RIBEIRO, João Crispim Moraes Lima. Avaliação do efeito do LASSBio-596, um análago da talidomida, na angiogênese inflamatória em córnea de coelho. 2011. 72 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-27T14:31:57Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_jcmlribeiro.pdf: 1224445 bytes, checksum: 0f6035c05cbdc2971d8b5f67e9c84c94 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-27T14:33:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_jcmlribeiro.pdf: 1224445 bytes, checksum: 0f6035c05cbdc2971d8b5f67e9c84c94 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-27T14:33:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_jcmlribeiro.pdf: 1224445 bytes, checksum: 0f6035c05cbdc2971d8b5f67e9c84c94 (MD5) Previous issue date: 2011 / There is exacerbation of the angiogenic process in various diseases, especially in corneal neovascularization. For the treatment of these diseases, several drugs were studied with antiangiogenic properties. The aim of this study was to evaluate the effect of LASSBio-596, structurally designed as a hybrid of thalidomide, sildenafil and arilsulfonamide, on inflammatory corneal angiogenesis. Eighteen rabbits were submitted to an alkaline cauterization in the right cornea. The animals were randomly allocated in three groups: vehicle, dexamethasone, and LASSBio-596 group. Drugs were administrated by eye drops three times per day for 21 days. Evaluations were performed on days 3, 6, 9, 12, 15, 18, and 21 post-cauterization. At these time points, digital images of the cornea were captured in a standard fashion. Angiogenic response was measured using software that was developed specifically for this purpose. It calculated the following parameters: neovascularization area (NA), total vascular length (TVL), and blood vessel number (BVN). It was observed that dexamethasone significantly decreased NA, TVL, and BVN during all assessments. From NA it was calculated the angiogenesis rate (AR) in each group. Therefore, dexamethasone completely inhibited the inflammatory corneal angiogenesis with angiogenesis rate (AR) of -0.001 ± 0.006 mm2/day, which was significantly lower (p < 0.001) than that observed after treatment with vehicle (0.078 ± 0.024 mm2/dia) and LASSBio-596 (0.054 ± 0.012 mm2/dia). Although LASSBio-596 reduced angiogenesis in relation to vehicle, according to NA, TVL and BVN values, this difference was not statistically significant. However, it was found that the AR as measured in the LASSBio-596 group was significantly lower (p < 0.05) than that seen in control animals, indicating a potential antiangiogenic effect. We conclude that topical application of LASSBio-596 at 1.0% has a partial inhibitory effect on inflammatory corneal angiogenesis in rabbits. / Observa-se exacerbação do processo angiogênico em diversas doenças, entre elas pode ser citada a neovascularização de córnea. Para o tratamento dessas doenças, são estudados diversos fármacos com propriedades antiangiogênicas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do fármaco LASSBIO-596, estruturalmente designado como um híbrido da talidomida, sildenafil e arilsulfonamida, na angiogênese corneana inflamatória. Dezoito coelhos foram submetidos a uma cauterização alcalina pontual na região superior da córnea direita. Os animais foram randomicamente alocados em três grupos: veículo, dexametasona 4,0% e LASSBio-596 1,0%. Os tratamentos foram administrados em forma de colírio três vezes por dia durante 21 dias. Avaliações foram realizadas nos dias 3, 6, 9, 12, 15, 18 e 21 pós-cauterização. Nesses momentos, imagens digitalizadas da córnea foram capturadas de uma forma padronizada. A resposta angiogênica foi mensurada utilizando-se um software que foi desenvolvido especificamente para esta finalidade. Foram calculados os seguintes parâmetros: área de neovascularização (AN), comprimento vascular total (CT) e número de vasos sanguíneos (NV). A partir da AN, calculou-se a taxa de angiogênese (TA) em cada grupo estudado. Observou-se que a dexametasona diminuiu significativamente AN, CT e NV durante todas as avaliações. Portanto, a dexametasona inibiu completamente a angiogênese inflamatória da córnea com uma TA de -0,001 ± 0,006 mm2/dia, que foi significativamente menor (p < 0,001) do que a observada após o tratamento com o veículo (0,078 ± 0,024 mm2/dia) e LASSBio-596 (0,054 ± 0,012 mm2/dia). Apesar de o LASSBio-596 ter reduzido o processo de angiogênese em relação ao veículo, conforme AN, CT e NV, essa diferença não foi estatisticamente significante. No entanto, verificou-se que a TA medida no grupo LASSBio-596 foi significativamente menor (p < 0,05) do que a observada nos animais controle, indicando um potencial efeito antiangiogênico. Concluímos que a aplicação tópica de LASSBio-596 a 1,0% tem um efeito inibitório parcial sobre a angiogênese corneana inflamatória em coelhos.

COSTA, Patrícia Marçal da. Avaliação do potencial antitumoral e antiangiogênico de novos análogos ftalimídicos da talidomida. 2011. 147 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-05T13:43:59Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_pmcosta.pdf: 6733805 bytes, checksum: 2df0bf508787f29942832caf4924eb1a (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:26:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_pmcosta.pdf: 6733805 bytes, checksum: 2df0bf508787f29942832caf4924eb1a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:26:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_pmcosta.pdf: 6733805 bytes, checksum: 2df0bf508787f29942832caf4924eb1a (MD5) Previous issue date: 2011 / The thalidomide was previously used to relieve gastric discomforts during pregnancy, and currently it is used for cancer treatment and inflammatory illnesses. Various phthalimides analogues of thalidomide have been researched for its antiangiogenic and immunemodulatory activity. In previous studies, these analogues showed absence of immunesuppressor activity. In this context, this work initially determined the cytotoxic activity of eight phthalimides analogues of thalidomide, in a series of cancer cell lines and of isolated peripheral mononuclear blood cells (PMBC) after 72h of incubation. None of compounds revealed cytotoxic activity in vitro in cancer cell lines and hemolytic activity towards of PBMC. They also showed no potential damage to the DNA strand, therefore they were not considered genotoxic towards human PMBC. The antitumor effect (in vivo) of thalidomide along with eight analogues was analyzed in mice transplanted with the Sarcoma 180 tumor and treated in a dose of 50mg/Kg/7 days, i.p. The inhibition of the tumor growth was only significant in mice treated with thalidomide (53.5%) and the analogues SC-10 and SC-11 (67.9% and 67.4%, respectively), p< 0,05. The histopathological analysis of the animals’ organs showed mainly that thalidomide and its analogues cause moderate toxic effects, mostly in the liver, but these can be considered reversible. The studies concerning the mechanism of action were deepened using isolated cells from the Sarcoma 180, after 72 hours of incubation, in the doses of 10, 50 and 100µg/mL. The following flow cytometry assays were carried out: 1- Evaluation of the membrane integrity, cellular viability and concentration of cells; 2- Determination of the nuclear DNA content. All the compounds led to the loss of membrane cell integrity and it was found internucleossomal DNA fragmentation in the higher concentrations, indicating the presence of cells with late stage apoptotic characteristics or in the process of secondary necrosis. The evaluation of the antiangiogenic potential, with the Wound Healing assay revealed that for the endothelial cell line (HUVEC) the analogue SC-10 caused a greater inhibition (65.28% ± 1,58), whereas in the tumor cell line the highest effect was of the analogue SC-11 (98.51% ± 0,25). The thalidomide was not capable of reducing cellular migration in none of the tested cell lines. In the chorioallantoic membrane assay (CAM), an antiangiogenic potential was observed with analogous SC-10 and SC-11 (5mg/mL), where there was an inhibition in the number of vessels (12, 88% ± 2,3 and 14.81% ± 3,3), the area of neovascularization (13.14% ± 1,7 and 14.26% ± 1,7) and the total length of vessels in mm2 (9.19% ± 1,5 and 9.86% ± 1,9). The thalidomide was not capable of inhibiting embryonic vascularization. The antitumor effect (in alive) of thalidomide and the analogues SC-10 and SC-11 was analyzed in mice transplanted with the Sarcoma 180 tumor, treated with the dose of 50mg/Kg/10 days, i.p. It was observed inhibition of the tumor growth in the thalidomide treatment (56,6%) and for analogues SC-10 and SC-11 (48.2% and 41.3%, respectively), p< 0,05. The immunostaining of intratumor endothelial cells with CD-31, showed, in the form of microvascular density, reduction in the groups treated with analogues SC-10 and SC-11 (64.59% and 46.51%), but not in the groups treated with thalidomide. These results, along with previous studies of immunemodulation suggest antitumor and antiangiogenic immunity, T cells dependent, for the phthalimides analogues. / A talidomida, anteriormente usada para aliviar desconfortos gástricos da gravidez, atualmente é usada para tratamento do câncer e de doenças inflamatórias. Vários análogos ftalimídicos da talidomida tem sido pesquisados quanto a sua atividade antiangiogênica e imunomodulatória. Em estudos prévios, estes análogos mostraram ausência de atividade imunossupressora. O trabalho determinou, inicialmente, a atividade citotóxica, de oito análogos ftalimídicos da talidomida, frente a linhagens tumorais e de células mononucleadas isoladas de sangue periférico (CMSP) após 72h de incubação. Nenhum dos compostos desencadeou atividade citotóxica in vitro, indução de hemólise em eritrócitos e potencial em induzir dano à fita de DNA, portanto não foram genotóxicos em CMSP humanas. O efeito antitumoral (in vivo) da talidomida e dos oito análogos foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180 e tratados na dose 50mg/Kg/7 dias, via i.p. A inibição do crescimento tumoral foi significante apenas para talidomida (53,5%) e análogos SC-10 e SC-11 (67,9% e 67,4%, respectivamente), p<0,05. A análise histopatológica dos órgãos dos animais mostrou que a talidomida e seus análogos provocam efeitos tóxicos moderados, principalmente no fígado, mas esses podem ser considerados como reversíveis. Os estudos acerca do mecanismo de ação foram aprofundados usando células isoladas do Sarcoma 180, após 72 horas de incubação, nas doses de 10, 50 e 100µg/mL, por citometria de fluxo, através dos seguintes ensaios: 1- Avaliação da integridade de membrana, viabilidade celular e concentração de células; 2- Determinação do conteúdo de DNA nuclear da célula. Todos os compostos induziram a perda de integridade de membrana celular e fragmentação internucleossomal do DNA nas maiores concentrações, indicando presença de células apoptóticas em estágios finais ou em processo de necrose secundária. A avaliação do potencial antiangiogênico, pelo ensaio do Wound Healing revelou que para a linhagem endotelial (HUVEC) o análogo SC-10 causou uma inibição maior (65,28% ± 1,58), enquanto que na linhagem tumoral o efeito maior foi do análogo SC-11 (98,51% ± 0,25). A talidomida não foi capaz de reduzir a migração celular em nenhuma das linhagens testadas. No ensaio da membrana corioalantóide (CAM), potencial antiangiogênico foi observado para os análogos SC-10 e SC-11(5mg/mL), que inibiram o número de vasos (12, 88% ± 2,3 e 14,81% ± 3,3), a área de neovascularização (13,14% ± 1,7 e 14,26% ± 1,7) e o comprimento total de vasos em mm2 (9,19% ± 1,5 e 9,86% ± 1,9). A talidomida, não foi capaz de inibir a vascularização embrionária. O efeito antitumoral (in vivo) da talidomida e análogos SC-10 e SC-11 foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180, tratados na dose 50mg/Kg/10 dias, via i.p. A inibição do crescimento tumoral para a talidomida (56.6%) e para os análogos SC-10 e SC-11 (48,2% e 41,3%, respectivamente), p<0,05. A imunocoloração de células endoteliais intratumorais com CD-31, revelou-se, na forma de densidade microvascular, diminuída nos grupos tratados com análogos SC-10 e SC-11 (64,59% e 46,51%), mas não nos grupos tratados com a talidomida. Estes resultados, unidos a estudos prévios de imunomudulação sugerem imunidade antitumoral e antiangiogênica, dependente de células T, para os análogos ftalimídicos.

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4406_1.pdf: 834156 bytes, checksum: 5bf579a51f2a65ab61e5d9b5de44d1a4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / As Úlceras de Pressão (UP), decorrentes da baixa perfusão tecidual induzida pela compressão do corpo sobre o leito vascular, podem gerar necrose isquêmica da pele. A terapia com lasers de baixa intensidade deflagra uma ação antiinflamatória, aumento da fagocitose, síntese de colágeno e epitelização. Estudos relacionados às alterações resultantes da ação do Laser nos processos de regeneração ainda estão em fase incipiente, especialmente em seres humanos. Alguns trabalhos demonstram que a fotoestimulação in vitro promove a síntese de ácidos nucléicos, divisão celular em cultura de fibroblastos humanos e aumenta o pool de células tipo I e II procolágeno e RNAm em feridas de pele em porcos. O objetivo foi avaliar as possíveis alterações provocadas pela ação do Laser de baixa potência AsGa (Arsenito- Gálio), quando irradiado em UP analisando-se as alterações clínicas e modificações histológicas decorrentes desta forma de terapia. A amostra foi constituída por 12 casos, sendo seis do grupo controle, que apresentavam UP não infectadas, submetidos à limpeza cirúrgica da ferida e internados nos hospitais públicos: Carlos Macieira HCM, Socorrão I e II e Hospital Aldenora Belo, da cidade de São Luís Maranhão. Para tanto, utilizou-se de uma metodologia quantitativa , na qual os pacientes foram separados em dois grupos, sendo o primeiro grupo A submetido à irradiação Laser AsGa, durante 5 dias consecutivos e o segundo grupo B irradiado durante 15 dias alternados, ambos com comprimento de onda 904 nm, dose 3 J/cm2, durante 1 minuto e aplicação pontual. Na avaliação clínica após a irradiação laser pudemos observar a presença de exsudação, tecido de granulação e pontos de sangramento, após o terceiro dia de irradiação, evidenciando início de vascularização colateral em ambos os grupos. A análise morfoquantitativa computadorizada demonstrou que nos casos submetidos à irradiação laser durante 15 dias a área ocupada pelos vasos foi de 4115,922 &#956;m2, e nos irradiados durante 5 dias de 4348,253 &#956;m2, ambos em uma área de 0,25 cm2 de derme demonstrando um aumento na vascularização, sugerindo assim que tal tratamento estimula a angiogênese bem como reparação tecidual (cicatrização). Os resultados obtidos sugerem que esta terapêutica foi eficaz como auxiliar nos processos de regeneração tecidual nos pacientes tratados na pesquisa

Endostatina, um fragmento do colágeno XVIII de 20 kDa, é um potente inibidor de angiogênese e crescimento tumoral. Foi previamente demonstrado que a administração contínua de endostatina em modelos animais melhorou a eficácia e potência da terapia antitumoral, comparada com a administração subcutânea diária por injeções de endostatina. A liberação contínua da proteína antiangiogênica endostatina para a circulação sistêmica poderia ser um tratamento antiangiogênico ideal. O sistema Theracyte é um sistema de membranas de politetrafluoretileno semi-permeáveis para macro-encapsulamento e implante de células geneticamente modificadas para liberação de proteínas terapêuticas in vivo e que não requer a imunossupressão do hospedeiro. Com a finalidade de demonstrar a utilidade deste sistema, células CHO expressando (his)6-met-endostatina foram injetadas em dispositivos de imunoisolamento Theracyte, que foram imediatamente implantados em camundongos imunodeficientes (SCID). Em outro modelo de implante de dispositivos de imunoisolamento, os dispositivos Theracyte foram implantados em animais e depois do tempo de cicatrização (17 dias), as células expressando endostatina foram injetadas dentro dos dispositivos. Níveis altos e constantes de endostatina de até 3,7 g/ml foram detectados no plasma durante os dois meses de duração do estudo em ambos os modelos de implante dos dispositivos de imunoisolamento. Níveis mais altos de endostatina (até 6,7 g/ml) foram detectados no plasma de animais implantados com o mesmo número de células livres. Análise histológica de cortes corados por hematoxilina/eosina dos dispositivos retirados dos animais mostraram que haviam células aparentemente viáveis dentro dos dispositivos. A análise imuno-histoquímica utilizando anticorpo anti-endostatina mostrou a existência de reação nas células dentro do dispositivo e também do lado de fora, demonstrando que a endostatina, secretada pelas células recombinantes confinadas, extravasou da membrana, atingindo os tecidos ao redor. / Endostatin, a 20 kDa C-terminal fragment of collagen XVIII, is a potent inhibitor of angiogenesis and tumor growth. It has been shown that endostatin continuous administration in animal models improves the efficacy and potency of the antitumoral therapy, compared to bolus subcutaneous daily administration. Continuous delivery of the antiangiogenic protein endostatin to the systemic circulation would be an optimal treatment for tumor. The Theracyte system is a semi-permeable membrane macro-encapsulation system for implantation of genetically engineered cells for therapeutic proteins delivery in vivo and which do not require host immunosuppression. To demonstrate the utility of this system, CHO cells expressing (his)6- met-endostatin where loaded into Theracyte immunoisolation devices which were immediately implanted into SCID mice. In another model for the immunoisolation devices implant, Theracyte devices were implanted into animals and after healing (17 days later), the cells expressing endostatin were injected within the devices. High and constant levels of endostatin of up to 3,7 g/ml were detected in plasma throughout the two months duration of the study in both models of immunoisolation device implant. Higher plasma levels of endostatin (up to 6,7 g/mL) were observed in animals implanted with the same amount of free cells. Histological analysis of hematoxilin/eosin stained devices withdrawn from the animals showed that there were apparently viable cells within the devices. Immunohistochemistry using anti-endostatin antibody showed that there are reaction in the cells within the devices and outside them, demonstrating that endostatin, secreted by the confined recombinant cells, permeated trough the membrane, reaching the surrounding tissues.

Endostatina, um fragmento do colágeno XVIII de 20 kDa, é um potente inibidor de angiogênese e crescimento tumoral. Foi previamente demonstrado que a administração contínua de endostatina em modelos animais melhorou a eficácia e potência da terapia antitumoral, comparada com a administração subcutânea diária por injeções de endostatina. A liberação contínua da proteína antiangiogênica endostatina para a circulação sistêmica poderia ser um tratamento antiangiogênico ideal. O sistema Theracyte é um sistema de membranas de politetrafluoretileno semi-permeáveis para macro-encapsulamento e implante de células geneticamente modificadas para liberação de proteínas terapêuticas in vivo e que não requer a imunossupressão do hospedeiro. Com a finalidade de demonstrar a utilidade deste sistema, células CHO expressando (his)6-met-endostatina foram injetadas em dispositivos de imunoisolamento Theracyte, que foram imediatamente implantados em camundongos imunodeficientes (SCID). Em outro modelo de implante de dispositivos de imunoisolamento, os dispositivos Theracyte foram implantados em animais e depois do tempo de cicatrização (17 dias), as células expressando endostatina foram injetadas dentro dos dispositivos. Níveis altos e constantes de endostatina de até 3,7 g/ml foram detectados no plasma durante os dois meses de duração do estudo em ambos os modelos de implante dos dispositivos de imunoisolamento. Níveis mais altos de endostatina (até 6,7 g/ml) foram detectados no plasma de animais implantados com o mesmo número de células livres. Análise histológica de cortes corados por hematoxilina/eosina dos dispositivos retirados dos animais mostraram que haviam células aparentemente viáveis dentro dos dispositivos. A análise imuno-histoquímica utilizando anticorpo anti-endostatina mostrou a existência de reação nas células dentro do dispositivo e também do lado de fora, demonstrando que a endostatina, secretada pelas células recombinantes confinadas, extravasou da membrana, atingindo os tecidos ao redor. / Endostatin, a 20 kDa C-terminal fragment of collagen XVIII, is a potent inhibitor of angiogenesis and tumor growth. It has been shown that endostatin continuous administration in animal models improves the efficacy and potency of the antitumoral therapy, compared to bolus subcutaneous daily administration. Continuous delivery of the antiangiogenic protein endostatin to the systemic circulation would be an optimal treatment for tumor. The Theracyte system is a semi-permeable membrane macro-encapsulation system for implantation of genetically engineered cells for therapeutic proteins delivery in vivo and which do not require host immunosuppression. To demonstrate the utility of this system, CHO cells expressing (his)6- met-endostatin where loaded into Theracyte immunoisolation devices which were immediately implanted into SCID mice. In another model for the immunoisolation devices implant, Theracyte devices were implanted into animals and after healing (17 days later), the cells expressing endostatin were injected within the devices. High and constant levels of endostatin of up to 3,7 g/ml were detected in plasma throughout the two months duration of the study in both models of immunoisolation device implant. Higher plasma levels of endostatin (up to 6,7 g/mL) were observed in animals implanted with the same amount of free cells. Histological analysis of hematoxilin/eosin stained devices withdrawn from the animals showed that there were apparently viable cells within the devices. Immunohistochemistry using anti-endostatin antibody showed that there are reaction in the cells within the devices and outside them, demonstrating that endostatin, secreted by the confined recombinant cells, permeated trough the membrane, reaching the surrounding tissues.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-15T12:13:26Z No. of bitstreams: 1 Publico-capa.pdf: 3484774 bytes, checksum: 0f75179eafb9fea87f004cdc7dc9e301 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-15T12:14:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-capa.pdf: 3484774 bytes, checksum: 0f75179eafb9fea87f004cdc7dc9e301 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T12:14:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-capa.pdf: 3484774 bytes, checksum: 0f75179eafb9fea87f004cdc7dc9e301 (MD5) Previous issue date: 2006 / Objetivo: o objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos morfológicos e ultra-estruturais na gênese de capilares sanguíneos em músculo esquelético do membro caudal de ratos submetidos à isquemia sob a ação da Prostaglandina E1 (PGE1), administrada por via intramuscular ou endovenosa. Métodos: foram utilizados 60 ratos (Rattus norvegicus albinus), linhagem Wistar-UEM, distribuídos aleatoriamente em três grupos de 20, redistribuídos igualmente em dois subgrupos, observados no 7o e 14o dias, sendo um grupo controle onde apenas foi provocada a isquemia no membro, outro com a isquemia e a injeção da PGE1 via intramuscular (IM), e outro com a isquemia e a injeção da PGE1 endovenosa (EV). Para análise dos resultados, foram realizadas a coloração com hematoxilina & eosina (HE), a imuno-histoquímica e a microscopia eletrônica de transmissão (MET). Resultados: constatou-se um aumento estatisticamente significante no número de capilares nos subgrupos com o uso da PGE1 IM e EV, através da contagem nos cortes corados com HE. Houve marcação de capilares e vasos de maior calibre nestes mesmos subgrupos, porém, esta reação não foi eficiente para a quantificação dos capilares. Na MET encontraram-se evidências de formação de novos capilares. Conclusões: a PGE1, administrada por via IM ou EV, promoveu, após 14 dias de observação, um aumento no número de capilares no músculo esquelético de ratos submetido à isquemia, identificáveis histologicamente com a coloração em HE. Na análise ultra-estrutural encontraram-se alterações que sugerem, nos animais sob a ação da PGE1, que a neoformação vascular possa ter ocorrido por angiogênese e vasculogênese. A imuno-coloração, apesar da marcação de capilares e vasos maiores, não permitiu estabelecer uma correlação com o aumento de vasos encontrados na coloração com HE. / Objective: The objective of this work was to study the morphologic and ultra-structural aspects in the genesis of blood capillaries in the lower limb skeletal muscle of rats submitted to ischemia under the action of intramuscular or endovenous Prostaglandin E1 (PGE1). Methods: Sixty Wistar-UEM rats (Rattus norvegicus albinus) were used, randomly distributed into three groups of 20, equally redistributed into two subgroups, observed at the 7th and 14th days as follows: group only with ischemia was considered as control (C), group with ischemia and intramuscular injection of PGE1 (IM), and group with ischemia and endovenous injection of the PGE1 (EV). The analysis of results was performed with the HE staining, imuno-histochemistry and transmission electronic microscopy (TEM). Results: an increase statistically significant was verified in the number of capillaries in the subgroups with PGE1 using IM or EV, through the counting in the samples with HE staining. Demarcation of capillaries and larger vases in these subgroups were observed, however, this reaction was not efficient for the quantification of the capillaries. In the electronic microscopy, evidences of new capillary formation were found. Conclusions: intramuscular or endovenous PGE1 promoted an increase on the number of capillaries in the skeletal muscle of rats submitted to ischemia after 14 days of observation histologically identifiable through HE staining. In the ultra-structural analysis, alterations found suggest, for animals under the action of PGE1 that the vascular neoformation might have occurred through angiogenesis and/or vasculogenesis. The imuno-staining, despite the demarcation of capillary and larger vases, did not allow the establishment of a correlation with the increase of vases found in the HE staining.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-19T18:40:25Z No. of bitstreams: 1 Renata Oliveira de Souza. Densidade de mastócitos....pdf: 1443667 bytes, checksum: 311f03148753ad500460aac2c50afa49 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-19T18:40:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renata Oliveira de Souza. Densidade de mastócitos....pdf: 1443667 bytes, checksum: 311f03148753ad500460aac2c50afa49 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Os tumores malignos orais representam 5% de todos os cânceres humanos e o carcinoma escamocelular oral (CECO) corresponde a 90% destes casos. Sabe-se que as pessoas acometidas por displasia epitelial oral (DEO) apresentam um maior risco de desenvolver CECO. A angiogênese está associada à iniciação e progressão neoplásica, sendo o início da neovascularização em DEOs um pré-requisito para a formação do tumor. Na angiogênese, destacam-se os mastócitos, responsáveis por estimular e manter a formação da rede vascular em determinadas doenças, inclusive displasias e neoplasias. Estas células liberam fatores que estimulam a angiogênese, como o VEGF. Assim, este estudo se propôs a avaliar o papel dos mastócitos na angiogênese de DEO e CECO, considerando parâmetros clínicos e morfológicos, comparando-os entre si. Metodologia: Quatorze DEOs e 56 CECOs, dispostos em lâminas convencionais e de tissue microarray (TMA), respectivamente, provenientes do Hospital AC Camargo, foram imunomarcardas para os anticorpos anti-CD34, anti-VEGF-A e anti-Mast cell tryptase, os três primeiros através do sistema EnVision Advance™ (Dako Corporation, Carpinteria, USA) e o último através do sistema Histofine (Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Japan). A microdensidade vascular (MDV - vasos/mm2) foi estabelecida através da determinação do número de vasos marcados para CD34 em cinco áreas de hot spot; a expressão de VEGF-A foi determinada pelo escore imuno-histoquímico (EI) estabelecido por Sinicrope et al. (1995); finalmente, a densidade da mastócitos (DM – células/ mm2) foi determinada através do número de células contadas em cinco áreas de hot spot. Resultados/Conclusões: A DM não apresentou relação com parâmetros clínicos e morfológicos em DEOs e CECOs, não existindo diferença na atividade exercida por Ms granulados e degranulados (p=0,18 e p= 0,1439, respectivamente; Teste de Mann-Whitney). A DM foi significativamente maior entre os casos de DEO quando comparadas aos carcinomas (p=0,01; Teste de Mann-Whitney), o que parece envolver a ação das células neoplásicas infiltrantes na regulação negativa do número de Ms nestes tumores. A MDV, nos casos de DEO e CECOs, não esteve associada aos parâmetros clínicos e morfológicos das mesmas, possivelmente sugerindo que a densidade de vasos não contribui de maneira independente para a progressão e comportamento biológico destas lesões. Os casos de DEO apresentaram MDV significativamente maior em relação aos CECOs (p= 0,0003, Teste de Mann-Whitney), sugerindo-se como possível causa uma subanálise dos vasos nas lâminas de TMA. A expressão de VEGF, no epitélio e lâmina própria, não esteve relacionada aos parâmetros clínicos e histológicos em DEOs e CECOs, tampouco à progressão de DEO para CECO, uma vez que os maiores EI foram encontrados em CECO bem diferenciado, seguido de DEO moderada, CECO moderadamente diferenciado e DEO discreta. A DM (granulados e degranulados) não estava correlacionada à MDV, o que provavelmente aponta para a atuação destas células, de maneira mais expressiva, em outros cânceres. Também não existiu correlação significante entre a DM, granulado e degranulado, e expressão de VEGF nestas duas lesões, o que provavelmente demonstra que não há participação expressiva dos Ms na produção desta citocina. Por fim, existiu associação entre a expressão de VEGF por células tumorais e MDV (r= 0,39, p= 0,0299, Teste de Spearman), o que parece demonstrar uma maior propensão das células tumorais infiltrantes para exercerem atividade sobre o desenvolvimento da MDV em CECOs. / Malignant tumors located in oral cavity represent 5% of all human cancers and oral squamous cell carcinomas (OSCC) correspond to 90% of these cases. One knows that people suffering from oral epithelial dysplasia (OED) have an increased risk to develop OSCC. Angiogenesis is associated with neoplastic initiation and progression, and neovascularization in dysplasic lesions is a pre-requisite to tumor formation. The mast cells (Ms) are well know for stimulating and maintaining the vascular network formation in certain diseases, including dysplasias and neoplasms. These cells release factors that stimulate angiogenesis such as VEGF. Thus, this study objective was to evaluate the role of mast cell in OED and OSCC angiogenesis, taking into account clinical and morphological parameters, and compared with each other. Methods: After approval by the REC (229/10), 14 OED and 56 OSCC, from the AC Carmargo Hospital, were immunostaining for anti-CD34, anti-VEGF-A and anti-mast cell tryptase, the first three using ENVISION ADVANCETM SYSTEM (Dako Corporation, Carpinteria, USA) and last one through thae Histofine system (Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Japan). The vascular microdensity (VMD – vessel/mm2) was established by determining the number of vessels stained for anti-CD34 score in five hot spots areas; the expression of anti-VEGF-A was found according to the established by Sinicrope et al. (1995), immunohistochemical score (IS); and finally the mast cells density (MD – cell/mm2) was determined by counting the number of cells in five hot spot areas. Results/Conclusions: The MD was not associated with clinical and morphological parameters in OED e OSCC, with no difference in the activity carried on by granulated and degranulated Ms (p= 0.18 and p= 0.1439, respectively, Mann-Whitney test). The MD was significantly higher among cases of OED (p= 0.01, Mann-whitney test), which seems to involve the action of the infiltrating neoplastic cells in regulating the number of Ms in these tumors.VMD was not associated with clinical and morphological parameters of OED and OSCC, showing that blood vessels density does not contribute independently to the progression and biological behavior of this lesions. The cases of OED had VMD higher compared to the OSCC (p= 0.0003, Mann-Whitney test), which may be associated with a subanalysis of vessels in the TMA slides. The expression of VEGF, in the epithelium and lamina propria, was not related to clinical and histological parameters in OED e OSCC, nor the progress of OED to OSCC, since the highest immunohistochemical score (IE) were found in well-differentiated OSCC, followed by moderate OED, moderately differentiated OSCC and discrete OED. The MD (granulated and degranulated) was not correlated with DMV, which shows the presence of these cells being more important in other cancers. Also, there was no significant correlation between MD, granulated and degranulated, and VEGF expression in these two lesions, which probably shows that there is no significant participation of Ms in the production this cytokine. Finally, there were association between expression of VEGF by tumoral cells and VMD in OSCC (r= 0.39, p=0.0299, Spearman test), which seems to show a greater propensity of infiltrative tumor cells to exert its activity on the development of MDV in OSCC.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T19:15:38Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T20:54:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T20:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) Previous issue date: 2012 / O protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, possui proteínas de superfície ou glicoproteínas, como a GPI–mucina que se liga a receptores primitivos Toll like de células fagocíticas desencadeando a ativação de fatores de transcrição responsáveis pela produção e liberação de mediadores pró-inflamatórios que participarão efetivamente da resposta inflamatória ativando e recrutando células imunes para o sítio inflamatório auxiliando no controle da replicação parasitária. A neovascularização é um mecanismo necessário durante o processo inflamatório, tanto para o fornecimento de nutrientes quanto para o aumento do recrutamento celular no sítio em questão. Neste estudo, avaliamos a angiogênese inflamatória induzida por implantes sintéticos, alojados no espaço subcutâneo em camundongos e estimulados, 24 horas pós-implante, com antígenos de 108 formas tripomastigotas sanguíneos da cepa Y do T. cruzi. Os implantes foram retirados nos dias 1, 4, 7 e 14 pós-implantes para análise bioquímica (hemoglobina, enzima mieloperoxidase, enzima N-acetil-b-Dglicosaminidase), imunológica (citocinas e quimiocinas) e avaliação histológica. Foi observado que os antígenos do T. cruzi elevaram os níveis de mediadores inflamatórios (TNF-alfa, CCL2, CCL5) e pró-angiogênicas (VEGF) no 7º dia pós-implante e o aumento do conteúdo de hemoglobina no 14º dia pós-implante. Além disso, observou-se aumento do infiltrado de monócitos no 7º dia pós-implante, provavelmente responsável pela angiogênese descrita no 14o dia, sendo estes dados confirmados pela análise histológicas dos implantes. O infiltrado de neutrófilos e a deposição de colágeno não foram alterados com o estímulo dos antígenos nos dias avaliados. Os resultados obtidos através deste estudo sugerem que os antígenos do T. cruzi (cepa Y) atuaram como um agente angiogênico (angiogênese inflamatória) no modelo de esponja subcutânea. Novas perspectivas de estudos esclarecerão se este padrão de angiogênese observado é reprodutível no sítio cardíaco e, se o mesmo é dependente da cepa do T. cruzi utilizada. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Acute inflammatory cells (granulocytes, macrophages, endothelial cells and fibroblasts) ordinarily lead to the resolution of a series events promoting mantainance of local tissue. Angiogenesis and inflammation are persistent features of several pathological conditions induced by pathological agents. Particularly, glycoproteins derived from the protozoan Trypanosoma cruzi are suggested to induce this inflammatory angiogenesis. In this study, we investigated the effects of total antigen from 108 trypomastigote forms of T. cruzi (Y strain), inoculated in sponge implantes of mice, on angiogenesis, inflammatory cell pattern and endogenous production of inflammatory and angiogenic mediators on days 1, 4, 7 and 14 post implant. There was an elevation of hemoglobin content on the 14th day, assessed by hemoglobin of the implants, but with no difference between those sponges stimulated with T. cruzi antigen or vehicle (PBS). However, parasite antigens induced high production of vascular endothelial growth factor (VEGF) and inflammatory mediators TNF-alpha, CCL2 and CCL5 on the 7th day in sponges when compared to the unstimulated group. Accumulation of neutrophils and macrophages was determined by measuring of myeloperoxidase (MPO) and N-acetyl-b-D-glucosaminidase (NAG) enzymes activitiy, respectively. MPO activity was unaffected by T.cruzi antigen, but macrophage accumulation was increased after stimulation with antigens initiating at day 4 and peaking at day 7. Morphometric analysis of the sponges suggested that inflammatory and angiogenic mediators, particularly induced by macrophages, increased blood vascularization in the matrix of the sponges peaking at 14th day. Together, our results suggest that T.cruzi molecules are the pivotal reason to the magnification of inflammatory angiogenesis in the sponge model and this process might be trigger by T.cruzi-induced inflammatory mediators.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28Bitstream added on 2014-06-13T18:41:22Z : No. of bitstreams: 1 bertini_f_dr_sjc.pdf: 1210131 bytes, checksum: e1b2631d7475ffa42f03933df9b818c8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O carcinoma epidermóide (CE) representa 95% das neoplasias malignas bucais, sendo língua e assoalho as localizações intra-orais mais comuns. A angiogênese e a linfangiogênese estão relacionadas com desenvolvimento, disseminação e agressividade dos tumores. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre as características histológicas, densidade microvascular sanguínea (MDV) e linfática (MDL) e proliferação celular no carcinoma epidermóide intra-oral (CEI). Sessenta casos de CEI, sendo 30 de assoalho bucal e 30 de língua, foram analisados e comparados quanto à gradação histológica de malignidade, a expressão do VEGF (fator de crescimento vascular endotelial) VEGF-C (fator de crescimento vascular endotelial - C) e sua correlação com a MDV e MDL. Verificou-se predomínio do gênero masculino em ambas as localizações, assim como da raça leucoderma. Quanto à gradação de malignidade, 73,3% dos casos de carcinoma epidermóide de língua e 96,67% dos casos de assoalho foram considerados muito agressivos. Foi notado um índice de proliferação celular médio maior nos casos de assoalho, entretanto, a diferença com relação à língua não foi estatisticamente significante. A maioria dos carcinomas avaliados teve ausência de marcação para VEGF(63,33% em língua e 70% em assoalho) e marcação positiva para VEGF-C (73,33% em língua e 79,31% em assoalho). A MDL foi maior nos casos de língua, com diferença significativa entre as regiões. Verificou-se que altos valores de MDV ocorrem nos casos com maior proliferação celular, o mesmo não acontecendo com a MDL. Não houve relação dos fatores de crescimento VEGF e VEGF-C com a MDV e MDL respectivamente. Assim pode-se concluir que: a gradação histológica de malignidade é maior nos casos de assoalho do que nos de língua; o índice de proliferação celular é semelhante nas duas regiões; a maioria... / Squamous cell carcinoma (SCC) represents 95% of the oral malignant neoplasias, being the tongue and the floor of the mouth the most common intraoral regions. The angiogenesis is essential to various pathological processes such as the development and dissemination of tumors as well as its agressivity. On the other hand, the lymphangiogenesis would be important in the development of tumor metastasis. The objective of this study is to evaluate the relation among histological characteristics, lymphatic and blood microvascular density and cell proliferation in intraoral squamous cell carcinoma (OSCC). Sixty cases of intraoral squamous cell carcinoma (OSCC) from the archives of the FOSJC – UNESP Pathology Laboratory, being 30 of floor of the mouth and 30 of tongue, will be analysed in relation to its histological gradation of malignancy. There was a predominance of males in both regions as well as the caucasian race. As for the grading of malignancy, 73.3% of cases of squamous cell carcinoma of tongue and 96.67% of cases of floor were very aggressive. It was noted a mean cell proliferation index increased in cases of floor, however, the difference an compared to the tongue was not statistically significant. Most carcinomas evaluated had no markings for VEGF (63.33% in language and 70% in floor) and positive staining for VEGF-C (73.33% and 79.31% and tongue on the floor). The LDV was greater in cases of tongue, with significant differences between regions. It was found that high values occur in cases of MVD with increased cell proliferation. There was no relation of the growth factors VEGF and VEGF-C with MDV and LDV, respectively... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:04Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12577.pdf: 942474 bytes, checksum: fb55d2b7cb3c2b41e6597447daa5d94b (MD5) / Células tumorais expressam um grande numero de proteases que têm importante função no desenvolvimento tumoral e metástases. Algumas destas proteases podem atuar também na regulação da angiogênese. Catepsinas são proteases lisossomais que estão expressas em células tumorais, podendo translocar-se para a superfície da célula e serem secretadas. Inibidores de catepsinas podem então ser potencialmente ativos na terapia anticâncer. Cistatinas são inibidores naturais de cisteíno proteases que podem inibir o desenvolvimento, crescimento e metástases de tumores. Na presente tese avaliamos o potencial uso terapêutico das cistatinas recombinates de cana de açúcar CaneCPI-2, CaneCPI-3 e CaneCPI-4 em um modelo de melanoma de camundongo. Estas cistatinas não foram citotóxicas para células de melanoma ou HUVEC, crescendo in vitro. A CaneCPI-4 inibiu angiogênese de células HUVEC em Matrigel in vitro e o desenvolvimento de células melanoma B16F10-Nex2 in vivo. CaneCPI-2 estimulou angiogênese e também o crescimento da célula tumoral in vitro e o desenvolvimento subcutâneo in vivo. Em contrapartida, a CaneCPI-3 não mostrou qualquer efeito na angiogênese ou crescimento de células tumorais. Estes efeitos opostos na angiogênese e viabilidade de células tumorais apresentados pelas CaneCPI-2 e CaneCPI-4 sugerem que estas cistatinas podem estar agindo sobre diferentes cisteíno proteases, levando a reações que levam a estimulação da progressão tumoral ou efeitos antitumorais. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações