Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-20Bitstream added on 2014-06-13T19:29:35Z : No. of bitstreams: 1 moraes_fs_me_bauru.pdf: 757610 bytes, checksum: 7863feccc53b25ea756881d180d9d723 (MD5) / O avanço tecnológico obtido através dos tempos permitiu o surgimento de uma nova classe de materiais, os biomateriais, cujas funções principais são o auxilio ou a substituição de partes do corpo humano. Para a fabricação de próteses e/ou implantes podem ser utilizados os polímeros. A utilização de tais dispositivos médicos pode ocasionar o surgimento de alguns problemas, como a incompatibilidade da prótese com o organismo e a contaminação por bactérias, sendo o último um problema grave, podendo ser fatal. A contaminação por Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus pode causar graves infecções. Uma das formas de se resolver este problema é através do tratamento de superfícies, pois a adesão das bactérias é dependente das propriedades superficiais dos biomateriais. Uma técnica de tratamento superficial bastante promissora é o tratamento a plasma de descarga luminescente. Foram realizados tratamentos de superfícies em poliuretano e silicone utilizando plasmas de 'SF IND. 6' com diferentes condições de tratamento, com o objetivo de se conseguir superfícies hidrofóbicas e a não adesão de microrganismos nessas superfícies. Após o tratamento as amostras foram contaminadas com as bactérias S. aureus e P. aeruginosa. Observou-se que embora o tratamento a plasma tenha conferido comportamento hidrofóbico aos polímeros, ainda não conseguiu-se chegar a superfícies ideais para inibir a adesão de microrganismos. / The technological advance attained through time, allowed the appearance of a new class of materials, the biomaterials, which main functions are: to help or to replace parts or sick organs of the human body. For the manufacture of prosthesis and/or implants, polymers can be used as biomaterials. The use of prosthesis or implants may cause the appearance of some problems, such as the incompatibility between the prosthesis and the organism and the contamination caused by bacteria. This last one is a serious problem, since it may lead to death. The contamination by Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus can cause serious infections. One possible way to solve this problem is through the surface treatment, since the adhesion of the bacteria depends on the superficial properties of the biomaterial. A promising technique of superficial modification is the treatment through glow discharge plasma. In this work, polyurethane and silicone coupons were exposed to 'SF IND. 6' glow discharge plasmas with different conditions of treatment. After the treatment, the coupons were contaminated with the P. aeruginosa e S. aureus. Even though the plasma treatment gives a hydrophobic behavior to the polymer, it can´t obtain the ideal surfaces who inhibit the bacterial adhesion.

Submitted by LEANDRO WAGNER FIGUEIRA null (leandrowf@live.com) on 2017-12-21T15:14:01Z No. of bitstreams: 1 TRABALHO IMPRESSÃO.pdf: 1390929 bytes, checksum: 89bf6ffe02866e87b54f92901cd88b62 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-01-04T15:29:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 figueira_lw_me_sjc.pdf: 1390929 bytes, checksum: 89bf6ffe02866e87b54f92901cd88b62 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-04T15:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 figueira_lw_me_sjc.pdf: 1390929 bytes, checksum: 89bf6ffe02866e87b54f92901cd88b62 (MD5) Previous issue date: 2017-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os seres humanos vivem em constante relação com micro-organismos, comensais e patogênicos, que podem ameaçar a homeostase do hospedeiro. Espécies patogênicas apresentam mecanismos capazes de contornar as barreiras de defesa do hospedeiro, facilitando sua disseminação e proliferação nos tecidos invadidos. Cepas resistentes aos antimicrobianos disponíveis surgem diariamente, por isso, é relevante encontrar métodos alternativos para controla-las. Produtos de plantas medicinais vem sendo investigados para essa finalidade. No presente estudo, foi avaliada a capacidade do extrato de C. longa em controlar infecções in vitro por S. aureus, P. aeruginosa e C. albicans em macrófagos murinos (RAW 264.7). Para isto, foram aplicadas as concentrações inibitórias mínimas (CIM) do extrato vegetal nas infecções e por meio de análise da fagocitose foi analisado a contribuição delas para a eliminação destes micro-organismos. A viabilidade dos macrófagos foi analisada por meio de teste colorimétrico com corante vermelho neutro. Foram checadas a produção de citocinas inflamatórias (IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10) e óxido nítrico (NO), por ELISA e com reagente de Griess, respectivamente. Os resultados foram analisados por ANOVA e Tukey’s Test (P ≤ 0.05). Foi verificado que o extrato de C. Longa auxiliou de maneira efetiva os macrófagos na fagocitose dos micro-organismos avaliados, apresentando reduções significativas de unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL), e atuou mediação da síntese de citocinas e NO. Os macrófagos apresentaram-se viáveis durante a infecção. Desta forma, foi constatado que o extrato de C. longa foi capaz de auxiliar in vitro os macrófagos na eliminação de S. aureus, P. aeruginosa e C. albicans, além de proporcionar efeito imunomodulador na síntese de IL-1β, TNF-α, IL-10 e NO, no intuito de controlar as infecções microbianas in vitro.

Submitted by NÁDIA DOMINGUES null (nadia.domingues@fosjc.unesp.br) on 2018-03-23T14:13:36Z No. of bitstreams: 1 Tese completa.pdf: 3393326 bytes, checksum: 5504238a789ee1c43fe177b59d548064 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-04-03T21:02:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 domingues_n_dr_sjc.pdf: 3393326 bytes, checksum: 5504238a789ee1c43fe177b59d548064 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-03T21:02:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 domingues_n_dr_sjc.pdf: 3393326 bytes, checksum: 5504238a789ee1c43fe177b59d548064 (MD5) Previous issue date: 2018-02-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os micro-organismos estão cada vez mais resistentes aos medicamentos disponíveis tanto na medicina quanto na odontologia, e esta resistência é ainda maior quando estão organizados em biofilmes mono ou multiespécies, de modo que o estudo de antimicrobianos alternativos, como fitoterápicos, estão em crescente ascensão. A interação entre leveduras e bactérias está intimamente presente na cavidade bucal, em que nichos como dentes, língua, mucosa e bolsa periodontal, nutrientes e temperatura adequados promovem condições favoráveis para formação do biofilme. Com isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos de Pfaffia paniculata K (pfaffia), Hamamelis virginiana L. (hamamelis), Stryphnodendron barbatiman (barbatimão) e Gymnema sylvestre (gimena) em biofilmes heterotípicos de Candida albicans (ATCC 18804) com Streptococcus mutans (ATCC 35688), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Enterococcus faecalis (ATCC 4083) e Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442). Para isso, suspensões padronizadas em 107 cels/mL dos micro-organismos testes, foram distribuídos em placas de microtitulação de 96 poços, juntamente 100 µL de caldo BHI. As placas foram incubadas em estufa bacteriológica a 37ºC/48h (5% de CO2 para S. mutans) e, após, os biofilmes foram submetidos ao tratamento com os extratos por 5 min e 24 h, nas respectivas concentrações de 100 mg/mL, 50 mg/mL e 25 mg/mL. Foi utilizado solução salina 0,9% (5 min) ou caldo BHI (24 h) nos grupos controles. Após, os biofilmes foram lavados e desagregados do fundo da placa e diluições seriadas foram semeadas em ágar seletivo para cada micro-organismo. Foram realizadas contagens de UFC/mL (log10) após 24 h de incubação e analisadas estatisticamente pelo método Kruskal-Wallis suplementado pelo teste de Dun’s (p<0.05). Os resultados obtidos indicaram reduções significativas promovidas pelos extratos nos dois tempos de tratamento analisados. Foi observado que o extrato de H. virginiana apresentou redução de todos os grupos analisados no tempo de tratamento de 24 h. Conclui-se que os extratos de P. paniculata, H. virginiana, S. barbatiman e G. sylvestre apresentaram ação antimicrobiana sobre biofilmes muliespécie de C. albicans com as bactérias de interesse médico-odontológico, nos tempos de tratamento de 5 min e 24 h. / Microorganisms are increasingly resistant to drugs available in both medicine and dentistry, and this resistance is even greater when they are organized into mono or multispecies biofilms, so that the study of alternative antimicrobials, such as herbal medicines, are on the rise. The interaction between yeasts and bacteria is intimately present in the oral cavity, in which niches such as teeth, tongue, mucosa and periodontal pocket, food and adequate temperature promote adequate conditions for biofilm formation. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of extracts of Pfaffia paniculata K., Hamamelis virginiana L., Gymnema sylvestre and Stryphnodendron barbatiman M. in heterotopic biofilms of Candida albicans (ATCC 18804) with Streptococcus mutans (ATCC 35688). Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Enterococcus faecalis (ATCC 4083), and Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442). Standardized suspensions at 107 cells/mL of the test microorganisms were distributed in 96 well microtiter plates together with 100 μL of BHI broth, the plates were incubated in a bacteriological oven at 37°C/48h (5% CO2 for S. mutans). After the incubation time, treatments were performed at 5 min and 24 h times, applying the respective extracts at the concentrations of 100 mg, 50 mg and 25 mg/mL and applying 0.9% saline solution or BHI broth in the control groups. After the biofilms were washed and disaggregated from the bottom of the plate, performing serial dilutions for later seeding in selective agar. UFC/ml (log10) counts were performed after 24 h of incubation and statistically analyzed Kruskal-Wallis method supplemented by the Dun's test (p<0.05%). The obtained results indicated significant reductions promoted by extracts in the two treatment times analyzed. It was observed that the extract of H. virginiana showed reduction of all the analyzed groups without treatment time of 24 h. It is concluded that the extracts of P. paniculata, H. virginiana, S. barbatiman and G. sylvestre presented antimicrobial action after analysis of the heterotypic biofilms of C. albicans with the bacteria of medical and dental interest, in the treatment times of 5 min and 24 h.

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Coorientador: Jonatas Rafael de Oliveira / Banca: Claudemir de Carvalho / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Resumo: Os seres humanos vivem em constante relação com micro-organismos, comensais e patogênicos, que podem ameaçar a homeostase do hospedeiro. Espécies patogênicas apresentam mecanismos capazes de contornar as barreiras de defesa do hospedeiro, facilitando sua disseminação e proliferação nos tecidos invadidos. Cepas resistentes aos antimicrobianos disponíveis surgem diariamente, por isso, é relevante encontrar métodos alternativos para controla-las. Produtos de plantas medicinais vem sendo investigados para essa finalidade. No presente estudo, foi avaliada a capacidade do extrato de C. longa em controlar infecções in vitro por S. aureus, P. aeruginosa e C. albicans em macrófagos murinos (RAW 264.7). Para isto, foram aplicadas as concentrações inibitórias mínimas (CIM) do extrato vegetal nas infecções e por meio de análise da fagocitose foi analisado a contribuição delas para a eliminação destes micro-organismos. A viabilidade dos macrófagos foi analisada por meio de teste colorimétrico com corante vermelho neutro. Foram checadas a produção de citocinas inflamatórias (IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-10) e óxido nítrico (NO), por ELISA e com reagente de Griess, respectivamente. Os resultados foram analisados por ANOVA e Tukey's Test (P ≤ 0.05). Foi verificado que o extrato de C. Longa auxiliou de maneira efetiva os macrófagos na fagocitose dos micro-organismos avaliados, apresentando reduções significativas de unidades formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL), e atuou mediação da síntese... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Humans live in constant contact with microorganisms, commensals and pathogens, which may threaten host homeostasis. Pathogenic species present mechanisms able circumventing the host defense barriers, facilitating their dissemination and proliferation in invaded tissues. Antimicrobial-resistant strains emerge daily, then it is important finding an alternative method to control them. Medicinal plant products have been investigated for this purpose. In this study, the ability of C. longa extract to control in vitro infections by S. aureus, P. aeruginosa and C. albicans in murine macrophages (RAW 264.7) was evaluated. For this, the minimum inhibitory concentrations (MIC) of the plant extract were used in the infections. Phagocytosis was analyzed to check if they would contribute to eliminate these microorganisms. The viability of the macrophages was analyzed by colorimetric test using neutral red dye. Productions of inflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, TNF-α and IL-10) and nitric oxide (NO) were verified during infection by ELISA and Griess's reagent, respectively. The results were analyzed by ANOVA and Tukey's Test (P ≤ 0.05). C. Longa L. extract effectively assisted the macrophages in the phagocytosis of the evaluated microorganisms, presenting significant reductions of colony-forming units per milliliter (CFU/mL), and mediated the synthesis of cytokines and NO. In addition, macrophages were viable during infection. C. Longa L. extract assisted in vitro the macrophages in the elimination of S. aureus, P. aeruginosa, and C. albicans, promoting immunomodulatory effect in the synthesis of IL-1β, TNF-α, IL-10 and NO, in order to control microbial infections in vitro / Mestre

Orientador: Jonas Contiero / Coorientador: Roberta Barros Lovaglio / Banca: Fabricio Coutinho de Paula / Banca: Antonio José Gonçalves da Cruz / Resumo: Visando à otimização da produção de ramnolipídios, o uso de glicerol cru como fonte de carbono surge como uma estratégia tanto para o reduzir custo de produção como para aproveitar este resíduo da indústria do biodiesel. O gênero Pseudomonas tem sido um dos mais estudados no campo da produção de ramnolipídios, pois as moléculas produzidas por estes micro-organismos apresentam uma elevada atividade de superfície e o rendimento de produção é alto em relação a outros tensoativos. Portanto, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar a produção de ramnolipídios por linhagens de Pseudomonas aeruginosa (PAOI, LBI e LBI 2A1) usando glicerol bruto da indústria do biodiesel como fonte de carbono. Para isto comparou-se a produção de ramnolipídio utilizando três tipos diferentes de glicerol bruto. A influência de uma concentração menor (50g/L) foi avaliada utilizando as linhagens Pseudomonas aeruginosa LBI e Pseudomonas aeruginosa LBI 2A1, sendo que diferentes concentrações também foram avaliadas para a linhagem P. aeruginosa LBI. Também se comparou a síntese de ramnolipídio utilizando glicerol bruto tratado e glicerol bruto na concentração que favoreceu a maior produção por parte de Pseudomonas aeruginosa LBI. Além disso, a caracterização dos homólogos produzidos por P. aeruginosa LBI 2A1, a aplicação destes biossurfactantes na síntese de nanopartículas de prata e o controle de vetores de doenças tropicais foram analisados. O glicerol bruto é um substrato que pode ser utilizado com ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aiming at optimization of rhamnolipid production, the use of crude glycerol as a carbon source emerges as a strategy both for reducing production costs and make use of this residue of the biodiesel industry. The genera Pseudomonas is one of the most studied on the field of rhamnolipids production, because the molecules produced by these kind of microorganisms have a higher superficial activity and the production yield is higher when compared with other tenso-actives. Therefore, the principal aim of this study was to compare the rhamnolipids production by Pseudomonas aeruginosa strains (PAOI, LBI and LBI 2A1) using crude glycerol from biodiesel industry as a carbon source. Was compared the rhamnolipids synthesis using three different types of crude glycerol (70 g/L). The influence of a lower concentration (50 g/L) was tested using the strains P. aeruginosa LBI and P. aeruginosa LBI 2A1, whereas different concentrations of crude glycerol were evaluated for the P. aeruginosa LBI strain. It was also compared the rhamnolipids synthesis using a treated crude glycerol and a raw crude glycerol, using the concentration that favored the higher production by P. aeruginosa LBI. In addition, were characterized the homologs produced by P. aeruginosa LBI 2A1, the biotechnological application of these biosurfactants for silver nanoparticles synthesis and control of vectors of tropical diseases, were tested. Residual glycerol is a substrate that can be used as a carbon source for rhamnolipid ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Vera Lucia Borges Isaac / Banca: Marcos Antonio Correa / Banca: Gislaine Ricci Leonarodo / Resumo: Cosméticos são usados pelo homem desde a antiguidade e o consumo desse segmento vem aumentando a cada ano, praticamente imune a crises. O Brasil é o quarto maior mercado de cosméticos no mundo, ficando atrás apenas dos Estados Unidos, China e Japão, segundo dados da Associação Brasileira de Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosméticos. Dentre as matérias primas que mais causam reações alérgicas estão os conservantes, corantes e composições aromáticas. Assim sendo, a preocupação com a segurança dos conservantes cosméticos deve ser intensificada. Grande importância é dada ao assunto atualmente, existindo a preocupação com o potencial de irritação e toxicidade para o consumidor e não apenas com o aspecto microbiológico. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a citotoxicidade e potencial de irritação de conservantes antimicrobianos que são utilizados em cosméticos. Foram realizados ensaios de citotoxicidade, através do método MTT, em células de fibroblastos humano (HDFa), células de queratinócitos humano (HaCaT) e células de carcinoma hepatocelular humano (HepG2) e potencial de irritação em ovos embrionados de galinha através do método HET-CAM. Foram utilizados os conservantes: fenoxietanol, mistura de fenoxietanol e metilisotiazolinona (Fenox/Mit), mistura de metilcloroisotiazolinona e metilisotiazolinona (CMit/Mit), metilparabeno e propilparabeno, que são amplamente utilizados em cosméticos. Os conservantes mais citotóxicos e com maior pontuação de irritação (PI... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)... / Abstract: Cosmetics have been used by man since antiquity and the consumption of this segment has been increasing every year, practically immune to crises. Brazil is the fourth largest cosmetics market in the world, behind only the United States, China and Japan, according to data from the Brazilian Association of Personal Hygiene, Perfumery and Cosmetics. Among the raw materials that most cause allergic reactions are preservatives, dyes and aromatic compositions. Therefore, concern about the safety of cosmetic preservatives should be intensified. Great importance is given to the subject nowadays, there being concern about the potential for irritation and toxicity to the consumer and not just with the microbiological aspect. Thus, the present work aimed to evaluate the cytotoxicity and irritation potential of antimicrobial preservatives that are used in cosmetics. Cytotoxicity were assessed by MTT assay method using human fibroblast cells (HDFa), human keratinocytes cells (HaCaT) and using human hepatoma cells (HepG2) and irritation potential in embryonated chicken eggs using the HET-CAM method. Preservatives were used: phenoxyethanol, a mixture of phenoxyethanol and methylisothiazolinone (Fenox/Mit), a mixture of methylchloroisothiazolinone and methylisothiazolinone (CMit / Mit), methylparaben and propylparaben, which are widely used in cosmetics. The most cytotoxic and highest irritation score (IS) preservatives considered irritants, were: phenoxyethanol (HaCat IC50: 0,237 mg/mL; HDFa IC50: 0,200 mg/mL; HepG2 IC50: 0,248 mg/mL; IS: 16) and Fenox/Mit (HaCat IC50: 0,156 mg/mL; HDFa IC50: ~0,056 mg/mL; HepG2 IC50: 0,119 mg/mL; IS: 10). The other preservatives, CMit/Mit (HaCat: non-toxic; HDFa: non-toxic; HepG2: >0,0045 mg/mL), propylparaben (HaCat IC50: ~0,200 mg/mL; HDFa IC50: >0,200 mg/mL; HepG2: >0,400 mg/mL)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivos: (a) Padronizar protocolos rápidos da técnica de eletroforese em campo pulsado (PFGE) para tipagem molecular de amostras clínicas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa; (b) Avaliar a tipabilidade, o poder discriminatório e a reprodutibilidade entre os protocolos rápidos de PFGE versus o protocolo convencional para as amostras de S. aureus, E. coli e P. aeruginosa; (c) Analisar os resultados da tipagem molecular pela técnica do PFGE de acordo com dois critérios distintos de interpretação, os critérios de PFALLER et al. (1992) e os critérios de TENOVER et al. (1995). Métodos: Um total de 60 amostras bacterianas das seguintes espécies bacterianas foi selecionado: S. aureus (n=20), E. coli (n=20) e P. aeruginosa (n=20). Todos amostras foram isoladas da corrente sanguínea de pacientes internados no Hospital São Paulo (HSP) no período de 2000 a 2004. Quinze dos 20 isolados clínicos de cada espécie bacteriana foram selecionados de pacientes previamente caracterizados como não relacionados epidemiologicamente, pela Comissão de Controle de Infecção Hospitalar do HSP. As outras cinco amostras de cada espécie bacteriana foram classificadas como amostras bacterianas possivelmente relacionadas epidemiologicamente, provenientes de uma mesma unidade do HSP em um período de tempo igual ou inferior a três meses. Protocolos convencionais da técnica PFGE foram reproduzidos e protocolos rápidos desta mesma técnica foram padronizados, após digestão destas bactérias com as enzimas de restrição SmaI e SpeI. Os perfis moleculares foram analisados visualmente e interpretados de acordo com os critérios de Pfaller et al (1992) e Tenover et al (1995). Resultados: Os protocolos convencionais e rápidos de PFGE apresentaram resultados idênticos para tipagem das amostras clínicas de S.aureus, E. coli e P. aeruginosa. De acordo com os critérios de Pfaller et al. (1992), foram encontrados nas amostras clínicas de S. aureus, E. coli e P. aeruginosa deste estudo, 17, 13 e 7 padrões diferentes de PFGE, respectivamente. Seguindo os critérios de Tenover et al. (1995) foram encontrados 16, 11 e 6 padrões distintos de PFGE nas amostras de S. aureus, E. coli e P. aeruginosa, respectivamente. As técnicas desenvolvidas tanto pelos protocolos rápidos quanto pelos protocolos convencionais apresentaram percentual de tipabilidade e reprodutibilidade de 100%. O poder discriminatório foi de 95%, 94% e 82% para as amostras clínicas de S. aureus e E.coli e P. aeruginosa, respectivamente. Conclusões: Foram padronizados protocolos rápidos para tipagem molecular de amostras de S. aureus (42hs), E. coli (43hs) e P. aeruginosa (56hs) pela técnica de PFGE. Todos protocolos testados apresentaram excelente tipabilidade e reprodutibilidade. O poder discriminatório foi excelente para as amostras clínicas de S. aureus e E. coli, e satisfatório para as amostras de P. aeruginosa, devido a pouca diversidade clonal. Os critérios de Pfaller et al. (1992) diferenciaram melhor a presença de novos clones quando comparados aos critérios de Tenover et al. (1995). / Objectives: (a) To develop rapid protocols of pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) technique for molecular typing of clinical samples of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa; (b) To evaluate the typeability, the discriminatory power, and the reproducibility between rapid and conventional PFGE protocols for clinical isolates of S. aureus, E. coli and P. aeruginosa, (c) To analyze PFGE results according to two different interpretation criteria, one from Pfaller et al. (1992) and the other from Tenover et al. (1995). Methods: A total of 60 bacteria samples were selected from the following species: S. aureus (n=20), E. coli (n=20), and P. aeruginosa (n=20), isolated from bloodstream infections from patients from Hospital São Paulo (HSP). Among the 20 clinical isolates from each specie, 15 were selected from patients previously characterized by the hospital’s Infection Control Department of HSP as epidemiologically non-related. The other five isolates were characterized as possible epidemiologically related. These samples were collected from the same medical ward of HSP, in a period of time equal to or less than 3 months. The conventional PFGE protocols were reproduced, and the rapid protocols were developed, after DNA digestion with SmaI and SpeI enzymes. The molecular patterns were examined visually and interpreted according to Pfaller et al. (1992) and Tenover et al.(1995) criteria. Results: The rapid and conventional PFGE protocols presented similar results for S. aureus, E. coli, and P. aeruginosa isolates. According to Pfaller et al. (1992), a total of 17, 13, and 7 distinct PFGE patterns were identified for S. aureus, E. coli, and P. aeruginosa, respectively. On the other hand, by Tenover criteria, a total of 16, 11 and 6 distinct PFGE patterns were found for S. aureus, E. coli and P. aeruginosa, respectively. All protocols tested presented 100% of reproducibility and typeability. The discriminatory power was 95%, 94%, and 82% for S. aureus, E. coli, and P. aeruginosa, respectively. Conclusions: Rapid PFGE protocols were developed for S. aureus (42hs), E. coli (43hs) and P. aeruginosa (56hs), and all of them presented excellent reproducibility and typeability. The discriminatory power was excellent for clinical isolates of S. aureus and E. coli, and satisfactory for P. aeruginosa; probably because of the low clonal diversity of this specie identified in this study. Compared to Tenover et al. (1995) criteria, Pfaller et al. (1992) could better differentiate the presence of new bacterial clones. / FAPESP: 2006/57700-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T23:32:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 294997.pdf: 3221362 bytes, checksum: 05c3e867a109c64c20174ece942ee493 (MD5) / Nas últimas duas décadas, índices crescentes de resistência têm minado a eficácia dos agentes antimicrobianos. Pseudomonas aeruginosa são importantes patógenos hospitalares e esta espécie é considerada um reservatório de genes determinantes de resistência, inclusive genes que codificam para as metalo-ß-lactamases (MßL). MßL são betalactamases capazes de hidrolisar os antimicrobianos betalactâmicos carbapenêmicos, os quais constituem o tratamento empírico de infecções causadas por bactérias Gram-negativas multirresistentes. Neste trabalho foram analisados 42 isolados clínicos de P. aeruginosa quanto à susceptibilidade aos principais antimicrobianos utilizados na clínica. Através da determinação das concentrações inibitórias mínimas, 41 desses não eram sensíveis a imipenem e meropenem e 31 se apresentaram simultaneamente resistentes a estes dois carbapenêmicos e às cefalosporinas ceftazidima e cefepima. Vinte e quatro isolados foram considerados produtores de MßL através do teste de sinergismo de disco duplo (DDST) utilizando ácido 2-mercaptopropiônico como inibidor seletivo de MßL. Trinta e cinco isolados (35/42) foram avaliados quanto à presença dos genes de MßL. Em dezessete dos isolados em que os testes fenotípicos se apresentaram positivos, quinze (15/17) corresponderam às subclasses SPM-1 (14/15) e IMP-1 (1/15). Nos demais isolados onde os testes fenotípicos se apresentaram negativos, também em quatro (4/18) deles pôde ser verificada a presença da subclasse SPM-1. A ocorrência de isolados produtores desta enzima naqueles isolados não sensíveis aos carbapenêmicos foi de 58,54% (24/41; . = 0,4322), no entanto, naqueles simultaneamente resistentes aos carbapenêmicos e cefalosporinas, aliados à observação de CIM elevadas, foi de 85,71% (24/28; . < 0,001), sugerindo que o isolamento de P. aeruginosa apresentando este último fenótipo é um indicativo mais apurado da presença de MßL. Os isolados desta amostragem também demonstraram uma associação positiva entre a presença de MßL e perfis de multirresistência. Foi observado que 81,5% (22/27) dos isolados sensíveis a, no máximo, colistina e aztreonam, produziam MßL. Assim, a correlação entre a presença dessa enzima e a observação de multirresistência foi de 91,67% (. < 0,001) e a uma razão 3,3 vezes superior à correlação obtida para os isolados não produtores de MßL. / In the last two decades, increasing rates of resistance have weakened the effectiveness of antimicrobial agents. Pseudomonas aeruginosa is an important nosocomial pathogen and the species is considered as a reservoir of resistant genes, including those coding for metallo-â-lactamases (MâL). MâL are enzymes able to hydrolyze the carbapenem beta-lactam antibiotics, which are the empirical treatment of infections caused by multiresistant Gram-negative bacteria. In the present work, 42 clinical isolates of P. aeruginosa with different susceptibility to the main antimicrobials used in the clinic were analyzed. By determining the minimum inhibitory concentrations, 41 of them were not sensitive to imipenem and meropenem, and 31 were simultaneously resistant to these carbapenems and to the cephalosporins ceftazidime and cefepime. Twenty-four isolates were considered as producers of MâL through double-disk synergy test (DDST) using the acid 2-mercaptopropionic as an MâL selective inhibitor. Thirty-five isolates (35/42) were evaluated for the presence of MâL genes. In seventeen of them, in which the phenotypic tests were positive, fifteen (15/17) corresponded to subclasses SPM-1 (14/15) and IMP-1 (1/15). In the other eighteen isolates where phenotypic tests were negative, four of them (4/18) also presented the SPM-1 gene. In the group of isolates resistant to carbapenems, the occurrence of producers of this enzyme was 58.54% (24/41; ñ = 0.4322). However, when the resistant isolates to both carbapenem and cephalosporin were combined with the observation of high MIC values, this value increased to 85.71% (24/28; ñ <0.001). This suggests that the occurrence of isolates of P. aeruginosa showing the latter phenotype is a reliable indicative of the presence of MâL. Isolates of this sample also showed a positive association between the presence of MâL and profiles of multidrug resistance. The results showed that 81.5% (22/27) of the isolates sensitive at least to colistin and aztreonam, produced MâL. The correlation between the presence of MâL and the observation of multidrug resistance was of 91.67% (ñ <0.001), in a rate 3.3 times greater than the risk obtained for the isolates that did not produce MâL.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-02T20:02:10Z No. of bitstreams: 1 MilleneCarolineAlbinoDeOliveira_DISSERT.pdf: 1418048 bytes, checksum: c956e83ed709189939b1c3817853edcb (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-04T15:33:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MilleneCarolineAlbinoDeOliveira_DISSERT.pdf: 1418048 bytes, checksum: c956e83ed709189939b1c3817853edcb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-04T15:33:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MilleneCarolineAlbinoDeOliveira_DISSERT.pdf: 1418048 bytes, checksum: c956e83ed709189939b1c3817853edcb (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A contínua necessidade de se produzir cada vez mais hidrocarbonetos faz com que seja de fundamental importância o desenvolvimento de métodos capazes de extrair mais óleo dos reservatórios. Assim, a recuperação avançada através da injeção de tensoativos atua na redução da tensão interfacial óleo-agua, melhorando o deslocamento de petróleo para fora do reservatório. Este trabalho tem como objetivo caracterizar o biossurfactante ramnolipídeo, produzido a partir da bactéria Pseudomonas aeruginosa, e avaliar sua utilização no processo de recuperação avançada de petróleo, utilizando arenitos sintéticos como rocha-reservatório. A caracterização do biossurfactante envolveu a determinação de sua concentração micelar crítica (cmc), além da influência do pH e da salinidade sobre o mesmo. Já para a recuperação avançada, foram utilizados três tipos de petróleo, entre 21 e 30 ºAPI, e três concentrações de biossurfactante, a 30, 50 e 100% acima da cmc. Os resultados obtidos mostram que a injeção de biossurfactante, além de ser uma alternativa sustentável aos tensoativos sintéticos por sua biodegradabilidade e baixa toxicidade, é capaz de aumentar o fator de recuperação do processo de produção de petróleo após a injeção de água, obtendo fatores de recuperação avançada entre 1,6 e 9,3%, dos quais os melhores resultados foram alcançados para óleos mais viscosos e maiores concentrações de ramnolipídeo. / The continuous need for increased production of hydrocarbons makes the development of techniques to produce more oil from reservoirs a matter of fundamental importance. In that context, the enhanced oil recovery (EOR) through surfactant flooding works by lowering the interfacial tension between water and oil, improving the displacement of the latter out of the reservoir. The present work aims to characterize the rhamnolipid biosurfactant, produced from a strain of the Pseudomonas aeruginosa bacteria, and to assess its utilization in the EOR process, using synthetic sandstone as reservoir rocks. The rhamnolipid characterization involved the determination of its critical micelle concentration (c.m.c.), and also the behaviour caused by the influence of pH and salinity over it. The EOR process included three oil samples, with API degree range of 25-30, and three biosurfactant concentrations, of 30, 50 and 100% above the cmc. The results demonstrated that biosurfactant flooding not only presents itself as a sustainable alternative to synthetic surfactants by being biodegradable, but is also capable of increasing the recovery factor of the oil production process post water injection, presenting a range of enhanced recovery factors from 1.6 up to 9.3%, displaying better results when heavier, more viscous oil samples are used and for higher rhamnolipid concentrarions.

RNA:protein interactions are central in many cellular processes, including activation of innate immune responses against microbial infection. Their study is essential to better understand the diverse biological events that occur within cells. However, isolation of RNA:protein complexes is often laborious and requires specialized techniques. This thesis is concerned with attempts to develop an improved purification protocol to isolate specific RNA:protein complexes. Taking advantage of the specific interaction of the Pseudomonas aeruginosa PP7 protein with its cognate RNA binding site, termed the PP7 recognition sequence (PRS), the aim was to identify cellular proteins involved in activating cell-signalling pathways, including the interferon-induction cascade, following viral infection with stocks of parainfluenza virus 5 (PIV5) rich in copyback defective interfering (DI) particles. Copyback DI genomes are powerful inducers of IFN and, here, I show they also activate the induction of IL-6, IL-8 and TNFα; cytokines that also have antiviral properties. Following the successful cloning of the PRS into a copyback DI genome, we investigated conditions for optimal in vitro capture of DI-PRS:protein complexes by PP7 on Dynabeads. When tested, the protocol led to the successful capture of ILF3 and PKR, two dsRNA binding proteins induced by IFN. We further developed a tap-tagging system to minimize the presence of non-specifically bound proteins to Dynabeads that may interfere with future mass spectrometry analysis. To isolate DI-PRS RNA:protein complexes from infected cells, attempts were made to rescue replicating DI-PRS genomes in the context of wild type PIV5. Similarly, efforts were made to isolate influenza A virus RNPs that contained the PRS in the neuraminidase (NA) gene from infected cells using the PP7-based protocol developed. However, for reasons discussed, unfortunately RNA:proteins complexes were not successfully purified from infected cells in either case.