Séculos de relatos históricos dedicados à reverência por distintas civilizações emergem dos últimos 25 anos de estudos científicos sobre abelhas sem ferrão, espécies nativas eusociais de habitat tropical e subtropical, em contraste com a extensão das pesquisas voltadas aos atributos comerciais de Apis mellifera. Diferenças das abelhas melíferas incluem arquiteturas de ninhos peculiares, contendo a estrutura comum em cera e resinas vegetais, reforçadas com amálgamas de pólen, sementes ou so lo para produzir o geoprópolis, que compartilha a mesma atividade prevalente de própolis contra bactérias gram- positivas, atribuível a derivados terpênicos. O trabalho teve como objetivo empregar um esquema de técnicas aplicadas ao fracionamento bioguiado, para obtenção de compostos ativos contra Staphylococcus aureus de geoprópolis da abelha sem ferrão Melipona scutellaris. Entre os extratos etanólicos de seis lotes de geoprópolis coletados, aleatoriamente, de um meliponário da Bahia durante um ano, a variedade “marrom-escura” destacou-se pelo poder antiestafilocócico com a mesma atividade apresentada por sua fração acetato de etila (C IM 62,5-31,25 µg/mL), a qual revelou 6 compostos-alvo através da bioautografia, na medida em que conservou o perfil cromatográfico por CLAE-FR-DAD durante a etapa de purificação, motivando o fracionamento do extrato por cromatografia em coluna de sílica, que levou, em vista da baixa eficiência de separação verificada para a fração F1 selecionada (C IM 1,95- 0,98 μg/mL), às sub-frações SF2 (3,90-1,95 µg/mL) e SF3 (7,81-3,90 µg/mL) por CLAE-FR-DAD semi-preparativa. Apesar da resistência ao isolamento, os perfis de fragmentação dos compostos em frações, sub-frações e extratos de geoprópolis, determinados por CLAE-FR-ESI-TQ-EMn, revelaram componentes intimamente relacionados à estrutura comum de um núcleo diterpênico ligado a um resíduo de ácido cinâmico, coerente com as varreduras espectrais no UV homólogas e ao espectro de 1H-RMN da fração F2 (7,81-3,90 µg/mL), relativamente mais purificada. Amostras de geoprópolis consistiram, ao contrário, na variabilidade dos espectros de massas, ressaltando características das abelhas nativas, ao mimetizar as Apis mellifera, quanto aos comportamentos de coleta heterogêneos relacionados às fontes de resi nas disponíveis. Ensaios antibacterianos envolvendo bioautografias e determinações da concentração inibitória/bactericida mínima (CIM/CBM) por microdiluição e revelação com resazuri na biomonitoraram as etapas do fracionamento, enquanto triagens por CIM/CBM comporam o perfil antimicrobiano do extrato “marrom-escuro” e seus derivados mais ativos contra S. aureus, em que um painel de linhagens bacterianas patogênicas padronizadas delineou espécies gram- positivas, em especial de Micrococcus, Bacillus e Staphylococcus, inclusive MRSA, como altamente susceptíveis, em detrimento das gram-negativas, demonstrando o potencial promissor de geoprópolis como repositório de produtos naturais indeléveis aos desafios precursores de fármacos na terapêutica. / Long historical records of reverence by distinct ci vilizations emerge from the last 25 years of scientific studies on stingless bees, native eusocial species inhabiting the tropical and subtropical areas of the world, over extensive documentation devoted to the globally widespread Apis mellifera. Differences from the honeybees include peculiar nest strengthened arquictetures built in beeswax and plant resi ns, amalgamated with pollen, seeds or soil material to produce geopropolis, compositionally dissociated of traditional propolis, even sharing a prevailing activity against gram-positi ve bacteria, attributable to terpenic derivatives. A bioassay-guided fractionation technique was aimed to separate active compounds against Staphylococcus aureus in geopropolis from Melipona scutellaris, concerni ng its potential biological relevance. Among the ethanolic extracts of the six lots of geopropolis ramdomly collected from a meliponary settled in the Bahia State of Brazil, during a year, the “dark-brown” variety was highlighted by the same antistaphylococcal acti vity of ethyl acetate fraction (MIC 62,5-31,25µg/mL), which unveiled at least si x target compounds from bioautography in the purification step, even because their chromatographic profiles by RP-HPLC-PDA remained equivalent to the original extract, motivating its chromatographic fractionation by Low-Pressure Silica Gel Column Chromatography, followed by preparative RP-HPLC-PDA of the poorly resolved fraction F1 (MIC 1,95 – 0,98 μg/mL), yelding sub-fractions SF2 (3,90- 1,95 µg/mL) and SF3 (7,81-3,90 µg/mL). Although escaping from the isolation purpose, the fragmentation profiles of compounds in fractions, sub-fractions and extracts, determined by RP-HPLC-ESI-TQ-MSn, allowed propositions of components closely related to the structure of a diterpenic core bonded to a cinnamic acid group, consistent with the homologous UV spectral scans, associated to the 1H-NMR spectra of fraction F2 (7,81-3,90 µg/mL), relatively the most purified one available. Differing extracts consisted, in contrast, of the variability of mass spectra, suggesting mimics of Apis mellifera heterogeneous collecting behavior in the choice for resin sources by native bees. Antibacterial assays involving bioautography and resazurin microtitre plate-based minimum inhibitory, followed by bactericidal, concentrations (MIC/MBC) methods conducted the fractionation process, whilst the screening by MIC/MBC composed the antimicrobial profile of “dark brown” extract and its most active derivatives against S. aureus, displaying a panel of standardized human pathogenic bacterial strains, recongni zed as highly susceptible gram-positive species, in particular Micrococcus, Bacillus and Staphylococcus, includi ng the selected MRSA isolate, over the gram-negative ones, demonstrating the promising potential of geopropolis as a repository of natural products candidates to the challenges of drugs development in the course of health claims. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Orientador: Fábio Camargo Abdalla / Banca: Rogilene Aparecida Prado / Banca: Edmilson Amaral de Souza / Resumo: Nas abelhas, a espermateca, órgão responsável por estocar os espermatozoides e mantê-los viáveis após a cópula, está presente nas fêmeas da maioria dos insetos,. Associadas a estas, encontram-se as glândulas espermatecais, cuja função é sintetizar o fluido espermatecal no qual os espermatozoides ficam imersos. As rainhas das espécies de abelhas eussociais, pertencentes as tribos Apini e Meliponini, podem estocar os espermatozoides dos machos por anos devido a sua longevidade ser maior do que a de outras espécies de abelhas. Contudo, espécies que apresentam longevidade e taxa de oviposição menores, como é o caso, dos Bombini e das abelhas solitárias, também possuem glândulas espermatecais e espermateca, e mecanismos de preservação dos espermatozoides. Não se sabe ao certo como a espermateca conserva os espermatozoides e se a secreção das glândulas espermatecais são as únicas responsáveis pela formação do fluido espermatecal, o qual se supõe ser o responsável por manter os espermatozoides viáveis nas espécies de abelhas. O fluido espermatecal é formado também pelo conteúdo seminal dos machos, produzido por suas glândulas de muco. Em abelhas, a composição química e a função da secreção das glândulas espermatecais das fêmeas e das glândulas de muco dos machos ainda são pouco estudadas e não se tem nada conclusivo na literatura. Com o intuito de verificar se a organização social e o estado reprodutivo das abelhas refletem em diferenças no tipo de secreção contido nas espermatecas, nas glândulas espermatecais e nas glândulas de muco foi realizado um estudo comparado da histoquímica e do padrão de bandeamento proteico das glândulas de muco, bem como do conteúdo da vesícula seminal dos machos, juntamente com as glândulas espermatecais e do fluido espermatecal das fêmeas com diferentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Spermatheca is the organ responsable to store the sperm and keep it viable after the copula. In association with this organ, we can find the spermathecal glands, which synthesize the spermathecal fluid that maintains the sperm. The eusocial bee queens of Apini and Meliponini tribes can store the male sperm for years due to its longevity is bigger than the others bee species. However, species with smaller longevity and oviposition rates like Bombini and lonely bees also have spermatheca, spermathecal glands and sperm preserving mechanisms. It is not known for sure how the spermatheca preserves the sperm and if the spermathecal glands secretion is the only responsible for the spermathecal fluid generation, which is believed to keeps the sperm viable. Some studies show that the spermathecal fluid is also formed by male seminal content produced in mucus glands. The spermathecal glands function and chemical composition in female bees and the male mucus glands are still less studied and there is nothing conclusive in the literature. This study aims to verify if different oviposition rates, longevity and social organization reflects in thta different kinds of secretion contained in spermatheca, spermathecal and mucus glands. For this I made a compared study of the histochemistry and protein band pattern of: 1. mucus glands secretion; 2. male seminal vesicle content plus spermathecal glands secretion; and 3. female spermathecal fluid. This comparison was done in diverse sociability levels and fecundity conditions: virgins and inseminated; with three bee species: Centris (ptilotopus) scopipes - solitary, Bombus morio - primitively eusocial, and Melipona quadrifasciata anthidioides - advanced eusocial. M. quadrifasciata anthidioides males don't have mucus gland, so in this case the seminal vesicle content was analyzed / Mestre

Orientador: Clotilde de Almeida Azevedo Murakawa / Banca: Gladis Maria de Barcello Almeida / Banca: Maria Helena de Paula / Banca: Odair Luiz Nadin da Silva / Banca: Ronaldo Zucchi / Resumo: A relação entre homens e abelhas é histórica. No Brasil, ela é inicialmente marcada pelo extrativismo predatório de mel de melipon"neos e, posteriormente, pela introdução no pa"s de abelhas do gênero Apis. O interesse cient"fico pelas abelhas nasce com a busca de conhecimento para o manejo seguro dessas abelhas e o aumento da produtividade de mel. Atualmente, as pesquisas com abelhas (Apis e melipon"neos) visam mensurar o impacto desses insetos polinizadores sob a perspectiva socioeconômica e ambiental. O conhecimento, a conservação e a criação das diferentes espécies de abelhas estão diretamente relacionados à recuperação da resiliência ambiental e à segurança alimentar. A ciência é a chave, e sua divulgação, as portas de acesso ao conhecimento e à mobilização da sociedade na direção da preservação da biodiversidade e da produção agr"cola sustentável. Esta tese na área da Lexicografia Especializada oferece-se como uma contribuição, como possibilidade de organização e divulgação da terminologia desse dom"nio espec"fico do conhecimento humano. Trata-se de reflexão teórico-metodológica para a elaboração de um dicionário terminológico. Dividida em cinco seções, a tese discute a metalinguagem necessária ao trabalho lexicográfico e a compreensão da palavra como unidade de significação, aprendizagem e transmissão de conhecimento. Como resultados, apresentam-se o corpus APIMELI - base textual digital constitu"da a partir dos princ"pios da Lingu"stica de Corpus; as facilidades e os limites das ferramentas computacionais utilizadas para a extração automática do vocabulário terminológico; a macroestrutura do dicionário com 2404 entradas registradas em ordem alfabética; e, finalmente, um conjunto-piloto com 225 verbetes referentes às unidades iniciadas com a letra M como modelo de microestrutura. Esta tese concebe o dicionário terminológico como produto lexicográfico ... / Abstract: The relationship between man and bees dates from ancient times. In Brazil, it initially consisted of predatory extraction of honey from stingless bees and later of the introduction of bees of the genus Apis. Scientific interest concerning bees began with a search for ways to safely manage these bees and increase honey production. Currently, bee research has focused on examining the impact of these pollinating insects from socio-economic and environmental perspectives. Knowledge concerning the biology, conservation and rearing of the various species of bees directly affects environmental resilience and food security. Scientific knowledge is the key, and its dissemination is the door to access to knowledge and to the mobilization of society to protect biodiversity and prioritize sustainable agricultural production. This thesis, concerning specialized lexicography, seeks to contribute to knowledge about bees, through organization and dissemination of the terminology of this specific domain of human knowledge. It is a theoretical-methodological reflection directed towards the elaboration of a terminological dictionary. Divided into five parts, the thesis discusses the metalanguage necessary for lexicographic studies and comprehension of words as units of significance, learning and transmission of knowledge. The results include the corpus APIMELI - digital text base constituted based on Corpus linguistic principals; the facilities and limits of computational tools used for automatic extraction of vocabulary terms; the macrostructure of a dictionary with 2404 entries recorded in alphabetical order; and a pilot grouping with 225 entries of units that initiate with the letter M as an infrastructure model. This thesis conceives a terminological dictionary as a lexicographic product of semasiological orientation, to bring together a lexical collection, resulting from the linguistic interchange of specialist speakers, and a model for description ... / Doutor

Orientador: Osmar Malaspina / Banca: Ademilson Espencer Egea Soares / Banca: Roberta Cornelio Ferreira Nocelli / Resumo: Muitos inseticidas atuam inibindo a ação de neurotransmissores específicos, causando a super atividade dos neurônios, como por exemplo, aqueles ligados ao aprendizado e a memória e, como conseqüência, podem alterar estruturas cerebrais. Atualmente, o inseticida fipronil é muito utilizado como defensivo agrícola, principalmente em culturas como cana-de-açúcar, soja e citrus, sendo que sua pulverização, que visa o controle de insetos-praga, vem causando sérios danos aos insetos não-alvo, como os polinizadores. Embora alguns estudos tenham sido realizados para os efeitos das doses subletais de inseticidas em abelhas A. mellifera, não existe nenhum trabalho documentado sobre esses efeitos para as abelhas africanizadas, híbrido predominante no país. Assim, esse projeto teve como objetivo estabelecer as doses subletais para o inseticida fipronil, administrado oralmente e por contato; os efeitos no comportamento de forrageamento das abelhas; e as possíveis alterações na morfologia do cérebro das abelhas (A. mellifera). Para isso, previamente foi calculado a DL50 oral e por contato, para que posteriormente estabelecesse os valores das doses subletais. Para as abelhas tratadas foram avaliados teste da atividade locomotora durante o forrageamento e de sensibilidade ao alimento, através da metodologia de Resposta e Extensão da Probóscide (REP), que é uma reprodução no que ocorre na interação abelha-planta. Por fim, foram realizados cortes histológicos no cérebro das abelhas tratadas a fim de detectar as possíveis alterações morfológicas destas estruturas e utilizar a técnica de imunohistoquímica para marcar e mapear as regiões cerebrais de atuação do inseticida. Os resultados mostraram-se promissores para as avaliações sobre o efeito de baixas doses do inseticida fipronil para as abelhas africanizadas, embora mais estudos deverão ser realizados e os testes melhores adaptados. / Abstract: Many pesticides act as an inhibitor of the action of specific neurotransmissors, causing a super activity of neurons, for example, those linked with learning and memory and, as consequence, they can alter cerebral structures. Nowadays, the pesticide fipronil is largely used as an agricultural defense, manly in sugar cane, soy and citrus cultures. Its use that targets the control of plague insects has been causing serious effects on other insects, such as pollinators. Although some studies have been done on the effects of sublethal doses of pesticides on bees Apis mellifera, there are no documented work on those effects on Africanized bees, a hybrid very abundant in this country. Therefore, this project has the objective of establishing the sublethal doses of the pesticide fipronil, administrated orally and by contact; the effects of the foraging behavior of work bees; possible alterations on the brain morphology of Africanized bees (A. mellifera). For that, the oral and by contact DL50 were calculated previously, so that the values of sublethal doses could be established later. For bees treated with sublethal doses of fipronil, tests of dislocation activity during foraging and sensitivity to food were evaluated through the PER methodology, which is a reproduction of what happens in the interaction bee/plant. At last, histological cuts were made in the brains of treated bees to detect possible morphological alterations on these structures and to use the imunehistochemistry technique to mark and map the cerebral regions affected by the pesticide. The results showed themselves very promising for the evaluations of small doses of fipronil pesticide on Africanized bees, although further studies should be made and tests more adapted. / Mestre

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The increase in accidents involving Africanized bees in Brazil and throughout Latin America in recent decades has become the object of surveillance by the health authorities, because of accidents with hundreds of bees to be associated with frames of poisoning. The venom of the honeybee Apis mellifera is a mixture of toxic peptides with various local and systemic actions. The objective of this study was to evaluate the renal and vascular changes promoted by the whole venom of the bee A. mellifera and its fractions PLA2 and melittin. Male Wistar rats (250-300g) whose kidneys were isolated and perfused with Krebs-Henseleit solution containing modified 6g% bovine albumin previously dialyzed. The evaluation of the vascular effects of the venom of Apis mellifera in pots was carried out using conductance tests ring of isolated rat aorta. The results showed that the whole venom of A. mellifera and the complexed fraction (PLA2+melittin) promoted significant changes in all renal parameters studied, producing an increase in renal perfusion pressure (PP), renal vascular resistance (RVR), urinary flow (FU) and the glomerular filtration rate (GFR), all these changes were seen at concentrations of 3μg/mL and 10μg/mL. However, the lower concentration (1μg/mL) had no effect on the evaluated parameters. It was observed a significant reduction in the percentage of tubular transport of sodium (Na+), potassium (K+) and chloride (Cl-), suggesting that the whole venom and the fraction complexed (PLA2+melittin) engaged on the renal tubular injury. Were also observed in protein deposition in the renal tubules histological focal regions with necrosis/apoptosis, and was found reduced the viability of the MDCK cells and an increased of the enzyme lactate dehydrogenase (LDH), whose concentration dependent cytotoxic effect with a value IC50 47.84μg/mL. In this sense, the results suggest that the renal lesions were necrosis in the tested conditions. It had been shown in the protocol of aortic ring an increase in contractility. In conclusion, the whole venom and the fraction complexed (PLA2+melittin) of bee Apis mellifera caused nephrotoxicity, suggesting a direct action on cell death in renal tubule cells by necrosis. The contractile effect of bee venom involves the opening of calcium channels operated by voltage and suggest a role of alpha adrenergic receptors via activation of phospholipase C. This finding confirms the results found in the isolated rat kidney and there was an increase in pressure due to renal perfussÃo possible vasoconstriction of the vessels supplying the kidney. Studies of the venom and its fractions in different systems provide a greater understanding of the pathophysiology and an elucidation of the mechanisms observed. Thus, it can lead to the discovery of pharmacological tools and bioprospecting in the components present in the venom. / O aumento dos acidentes envolvendo abelhas africanizadas no Brasil e em toda a AmÃrica, nas Ãltimas dÃcadas, passou a ser objeto de vigilÃncia das autoridades sanitÃrias, devido ao fato dos acidentes com centenas de abelhas estarem associadas a quadros de envenenamento. O veneno da abelha Apis mellifera à uma mistura de peptÃdeos tÃxicos com diversas aÃÃes locais e sistÃmicas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar as alteraÃÃes renais e vasculares promovidas pelo veneno total da abelha A. mellifera e de suas fraÃÃes PLA2 e melitina. Foram utilizados ratos Wistar machos (250-300g), cujos rins foram isolados e perfundidos com soluÃÃo de Krebs-Henseleit modificado contendo 6g% de albumina bovina previamente dialisada. A avaliaÃÃo dos efeitos vasculares do veneno de Apis mellifera em vasos de condutÃncia foi realizada atravÃs dos ensaios em anel de aorta isolado de rato. Os resultados encontrados demonstraram que o veneno total de A. mellifera e da fraÃÃo complexada (PLA2 + melitina) promoveram alteraÃÃes significativas em todos os parÃmetros renais estudados, produzindo um aumento na pressÃo de perfusÃo renal (PP), na resistÃncia vascular renal (RVR), no fluxo urinÃrio (FU) e no ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG), todas essas alteraÃÃes foram verificadas nas concentraÃÃes de 3Âg/mL e 10Âg/mL. PorÃm, a menor concentraÃÃo (1Âg/mL) nÃo apresentou efeito nos parÃmetros avaliados. Foi verificada uma reduÃÃo significativa no percentual de transporte tubular de sÃdio (Na+), potÃssio (K+) e cloreto (Cl-), sugerindo que o veneno total e a fraÃÃo complexada (PLA2 + melitina) exerÃam injÃria sobre os tÃbulos renais. TambÃm foram observadas depÃsito de proteÃnas nos tÃbulos renais nas anÃlises histolÃgicas com regiÃes focais de necrose/apoptose, bem como foi constatada reduÃÃo da viabilidade das cÃlulas MDCK e do aumento da enzima lactato desidrogenase (LDH), cujo efeito citotÃxico dependente de concentraÃÃo com um valor de IC50 47.84Âg/mL. Nesse sentido, os resultados sugerem que as lesÃes renais foram por necrose nas condiÃÃes testadas. Foi demonstrado no protocolo de anel de aorta um aumento na contratilidade. Em conclusÃo, o veneno total e a fraÃÃo complexada (PLA2 + melitina) da abelha Apis mellifera causaram nefrotoxicidade, sugestivo de uma aÃÃo direta com morte celular em cÃlulas do tÃbulo renal por necrose. O efeito contrÃtil do veneno de abelha envolve a abertura de canais de cÃlcio operados por voltagem e sugerem a participaÃÃo dos receptores alfa adrenÃrgicos via ativaÃÃo da enzima fosfolipase C. Esse achado corrobora com os resultados encontrados em rim isolado de rato, verificando-se um aumento da pressÃo de perfusÃo renal devido a uma possÃvel vasoconstricÃÃo dos vasos que irrigam o rim. Os estudos do veneno e suas fraÃÃes em diferentes sistemas propiciam um maior conhecimento da fisiopatologia e uma elucidaÃÃo dos mecanismos observados. Desta forma, pode levar à descoberta e bioprospecÃÃo de ferramentas farmacolÃgicas em componentes presentes no veneno.

Acidentes envolvendo abelhas africanizadas são freqüentemente relatados, particularmente na América do Sul. As picadas de abelhas causam reações localizadas e sistêmicas e os sintomas do envenenamento incluem náuseas, vômitos, hemólise, falência renal e coagulação intravascular disseminada. Durante muito tempo todas as reações tóxicas eram atribuídas à presença de uma fosfolipase A2, mesmo sendo o veneno uma mistura complexa de substâncias. A melitina, o componente mais abundante e tóxico do veneno de abelha, é um peptídeo de 26 aminoácidos com a habilidade de interagir e danificar membranas celulares. A melitina é também capaz de modular muitas proteínas, aumentando a diversidade de atividades biológicas do peptídeo. Até recentemente, acreditava-se que a estrutura tri-dimensional biologicamente ativa do peptídeo, que possui conformação em hélice, era um tetrâmero. Neste trabalho avaliamos a conformação da melitina e seus estados oligoméricos em solução por dinâmica molecular e a interferência da melitina na função plaquetária. Aqui está demonstrado que a melitina possui uma conformação randômica em condições fisiológicas e que sua estrutura tri-dimensional sofre alterações de acordo com as condições ambientais. Ainda, foi demonstrada uma nova atividade biológica do peptídeo melitina. O peptídeo é capaz de induzir a 8 agregação plaquetária de forma dose-dependente e de interagir diretamente com a superfície de plaquetas. A correlação entre a conformação da melitina e suas atividades biológicas é discutida. Os resultados aqui apresentados podem ser valiosos no entendimento do papel da melitina nas coagulopatias induzidas por veneno de abelha. O estudo estrutural mostrado aqui pode ser aplicado para explicar as diferentes atividades do peptídeo. / Accidents involving africanized bees are frequently reported, particularly in South America. Bee stings cause localized and systemic reactions and the symptoms of envenomation include nausea, vomiting, hemolysis, kidney failure and disseminated intravascular coagulation. For a long time, all toxic reactions were ascribe to the presence of a phospholipase A2, despite of being the venom a complex mixture of substances. Melittin, the most abundant and the major toxic component of bee venom, is a 26 amino acid peptide with the ability to interact and disrupt cell membranes. Melittin is also able to modulate many proteins, enhancing the wide range of the peptide biological activities. The biologically active tridimensional structure of the peptide, which has a helical conformation, has been described until now as a tetramer. In this work we evaluated the conformation of melittin and its oligomeric states in solution by molecular dynamics simulations and performed studies of melittin effect on platelet function. Here we demonstrate that melittin has a random conformation under physiological conditions and its tridimensional structure changes under different environmental conditions. Moreover, here we describe a new biological activity of melittin. The peptide is able to induce platelet aggregation in a dose10 dependent manner and can interact directly with the platelet surface. The correlation between melittin conformation and biological activity is discussed. Our results might contribute to elucidate the role of melittin in bee venom induced coagulopathies. The structural data gathered in this work may explain the different activities of the peptide.

Acidentes envolvendo abelhas africanizadas são freqüentemente relatados, particularmente na América do Sul. As picadas de abelhas causam reações localizadas e sistêmicas e os sintomas do envenenamento incluem náuseas, vômitos, hemólise, falência renal e coagulação intravascular disseminada. Durante muito tempo todas as reações tóxicas eram atribuídas à presença de uma fosfolipase A2, mesmo sendo o veneno uma mistura complexa de substâncias. A melitina, o componente mais abundante e tóxico do veneno de abelha, é um peptídeo de 26 aminoácidos com a habilidade de interagir e danificar membranas celulares. A melitina é também capaz de modular muitas proteínas, aumentando a diversidade de atividades biológicas do peptídeo. Até recentemente, acreditava-se que a estrutura tri-dimensional biologicamente ativa do peptídeo, que possui conformação em hélice, era um tetrâmero. Neste trabalho avaliamos a conformação da melitina e seus estados oligoméricos em solução por dinâmica molecular e a interferência da melitina na função plaquetária. Aqui está demonstrado que a melitina possui uma conformação randômica em condições fisiológicas e que sua estrutura tri-dimensional sofre alterações de acordo com as condições ambientais. Ainda, foi demonstrada uma nova atividade biológica do peptídeo melitina. O peptídeo é capaz de induzir a 8 agregação plaquetária de forma dose-dependente e de interagir diretamente com a superfície de plaquetas. A correlação entre a conformação da melitina e suas atividades biológicas é discutida. Os resultados aqui apresentados podem ser valiosos no entendimento do papel da melitina nas coagulopatias induzidas por veneno de abelha. O estudo estrutural mostrado aqui pode ser aplicado para explicar as diferentes atividades do peptídeo. / Accidents involving africanized bees are frequently reported, particularly in South America. Bee stings cause localized and systemic reactions and the symptoms of envenomation include nausea, vomiting, hemolysis, kidney failure and disseminated intravascular coagulation. For a long time, all toxic reactions were ascribe to the presence of a phospholipase A2, despite of being the venom a complex mixture of substances. Melittin, the most abundant and the major toxic component of bee venom, is a 26 amino acid peptide with the ability to interact and disrupt cell membranes. Melittin is also able to modulate many proteins, enhancing the wide range of the peptide biological activities. The biologically active tridimensional structure of the peptide, which has a helical conformation, has been described until now as a tetramer. In this work we evaluated the conformation of melittin and its oligomeric states in solution by molecular dynamics simulations and performed studies of melittin effect on platelet function. Here we demonstrate that melittin has a random conformation under physiological conditions and its tridimensional structure changes under different environmental conditions. Moreover, here we describe a new biological activity of melittin. The peptide is able to induce platelet aggregation in a dose10 dependent manner and can interact directly with the platelet surface. The correlation between melittin conformation and biological activity is discussed. Our results might contribute to elucidate the role of melittin in bee venom induced coagulopathies. The structural data gathered in this work may explain the different activities of the peptide.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-24T16:27:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3327901 bytes, checksum: 1bdbba7554cfc67e53033c656a5abe84 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T16:27:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3327901 bytes, checksum: 1bdbba7554cfc67e53033c656a5abe84 (MD5) Previous issue date: 2016-11-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As abelhas sem ferrão são importantes polinizadores dos ecossistemas onde ocorrem. Atualmente, possuem distribuição pantropical com registros em algumas regiões subtropicais. Registros fósseis sugerem que Meliponini tenha ocupado as regiões Neártica, no final do Cretáceo, e Paleártica durante o Paleogeno e início do Neogeno. O início da diversificação de Meliponini ainda é controverso, embora estudos anteriores tenham estimado para o final do Cretáceo superior. O clado Plebeia é composto pelos gêneros Plebeia, Lestrimelitta e Friesella. Estudos baseados em morfologia sempre consideraram Plebeia como um gênero monofilético. No entanto, filogenias baseadas em sequências de DNA têm considerado Plebeia como polifilético. Sendo assim, a presente tese teve como objetivo utilizar um amplo conjunto de dados moleculares oriundo de sequências parciais de genes nucleares e mitocondriais, a fim de estudar a filogenia de Meliponini com ênfase no clado Plebeia, para que dessa forma fossem realizadas inferências a respeito da evolução dessas abelhas no espaço e no tempo. No Capítulo 1 nós testamos a monofilia de Plebeia a partir de uma ampla filogenia da tribo Meliponini baseada em genes nucleares (EF-1α, ArgK, Opsin e 28S) e mitocondriais (CytB e 16S). Nossa amostragem abrange todas as regiões de ocorrência de Plebeia. Nós sequenciamos 76 terminais, incluindo 27 das 40 espécies descritas para Plebeia, cinco espécies de Lestrimelitta e cinco amostras de localidades diferentes do gênero monotípico Friesella. O conjunto de dados concatenado é composto por 4.112 pares de bases. Nossos resultados reforçam a polifilia de Plebeia e a monofilia de Lestrimelitta e Friesella. Foi possível reconhecer dois clados de Plebeia (I e II), com Lestrimelitta e Friesella entre eles (Plebeia I, (Friesella, (Lestrimelitta + Plebeia II))). As implicações dos nossos resultados para classificação do grupo aqui estudado foram discutidas. Por fim, foram feitos comentários sobre os grupos e as espécies de Plebeia. No Capítulo 2, nós utilizamos uma ampla filogenia da tribo Meliponini com datações moleculares utilizando fósseis como pontos de calibração, o que permitiu inferir sobre o início da história evolutiva de toda a tribo, além de reconstruir a história biogeográfica do clado Plebeia. Nossos resultados apontam a América do Sul como centro de origem das abelhas sem ferrão durante o Maastrichtiano no final do Cretáceo (ca 70 Ma). O clado Plebeia se originou na sub-região Paranaense durante o Oligoceno (ca 28 Ma), com as primeiras dispersões para a Amazônia e México durante o início do Mioceno, e posteriores dispersões para a Amazônia, sub-região Chaquenha, Domínio do Pacífico e Mesoamericano durante o Tortoniano (ca 10 Ma). E, por fim, nossos dados também sugerem que elementos da fauna sul-americana de Meliponini se dispersaram da região Neotropical para a Neártica muito antes das datas estimadas para o fechamento do Istmo do Panamá, o que reforça a hipótese de rotas transoceânicas do início do Mioceno. / Stingless bees are important pollinators in tropical ecosystems. They are currently pantropical distributed, being also registered in some subtropical regions. Fossils records suggest that Meliponini have inhabited Neartic region in the end of Cretaceous, and Paleartic region during Paleogene and the beginning of Neogene. The starting point of its diversification is still controversial, though previous studies have estimated it to the end of upper Cretaceous. Plebeia clade is composed of the genera Plebeia, Lestrimelitta and Friesella. Studies based on morphology have always considered Plebeia as a monophyletic genus. Phylogenies based on DNA sequences have, however, considered Plebeia as polyphyletic. Thus, the aim of this thesis was to use a wide set of molecular data from partial sequences of nuclear and mitochondrial genes to study Meliponini’s phylogeny focusing on Plebeia clade, enabling inferences on their evolution through space and time. On Chapter 1, we tested the monophyly of Plebeia based on a broad phylogeny of Meliponini tribe set from nuclear (EF-1α, ArgK, Opsin and 28S) and mitochondrial (CytB and 16S) genes. Our data set comprises all regions where Plebeia can be found We have sequenced 76 terminals, including 27 from the 40 species described for Plebeia, five species of Lestrimelitta and five samples of the monotypic genus Friesella from different locations. The concatenated data set is composed of 4112 base pairs. Our results support the polyphyly of Plebeia and the monophyly of Lestrimelitta and Friesella. It was possible to recognize two clades of Plebeia (I and II), with Lestrimelitta and Friesella among them (Plebeia I, (Friesella, (Lestrimelitta + Plebeia II))). We have also discussed the implications of our results towards a classification of the group. On Chapter 2, we use a broad phylogeny of Meliponini tribe with molecular dating, and/with fossils as calibrating points, enabling inferences on the beginning of its evolutionary history. It was also possible to reconstruct the biogeographical history of Plebeia clade. Our results suggest South America as the center of origin of stingless bees during the Maastrichtian in upper Cretaceous (⁓70 Ma). Plebeia clade has its origins in the Paranaense sub-region during the Oligocene (⁓28 Ma), with its first dispersions to the Amazon sub-region and Mexico during the Miocene. The posterior dispersions wereto the Chacoan sub-region, Pacific and the Mesoamerican Dominion during the Tortonian (⁓10 Ma). Finally, our data also suggest that elements from the South-American fauna of Meliponini have dispersed from the Neotropical region to the Neartic long before the estimated date to the closing of Isthmus of Panama, endorsing the hyphothesis of transoceanic routes in early Miocene.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-24T18:27:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1397181 bytes, checksum: 7774bdec9dafd093faa36fa019784769 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T18:27:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1397181 bytes, checksum: 7774bdec9dafd093faa36fa019784769 (MD5) Previous issue date: 2016-11-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O objetivo deste trabalho foi o isolamento de linhagens de leveduras a partir de produtos de abelhas nativas e exóticas, para tanto linhagens de leveduras foram isoladas a partir de méis e pólen apícola de abelhas Tetragonisca angustula (Jataí), Nannotrigona testaceicornis (Iraí) e Apis mellifera. Ao todo 19 leveduras foram isoladas, das quais 9 foram identificadas como Starmerella meliponinorum, 1 Papiliotrema flavescens, 2 Rhodotorula mucilaginosa, duas Candida apícola e 5 como Saccharomyces cerevisiae. Estas linhagens foram submetidas a estresse de 5% (v/v) de etanol e 20% (m/v) de glicose. Sete linhagens foram selecionadas e testadas quanto à tolerância a diferentes concentrações de glicose, etanol e metabissulfito de sódio, das quais selecionou-se JP14, IM8 e IP9, identificadas como S. cerevisiae, para produção de bebidas. Estas linhagens foram testadas em temperaturas de 15, 20, 25 e 30 oC, onde JP14 mostrou-se aptas para fermentações em temperaturas inferiores, e a temperatura de 20 oC foi caracterizada como ideal e comum às três linhagens, proporcionando um hidromel de menor acidez volátil, maior consumo de açúcares e maior teor alcoólico. Com a temperatura definida, iniciou-se a fermentação do mosto que durou 35 dias seguidos por 35 dias de maturação, onde determinou-se consumo de açúcares, contagem de leveduras, turbidez, teor alcoólico, acidez total, volátil e fixa, e compostos voláteis. O melhor tempo de maturação foi de 28 dias. Os 3 hidroméis apresentaram perfil de compostos voláteis diferentes, e após a análise sensorial exibiram pontuações que variaram entre “gostei ligeiramente” e “gostei moderadamente”, entretanto os provadores não identificaram diferença entre eles. Assim foi possível desenvolver com sucesso fermentos a partir de linhagens de S. cerevisiae isoladas de produtos de abelhas sem ferrão para produção de hidromel, consideradas seguras na produção de bebidas. / The objective of this study is isolation of yeast strains from products of exotic and native bees. Yeast strains have been isolated from honey and bee bread of Tetragonisca angustula (Jataí), Nannotrigona testaceicornis (Iraí) and Apis mellifera bees. In total, 19 strains were isolated, 9 of which were identified by sequencing as Starmerella meliponinorum, 1 as Papiliotrema flavescens, 2 as Rhodotorula mucilaginosa, 2 as Candida apícola and 5 as Saccharomyces cerevisiae, being subjected to stress at 5% (v / v ) ethanol and 20% (w / v) glucose. Seven strains were selected and tested by tolerance for different concentrations of glucose, ethanol and sodium metabisulphite. S. cerevisiae JP14, IM8 and IP9 strains were selected as for the production of drinks. These strains were tested at temperatures of 15, 20, 25 and 30 ° C, JP14 and IM8 have proved being suitable for adaptation and fermentation at lower temperatures, the temperature of 20 ° C was characterized as ideal and common to all, providing mead with less acidity volatile , higher consumption of sugars and higher alcohol content. With the fixed temperature, the fermentation was begun during 35 days followed by 35 days of maturation, during this time, consumption of sugars, yeast count, turbidity, alcohol content, total acidity, volatile acidity, fixed acidity and volatile compounds were quantified. The best maturation time was 28 days under the conditions tested. The meads showed different profile of volatile compounds, and scores ranging from "I liked it slightly" and "I liked it moderately", however after the sensory analysis, testers didn't identified difference between them. Thus it was possible to develop with success ferments from isolated S. cerevisiae strains of stingless bee products for mead production, considered safe and unrestricted use in beverage production.

CAVALCANTE, Arianne Moreira. Nicho trófico e aspectos bionômicos da abelha solitária Tetrapedia diversipes KLUG (Hymenoptera, Apidae, Tetrapediini). 2016. 58 f. Dissertação (Mestrado em Zootecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2017-01-16T20:34:26Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_amcavalcante.pdf: 1762771 bytes, checksum: 62dbbf28f087095db9f3952c60edba0e (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-16T20:37:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_amcavalcante.pdf: 1762771 bytes, checksum: 62dbbf28f087095db9f3952c60edba0e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T20:37:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_amcavalcante.pdf: 1762771 bytes, checksum: 62dbbf28f087095db9f3952c60edba0e (MD5) Previous issue date: 2016 / In the world, there are more than 20,000 species of bees described. Among them there are the solitary bees Tetrapedia diversipes, belonging to Tetrapediini tribe, which occur exclusively in the Neotropics. T. diversipes. The females, as well as males, have morphological and behavioral adaptations that allow the collection of floral lipids used by females in feeding larvae, in the construction of brood cells and sealing of the nests. These bees have varied nesting habits, for ground-nesting in termitaria or pre-existing cavities in wood, enabling the use of trap nests in the study areas. This method allows to obtain information about the nesting behavior, nest architecture and resources provided to the larvae. All this knowledge provides grants for studies on environmental requirements of these bees, as well as for the development of management techniques for the maintenance of these native bees in the environment. In this sense, the objective of this study was to bionomics of Tetrapedia diversipes and identify the plant species used in the diet of their immature, through cropopalinologica analysis. The study was conducted at the Federal University of Ceará Bees industry in the period between December 2014 and September 2015 by providing trap nests made of black paper and straws transparent plastic. During the study were recorded 135 nests where the highest percentage of Nest establishment occurred at the end of the rainy season and early dry season, but there was no significant difference between the monthly nesting rate (%) and evaluated climate variables: temperature (° C) r = -0.1635; p = 0.6517; relative humidity (%) r = 0.4954; p = 0.1454 and rainfall (mm) r = 0.4285; p = 0.2166. The number of cells creates constructed by these bees in each nest ranged from 1 to 8, a total of 593 cells. In these nests emerged 297 females, 151 males and two individuals parasitic species. The Tetrapedia diversipes females used resources of 29 plant species to feed their offspring. The pollen type with the largest representation in the diet of these bees was Dalechampia sp. (Euphorbiaceae) composing 59.57% of all analyzed pollen. The specific analysis of stool present in males cells (n = 31) and female (n = 66) revealed that the diet of male pollen is composed of more types than diet females. However, when compared with the amplitude of the trophic niche between the two sexes, males had a less diverse diet compared to females (H'F = 1:32; H'F = 8.1; t = 16,371; p <0.0001). The studied also indicated that there was a strong overlap in the use of plants as pollen source of 98.9% (CH = 0.989) between the two sexes, but there was no statistical difference in the frequency distribution of the food items of males and females (D = 0.214; p = 0.341). The pollen types Dalechampia sp (Euphorbiaceae) and Talinum triangulare (Portulacaceae) were more frequent in both diet of females as males in the diet. This study showed that T. diversipes both built their nests in the rainy season and the dry season has low levels of parasitism. The results of stool samples of these bees showed that the diet is rich in immature different pollen types indicating that this species is polilética. / No mundo existem mais de 20.000 espécies de abelhas descritas. Dentre elas, estão as abelhas solitárias Tetrapedia diversipes pertencentes à tribo Tetrapediini, a qual ocorre exclusivamente na região neotropical. As fêmeas de T. diversipes, assim como os machos, possuem adaptações morfológicas e comportamentais que permite a coleta de lipídeos florais, utilizado pelas fêmeas na alimentação de larvas, na construção das células de cria e na impermeabilização dos ninhos. Essas abelhas possuem hábitos de nidificação variados, pois nidificam no solo, em termiteiros ou em cavidades pré-existentes em madeira, possibilitando a utilização de ninhos-armadilha nas áreas de estudo. Esse método permite a obtenção de informações sobre o comportamento de nidificação, arquitetura dos ninhos e recursos fornecidos para as larvas. Todo esse conhecimento fornece subsídios para estudos sobre os requerimentos ambientais dessas abelhas, bem como para o desenvolvimento de técnicas de manejo, visando à manutenção dessas abelhas nativas no meio ambiente. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar a bionomia de Tetrapedia diversipes e identificar as espécies de plantas usadas na dieta de seus imaturos, por meio da análise cropopalinológica. O estudo foi realizado no Setor de Abelhas da Universidade Federal do Ceará, no período entre dezembro de 2014 e setembro de 2015, através da disponibilização de ninhos-armadilha confeccionados em cartolina preta e canudos de plásticos transparentes. Durante o estudo, foram registrados 135 ninhos onde o maior percentual de nidificações ocorreu no final do período chuvoso e início do período seco; contudo, não houve diferença significativa entre a taxa de nidificação mensal (%) e as variáveis climáticas avaliadas: temperatura (°C) r = - 0,1635; p = 0,6517; umidade relativa do ar (%) r = 0,4954; p = 0,1454 e precipitação pluviométrica (mm) r = 0,4285; p = 0,2166. O número de células de cria construídas por essas abelhas em cada ninho variou de 1 a 8, totalizando 593 células. Nesses ninhos, emergiram 297 fêmeas, 151 machos e indivíduos de duas espécies parasitas. As fêmeas de Tetrapedia diversipes utilizaram recursos de 29 espécies de plantas para alimentar sua prole. O tipo polínico com maior representatividade na dieta dessas abelhas foi Dalechampia sp. (Euphorbiaceae) compondo 59,57% de todo pólen analisado. A análise individual das fezes presentes nas células de machos (n = 31) e de fêmeas (n = 66) revelou que a dieta dos machos é composta por mais tipos polínicos do que a dieta das fêmeas. Contudo, quando comparada com a amplitude do nicho trófico entre os dois sexos, os machos apresentaram uma dieta menos diversa em relação às fêmeas (H’F= 1.32; H’F= 1.08; t= 16.371; p< 0.0001). O estudou indicou, também, que houve uma forte sobreposição na utilização de plantas como fonte de pólen, sendo de 98,9% (CH= 0.989) entre os dois sexos; contudo, não houve diferença estatística na distribuição de frequência dos itens alimentares de machos e fêmeas (D = 0,214; p = 0,341). Os tipos polínicos Dalechampia sp. (Euphorbiaceae) e o Talinum triangulare (Portulacaceae) foram mais frequentes, tanto na dieta das fêmeas como na dieta dos machos. Este estudo permitiu verificar que T. diversipes nidificou tanto na estação chuvosa como na estação seca, apresentando baixos índices de parasitismo. Os resultados das amostras de fezes dessas abelhas evidenciou que a dieta dos imaturos é rica em diferentes tipos polínicos, indicando que essa espécie é polilética.