrant ainsi l'effet de la pollution lumineuse sur M. aeruginosa . D'autres mesures n'ont pas été affectées par la pollution lumineuse. Celles-ci comprennent la quantité de certaines protéines photosynthétiques, la mesure d'efficacité photosynthétique par 14 [degrés Celsius] et la microcystine intracellulaire. Une hypothèse permettant d'expliquer les résultats a été émise. En conclusion, l'étude a permis de montrer qu'un éclairage d'une intensité lumineuse semblable à ce qui est retrouvé dans nos villes peut causer des changements dans l'écophysiologie de Microcystis aeruginosa en laboratoire.
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