Diss. (sammanfattning) Göteborg : Göteborgs universitet, 2007. / Härtill 5 uppsatser.

Thesis (M. Sc.) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv., 2006.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1992. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1992. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thesis (M.S.)--University of Florida, 2004. / Typescript. Title from title page of source document. Document formatted into pages; contains 71 pages. Includes Vita. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph.D.)--University of Florida, 2004. / Typescript. Title from title page of source document. Document formatted into pages; contains 134 pages. Includes Vita. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2018-03-07T17:02:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) silvana_portes_ioc_dout_2017.pdf: 8610199 bytes, checksum: 0cccd6bb223121b0a0613dee1f34758f (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Os vírus gastrentéricos são associados à casos esporádicos e surtos de doença diarreica (DD). A DD é uma complicação frequente em crianças imunocompetentes e imunocomprometidas. O objetivo principal deste estudo, foi avaliar a frequência de detecção dos vírus gastroentéricos (rotavírus [RVA], norovírus [NoV], astrovírus [HAstV] e adenovírus [HAdV]) ou emergentes (bocavírus [HBoV] e aichivírus [AiV-1]), em crianças hospitalizadas com DD, infectadas ou não infectadas pelo HIV-1, no estado do Rio de Janeiro. Neste contexto, as taxas de detecção destes vírus nessas crianças, foram descritas e comparadas e, a infecção recorrente de HAdV em crianças soropositivas para HIV-1, foi avaliada. Além disso, foi possível investigar a etiologia viral de um surto de DD ocorrido no Rio de Janeiro, em 2013. O RVA foi detectado por ensaio imunoenzimático (EIE) e por eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), sendo caracterizado por semi-nested multiplex RT-PCR. Os NoV, HAdV,HAstV, HBoV e AiV-1 foram detectados e caracterizados através da PCR ou RT-PCR e sequenciamento. A carga viral dos RVA, NoV, HAstV, HAdV e HBoV foram determinadas nas fezes das crianças estudadas. Nossos resultados, mostraram que o AiV-1, NoV, HBoV e HAdV foram significativamente mais frequentes entre as crianças HIV-1 soropositivas, enquanto RVA e HAstV foram significativamente menos frequentes entre essas crianças. A circulação do AiV-1 genótipos A e B foi demonstrada nas crianças estudadas. Foram observadas coinfecções nas crianças estudadas, sendo mais frequentes nas crianças com AIDS A mediana da carga viral de HAstV nas fezes das crianças estudadas, foi significativamente maior entre as crianças HIV-1 positivas em comparação com crianças HIV-1 negativas, enquanto que para RVA, NoV, HBoV e HAdV, não hove significância nas medianas das cargas virais nas fezes destas crianças. NoV e o HBoV foram significativamente mais frequentes entre crianças com contagem de linfócitos TCD4+<200 células/mm3. Os dados apontam o NoV, AiV-1 e HAdV como patógenos oportunistas, infectando crianças com AIDS e DD. A diversidade genética foi demonstrada, sendo possível apresentar as variantes circulantes para os vírus estudados. A infecção recorrente por HAdV foi detectada entre as crianças HIV-1 soropositivas, com HAdV-F40, -F41 e D associados a diarreia crônica e persistente. O HAdV foi o único vírus detectado no surto de 2013, no Rio de Janeiro, sendo o HAdV-A12 associado ao surto. Os resultados obtidos neste estudo, monstram que os vírus gastroentéricos e emergentes devem ser considerados como causas importantes de DD em crianças HIV-1 soropositivas. Além disso, este estudo enfatiza a importância de investigar os vírus gastroentéricos e emergentes em casos de DD, especialmente em surtos, visando a vigilância desses vírus em DD em países onde a vacinação com RVA é rotineiramente realizada / Gastroenteric viruses are associated with sporadic cases and outbreaks of diarrheal disease (DD). DD is a frequent complication in immunocompetent and immunocompromised children. The main objective of this study was to evaluate the frequency of detection of gastroenteric (rotavirus [RVA], norovirus [NoV], astrovirus [HAstV] and adenovirus [HAdV]) or emergent (bocavirus [HBoV] and aichivirus [AiV-1]) viruses in children hospitalized with DD, infected or not infected by HIV-1, in the state of Rio de Janeiro. In this context, detection rates of these viruses in these children were described and compared, and recurrent HAdV infection in children HIV-1 seropositive was evaluated. In addition, it was possible to investigate the viral etiology of a DD outbreak occurred in Rio de Janeiro in 2013. The RVA was detected by immunoenzymatic assay (EIE) and by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE), characterized by semi-nested multiplex RT-PCR. NoV, HAdV, HAstV, HBoV and AiV-1 were detected and characterized by PCR or RT-PCR and sequencing. The viral load of RVA, NoV, HAstV, HAdV and HBoV were determined in the feces of the studied children. Our results showed that AiV-1, NoV, HBoV and HAdV were significantly more frequent among children HIV-1 seropositive, whereas RVA and HAstV were significantly less frequent among these children. The circulation of the AiV-1 genotypes A and B was demonstrated in the studied children. Coinfections were observed in the studied children, being more frequent in children with AIDS The median HAstV viral load in the feces of the children studied was significantly higher among children HIV-1 seropositive compared to children HIV-1 seronegative, while for RVA, NoV, HBoV and HAdV, there is no significance in the medians of the viral loads in the feces of these children. NoV and HBoV were significantly more frequent among children with TCD4 + cells <200 cells / mm3. The data point to the NoV, AiV-1 and HAdV as opportunistic pathogen infecting children with AIDS and DD. The genetic diversity was demonstrated, being possible to present the circulating variants for the virus studied. Recurrent HAdV infection was detected among children HIV-1 seropositive with HAdV-F40, -F41 and D associated with chronic and persistent diarrhea. HAdV was the only virus detected in the 2013 outbreak in Rio de Janeiro, with HAdV-A12 associated with the outbreak. The results obtained in this study, show that the gastroenteric and emergent viruses should be considered as important causes of DD in children HIV-1 seropositive. In addition, this study emphasizes the importance of investigating the gastroenteric and emergent viruses in cases of DD, especially in outbreaks, aiming the surveillance of these viruses in DD in countries where vaccination with RVA is routinely performed

O Adenovírus (Ad) é um agente etiológico que causa infecções em diversas espécies e também pode ser utilizado na forma de vetor como ferramenta tecnológica para terapia gênica. O Controle sobre a replicação de Ad pode trazer beneficio para o combate de infecções e para as tecnologias de transferência genica. Porém, poucas ferramentas existem que podem inibir a replicação de Ad. Uma aplicação importante seria a inibição da replicação de Adenovírus helper utilizado na produção de Vírus Adenoassociado recombinante (rAAV), assim minimizando contaminação da produção de rAAV com o virus helper. Dessa maneira o objetivo desse trabalho foi investigar se há inibição da replicação do Ad mediada por RNA de interferência (RNAi) direcionada para alvos adenovirais chaves. Para isso foram construídos vetores lentivirais que codificam shRNAs para os genes hexon, IVa2 e pol. Em seguida foram criadas linhagens que expressam constitutivamente os shRNAs em 293T, células onde os vetores adenovirais conseguem se replicar. Os shRNAs específicos para hexon e IVa2 promoverem significantemente a redução dos níveis destes mRNAs conforme revelado utilizando RT-qPCR para quantificação dos transcritos adenovirais. Em seguida, knockdown do gene hexon se mostrou promissor em inibir a replicação do Ad, visto como redução de vírus produzido em células 293T anti-hexon. O knockdown do transcrito de hexon e a redução em replicação de Adenovírus foram mais acentuados após cell sorting e obtenção de clones celulares a partir da linhagem anti-hexon. O clone anti-hexon mostrou significante redução na quantidade de partículas adenovirais visualizadas por microscopia eletrônica e redução de 92% das partículas infecciosas em relação a 293T quando a produção foi realizada em larga escala. Esses resultados indicam que a tecnologia de shRNA para inibir a replicação do Ad é promissora e representa o primeiro passo de desenvolvimento de uma estratégia para a produção de rAAV livre de contaminação com Ad helper / Adenovirus (ad) is an etiologic agent that causes infections in diverse species and can also be used as a technologic resource, such as a vector applied in gene therapy. Control over Ad replication could be beneficial for the combat of infections and for the technology of gene transfer. However, few tools exist that may useful for the inhibition of Ad replication. One important application would be to impede replication of helper adenovirus utilized in the production of recombinant Adenoassociated Virus (rAAV), thus minimizing the contamination of the rAAV production with helper virus. The objective of the study was to investigate the use of RNA interference (RNAi) directed against key adenoviral targets as an inhibitor of Ad replication. For this, lentiviral vectors encoding shRNAs for hexon, IVa2 and pol were constructed. Next, constitutive expression of the shRNAs was established in 293T cells, the parental cell line that is permissive for adenovirus replication. The shRNAs specific for hexon or IVa2 significantly promoted reduction in the level of these mRNAs as revealed by RT-qPCR quantification of the adenoviral transcripts. Next, knockdown of hexon was shown to be promising as an inhibitor of Ad replication, seen as the reduction of Ad produced in the 293T anti-hexon cell line. Both the knockdown of the hexon transcript and reduction in adenovirus replication were accentuated after cell sorting and isolation of cellular clones from the anti-hexon cell line. The anti-hexon clone showed significant reduction in the quantity of adenovirus particles when visualized by electron microscopy and 92% fewer infectious particles as compared to the parental 293T cells when full scale production was made. These results indicate that the use of shRNA technology for the inhibition of Ad replication is promising and represents the first step for the development of a strategy for the production of rAAV free from helper virus contamination

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Formação de tumores deve-se a combinações de fatores. A via de p53 tem um papel fundamental no controle de proliferação e apoptose. O interferon-beta (IFNb) é importante na modulação da resposta imunológica, no efeito antitumoral e no impacto apoptótico em células tumorais. Segundo a literatura, IFNb ativa a transcrição de p53 e componentes do sistema IFN efetuam sua função pela via p53/p14arf. Neste projeto, foi construída uma série de ferramentas para explorar interações entre p53 e IFNb. A primeira ferramenta, uma linhagem celular derivada de B16 com expressão de p53 reduzida por miRNA. Também construímos vetores plasmidiais e adenovirais portadores dos cDNAs para eGFP, Luciferase, p53 ou IFNb. Os vetores são utilizados para introduzir estes fatores, sozinho ou combinados, na célula alvo. Mesmo confirmando a atividade de p53 ou IFNb sozinho, não foi observado um efeito aditivo destes fatores em conjunto com este tipo de ensaio. Futuros estudos das possíveis interações entre as vias de p53 e IFNb terão o benefício das ferramentas construídas neste projeto. / Formation of tumors it must to combinations of factors. The p53 pathway has an essential role in proliferation control and apoptosis. The interferon-beta (IFNb) is important in modulation of the immunologic response, in the antitumoral effect and in the apoptotic impact in tumor cells. According to literature, IFNb activate the p53 transcription and components of IFN system effect its function to p53/p14arf pathway. In this project, a series of tools was constructed to explore interactions between p53 and IFNb. The first tool, a cellular lineage derivative of B16 with expression of p53 reduced by miRNA. We also construct plasmidial and adenoviral vectors carriers of cDNAs for eGFP, Luciferase, p53 or IFNb. The vectors are used to introduce these factors, alone or agreed, in the target cell. Even confirming the activity of p53 or IFNb alone, an additive effect of these factors combined was not observed with this type of assay. Future studies of the possible interactions between p53 and IFNb pathways will have the benefit of the tools constructed in this project.