O aumento na incidência do carcinoma hepatocelular (CHC) tem sido atribuído ao aumento da obesidade, diabetes e doença hepática gordurosa não alcoólica. (DHGNA), estando ainda por ser melhor esclarecidos vários aspectos histopatológicos e imuno-histoquímicos. O objetivo deste estudo é avaliar aspectos clínicos e patológicos de pacientes com CHC secundário a DHGNA, assim como relacionar a marcadores imuno-histoquímicos de classe proliferativa. Avaliamos 35 espécimes de CHC de 21 pacientes diagnosticados com DHGNA submetidos a ressecção hepática (12 pacientes) ou a transplante hepático (8 pacientes) ou ambos (1 paciente), de 2005 a 2015. Dados demográficos, clínicos e bioquímicos foram relacionados a características histológicas e reatividade imuno-histoquímica para K19, marcando características de células progenitoras e Ki-67, marcando as células em ciclo celular. Um total de 35 nódulos foram detectados em 21 pacientes. A cirrose estava presente em 12 casos (7 F4A x 4F4B x 1F4C de acordo com estadiamento de Laennec) e 9 pacientes não apresentavam cirrose (estadiamento DHGNA: F2: 6pts, F3 = 3pts). A idade variou de 50 a 77 anos e 16 pacientes eram do sexo masculino (76%). Dezesseis pacientes (76%) apresentavam diabetes mellitus, 17 pacientes (81%) apresentavam hipertensão arterial e 19 pacientes (90%) tinham IMC superior a 25 kg / m2. O CHC ocorreu em 8 pacientes CHILD A, 4 CHILD B e em 9 pacientes sem cirrose. O nível de alfa-fetoproteína foi normal em 13 (62%) pacientes. Dentre os critérios histológicos, 25 (70%) nódulos foram diagnosticados como \"CHC esteatohepatítico\". Embora 63% tenham sido pouco diferenciados (G.3/G.4) de acordo com Edmondson & Steiner (1954), apenas 21% apresentaram níveis elevados de Ki-67 ( > 10%). No caso da K19, também 21% dos pacientes apresentaram expressão positiva ( > 5%), e foi associado a maior inflamação intratumoral (G 2/3). Curiosamente, 75% dos pacientes com alta expressão de Ki-67 ( > 10%) não eram cirróticos. Em conclusão: 1. Nesta casuística cirúrgica, o CHC relacionado com DHGNA foi encontrado em não cirróticos em 42% dos casos, com nível normal de alfafetoproteína em 62%. 2. Os marcadores histológicos de \"CHC esteatohepatítico\" estiveram altamente prevalentes. 3. A imunoexpressão positiva de K19 e Ki-67 ocorreu em apenas 21% dos pacientes, o que pode sugerir que o CHC na síndrome metabólica pode ser preferencialmente \"um subtipo inflamatório e não proliferativo de CHC\" / The increase incidence of hepatocellular carcinoma (HCC) has been attributed to the increase in obesity, diabetes and non-alcoholic fatty liver disease. (NAFLD), and several histopathological and immunohistochemical aspects are still to be better clarified. The aim of this study is to assess clinical and pathological aspects of patients with HCC secondary to NAFLD as well as to related to immunohistochemical markers of proliferative class. We evaluated 35 HCC specimens from 21 patients diagnosed with NAFLD undergoing liver resection (12 patients) or liver transplantation (8 patients) or both (1 patient) from 2005 to 2015. Demographic, clinical and biochemical data were related to histological features and immunohistochemical reactivity for K19, marking characteristics of progenitor cells and Ki-67, marking the cells in cell cycle. A total of 35 nodules were detected from 21 patients. Cirrhosis was present in 12 cases (7 F4A x 4F4B x 1F4C according to Laennec Staging) and 9 patients did not have cirrhosis (NAFLD staging: F2: 6pts, F3=3pts). Ages ranged from 50 to 77 years and 16 patients were male (76%). Sixteen patients (76%) had diabetes mellitus, 17 patients (81%) had arterial hypertension and 19 patients (90%) had BMI above 25kg/m2. HCC occurred in 8 patients Child A, 4 Child B and in 9 patients without cirrhosis. Alpha-fetoprotein level was normal in 13 (62%) patients. Among the histological criteria, 25 (70%) nodules were diagnosed as \"steatohepatitic HCC\". Although 63% were poorly differentiated (G.3/ G.4) according to Edmondson & Steiner (1954), only 21% presented high levels of Ki-67 ( > 10%). In the case of K19, 21% of patients presented positive expression (> 5%), and was associated with greater intratumoral inflammation (G 2/3). Interestingly, 75% of the patients with high Ki67 expression ( > 10%) were non-cirrhotic. In conclusion: 1. In this surgical series, HCC related to NAFLD was found in non-cirrhotic patients in 42% of cases, with a normal level of alpha-fetoprotein in 62%. 2. Histological markers of \"steatohepatitic HCC\" were highly prevalent. 3. Positive immunoexpression of K19 and Ki-67 occurred in only 21% of patients, which might suggest that HCC in metabolic syndrome might be preferentially \"an inflammatory, non-proliferative subtype of HCC\"

Orientador: Roberto Carlos Burini / Resumo: Fetuina-A é uma glicoproteína multifuncional, sintetizada pelo fígado como proteína de fase aguda. Atua na inibição da cascata da insulina, e estimula a síntese de citocinas pró-inflamatórias. Assim, sugere-se que a fetuina-A esteja envolvida na patogênese da doença gordurosa hepática não-alcoólica (DGHNA), constituindo-se em um dos seus indicadores. O presente estudo tem como objetivo investigar as concentrações de fetuina-A na DGHNA e sua associação com distúrbios metabólicos, bem como, com o risco de fibrose hepática, e doença cardiovascular (DCV), mediante marcadores bioquímicos. Para tanto, foi realizado estudo transversal com mulheres ingressantes em programa para mudança do estilo de vida. Foram avaliadas 148 mulheres com idade entre 35 a 78 anos, as quais foram submetidas às avaliações clínicas, sócio-demográfica, antropométrica, de consumo alimentar e análises bioquímicas. O nível de significância considerado foi p<0,05. Verificou-se DGHNA, pelo Índice de Gordura Hepática (IGH≥60), em 55,4% das mulheres. Fetuina-A sérica correlacionou-se positivamente com Índice de Massa Corporal, circunferência abdominal, IGH e proteína C-reativa ultra-sensível (PCR-us). A proporção de mulheres com resistência insulínica (RI) pelo modelo homeostático de resistência à insulina (HOMA-IR) foi maior dentre os valores maiores (Tercil 3) de fetuina-A, comparativamente, aos menores valores (Tercil 1). Resultado análogo foi encontrado para a PCR-us, mas não para proteína ligadora de lipopol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fetuin-A is a multifunctional glycoprotein, synthesized by the liver as a acute phase protein. It acts in insulin cascade inhibition, and stimulates pro-inflammatory cytokines. It is postulated that fetuin-A is involved in non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) pathogenesis, as one of its indicators. The present study aims to investigate fetuin-A concentration in NAFLD and its association with metabolic disturbers, as well as with hepatic fibrosis risk, and cardiovascular disease (CVD), through biochemical markers. For that, a cross-sectional study was carried out with women entering a lifestyle modification program. We evaluate 148 women, with age that range from 35 to 78 years old that were submitted to clinical, sociodemographic, anthropometric, food consumption and biochemical evaluation. The statistical significance considered was p<0,05. We verified that NAFLD, measured by Fatty Liver Index (FLI ≥60), was found in 55.4% of women. Serum fetuin-A was positively correlated with Body Mass Index, waist circumference, FLI and high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP). The proportion of women with insulin resistance (IR) by insulin resistance homeostatic model assessment (HOMA-IR), was higher among the higher values (Tercil 3) of fetuin-A, compared to the lowest values (Tercil 1). Analog results were found to hs-CRP, but not to lipopolysaccharide-binding protein (LBP), albuminemia and hepatic fibrosis. After adjustments, HOMA-IR and hs-CRP altered, constitute independent... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Este trabajo valora el efecto de la dieta y el tratamiento con atorvastatina sobre la EGHNA inducida en pollos mediante una dieta hiperlipémica, empleando técnicas de análisis bioquímico, histológico, microscopía electrónica, técnicas inmunocitoquímicas y cuantificaciones histológicas. Utilizamos 100 pollos de la raza White Leghorn, se dividieron al azar en dos grupos control e hiperlipémico en una primera fase de inducción de hígado graso (3 meses) y en una segunda fase de otros 3 meses los animales hiperlipémicos fueron divididos en los grupos de progresión con dieta hiperlipémica, regresión, regresión farmacológica y progresión farmacológica. La retirada de la dieta y/o el tratamiento con atorvastatina reduce la esteatosis hepática, la inflamación y la lesión hepatocelular. Se constata una mayor actividad de la enfermedad en los grupos de progresión respecto a los de regresión y una menor actividad en los animales tratados respecto a los no tratados. / The aim of the present study was to determinate the effect of diet and atorvastatin on NAFLD induced by hyperlipidemic diet in experimental animals. We carried out serum biochemical analysis, histology, electron microscopy and immunohistochemical techniques and histological quantifications. We used one-hundred white Leghorn chickens. The chickens were randomly assigned to 2 Kinds of diet: a standard diet and a hyperlipidemic diet. After a three-month induction period the chickens were randomly divided in four groups and were breeding for another three-month period with different diets. Thus, the groups of our study were as follows: healthy control, hyperlipidemic progression, spontaneous regression, pharmacological regression and pharmacological progression.The removal diet and/or atorvastatin treatment decreased the steatosis, inflammation and hepatocelular lesion grade in the liver. We have observed a greater NASH Activity Score in progression groups than regression groups and lower activity in the treatment groups with regard to non-treated groups.

Orientador: Roberto Carlos Burini / Resumo: O aumento da permeabilidade intestinal promove o influxo de toxinas bacterianas do lúmen intestinal para o interior do hospedeiro, desencadeando em resposta inflamatória de baixo grau, semelhante à observada na expansão do tecido adiposo e na etiologia das doenças crônicas. Foi realizado estudo transversal para identificar os determinantes das concentrações plasmáticas de proteína ligadora de lipopolissacarídeo (LBP) em mulheres adultas ingressantes em programa para mudança do estilo de vida. Foram avaliadas 74 mulheres com idade entre 35 a 67 anos, as quais foram submetidas à avaliação sociodemográfica e clínica, antropométrica, de composição corporal e consumo alimentar, coleta sanguínea e bioquímica padrão. Todas as análises foram efetuadas pelo programa estatístico SPSS versão 19.0, e o nível de significância adotado foi de 5%. Observou-se que as concentrações da LBP foram significativamente maiores em mulheres com excesso de peso e que este biomarcador apresentou correlações moderadas com a circunferência abdominal, a pressão arterial e com o índice de gordura hepática. Similarmente, notou-se que a ingestão de frutose e de gordura poli-insaturada, a pressão arterial diastólica, a transaminase glutâmico-pirúvica e o percentual de gordura corporal total, influenciaram os níveis plasmáticos da LBP de maneira independente das demais variáveis. Desta forma, o presente estudo demonstra que a LBP está relacionada a dois componentes da síndrome metabólica e ao acúmulo hepático d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: A complexidade da fisiopatologia na Esteatose Hepática Não Alcóolica (EHNA) envolve uma interface entre as adipocinas e a regulação neuroendócrina do balanço energético, incluindo o papel do sistema Neuropeptídeo Y/Proteína agouti relacionada. Objetivo: estabelecer a relação entre a razão NeuropeptídeoY/Proteína relacionada Agouti (AgRP) e a adiponectinemia, bem como avaliar a influência de neuropeptídeos orexígenos nos aspectos nutricionais de adolescentes obesos com EHNA submetidos a uma intervenção interdisciplinar de longo prazo. Métodos: Recrutou-se adolescentes obesos pós-púberes para participarem de uma intervenção interdisciplinar. O grupo foi analisado de acordo com a presença ou não de EHNA pela ultrassonografia (US). As amostras de sangue foram coletadas para a mensuração da glicemia, transaminases hepáticas e perfil lipídico, resistência e sensibilidade insulínica. As concentrações de Adiponectina, NPY e AgRP foram avaliadas por ELISA e a mensuração da gordura visceral e subcutânea pela US. A ingestão alimentar foi aferida por meio de registro alimentar de 3 dias. Resultados: No início da terapia, observou-se que parâmetros clínicos importantes como massa corporal, IMC, gordura visceral, HOMA-IR, QUICKI, triglicérides, VLDL-colesterol e transaminases hepáticas apresentaram-se mais alterados em pacientes com EHNA, os quais melhoram após tratamento. Além disso, a energia total e ingestão de macronutrientes reduziram significativamente em ambos os grupos. Observou-se correlação positiva entre AgRP e a gordura visceral em todos os pacientes, e correlação negativa entre NPY/AgRP com a concentração de adiponectina apenas em adolescentes obesos com EHNA. Ao analisar a influência da dieta nos neuropeptídeos orexígenos, apenas os pacientes com EHNA apresentaram correlação positiva entre a ingestão de ácidos graxos saturados com os neuropeptídeos orexígenos (NPY e AgRP); e carboidrato com NPY. Foi observada correlação positiva entre ingestão de energia, (%) de lipídio e ácidos graxos saturados com o acúmulo de gordura visceral. Conclusão: Os pacientes com EHNA apresentaram parâmetros clínicos mais alterados ao compará-los àqueles que não possuíam esta doença, incluindo a correlação negativa entre adiponectina e NPY/AgRP. Estes resultados sugeriram que adolescentes obesos com EHNA apresentaram perfil inflamatório alterado, o qual pode influenciar na regulação neuroendócrina do balanço energético indicando uma barreira adicional na terapia de redução de peso. Além disso, nossos achados revelaram uma importante influência da composição da dieta no sistema orexígeno, sendo essencial considerar a ingestão excessiva de gordura saturada como um fator determinante para o desenvolvimento de EHNA. / BACKGROUND: The complexity physiophatology in the Non Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) involves interplay between adipokines and neuroendocrine regulation of energy balance, including the role of Neuropeptide Y/Agouti Related Protein system. AIM: establishing the relationship between Neuropeptide Y/Agouti Related Protein (NPY/AgRP) ratio and adiponectinemia, as well as to assess the influence of orexigenic neuropeptides in the nutritional aspects of NAFLD obese adolescents submitted to a long-term interdisciplinary approach. METHODS: A group of post-pubescent obese adolescents were recruited and included in the interdisciplinary intervention. The group was analyzed according to the presence or ausence of NAFLD by ultrassonography (US). Blood samples were collected to measure glycemia, hepatic transaminases and lipid profile, insulin resistance and sensitivity. Adiponectin, NPY and AgRP concentrations were measured by ELISA and the measurement of visceral ans subcutaneous fat by US. Food intake was measured using 3-day diet records. RESULTS: It was observed at baseline that important clinical parameters including body weight, BMI, visceral fat, HOMA-IR, QUICKI, triglycerides, VLDL-cholesterol and hepatic transaminases were more altered in NAFLD patients. After the intervention, these parameters, total energy and macronutrient intake were reduced significantly in both groups. The most important finding was the positive correlation between AgRP with visceral fat in all patients, and negative correlation between NPY/AgRP with adiponectin only in NAFLD obese adolescents. Analyzing the influence of the diet in the orexigenic neuropeptides, only the NAFLD patients presented a positive correlation between the saturated fatty acids intake and the orexigenic neuropeptides (NPY and AgRP); and carbohydrate with NPY. Indeed, it was observed a positive correlation between energy intake, lipid (%) and saturated fatty acids with visceral fat accumulation. CONCLUSION: NAFLD patients presented more altered clinical parameters than non-NAFLD, including the negative correlation between adiponectin and NPY/AgRP. These results suggested that NAFLD obese adolescents presented an altered inflammatory profile that can influence the neuroendocrine regulation of energy balance suggesting and additional impairment in the weigth loss therapy. Moreover, our findings showed an important influence of diet composition in the orexigenic system, being essential consider that the excessive saturated fatty acids intake could be a determinant factor to increase nonalcoholic fatty liver disease. / FAPESP: 2008/53069-0 / FAPESP: 2006/00684-3 / FAPESP (CEPID/Sono): 9814303-3 / TEDE

The non-alcoholic fat liver diseases (NAFLD) have been presented, recently, as a novel component of the Metabolic Syndrome (MetS), representing the oxidative stress a critical role in their progression. In this context, the present study aimed to assess the morphofunctional hepatic alterations and the redox balance in a murine model for the MetS induced by a high calorie diet, after treatment with tempol and apocinina. C57Bl/6 male mice, young (6-8 weeks) and elderly (53-57 weeks), were divided in four groups: control group (CT; n young=8 and n elderly=5), fed with chow diet (14% calories from lipids); DHC group ( n young=9 and n elderly=5), receiving hypercaloric diet for 14 weeks (58,4% calories from lipids); DHC + Tempol group ( n young=4 and n elderly=9), which received hypercaloric diet and treatment with tempol (50mg/kg) in the water for drinking; DHC + Apocinin group ( n young=4 and n elderly=9), fed with a hypercaloric diet and under apocinin treatment (50mg/kg) in the water for drinking. Metabolic and the redox state assessment, as well as the histological analyses were performed. After the end of the experimental period, young DHC animals were not shown to present significant weight gain, being the latter observed in the elderly DHC animals, when compared to CT group. The treatment with tempol and apocinin was not effective in modifying this parameter in both groups. The DHC animals, both young and elderly, showed fasting hyperglicaemia, and the treatment with tempol and apocinin did not change this profile. A significant improvement in the glucose tolerance was observed in the young animals after the treatment with apocinin, but the treatment with tempol failed to show so. In the elderly animals, a significant improvement in the glucose tolerance and insulin sensitivity was identified after the treatment with tempol and apocinin. An elevated accumulation of visceral fat was identified in the DHC animals (young and elderly), so that the treatment with tempol and apocinin did not alter this profile. An elevated serum concentration of total cholesterol was shown in the young and elderly DHC animals when compared to the CT group, the same not happening to triglycerides, VLDL and lipid peroxidation in both groups, young and elderly. The pharmacological treatment was not shown to be effective in altering these serum parameters. In the young DHC animals, it was not observed significant changes in the enzymatic activities of the AST and ALT, as well as AST/ALT ratio, ALP, &#947;-GT, LDH, albumin and total proteins, when compared to the CT group. However, in the DHC elderly animals, and increased AST activity and AST/ALT ratio were observed among these parameters of hepatic assessment. The DHC animals, young and elderly, presented elevated lipid peroxidation and fat liver accumulation, with numerous fat vacuoles at histology. The pharmacological treatment with tempol and apocinin ameliorated, in a qualitative manner, the fat accumulation in the liver, both in the young and elderly animals, without, however, modifying the hepatic lipid peroxidation. Furthermore, the DHC elderly animals presented high hepatic levels of total lipids, triglycerides, total cholesterol and VLDL cholesterol, with a similar condition not being observed in the DHC young animals. The hepatic activity of the antioxidant enzymes (SOD and CAT) was not shown to be significantly different after the dietary and pharmacological treatments. An increase in the NADPH oxidase activity, and consequently the increased production of superoxide anion ( O2-), may be involved in the mechanisms associated to the MetS and the NAFLD. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As doenças hepáticas gordurosas não-alcoólicas (DHGNA) foram apresentadas, recentemente, como um novo componente da Síndrome Metabólica (SMet), desempenhando o estresse oxidativo papel fundamental na progressão destas. Nesse contexto, o presente estudo objetivou avaliar as alterações morfo-funcionais hepáticas e do balanço redox em um modelo murino para a SMet induzida por uma dieta hipercalórica, após tratamentos com tempol e apocinina. Camundongos machos C57Bl/6, jovens (6-8 semanas) e idosos (53-57 semanas), foram divididos em quatro grupos: grupo controle (CT; n jovem=8 e n idoso=5), alimentado com dieta chow (14% calorias provenientes dos lipídios); grupo DHC ( n jovem=9 e n idoso=5), que recebeu dieta hipercalórica por 14 semanas (58,4% calorias provenientes dos lipídios); grupo DHC + Tempol ( n jovem=4 e n idoso=9), que recebeu dieta hipercalórica e tratamento com tempol (50mg/kg) na água de beber; grupo DHC + Apocinina ( n jovem=4 e n idoso=9), alimentado com dieta hipercalórica e tratado com apocinina (50mg/kg) na água de beber. Avaliações metabólicas, do estado redox e análise histológica hepática foram realizadas. Após o término do período experimental, os animais DHC jovens não apresentaram significativo ganho de peso corporal, sendo este observado nos animais DHC idosos quando comparados ao grupo CT. O tratamento com tempol e apocinina não modificou este parâmetro em ambos os grupos. Os animais DHC, tanto jovens quanto idosos, apresentaram hiperglicemia de jejum e o tratamento com tempol e apocinina não modificou este perfil. Uma significante melhora na tolerância à glicose dos animais jovens foi observada após o tratamento com a apocinina, o mesmo não ocorrendo após o tratamento com o tempol. Nos animais idosos, uma melhora significativa foi observada na tolerância à glicose e sensibilidade à insulina após o tratamento com tempol e apocinina. Acentuado acúmulo de gordura visceral foi identificado nos animais DHC (jovens e idosos), de modo que o tratamento com o tempol e a apocinina não alterou este perfil. Elevada concentração plasmática de colesterol total foi observada nos animais DHC jovens e idosos comparado ao CT, o mesmo não ocorrendo para triglicerídeos, VLDL e peroxidação lipídica plasmática em ambos grupos DHC, jovens e idosos. O tratamento farmacológico em questão não modificou estes parâmetros plasmáticos. Nos animais DHC jovens, não foram observadas mudanças significativas na atividade das enzimas AST, ALT, razão AST/ALT, ALP, &#947;-GT, LDH, albumina e proteínas totais, quando comparado ao grupo CT. Contudo, nos animais idosos DHC, elevada atividade da AST e da razão AST/ALT foram observadas dentre estes parâmetros de avaliação hepática. Os animais DHC, jovens e idosos, apresentaram elevada peroxidação lipídica e acúmulo de gordura hepática, com numerosos vacúolos gordurosos à histologia. O tratamento farmacológico com tempol e apocinina melhorou, de forma qualitativa, o acúmulo de gordura hepática, tanto nos animais jovens quanto nos idosos, sem, entretanto, modificar a peroxidação lipídica hepática. Além disso, os animais idosos DHC apresentaram elevados níveis hepáticos de lipídios totais, triglicerídeos, colesterol total e VLDL colesterol, não sendo observado o mesmo nos animais jovens DHC. A atividade hepática das enzimas antioxidantes (SOD e CAT) não diferiu significativamente após os tratamentos dietético e farmacológico. O aumento na atividade da NADPH oxidase, e consequentemente a produção de anion superóxido ( O2-), pode estar envolvida nos mecanismos associados à SMet e às DHGNA.

A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) tornou-se a hepatopatia crônica mais comum no mundo, afetando principalmente alguns grupos de pacientes, como os diabéticos tipo II. A biópsia hepática permanece como método padrão ouro para o seu diagnóstico. A prevalência da DHGNA e seus subtipos, em especial a esteatohepatite (EH), pode estar subestimada por métodos não invasivos de diagnóstico ou superestimada pela realização da biópsia em pacientes selecionados por alterações na ultrassonografia (US) ou nas aminotransferases. Os objetivos deste estudo foram: determinar a prevalência da DHGNA (esteatose, EH e cirrose) em uma amostra de pacientes diabéticos tipo II, com base na biópsia hepática; quantificar a esteatose, inflamação e fibrose quando presentes; identificar fatores preditivos de DHGNA, EH e fibrose significativa (&#8805; estágio 2) e avaliar o valor das aminotransferases e da US de abdome para o diagnóstico de EH e fibrose significativa. Todos os diabéticos tipo II, entre 18 e 70 anos, consecutivamente atendidos no ambulatório de Diabetes do Hospital Universitário Pedro Ernesto, eram candidatos a participar do estudo. Foram excluídos pacientes com sorologias positivas para hepatite B ou C, outras doenças hepáticas crônicas, uso de drogas hepatotóxicas ou esteatogênicas, etilismo (&#8805;20g/dia), obesidade grau III, comorbidades graves, gravidez ou por recusa em participar do estudo. Dos 396 pacientes triados com critérios de inclusão, 85 foram incluídos. Todos os pacientes foram submetidos à avaliação clínica, exames laboratoriais, US de abdome e biópsia hepática. As lâminas foram analisadas por dois patologistas independentes e a DHGNA foi graduada pelo NASH Clinical Research Network Scoring System. A concordância entre os patologistas foi medida pelo coeficiente Kappa (k) e foi realizada análise multivariada por regressão logística para avaliação dos fatores associados de forma independente à DHGNA, EH e fibrose significativa. A prevalência de DHGNA na amostra foi de 92%, sendo 50% esteatose simples, 40% EH e 2% cirrose. A concordância (k) entre os patologistas foi 0,78. A esteatose foi leve na maior parte dos pacientes com esteatose simples e predominantemente acentuada nos pacientes com EH (p<0,001). A fibrose foi verificada em 76% dos pacientes com EH, sendo significativa em 41% deles. A presença de síndrome metabólica foi associada de forma independente à DHGNA, o índice de massa corporal e a circunferência abdominal aumentada à EH e a dosagem de alanina aminotransferase (ALT) à EH e à fibrose significativa. Apenas um de 21 pacientes (5%) com US e ALT normais apresentou EH. A prevalência da EH aumentou progressivamente com o aumento do grau de esteatose na US e com o aumento da ALT. Conclusão: A prevalência da DHGNA estimada pela biópsia hepática sem vieses de seleção foi muito elevada. Apesar de alto, o percentual de EH e fibrose significativa foi inferior ao dos estudos com biópsias em diabéticos selecionados por alterações na US e aminotransferases. EH foi associada a esteatose acentuada na histologia. A obesidade foi um cofator importante no diagnóstico de EH. O melhor desempenho da ALT e da US foi o de excluir as formas graves de DHGNA quando normais. / Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has become the most common chronic liver disease worldwide, especially in some groups of patients, as type II diabetic. Liver biopsy remains the gold standard method for diagnosis of the disease. Current prevalences of NAFLD and its subtypes, as steatohepatitis (NASH), can be underestimated due to the non invasive tests for diagnosis or overestimated due to liver biopsy in patients selected by changes in ultrasonography (US) or aminotransferases. The objectives of this study were: define the prevalence of NAFLD (bland steatosis, NASH and cirrhosis) in type II diabetic patients, based on liver biopsy; quantify steatosis, inflammation and fibrosis when present; identify predictive factors of NAFLD, NASH and significant fibrosis (&#8805; stage 2) and analyse the value of aminotransferases and abdominal US for diagnosis of NASH and significant fibrosis. All type II diabetic patients, from 18 to 70 years, consecutively evaluated in the outpatient Clinic of Diabetes Mellitus of a terciary care University Hospital, were considered for enrollment. Patients were excluded if they had positive serology for hepatitis B or C, other chronic liver diseases, used medications associated with steatosis or hepatotoxic drugs, consumed &#8805; 20g alcohol per day, had other serious diseases, grade III obesity, were pregnant or declined participation. From 396 patients evaluated, 85 were included. Patients were submitted to clinical and laboratory examinations, abdominal US and liver biopsy. The slides were analysed by two independent pathologists and graded according to NASH Clinical Research Network Scoring System. Agreement between pathologists was accessed by kappa coefficients (k) and factors independently associated to NAFLD, NASH and significant fibrosis by multivariate logistic regression. Prevalence of NAFLD was 92%, being 50% bland steatosis, 40% NASH and 2% cirrhosis. Agreement between pathologists (k) was 0,78. Steatosis was mild in the majority of patients with bland steatosis and mostly severe in NASH patients (p<0,001). Fibrosis occurred in 76% of NASH patients, being significant in 41% of them. Metabolic syndrome was independently associated to NAFLD, body mass index and increased waist circumference to NASH and alanine aminotransferase (ALT) to NASH and significant fibrosis. Metabolic syndrome was independently associated to NAFLD; body mass index and increased waist circumference were associated to NASH; and ALT was associated to NASH and significant fibrosis. Only one from 21 patients (5%) with normal US and ALT had NASH. The prevalence of NASH progressively increased as the steatosis grade on US and the liver enzymes got worse. Conclusion: Prevalence of NAFLD estimated by liver biopsy in T2DM patients without selection bias was very high. Although elevated, prevalence of NASH and significant fibrosis were lower than defined by studies with biopsies in patients with changes in US or aminotransferases. NASH was associated to severe steatosis on histology. Obesity was an important factor in NASH diagnosis. The best performance of ALT and US was in exclude severe subtypes of NAFLD when normal.

Submitted by Caroline das Neves Mendes Nunes null (ca.mendes.nunes@gmail.com) on 2018-03-13T17:18:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação do Mestrado Completa - Entrega.pdf: 2225273 bytes, checksum: 1a95f4918cc1bde4f9a8dcde06993a94 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-03-13T19:53:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nunes_cnm_me_bot.pdf: 2225273 bytes, checksum: 1a95f4918cc1bde4f9a8dcde06993a94 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-13T19:53:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nunes_cnm_me_bot.pdf: 2225273 bytes, checksum: 1a95f4918cc1bde4f9a8dcde06993a94 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O aumento da permeabilidade intestinal promove o influxo de toxinas bacterianas do lúmen intestinal para o interior do hospedeiro, desencadeando em resposta inflamatória de baixo grau, semelhante à observada na expansão do tecido adiposo e na etiologia das doenças crônicas. Foi realizado estudo transversal para identificar os determinantes das concentrações plasmáticas de proteína ligadora de lipopolissacarídeo (LBP) em mulheres adultas ingressantes em programa para mudança do estilo de vida. Foram avaliadas 74 mulheres com idade entre 35 a 67 anos, as quais foram submetidas à avaliação sociodemográfica e clínica, antropométrica, de composição corporal e consumo alimentar, coleta sanguínea e bioquímica padrão. Todas as análises foram efetuadas pelo programa estatístico SPSS versão 19.0, e o nível de significância adotado foi de 5%. Observou-se que as concentrações da LBP foram significativamente maiores em mulheres com excesso de peso e que este biomarcador apresentou correlações moderadas com a circunferência abdominal, a pressão arterial e com o índice de gordura hepática. Similarmente, notou-se que a ingestão de frutose e de gordura poli-insaturada, a pressão arterial diastólica, a transaminase glutâmico-pirúvica e o percentual de gordura corporal total, influenciaram os níveis plasmáticos da LBP de maneira independente das demais variáveis. Desta forma, o presente estudo demonstra que a LBP está relacionada a dois componentes da síndrome metabólica e ao acúmulo hepático de gordura em mulheres adultas. Elevações plasmáticas deste biomarcador podem refletir o consumo de alimentos industrializados, o excesso de peso e as alterações metabólicas que são provocadas ou agravadas pela permeabilidade intestinal aumentada. / Increased intestinal permeability promotes the influx of bacterial toxins from the intestinal lumen into the host, triggering low grade inflammatory response similar to that observed in the expansion of adipose tissue and in the etiology of chronic diseases. A cross-sectional study was conducted in adult women to identify the determinants of plasma lipopolysaccharide binding protein (LBP) concentrations in adult women entering a lifestyle modification program. A total of 74 women aged 35-67 years were assessed, which were submitted to sociodemographic and clinical, anthropometric, body composition and food consumption evaluations, blood collection and standard biochemistry. All analyzes were performed by the SPSS software version 19.0 and the significance level adopted was 5%. It was observed that LBP concentrations were significantly higher in overweight women and this biomarker showed moderate correlations with waist circumference, blood pressure and liver fat index. Similarly, the ingestion of fructose and polyunsaturated fat, diastolic blood pressure, glutamic-pyruvic transaminase and total body fat percentage influenced plasma LBP levels independently of the other variables. Thus, the present study demonstrates that LBP is related to two components of metabolic syndrome and to the hepatic accumulation of fat in adult women. Plasma elevations of this biomarker may reflect consumption of processed foods, overweight, and metabolic changes that are caused by increased intestinal permeability. / 130378/2016-0

A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) tornou-se a hepatopatia crônica mais comum no mundo, afetando principalmente alguns grupos de pacientes, como os diabéticos tipo II. A biópsia hepática permanece como método padrão ouro para o seu diagnóstico. A prevalência da DHGNA e seus subtipos, em especial a esteatohepatite (EH), pode estar subestimada por métodos não invasivos de diagnóstico ou superestimada pela realização da biópsia em pacientes selecionados por alterações na ultrassonografia (US) ou nas aminotransferases. Os objetivos deste estudo foram: determinar a prevalência da DHGNA (esteatose, EH e cirrose) em uma amostra de pacientes diabéticos tipo II, com base na biópsia hepática; quantificar a esteatose, inflamação e fibrose quando presentes; identificar fatores preditivos de DHGNA, EH e fibrose significativa (&#8805; estágio 2) e avaliar o valor das aminotransferases e da US de abdome para o diagnóstico de EH e fibrose significativa. Todos os diabéticos tipo II, entre 18 e 70 anos, consecutivamente atendidos no ambulatório de Diabetes do Hospital Universitário Pedro Ernesto, eram candidatos a participar do estudo. Foram excluídos pacientes com sorologias positivas para hepatite B ou C, outras doenças hepáticas crônicas, uso de drogas hepatotóxicas ou esteatogênicas, etilismo (&#8805;20g/dia), obesidade grau III, comorbidades graves, gravidez ou por recusa em participar do estudo. Dos 396 pacientes triados com critérios de inclusão, 85 foram incluídos. Todos os pacientes foram submetidos à avaliação clínica, exames laboratoriais, US de abdome e biópsia hepática. As lâminas foram analisadas por dois patologistas independentes e a DHGNA foi graduada pelo NASH Clinical Research Network Scoring System. A concordância entre os patologistas foi medida pelo coeficiente Kappa (k) e foi realizada análise multivariada por regressão logística para avaliação dos fatores associados de forma independente à DHGNA, EH e fibrose significativa. A prevalência de DHGNA na amostra foi de 92%, sendo 50% esteatose simples, 40% EH e 2% cirrose. A concordância (k) entre os patologistas foi 0,78. A esteatose foi leve na maior parte dos pacientes com esteatose simples e predominantemente acentuada nos pacientes com EH (p<0,001). A fibrose foi verificada em 76% dos pacientes com EH, sendo significativa em 41% deles. A presença de síndrome metabólica foi associada de forma independente à DHGNA, o índice de massa corporal e a circunferência abdominal aumentada à EH e a dosagem de alanina aminotransferase (ALT) à EH e à fibrose significativa. Apenas um de 21 pacientes (5%) com US e ALT normais apresentou EH. A prevalência da EH aumentou progressivamente com o aumento do grau de esteatose na US e com o aumento da ALT. Conclusão: A prevalência da DHGNA estimada pela biópsia hepática sem vieses de seleção foi muito elevada. Apesar de alto, o percentual de EH e fibrose significativa foi inferior ao dos estudos com biópsias em diabéticos selecionados por alterações na US e aminotransferases. EH foi associada a esteatose acentuada na histologia. A obesidade foi um cofator importante no diagnóstico de EH. O melhor desempenho da ALT e da US foi o de excluir as formas graves de DHGNA quando normais. / Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has become the most common chronic liver disease worldwide, especially in some groups of patients, as type II diabetic. Liver biopsy remains the gold standard method for diagnosis of the disease. Current prevalences of NAFLD and its subtypes, as steatohepatitis (NASH), can be underestimated due to the non invasive tests for diagnosis or overestimated due to liver biopsy in patients selected by changes in ultrasonography (US) or aminotransferases. The objectives of this study were: define the prevalence of NAFLD (bland steatosis, NASH and cirrhosis) in type II diabetic patients, based on liver biopsy; quantify steatosis, inflammation and fibrosis when present; identify predictive factors of NAFLD, NASH and significant fibrosis (&#8805; stage 2) and analyse the value of aminotransferases and abdominal US for diagnosis of NASH and significant fibrosis. All type II diabetic patients, from 18 to 70 years, consecutively evaluated in the outpatient Clinic of Diabetes Mellitus of a terciary care University Hospital, were considered for enrollment. Patients were excluded if they had positive serology for hepatitis B or C, other chronic liver diseases, used medications associated with steatosis or hepatotoxic drugs, consumed &#8805; 20g alcohol per day, had other serious diseases, grade III obesity, were pregnant or declined participation. From 396 patients evaluated, 85 were included. Patients were submitted to clinical and laboratory examinations, abdominal US and liver biopsy. The slides were analysed by two independent pathologists and graded according to NASH Clinical Research Network Scoring System. Agreement between pathologists was accessed by kappa coefficients (k) and factors independently associated to NAFLD, NASH and significant fibrosis by multivariate logistic regression. Prevalence of NAFLD was 92%, being 50% bland steatosis, 40% NASH and 2% cirrhosis. Agreement between pathologists (k) was 0,78. Steatosis was mild in the majority of patients with bland steatosis and mostly severe in NASH patients (p<0,001). Fibrosis occurred in 76% of NASH patients, being significant in 41% of them. Metabolic syndrome was independently associated to NAFLD, body mass index and increased waist circumference to NASH and alanine aminotransferase (ALT) to NASH and significant fibrosis. Metabolic syndrome was independently associated to NAFLD; body mass index and increased waist circumference were associated to NASH; and ALT was associated to NASH and significant fibrosis. Only one from 21 patients (5%) with normal US and ALT had NASH. The prevalence of NASH progressively increased as the steatosis grade on US and the liver enzymes got worse. Conclusion: Prevalence of NAFLD estimated by liver biopsy in T2DM patients without selection bias was very high. Although elevated, prevalence of NASH and significant fibrosis were lower than defined by studies with biopsies in patients with changes in US or aminotransferases. NASH was associated to severe steatosis on histology. Obesity was an important factor in NASH diagnosis. The best performance of ALT and US was in exclude severe subtypes of NAFLD when normal.

Introdução e Objetivos: A Doença hepática gordurosa não alcóolica (DHGNA) é claramente marcada por influência ambiental, no entanto, fatores genéticos têm sido associados a progressão para formas mais graves de DHGNA. O estresse oxidativo tem sido cada vez mais enfatizado nesta evolução e o sistema NADPH parece ser uma importante fonte de produção de espécies reativas de oxigênio. O papel dos polimorfismos do sistema NADPH nessa população e sua possível relação com progressão de doença e síndrome metabólica são desconhecidos. Desta maneira, investigamos dois polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) na região reguladora dos genes que codificam a NADPH oxidase 4 subunidade catalítica (NOX4) e sua subunidade regulatória p22phox (CYBA) e sua relação com variáveis histológicas e bioquímicas em pacientes com DHGNA. Métodos: 207 pacientes com DHGNA com biópsia hepática (esteatose=27; esteato-hepatite=180), sendo (70% do sexo feminino), foram genotipados para SNPs da Nox4 (rs3017887) e CYBA -675 T/A. O DNA genômico foi extraído a partir de células do sangue periférico e a genotipagem foi realizada utilizando primers específicos e sondas fluorescentes marcadas por sequenciamento. A análise histológica foi baseada na classificação de Kleiner et al (2005). Todos os pacientes eram negativos para os marcadores de hepatites virais, doença de Wilson, hemocromatose, doenças auto-imunes e tinham ingestão diária de álcool < 100 g/semana. Resultados:Associação do CYBA -675 T/A com triglicerídeos foi observada: 176,87 ± 12,93 (TT) versus 228,70 ± 21,66 (XA), p = 0,007 . Quando a população é estratificada, a associação aparece apenas entre os pacientes que possuem esteatohepatite não alcoólica (EHNA). Foi observada uma associação do CYBA-675 T / A com HDL: 48,05 ± 1,71 (TT) vs 41,70 ± 2,91 (TA) vs 28,03 ± 9,47 mg / dL (AA), p = 0,001. Quando a população é estratificada, a associação aparece apenas entre os pacientes que possuem EHNA. Quando se estudou o SNP no gene da NOX4, observou-se associação com ALT (CA + AA: 60,10 ± 6,01 U/L vs CC: 44,23 ± 4,36 U/L; P = 0,02). Porém, quando a população foi estratificada em esteatose e EHNA não se verificou diferença estatisticamente significante na frequência dos genótipos. Não houve associação de SNPs de genes que codificam proteínas do sistema NADPH oxidase nos genes CYBA (não registrado) e Nox4 (rs 3017887) e a presença de EHNA, nos portadores de DHGNA. Quanto aos resultados clínicos, observou-se que os graus de fibrose mais avançados ocorreram em pacientes com diagnóstico de Diabetes Mellitus tipo 2 (66,9% vs 37,5%; p= 0,007), além de serem mais obesos (32,2% vs 29%; p=0,003). Além disso, os níveis séricos de glicose e insulina aumentaram significantemente, de acordo com a presença de EHNA. A frequência da SM foi significativamente maior em pacientes com EHNA. Conclusões: 1) Houve associação entre a presença do genótipo CC na Nox4 SNP com uma maior concentração de ALT na população em geral 2) Houve associação entre a presença do genótipo AA no polimorfismo do gene -675 T/A CYBA com uma maior concentração de TGL e menor de HDL, nos pacientes com EHNA 3) Houve associação entre a presença de síndrome metabólica e graus avançados de fibrose hepática em portadores de DHGNA. No entanto, a amostra deve ser ampliada para confirmar estas associações, bem como, para melhor explorar possíveis relações com escores de fibrose e inflamação / Background/Aims: Oxidative stress has been implicated in progression to severe forms of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). NADPH oxidase appears to be an important source of production of reactive oxygen species. We investigated by the first time two single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the regulatory region of genes encoding the NADPH oxidase 4 (NOX4) and p22phox (CYBA) in NAFLD. Methods: 207 biopsy-proven NAFLD patients (27 = steatosis; 180= NASH) were evaluated. Genomic DNA was extracted from peripheral blood cells and on Nox4 and CYBA polymorphisms were determined by direct sequencing of PCR. All the patients were negative for markers of viral hepatitis, Metabolic diseases, autoimmune diseases and had daily intake of alcohol < 100 g/week. Results: An association of CYBA -675 T / A with triglycerides was observed: 176.87 ± 12.93 (TT) versus 228.70 ± 21.66 (XA), mean ± SEM, p = 0.007. When the population is stratified, the association appears only among patients who have non-alcoholic steatohepatitis (NASH). An association of CYBA-675 T/A with HDL was observed: 48.05 ± 1.71 (TT) vs 41.70 ± 2.91 (TA) vs 28.03 ± 9.47 mg/dL (AA), mean ± SEM, p = 0.001. When the population is stratified, the association appears only among patients who have NASH. When the NOX4 (rs 3017887) gene was studied, there was association with ALT (CA + AA: 60.10 ± 6.01 U / L vs CC: 44.23 ± 4.36 U/L; P = 0, 02). However, when the population was stratified in steatosis and NASH, there was no statistically significant difference in the frequency of genotypes. There was no association of SNPs from genes encoding NADPH oxidase system proteins in the CYBA (unregistered) and Nox4 (rs 3017887) genes and the presence of NASH in the DHGNA carriers. Regarding the clinical results, it was observed that the most advanced degrees of fibrosis occurred in patients diagnosed with Type 2 Diabetes Mellitus (66.9% vs 37.5%, p = 0.007), in addition to being more obese (32.2% % vs 29%, p = 0.003). In addition, serum glucose and insulin levels increased significantly, according to the presence of NASH. The frequency of MS was significantly higher in patients with NASH. Conclusions: 1) There was an association between the presence of the CC genotype in the Nox4 SNP with a higher concentration of ALT in the general population. 2) There was an association between the presence of the AA genotype in the CYBA gene -675 T / A polymorphism with a higher concentration of TGL and lower HDL in patients with NASH. 3) There was an association between the presence of metabolic syndrome and advanced degrees of hepatic fibrosis in patients with NAFLD. However, the sample should be expanded to confirm these associations, as well as to better explore possible relationships with fibrosis and inflammation scores