O projeto avaliou os efeitos da aflatoxina B1 (AFB1) e fumonisina B1 (FB1), isoladas e associadas, sobre a produtividade e a qualidade dos ovos de codornas poedeiras (Coturnix coturnix japonica). Duzentas e oitenta e oito aves, adquiridas com idade de 8 semanas, foram subdivididas em 6 grupos experimentais (48 aves por grupo) e submetidas a 6 tipos de tratamentos, constituídos por rações contendo AFB1 e FB1 nas concentrações: (0 AFB1+0 FB1), (0 AFB1+10 mg/kg FB1), (50 &microg/kg AFB1+0 FB1), (50 µg/kg AFB1+10 mg/kg FB1), (200 µg/kg AFB1+0 FB1), e (200 µg/kg AFB1+10 mg/kg FB1). As aves foram alimentadas durante 140 dias (5 ciclos de 28 dias). Os parâmetros de produtividade foram avaliados semanalmente, através do consumo de ração, peso dos ovos, índice de conversão alimentar e curva de produção. A qualidade dos ovos foi avaliada a cada ciclo de 28 dias, cada ovo produzido nesse dia foi analisado individualmente para a determinação do valor de unidade Haugh, gravidade específica e percentual do peso da casca. Ao final do 5º período experimental, o peso médio dos ovos foi significativamente menor (p < 0,05) nas aves alimentadas com 10 mg FB1/kg, 50 &microg/kg AFB1, 200 µg/kg AFB1 e com o tratamento de associação de 10 mg FB1/kg + 50 µg/kg AFB1. Em relação à produção de ovos, as codornas alimentadas com 10 mg FB1/kg apresentaram uma diminuição significativa (p < 0,05), ao final do 3º, 4º e 5º ciclos. O consumo médio diário de ração foi significativamente menor (p< 0,05) nas aves alimentadas com 10 mg FB1/kg, ao final do 4º e 5º ciclos, enquanto que os níveis de 50 ou 200 µg/kg AFB1 provocaram uma diminuição significativa (p < 0,05), ao final do 5º período experimental. Ao final do 1º, 2º e 5º ciclos, o consumo médio de ração foi significativamente menor (p< 0,05) nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg + 50 µg/kg AFB1. Os índices de conversão alimentar e os valores de Unidades Haugh não foram afetados (p > 0,05) pelos tratamentos. A gravidade específica dos ovos foi significativamente menor (p < 0,05) ao final do 5º ciclo, nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg + 200 µg/kg AFB1. Observou-se uma diminuição significativa (p < 0,05) na porcentagem do peso de casca, nas aves tratadas com 10 mg FB1/kg ao final do 1º ciclo, entretanto, houve um aumento significativo (p < 0,05) nos tratamentos com 200 µg/kg AFB1 e também com 10 mg/kg FB1 + 50 µg/kg AFB1 ao final do 1º ciclo. Já ao final do 5º ciclo, o aumento na porcentagem de peso de casca (p < 0,05) ocorreu somente nas aves tratadas com 10 mg/kg FB1 + 200 µg/kg AFB1. Os resultados demonstraram que a administração prolongada de FB1 e AFB1, isoladas ou associadas nos níveis utilizados no presente experimento, pode causar prejuízos econômicos aos produtores de ovos de codornas. / This study evaluated the individual and combined effects of aflatoxin B1 (AFB1) and fumonisin B1 (FB1) on egg quality and performance of laying Japanese quail (Coturnix coturnix japonica). Two hundred twenty-eight birds were purchased at 8 week of age and randomly distributed into 6 experimental groups and given rations containing AFB1 and FB1 at the following levels: (0 AFB1+0 FB1), (0 AFB1+10 mg/kg FB1), (50 &microg/kg AFB1+0 FB1), (50 &microg/kg AFB1+10 mg/kg FB1), (200 &microg/kg AFB1+0 FB1), e (200 &microg/kg AFB1+10 mg/kg FB1). The birds were fed for 140 days (5 28-day laying periods). Each treatment consisted of four replicates of twelve quail. Egg production and individual egg weight were checked daily. Feed consumption and feed utilization were determined weekly. Eggs laid in the last day of each 28-day laying period were collected and submitted to individual analysis for specific gravity, Haugh units and percent egg shell. Results showed that average egg weight at the end of the fifth cycle was significantly lower (p < 0,05) for groups fed 10 mg FB1/kg, 50 &microg/kg AFB1, 200 &microg/kg AFB1 and also for the group fed 10 mg FB1/kg + 50 &microg/kg AFB1. Average egg production significantly decreased (p < 0,05) for groups fed 10 mg FB1/kg by the end of the third, fourth and fifth cycles. Feed consumption was significantly lower (p < 0,05) for group exposed to 10 mg FB1/kg, by the end of fourth and fifth cycles, whereas birds fed 50 or 200 &microg/kg AFB1 showed a significant decrease (p < 0,05) on feed consumption, by the end of fifth cycle. Birds exposed to 10 mg FB1/kg + 50 &microg/kg AFB1 also showed lower values (p < 0,05) of feed consumption, by the end of first, second and fifth cycles. Feed utilization and Haugh units were not affected (p > 0,05) by AFB1 and FB1. Average egg specific gravity was significantly lower (p < 0,05) for group fed 10 mg FB1/kg + 200 &microg/kg AFB1, by the end of fifth cycle. Percent egg shell was significantly lower (p < 0,05) for group exposed to 10 mg FB1/kg, by the end of the first cycle, however, birds exposed to 200 &microg/kg AFB1 and also to 10 mg/kg FB1 + 50 &microg/kg AFB1, showed a significantly increase (p < 0,05) of percent egg shell, by the of the first cycle. Percent egg shell was significantly higher (p < 0,05) for group fed 10 mg/kg FB1 + 200 &microg/kg AFB1 , by the end of fifth cycle. The results obtained in the present study showed that the prolonged administration of FB1 and AFB1, singly or combined at the levels checked, may cause economic losses to the quail egg producers.

Mutação 249Ser no TP53 no Carcinoma Hepatocelular (CHC), frequente em países da África e Ásia, é uma evidência molecular de exposição à aflatoxina. O objetivo deste estudo é analisar a freqüência de 249Ser em 74 amostras de CHC no Brasil. A mutação foi analisada por RFLP e sequenciamento. A presença de vírus da hepatite B (VHB) foi analisada por PCR em tempo real. 249Ser foi encontrada em 13/74 (28%) e VHB em 13/74 (16%). A mutação foi encontrada em maior freqüência em tumores indiferenciados (OR = 2,415, IC = 1,001 - 5,824). O tamanho médio de tumores com 249Ser foi de 9,4 cm contra 5,5 cm de amostras sem a mutação (p=0,012). Não foi encontrada relação entre VHB e 249Ser. Os resultados indicam que 249Ser é um fator importante na carcinogênese do CHC no Brasil sendo associada à uma forma maior e menos diferenciada de tumor. / TP53 249Ser mutation has been proved a molecular evidence for aflatoxin-related Hepatocellular Carcinoma (HCC) and is frequent in Africa and Asia. The aim of our study was to analyze the frequency of 249Ser mutation in HCC from Brazil. We studied 74 samples of paraffin embedded HCC. 249Ser mutation was analyzed by RFLP and sequencing. Presence of HBV DNA was determined by Real-Time PCR. 249Ser was found in 21/74 (28%) samples while HBV DNA was found in 13/74 (16%). Poorly differentiated HCC was more likely to have 249Ser mutation (OR = 2.415, IC = 1.001 - 5.824). The mean tumor size of 249Ser HCC was 9.4 cm versus 5.5cm on wild type (p=0.012). HBV DNA was not related with 249Ser. Results indicate that 249Ser is an important factor of HCC carcinogenesis in Brazil and is associated with large and poorly differentiated tumors.

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-26T00:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gasperini_AlessandraMarcon_M.pdf: 1292764 bytes, checksum: fcbdfc6ab370ac6744e8002a57b4a69e (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O fungo Aspergillus flavus é responsável pela degradação de alimentos, além de produzir aflatoxinas que são reconhecidas como potentes carcinógenos. Atualmente, frente ao aumento acelerado de cepas resistentes aos antifúngicos sintéticos e à pressão dos consumidores pela substituição destes por produtos naturais, a busca de novos antimicrobianos a partir de óleos essenciais (OE) tem se tornado uma opção promissora. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de 13 OE, provenientes de plantas medicinais e aromáticas no controle do crescimento de A. flavus CCT 0614 e produção das aflatoxinas AFB1 e AFB2. Ensaios in vitro realizados pelo teste da microdiluição mostraram que os OE de Cinamommum burmanii (MIC 0,2 mg.mL-1) e Cymbopogon citratus, C. martinii, C. winterianus, Eugenia caryophyllata e T. vulgaris (MIC 0,5 mg.mL-1) apresentaram elevada ação anti ¿ A. flavus. Em relação à produção de biomassa seca pelo fungo na presença dos OE, nas concentrações correspondentes a de mínima concentração inibitória (MIC) e 2xMIC, houve diminuição significativa em relação ao controle (p > 0,05). A avaliação do crescimento radial de A. flavus quando submetido à ação dos compostos voláteis (AV) do OE de C. burmanii a 0,2 mg.mL-1 mostrou inibição total até 336 h. Por outro lado, os OE de E. caryophyllata, T. vulgaris e C. citratus reduziram o crescimento radial do fungo quando incorporados ao meio de cultura e quando submetidos a ação dos voláteis. Os OE mais ativos foram analisados através de CG-EM, que permitiu identificar nos óleos compostos conhecidos pela ação antimicrobiana. Em seguida, o OE de C. citratus foi selecionado para estudo dos efeitos sobre a produção de aflatoxinas por A. flavus, quantificada por CLAE-FL. Os resultados mostraram que o OE de C. citratus foi capaz de reduzir a produção de AFB1 em 95% quando incorporado ao meio a 0,5 mg.mL-1, enquanto houve um aumento de cerca de 53% na produção da micotoxina a 0,25 mg.mL-1, após o mesmo período. Não foi detectada a presença da AFB2. Os resultados deste trabalho indicam que os OE estudados representam uma alternativa promissora no controle do crescimento A. flavus e o OE de C. citratus à produção de AFB1. A possibilidade de aplicação dos OE por AV é uma alternativa atrativa, pelo fato de não afetar as propriedades físicas e sensoriais do alimento / Abstract: The fungus Aspergillus flavus is responsible for damage in foods, and by aflatoxins production that are recognized as potent carcinogens. Currently, due to rapid increase of resistant strains to synthetics antifungal, and consumer pressure to replacing these synthetics compounds by natural products, the search for new antimicrobial from essential oils (EO) has become a promising option. This study aimed evaluate the capacity of 13 EO from medicinal and aromatic plants in the control of growth and aflatoxins B1 and B2 production by A. flavus CCT 0614. In vitro assays performed by microdilution method demonstrated that EO of Cinnamomum burmanii (MIC 0.2 mg.mL-1) and Cymbopogon citratus, C. martinii, C. winterianus, Eugenia caryophyllata and T. vulgaris (MIC 0.5 mg.mL-1) showed strong action anti - A. flavus. In relation to fungal biomass dry weight in the presence of OE in the concentrations corresponding to minimum inhibitory concentration (MIC) and 2xMIC, occurred a significant decrease compared to control (p< 0.05). The radial growth of A. flavus was inhibited totally until 336 h when submitted to the action of the volatile compounds (AV) of C. burmanii at 0.2 mg.mL-1. In contrast, the OE of E. caryophyllata, T. vulgaris and C. citratus reduced the radial growth of the mould when were incorporated to medium (IP) and when used in AV. EO that showed higher action were analysed by CG-MS this allowed identify the compounds known by antimicrobial action. The EO of C. citratus was selected to evaluation of the effects on the aflatoxins production by A. flavus, which was quantified by HPLC-FL. The results showed that C. citratus EO (0.5 mg.mL-1) was able to reduce 95% of AFB1 production, while the production increase about 53% with 0.25 mg.mL-1 after the same period. The presence of AFB2 was not detected. The most active EO were identified by GC-MS, which show the presence of compounds with known antimicrobial activity. The results of this study indicate that the EO studied represent a promising alternative to control the growth and AFB1 production by A. flavus. The possibility of application of EO by AV is an attractive alternative, in view of the fact that it does not affect the physical and sensory properties of food / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-08-24T13:37:53Z No. of bitstreams: 1 2011- Veronica da Silva Cardoso.pdf: 2067813 bytes, checksum: a52c401412243d162e7030dda12cdf48 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T13:37:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011- Veronica da Silva Cardoso.pdf: 2067813 bytes, checksum: a52c401412243d162e7030dda12cdf48 (MD5) Previous issue date: 2011-04-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Piperine interference (amide extracted from black pepper) added to the diet of broiler chickens experimentally intoxicated by aflatoxin B1 (mycotoxin of great importance in the poultry sector) and it?s chemoprotective capacity were the main goal of this work. The experiment was divided into two assays: (i) The first assay was carried out to determine the effects of different concentrations of piperine (0, 60, 120, 180 ppm) and it?s possible toxicity in broiler chickens diets. Ninety six male chicks (Cobb), seven days old were used, being randomly allocated into four experimental groups (n=24) during 35 consecutive days. The following parameters were evaluated: biochemical, hematological, histopathological (proventriculus, gizzard, liver, kidney), histomorphometric (small intestine) and zootecnic. The concentration of 60 ppm of piperine in the diet was safe for broilers, showing better performance of broilers on period from 36 to 42 days old. The concentration of 180 ppm caused leukopenia and concentrations of 120 and 180 ppm was observed decrease in the number of heterophils and monocytes. Hepatotoxicity was observed by elevated AST enzyme activity, histopathological changes and decreased absorption surface in the segments (jejunum and ileum) of small intestine were observed for both 120 and 180 ppm concentrations. (ii) In the second assay, 60 broilers with nine days old divided into four groups: control, piperine (60 ppm added to diet), aflatoxin B1 (0.5 mg of aflatoxin B1.Kg-1 of body weight, orally) and piperine associated aflatoxin B1, were evaluated by effect chemoprotector of piperine against toxics effects of aflatoxin B1 being evaluated for zootecnic, biochemical, histopathological and histomorphometric parameters, toxic heterophils in peripheral blood and genotoxic by comet assay and micronucleus were also determined. No changes in the performance parameters were observed after this experiment. Broiler chickens intoxicated with AFB1 (0.5 mg of aflatoxin B1.kg-1 of body weight ) showed: decreased body weight gain and increased feed conversion; reduced carcass and cuts yields; liver toxicity, with increased relative weight of the liver and heart, macroscopic variations of hepatic parenchyma and increase of liver enzymes activity; kidney enzymes increase without evidence of renal tissue damage macroscopic or microscopic; leukopenia with significant reduction of lymphocytes and heterophils; reduction in absorptive surface due to the reduction of the length and width of the villi of all studied segments of small intestine; presence of toxic heterophils. The cytotoxic and genotoxic effects of aflatoxin B1 described above were significantly reduced or absent in the group of broiler intoxicated with aflatoxin B1 and fed with with piperine. No significant difference between piperine associated aflatoxin B1 in control and piperine groups were observed. The addition of 60 ppm of piperine in the diet of broiler chickens was safe, promoting beneficial effect both in zootecnic parameters and in poultry health, preventing toxic effects of aflatoxin B1in broiler chickens. / A interfer?ncia da piperina (amida extra?da da pimenta do reino) adicionada ? ra??o de frangos de corte intoxicados experimentalmente por aflatoxina B1 (micotoxina de grande relev?ncia no setor av?cola) e sua capacidade quimioprotetora foram o principal objetivo deste trabalho. O experimento foi dividido em dois ensaios: (i) O primeiro ensaio foi realizado para determinar os efeitos de diferentes concentra??es de piperina (0, 60, 120 e 180 ppm) foram avaliados e sua poss?vel toxicidade. Noventa e seis pintos (Cobb), com 7 dias de idade foram divididos aleatoriamente em 4 grupos (n=24), por 35 dias consecutivos. Os par?metros avaliados foram: hematol?gicos, bioqu?micos, histopatol?gicos (proventr?culo, moela, f?gado e rim), histomorfom?trico (intestino delgado) e par?metros zoot?cnicos. A concentra??o de 60 ppm de piperina adicionada ? ra??o foi segura para frangos de corte, tendo ainda resultado em melhor desempenho dos frangos na fase final (36-42 dias de idade). A concentra??o de 180 ppm promoveu leucopenia e nas concentra??es de 120 e 180 ppm foi observada diminui??o do n?mero de heter?filos e mon?citos; hepatotoxicidade, com eleva??o da enzima AST e altera??es histopatol?gicas em ambas as concentra??es; diminui??o da superf?cie de absor??o nos segmentos (jejuno e ?leo) do intestino delgado, por?m, sem altera??o dos par?metros zoot?cnicos. (ii) Para o segundo ensaio com a concentra??o de 60ppm de piperina: 60 frangos com 9 dias de idade, foram divididos em 4 grupos (n=15): grupo controle, grupo aflatoxina B1 (0,5 mg aflatoxina B1.kg-1 de peso vivo por via oral), grupo piperina (60 ppm adicionada ? ra??o) e grupo piperina associada a aflatoxina B1, determinando-se a capacidade quimioprotetora da piperina sendo avaliados os par?metros zoot?cnicos, hematol?gicos, bioqu?micos, histopatol?gicos, histomorfom?tricos, os efeitos genot?xicos da aflatoxina B1 pelo teste do cometa e do micron?cleo, presen?a de heter?filos t?xicos no sangue perif?rico. Os frangos intoxicados com aflatoxina B1 (0,5 mg de aflatoxina B1.Kg-1 de peso vivo) apresentaram: diminui??o do ganho m?dio de peso e piora da convers?o alimentar; diminui??o do rendimento de carca?a e cortes; hepatotoxicidade, com aumento de peso relativo do f?gado e cora??o, varia??es macrosc?picas do par?nquima hep?tico e eleva??o das enzimas hep?ticas; aumento das enzimas renais, sem evid?ncia de les?es macrosc?picas e microsc?picas no tecido renal; leucopenia, com diminui??o significativa de linf?citos e heter?filos; diminui??o da superf?cie de absor??o em fun??o da redu??o do comprimento e largura das vilosidades de todos os segmentos estudados do intestino delgado; presen?a de heter?filos t?xicos. Os efeitos citot?xicos e genot?xicos da aflatoxina B1 foram significativamente reduzidos ou ausentes no grupo piperina associada a aflatoxina B1, sem diferen?a significativa entre o grupo controle e piperina. A ra??o de frangos de corte com 60 ppm de piperina foi segura, promovendo efeito ben?fico tanto nos par?metros zoot?cnicos avaliados, como na sanidade av?cola, por impedir os efeitos t?xicos da aflatoxina B1 em frangos de corte.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-05-02T11:42:47Z No. of bitstreams: 1 2012 - Juliana Scofano Barrabin.pdf: 1875258 bytes, checksum: a222dd8183b171aeac5b500db7dbb482 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-02T11:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Juliana Scofano Barrabin.pdf: 1875258 bytes, checksum: a222dd8183b171aeac5b500db7dbb482 (MD5) Previous issue date: 2012-06-06 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Aflatoxins classified by the World Health Organization as carcinogenic to humans and their intake causes many health injuries, from acute toxicities with liver lesions to hepatocellular carcinoma. Many countries already have regulations regarding these contaminants and the European Union is the most critical in relation to food safety. It has a strict regulation not only in relation to maximum permitted levels of aflatoxins in foods, but also concerning the quality of the analytical methods used to measure such contaminants. In Brazil, the National Agency of Sanitary Surveillance (ANVISA) published the resolution RDC N? 7, February 18th, 2011, providing for maximum permitted levels on mycotoxins in food for human consumption and raw materials, setting every two years the limits of these toxins become smaller, tending to be as strict as the European Union. For these goals to be fulfilled high sensitivity, selectivity and accuracy analytical methodologies are needed. This work aimed to develop an analytical method and to calculate validation parameters for determination of aflatoxin in peanuts using ultra performance liquid chromatography and detection by high-resolution mass spectrometry, method equivalent to the analytical quality standards of the European Union, which are worldwide trend. The developed method showed high selectivity and resolution, allowing the unambiguous qualitative analysis of aflatoxins B1, B2, G1 and G2 in peanuts and fulfilled the most rigorous analytical chromatographic criteria established by the EU. The requirements for a quantitative analysis have been partially achieved. Calibration curves were obtained with good linearity, however, was not possible to fix the sensitivity of the method, compromising the accuracy and quantification of the test. / As aflatoxinas s?o atualmente as micotoxinas mais estudadas no mundo. S?o classificadas pela Organiza??o Mundial da Sa?de como carcinog?nicas para humanos e sua ingest?o causa diversos danos ? sa?de, variando de toxicidades agudas com les?es de f?gado ao carcinoma hepatocelular. Muitos pa?ses j? possuem regulamenta??o quanto a estes contaminantes e a Uni?o Europ?ia (UE) ? uma das comunidades mais cr?ticas em rela??o ? legisla??o das micotoxinas com foco na inocuidade alimentar. Possui uma r?gida legisla??o n?o apenas em rela??o aos limites m?ximos permitidos de aflatoxinas em alimentos, mas tamb?m em rela??o ? qualidade dos m?todos anal?ticos utilizados para medir tais contaminantes. No Brasil, a Ag?ncia Nacional de Vigil?ncia Sanit?ria (ANVISA) publicou a resolu??o RDC N? 7 de 18 de fevereiro de 2011, dispondo sobre limites m?ximos tolerados de micotoxinas em alimentos. Essa resolu??o fixa novos limites para aflatoxinas, al?m de ocratoxina A, desoxinivalenol, fumonisinas, patulina e zearalenona em mat?rias primas e alimentos prontos para consumo, estabelecendo metas para que a cada 2 anos os limites dessas toxinas sejam cada vez menores, tendendo a uma maior rigidez, assim como a UE. Para que essas metas possam ser cumpridas s?o necess?rias metodologias anal?ticas de maior sensibilidade, seletividade e exatid?o. Desta forma o presente trabalho visou desenvolver um m?todo anal?tico e avaliar os par?metros de valida??o necess?rios para determina??o de aflatoxinas em amendoim. Utilizou-se cromatografia l?quida de ultra efici?ncia e detec??o por espectrometria de massas (UPLC-MS) de alta resolu??o, metodologia equiparada aos padr?es de qualidade anal?tica da UE. No m?todo desenvolvido obteve-se de 3 a 7 fragmentos para cada aflatoxina permitindo a an?lise qualitativa inequ?voca das AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2 em amendoim e cumpriu-se com os mais rigorosos crit?rios anal?ticos cromatogr?ficos estabelecidos pela UE. O m?todo apresentou uma corrida cromatogr?fica de 5 minutos e menor gasto de solventes org?nicos quando comparado ? t?cnica de HPLC. Os limites de detec??o alcan?ados foram de 1,6; 0,396; 1,608 e 1,396 ?g/kg ?g/kg?g/kg?g/kg para as AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2, respectivamente, e foram obtidas curvas de calibra??o com boa linearidade entre os valores de 1,6 a 12,0 ?g/kg (AFB1 e AFG1) e 0,396 a 2,97 ?g/kg (AFB2 e AFG2). Foram analisadas 10 amostras de amendoim adquiridas em feira livre do Rio de Janeiro e identificados tra?os das aflatoxinas B1, B2 e G2 em duas delas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aflatoxin B1 (AFB1) is one of the main mycotoxins that can be identified in foods, and has relevance for agricultural economics and public health because of its immunotoxic properties. A functional immune system is a basic requirement for a healthy life in modern animal production. The interaction involving nutrition and immunity is a strategic factor to obtain a high quality performance in the poultry industry. Immunomodulators such as β-glucans have an immunostimulating activity, which enables the host ability to resist opportunistic infections. To contribute to the elucidation of the mechanism of action of β-glucans in broiler chicken lymphocytes, the effects of the concentrations of 0.1, 1 and 10% of β-glucans derived from Saccharomyces cerevisiae were investigated in lymphocytes exposed to increasing concentrations of AFB1 (0, 0.1, 1, 10, 20 μg/ml). Lymphocytes were separated by Ficoll-Histopaque density and cultured in 96 well-plates containing AFB1 and/or β-glucans in a 5% CO2 atmosphere at 39°C. MTT, PicoGreen® and 2'-7'-dichlorofluorescein diacetate cytotoxicity tests were evaluated at 24, 48 and 72 h of incubation. The comet assay to elucidate the DNA damage was also performed. The percentage of viable cells decreased in the presence of 10 μg/ml AFB1 at 48 h (p < 0.05) and 10 and 20 μg/ml AFB1 at 72 h (p < 0.001 and p < 0.01, respectively), when compared to the control group (0 μg/ml). Furthermore, an increase in cell-free DNA in AFB1 concentrations > 1 μg/ml (p < 0.001) and the generation of ROS at 24 h were also observed. DNA damage increased approximately 2.3 fold in lymphocytes exposed to 20 μg/ml of AFB1 when compared to the control group. Conversely, β-glucans showed cytoprotective effects (p < 0.001), and the concentration of 1% reverted the AFB1-induced lymphocyte damage. β-glucans at 10% significantly increased (p < 0.001) the formation of reactive oxygen species (ROS), potentiating the AFB1-induced ROS formation. In conclusion, this study showed that AFB1 and β-glucans exert influence on lymphocyte oxidative metabolism and have dose-dependent potentiating effects. The results also showed genoprotective in vitro effect of β-glucans in poultry lymphocytes exposed to AFB1, being the concentration of 1% β-glucans able to maintain DNA integrity. / A aflatoxina B1 (AFB1) é uma das principais micotoxinas que podem ser identificadas em alimentos, possuindo relevância agroeconômica e para a saúde pública, por ser considerada imunotóxica. Um sistema imune funcional é um requisito básico para uma vida saudável na produção moderna de animais. A interação envolvendo nutrição e imunidade é um fator estratégico para obter um bom desempenho em frangos de corte. Devido as suas atividades imunomodulatórias, substâncias como as β-glucanas proporcionam ao hospedeiro uma maior capacidade de resistir a infecções oportunistas. Para melhor compreender o mecanismo de ação das β-glucanas, sobre os linfócitos de frangos de corte, investigou-se os efeitos das concentrações de 0.1, 1 e 10% de β-glucanas derivadas do fungo Saccharomyces cerevisiae em linfócitos expostos a crescentes concentrações de AFB1 (0, 0.1, 1, 10, 20 μg/ml). Os linfócitos foram separados através do reagente de densidade Ficoll-Histopaque e cultivados em placas de 96 poços, contendo as concentrações de AFB1 e/ou β-glucanas em atmosfera de 5% de CO2 a 39°C durante 24, 48 e 72 h. A citotoxicidade celular foi avaliada através dos testes MTT e PicoGreen®, e a formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) através do ensaio 2′-7′- diacetato diclorofluoresceína. Também foi utilizado o teste cometa para elucidar os danos ao DNA. A viabilidade celular reduziu na presença de 10 μg/ml de AFB1 em 48 h (p < 0.05) e em 10 and 20 μg/ml de AFB1 (p < 0.01 e p < 0.001, respectivamente) em 72 h quando comparada ao grupo controle. Além disso, as concentrações de AFB1 > 1 μg/ml aumentaram significativamente (p < 0.001) a liberação de fita dupla de DNA (dsDNA) e a produção de EROS em 24 h. Os danos causados ao DNA foram confirmados através do momento cauda do cometa e aumentaram cerca de 2,3 vezes em linfócitos expostos a 20 μg/ml de AFB1 quando comparados ao grupo controle. Por outro lado, as β-glucanas exerceram efeitos citoprotetores (p < 0.001), sendo que a concentração de 1% foi capaz de reverter os danos genotóxicos causados pela ação da AFB1. Já a concentração de 10% de β-glucanas aumentou significativamente (p < 0.001) a formação de EROS, potencializando a ação da AFB1. Em conclusão, este estudou evidenciou que a AFB1 e as β-glucanas exercem influência sobre o metabolismo oxidativo dos linfócitos e possui efeito potencializador dose-dependente. Os resultados também evidenciaram o efeito genoprotetor in vitro de β-glucanas em linfócitos de frangos expostos a AFB1, sendo a concentração de β-glucanas a 1% capaz de manter a integridade do DNA.

Resumo: Os efeitos da aflatoxina e fumonisina e sua associação, sobre a produção e a qualidade dos ovos em poedeiras comerciais, foram avaliados bem como a eficácia de um adsorvente glucano em promover a redução e/ou eliminação total destes efeitos. Foram utilizadas 168 poedeiras com 37 semanas de idade, por um período experimental de 56 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 3x2 + 1 (3 tratamentos com micotoxinas: aflatoxina (AF), fumonisina (FU) e aflatoxina + fumonisina (AF + FU); 2 tratamentos com e sem adsorvente; e grupo controle sem micotoxinas e adsorvente), totalizando 7 tratamentos e 6 repetições com 4 aves/gaiola. As rações foram contaminadas, isoladamente ou em combinação, com 1ppm de AF e 25ppm de FU e o adsorvente foi incluído na concentração de 2kg/ton ração. Os tratamentos com presença de AF apresentaram as menores porcentagens (p = 0,0594) de postura (76,72% para AF e 77,38% para AF+FU). A massa de ovos obteve a menor média (p<0,05) no tratamento com AF+FU (49,49 g) que foi diferente do grupo controle (64,06 g). O tratamento com AF apresentou maior espessura e resistência de casca comparado ao grupo controle e ao tratamento com FU. O uso do adsorvente no tratamento com AF reduziu a resistência da casca voltando aos valores próximos aos do controle. As alterações observadas neste estudo são indicativas da toxicidade da aflatoxina na concentração de 1 ppm. Os efeitos da fumonisina foram menos evidentes em função da baixa dose utilizada neste estudo (25mg/kg). O uso de glucano na concentração de 2 kg/ton foi efetivo em reverter alguns dos efeitos tóxicos da aflatoxina e, em menor extensão da fumonisina, quando estas micotoxinas estavam separadamente na ração de poedeiras comerciais / Abstract: The present study was conducted to evaluate the effects of aflatoxin and fumonisin and their association on production and egg quality in laying hens and was also evaluated the effectiveness of an adsorbent glucan to promote the reduction and/or total elimination of these effects. One hundred and sixty-eight 37-wk-old laying hens were used for a trial period of 56 days. The experimental design was a completely randomized with 3x2+ 1 factorial arrangement (three treatments with mycotoxins: aflatoxin (AF), fumonisin (FU) + fumonisin and aflatoxin (AF + FU), two treatments with and without adsorbent, and the control group without mycotoxin and adsorbent), totaling seven treatments, six replicates and four birds per cage. The mycotoxins were added to rations, singly and in combination, at levels of 1 ppm AF and 25 ppm FU and the adsorbent was included in the dosage of 2kg/ton .The treatments with the presence of AF had the lowest percentages (p = 0,0594) of stance (76,72% to AF and 77,38% to AF + FU). The egg mass received the lowest average (p<0,05) in the treatment with AF + FU (49,49 g) which was different from the control group (64,06 g). Treatment with AF showed higher values of thickness and peel strength compared to the control group and treatment with FU. The use of the adsorbent in the treatment with AF reduced the strength of the shell back to values near baseline. The changes observed in this study are indicative of the toxicity of aflatoxin at a concentration of 1mg/kg. The effects of fumonisin were less evident because of the low levels used in this study (25mg/kg). The level of glucan added to the diets was effective to prevent some of the toxic effects of aflatoxins and to a lesser extent of fumonisin, when the mycotoxins were separately in the diet of laying hens / Orientador: Denise Rangel da Silva Sartori / Coorientador: José Roberto Sartori / Banca: Alice Eiko Murakami / Banca: Daniela Felipe Pinheiro / Mestre

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-06-17T12:26:34Z No. of bitstreams: 1 Victor Hugo de Vasconcelos Calado.pdf: 593050 bytes, checksum: ab20bdddfa55a2c22cb9e115c16dbb93 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-17T12:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Victor Hugo de Vasconcelos Calado.pdf: 593050 bytes, checksum: ab20bdddfa55a2c22cb9e115c16dbb93 (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mycotoxins have been a problem in poultry production to be present in the major ingredients (corn and soybean meal) that make up the poultry feed, leading to problems such as an inadequate use of food and reduction of animal front immunity to various pathogens. Thus it aimed to evaluate the effects of adding mycotoxin adsorbents in broiler diets naturally contaminated with aflatoxin and fumonisin, on the parameters: histopathology, biometric and serological. The experiment was conducted with 60 birds, seven-day-old Cobb commercial line in three treatments: T1 - control (not including mycotoxin adsorbents in diet); T2 - adding 0.5 kg / t. of adsorbent A and T3 inclusion of 1.5 kg / t of adsorbent B. The broilers receive in all treatments, isonutritives diets naturally contaminated by mycotoxins. These broilers were raised up to 60 days old when was made serology tests for NDV and IBDV, and after were sacrificed for histopathologic and biometric analysis. The results were submitted to analysis of variance (ANOVA) with significance level of 5% probability and Tukey test. There were significant differences between treatments (P <0.05) in body weight. The body weight was significantly different between T1 and T2 (P = 0.01400), with a higher weight of the broilers receiving the adsorbent (4.26 ± 0.37). Among the organs analyzed, only the weight of the cecal tonsil significant difference between T1 and T2 (P <0.05; P = 0.03008), and T1 (5,20g ± 1.239) had an average weight slightly higher than average weight of T2 (4,05g ± 1.208). The amounts of immunoglobulins to IBDV showed significantly higher concentrations in T2 (P = 0.041). This contamination of broilers aflatoxin and fumonisin caused histopathological lesions in immune organs, liver and kidneys. However adsorbents used A and B reversed in parts of the lesions, especially in the liver, bursa and thymus. This reversal of lesions led to improved serological tests for IBD (Gumboro bursal-infectious disease) in the group treated with the adsorbent, resulting in broilers with better performance, suggesting that this adsorbent showed better effect on broilers in field conditions. / As micotoxinas têm sido um problema na produção avícola por estarem presentes nos principais ingredientes (milho e farelo de soja) que compõem a ração para aves, levando a problemas como: inadequado aproveitamento dos alimentos e diminuição de imunidade animal frente a patógenos diversos. Assim, objetivou-se avaliar os efeitos da adição de adsorventes de micotoxinas, em dietas de frangos de corte contaminadas naturalmente com aflatoxinas e fumonisinas, sobre os parâmetros: biométricos, sorológicos e histopatológicos. O experimento foi realizado com 60 aves, com sete dias de idade, da linhagem comercial Cobb distribuídas em três tratamentos: T1 – Controle (sem inclusão de adsorventes de micotoxinas na dieta); T2 – inclusão de 0,5 kg/t do adsorvente A (composto por aluminossilicato de sódio e cálcio modificado industrialmente) e T3- inclusão de 1,5 kg/t do adsorvente B(composto por aluminossilicato de sódio e cálcio). As aves receberam, em todos os tratamentos, dietas isonutritivas, feitas com milho sabidamente contaminado, em campo por micotoxinas. Essas aves foram criadas até 60 dias de idade, quando foi realizada sorologia para NDV(vírus da doença de Newcastle) e IBDV(vírus da doença infecciosa bursal) e preparadas para eutanásia para posteriores análises histopatológicas e biométricas. Ao final, o peso vivo foi significativamente diferente entre os tratamentos T1 e T2 (P=0,01400), observando-se maior peso das aves que receberam o adsorvente A (4,26 ± 0,37). Entre os órgãos analisados, apenas o peso da tonsila cecal apresentou diferença significativa entre os tratamentos T1 e T2 (P<0,05; P=0,03008), sendo que T1 (5,20g ± 1,239) apresentou peso médio levemente superior ao peso médio do T2 (4,05g ± 1,208). No teste sorológico, as quantidades de imunoglobulinas para IBDV apresentaram concentrações significativamente maiores no T2 (P=0,041). A intoxicação das aves com aflatoxinas e fumonisinas provocou lesões histopatológicas nos órgãos linfóides (bolsa cloacal, baço, timo e tonsilas cecais), fígado e rins. Contudo os adsorventes usados A e B minimizou as lesões, principalmente no fígado, bursa, e timo. A menor intensidade das lesões proporcionou melhores resultados sorológicos para IBDV no grupo tratado com o adsorvente A, resultando em aves com melhor desempenho, conclui-se sugerindo que este adsorvente produz melhor efeito nas aves em condições de campo.

This research had as objective evaluated the biochemistry values and the hepatic and renal enzymatic activity pf broiler chicken submitted to experimental intoxication using aflatoxin with and without addition of sodic montmorilonite on the diet. In this study were used 528 Cobb s broiler chickens that were divided in 6 treatments from 1º to 42º day of life: (T1) control: normal diet; (T2) diet with 5 ppm of aflatoxin; (T3) diet with 0,25% sodic montmorilonite; (T4) diet with 5 ppm of aflatoxin + 0,25% sodic montmorilonite; (T5) diet with 0,50% sodic montmorilonite; (T6) diet with 5 ppm of aflatoxin + 0,50% sodic montmorilonite. The treatment (T2) showed significant (P<0.01) decreased levels of uric acid, albumin, cholesterol, creatinine, triglycerides, globulins and total serum proteins. There was statistically significantly increased on alanine aminotransferase (ALT). Aspartate aminotransferase (AST) did not show up important differences among treatments. In (T3) and (T5) there was not variation on the biochemical values when compared with treatment (T1). The sodic montmorilonite (0,50%) (T6) presented the better results on the reduction of the aflatoxin s adsorption when compared with the sodic montmorilonite from (0,25%) (T4). The outcome of this experiment proposed that high level of diet aflatoxin does cause important biochemistry changes on the enzymatic activity of the broiler chicken and also the alternative treatments using sodic montmorilonite may be used to avoid risks caused by feed contamination by aflatoxins. / Este estudo teve como objetivo avaliar os valores bioquímicos e atividade enzimática hepática e renal em frangos de corte submetidos à intoxicação experimental com aflatoxina com e sem a adição de montmorilonita sódica na dieta. Foram utilizados 528 frangos de corte, da linhagem cobb, divididos em 6 tratamentos do 1º ao 42º dia de vida: (T1) Controle: dieta normal; (T2) Dieta com 5 ppm de aflatoxina; (T3) Dieta com 0,25% montmorilonita sódica; (T4) Dieta com 5 ppm de aflatoxina + 0,25% montmorilonita sódica; (T5) Dieta com 0,50% montmorilonita sódica; (T6) Dieta com 5 ppm de aflatoxina + 0,50% montmorilonita sódica. O tratamento (T2)com aflatoxina demonstrou significante (P< 0.01) diminuição dos níveis de ácido úrico, albumina, colesterol, creatinina, triglicerídeos, globulinas e proteína plasmatica total. Houve significante aumento da alamina amino transferase (ALT) e a enzima aspartato amino transferase (AST) não foi significantemente diferente entre os tratamentos. Nos (T3) e (T5) não houve alteração nas dosagens bioquímicas em relação ao (T1) controle. A montmorilonita sódica (0,50%) (T6) apresentou melhores resultados na redução da adsorção da aflatoxina em relação a montmorilonita sódica (0,25%) (T4). Os resultados obtidos, nas condições em que foi realizado este experimento, sugerem que altos níveis de aflatoxina na dieta causam alterações bioquímicas significativas na atividade enzimática de frangos de corte e que o tratamento paleativo com a montmorilonita sódica pode ser usado para se evitar o risco causado pela contaminação alimentar com aflatoxinas.

La Espectrometría de Masas mediante ionización en Plasma Acoplado Inductivamente (ICP-MS) es una técnica de análisis elemental que permite cuantificar la mayor parte de los elementos de la tabla periódica de forma rápida y a niveles de ultratraza. A lo largo de la última década, y debido a sus características analíticas, el ICP-MS se ha utilizado como sistema de detección en inmunoensayos para la determinación de bioméculas. A pesar de los avances que se han producido, este tipo de estrategias todavía no están exentas de inconvenientes. Entre los retos que aún están por resolver, se encuentran: (i) desarrollo de metodologías para la determinación de haptenos (biomoléculas de bajo peso molecular < 10 kDa), (ii) falta de criterio para seleccionar el tipo de inmunoensayo más adecuado para una aplicación bioanalítica dada, sobre todo cuando se trabaja con haptenos; y (iii) escaso aprovechamiento del potencial del ICP-MS (sensibilidad, límites de detección, capacidad de análisis multielemental, etc.). En la presente Tesis Doctoral se han desarrollado nuevos métodos de análisis de biomoléculas con detección mediante ICP-MS tratando de solucionar los inconvenientes citados con anterioridad. Los métodos se han aplicado al análisis de tóxinas en alimentos y de biomarcadores oncológicos en fluidos biológicos (suero). En primer lugar, debido a la gran preocupación existente por la seguridad alimentaria y el efecto de la alimentación sobre la salud humana, se ha desarrollado una nueva metodología para la cuantificación de la aflatoxina M1 (hapteno) en muestras de leche que cumpliera con los niveles de seguridad requeridos por las actuales políticas internacionales. Por otro lado, se han comparado diferentes formatos de inmunoensayos competitivos para la determinación de esta misma aflatoxina en leche. Además se ha estudiado el efecto de la naturaleza química y del tamaño de las nanopartículas (es decir, Ag / Au, 80 nm / 40 nm) empleadas en los inmunoensayos sobre los parámetros analíticos. Finalmente, se presenta un nuevo enfoque con el objeto de aumentar la sensibilidad de los inmunoensayos homogéneos con detección mediante ICP-MS, con la introducción de un alto número de etiquetas por anticuerpo monoclonal mediante el empleo de polímeros como portadores de múltiples iones lantánidos. Esta metodología se ha aplicado a la determinación simultánea de 4 biomarcadores de cáncer (CEA, sErbB2, CA 15.3 y CA 125) en suero humano.