Polymorphonuclear neutrophils (PMNs) are important effector cells in host defense and the inflammatory response to antigen. The involvement of PMNs in inflammation is mainly mediated by the Fc receptor family, including IgE receptors. Recently, we have shown that human PMNs from allergic asthmatic subjects express the high affinity receptor, FceRI. In this study, we have examined the regulation of FceRI by human PMNs in vitro and in vivo during the allergic pollen season. First we studied the pattern of expression of FceRI in PMNs during the pollen allergic and outside the pollen season. Peripheral blood neutrophils were isolated from adult atopic asthmatics (AA) (n=17), allergic non asthmatics (ANA) (n=15) and healthy donors (n=16) by dextran, ficoll gradient centrifugation and magnetic cell sorting (MACS). Surface, total protein and mRNA expression of FceRI were investigated in the three groups by FACS, immunocytochemistry (ICC) and fluorescent in situ hybridization (FISH) respectively. Secondly, we investigated the effect of Th-2 cytokines which are known to regulate IgE receptor expression. PMNs from atopic asthmatic subjects were stimulated in vitro with Th-2 cytokines (IL-4, IL-9, GM-CSF) and Th-1 cytokine IFN-gamma. Finally we determined whether the expression of FceRIbeta chain correlated with the surface expression of FceRIalpha chain in PMNs. Irrespective of the season, PMNs from atopic asthmatic subjects showed increased expression of FceRIalpha chain in surface, total protein and mRNA compared to atopic non asthmatics and healthy donors (n=20). Interestingly, FceRIalpha chain surface and mRNA expression increased significantly during pollen season compared to non pollen season (P=0.001) in PMNs isolated from AA (n=9) in contrast to healthy donors and ANA (n=8). Furthermore similar pattern of FceRI expression were observed in vitro when PMNs were stimulated with Th2 cytokines. IL-4, IL-9 and GM-CSF showed increased protein and mRNA expression of FceRIalpha chain at 6 and 18hrs (n=6) whereas IFN-gamma down regulated the mRNA expression of FceRIalpha chain at 6hrs. Also, irrespective of season AA (n=11) subjects showed increased expression of FceRI beta chain when compared to ANA (n=10) and healthy donors (n=9). Western blot analysis showed increased FceRI beta protein in atopic asthmatic subjects (n=4). Interestingly irrespective of the groups, there was a positive correlation r = 0.8054 between total protein expression of beta chain with surface expression of alpha chain of FceRI in neutrophils. Our data suggest that the expression of FceRI in neutrophils of atopic asthmatic patients is highly regulated. Our in vitro studies provide evidence that Th-2 cytokines such as IL-9, IL-4 and GM-CSF up-regulate the expression of FceRI. Furthermore we show evidence of increased expression of FceRIbeta chain in neutrophils of atopic asthmatic subjects. Collectively these results suggest that FceRI mediated neutrophil dependent activation may play a key role in allergic diseases.

No description available.

No description available.

Thesis (Ph.D.)--Australian National University, 2004.

Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1940.

The aim of this thesis was to contribute to the standardization and validation of expiratory flow parameters independent of NO testing, particularly alveolar concentration (CANO) and bronchial NO flux (JawNO) in children and adolescents with allergic respiratory diseases. The thesis was created in the time of increased interest of medicine professionals in non-invasive examination methods and targeted therapeutic influence of inflammation in small airways in asthmatics. After the standardization and validation of clinical benefits, the measurement of concentrations of nitric oxide (FENO) in the air exhaled through the mouth with the speed of 50 ml/s was validated for the evaluation of eosinophilic airway inflammation in patients with asthma and started to be widely used in clinical practice. Currently, there is an ongoing research focused on a new method for FENO measurement at several flow rates, which uses physiological models of NO transfer in exhaled air, allowing to quantify the amount of NO in an indirect way and to monitor the intensity of the inflammatory processes in distal and proximal airways non- invasively. In groups of children and adolescents with allergic rhinitis and / or bronchial asthma and their healthy peers (aged 6 -19 years), the concentration of FENO was examined using online...

Orientador: Ângelo Pires do Prado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RaquelSoaresBinottide_D.pdf: 2064191 bytes, checksum: 947400e01f2da61b9ec537f4350e8793 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Ácaros são os principais agentes relacionados ao quadro de sensibilização respiratória de indivíduos atópicos no Brasil, sendo responsáveis por crises de asma, rinite e conjuntivite alérgicas, dentre outros. São encontrados nas residências principalmente em colchões, sofás e tapetes, onde alguns métodos podem ser utilizados para controlar sua infestação. O objetivo desse estudo foi o de avaliar a eficácia acaricida in vitro do produto a base de óleo essencial das plantas Lavandula officinalis e Mentha piperita (Labiatae) contra ácaros Dermatophagoides pteronyssinus e Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae). O efeito acaricide do Produto-Teste foi comparado com vários outros produtos químicos em estudos in vitro e de intervenção. O estudo in vitro foi realizado utilizando culturas acarinas, nas quais os produtos foram diretamente aplicados e em placas de Petri onde um número de ácaros foram colocados em contato com as substâncias testadas. A mortalidade acarina foi avaliada e utilizada para a comparação. O estudo de intervenção foi realizado em 30 residências de pacientes atópicos com asma e/ou rinite. A eficácia do Produto-Teste foi comparada com um produto acaricida comercializado no país através da quantificação de alérgenos acarinos Der p1 e Der f1 por ELISA e pela contagem do número de corpos acarinos nas amostras de poeira coletadas de colchões, sofás e tapetes tratados com um dos produtos pelo período de 6 meses. As implicações clínicas como sintomas alérgicos e segurança aos humanos dos produtos também foram avaliados. O estudo in vitro demonstrou que o efeito acaricida do Produto-Teste foi similar aquele observado com os produtos químicos. No estudo de intervenção, houve uma diminuição significativa nas concentrações dos alérgenos Der p1 e Der f1 nos 3 substratos tratados. Essa diminuição foi semelhante aquela observada com o produto comercial utilizado como controle. Apesar dos resultados, o número de corpos acarinos nas amostras de poeira dos 3 substratos não demonstrou alteração significativa após os 6 meses de tratamento para ambos os produtos testados. Além disso, os produtos foram considerados seguros para uso humano, desde que não foram observados efeitos adversos ou sinais de irritação significativos, embora fosse observado que alguns patientes atópicos presentes no recinto quando da aplicação do produto reclamaram de sintomas respiratórios. Os resultados demonstram que o acaricida contendo óleos essenciais de Lavandula officinalis e Mentha piperita (Labiatae) apresenta significativo efeito in vitro contra ácaros Dermatophagoides pteronyssinus e Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae) e causa uma diminuição significativa nos níveis de Der p1 e Der f1 na poeira de colchões, sofás e tapetes tratados. O produto foi considerado seguro para uso por humanos. / Abstract: House dust mites (HDM) are the greatest source of indoor allergens in Brazil, being closely implicated in respiratory allergic diseases such as asthma and rhinitis. In dwellings, HDM allergens are mainly found on mattresses, sofas and rug surfaces, where several methods such as mattress-covers and acaricides, can be used to control indoor mite infestation. The aim of this study was to evaluate the acaricide effect of an herbal product containing essential oils from Lavandula officinalis and Mentha piperita (Labiatae) against mites Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae). The acaricide effect of the Test-product was compared with several other chemical products in in vitro and clinical studies. The in vitro study was conducted using mite cultures, in which the chemical products were directly applied and in Petri dishes where a number of mites were placed in contact with the chemicals tested. Mite mortality was counted and used as comparison. The clinical study was conducted in 30 dwellings of atopic patients with asthma and/or rhinitis. The efficacy of the Test-product was compared with a Brazilian commercial acaricide and was done by ELISA quantification of the mite allergens Der p1 and Der f1 and by the number of body mites on dust collected from a mattress, sofa and rug treated with one of the products for 6 months. Clinical implications in allergic symptoms and the toxicity of the products for humans were also evaluated. The in vitro study showed that the acaricide effect of the Test-product was similar to that observed with the chemical products. In the clinical study, a significant decrease in Der p1 and Der f1 allergens concentrations were observed in all 3 treated sources. This decrease was similar to that observed with the commercial product used as control. Despite these results, the number of mite bodies on dust from all 3 sources presented no significant difference after the 6- months of treatment for both Test- and Control-products. Also, both products were considered safe for human use, since no significant adverse effects or toxicity signals were observed, although, atopic patients who were present in the room when the product was applied complained of respiratory symptoms. Our findings showed that the acaricide containing essential oils from Lavandula officinalis and Mentha piperita (Labiatae) has a significant in vitro effect against mites Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae) and caused a significant decrease in Der p1 and Der f1 levels on dust from treated mattresses, sofas and rugs. The product was considered safe for human use. / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Heloísa Helena de Araújo Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T04:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pelaquini_EdmarHenrique_M.pdf: 18418086 bytes, checksum: fa003dada60c0eb4043e3908a67d256b (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito do tratamento com 1400W, inibidor seletivo da NOS induzível (iNOS), na adesão in vitro a VCAM-1 e ICAM-1 e na expressão das selectinas VLA-4, Mac-1 e LFA-1 nos eosinófilos da medula óssea e do sangue periférico. A produção das citocinas sintetizadas pelos linfócitos T, Th1 e Th2, também foi avaliada nos homogenatos dos pulmões. Verificamos que o conteúdo de eosinófilos estava aumentado nos pulmões dos camundongos não tratados (controles) a partir de 48h após o desafio com OVA. O tratamento dos camundongos alérgicos com 1400W causou redução no infiltrado de eosinófilos somente em 48h. O tratamento com 1400W aumentou a adesão in vitro dos eosinófilos obtidos da medula óssea a ICAM-1 em 24h-48h, enquanto que a adesividade a VCAM-1 estava diminuída em 48h. Nos eosinófilos do sangue, o 1400W diminuiu a adesão a VCAM-1 em 24h-48h. Na análise por citometria de fluxo não foram observadas alterações na expressão do CD11a sobre os eosinófilos da medula óssea ou do sangue periférico obtidos de ambos os grupos. Um aumento da expressão do CD11b nos eosinófilos da medula óssea dos controles foi verificada em 48h, enquanto que, neste período, CD11b e CD49d estavam diminuídas nos eosinófilos do sangue. O tratamento com 1400W aumentou a expressão do CD11b dos eosinófilos da medula óssea em 24h e 48h e provocou efeitos contrários nas células do sangue ao diminuir sua expressão em 24h e aumentar em 48h. Do mesmo modo, efeitos inversos do 1400W sobre a CD49d foram detectados no sangue quando reduziu sua expressão em 24h, aumentando-a em 48h. O desafio com OVA provocou em 24h aumento nos níveis de todas citocinas nos pulmões dos controles. Não foram observadas outras variações significativas nos níveis de IFN-y e TNF-a em nenhum dos grupos. A eotaxina mostrou pico de produção em 48h-72 horas nos animais controles, quando o tratamento com 1400W reduziu sua síntese nos pulmões. A IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 estavam aumentadas nos camundongos controles em 24h, sendo que picos de IL-4 e IL-13 foram detectados em 24h e 48h, respectivamente. Níveis elevados de IL-5 foram observados em 24-48h. O tratamento com 1400W reduziu os níveis de IL-4 no pulmão em 24h-48h após o desafio com OVA, assim como os de IL-5 em 48h e de IL-13 em 48h-72h. Somente em 72h o 1400W diminuiu o nível da IL-10 no pulmão. Em conclusão, nossos resultados sugerem que o envolvimento do NO na modulação da secreção de citocinas derivadas dos linfócitos Th2 e da eotaxina nos pulmões, bem como na expressão das moléculas de adesão nos eosinófilos da medula óssea e do sangue periférico, pode influenciar a migração celular para os pulmões dos camundongos alérgicos. O NO produz um efeito temporal na expressão/função do Mac-1, sugerindo ser esta a principal molécula de adesão envolvida no efluxo dos eosinófilos da medula óssea em 24h, enquanto o Mac-1 e o VLA-4 estão envolvidos na mobilização dos eosinófilos do sangue periférico para o pulmão em 48h após o desafio antigênico. / Abstract: The aim of this study was investigated the effectiveness of treatment with 1400W, a selective inhibitor of inducible NOS (iNOS) in in vitro adhesion to VCAM-1 and ICAM-1 and VLA-4, Mac-1 and LFA-1 expression in eosinophils from bone marrow and peripheral blood. The cytokines synthesized by T lymphocytes, Th1 and Th2 cells, was evaluated in lungs homogenates. As a result we found that the eosinophils were increased from 48h after OVA challenge in lungs of untreated mice (controls). Treatment of allergic mice with 1400W caused a reduction in eosinophils infiltration only after 48h. 1400W increased between 24-48h the in vitro adhesion of bone marrow eosinophils to ICAM-1, whereas adhesion to VCAM-1 was decreased after 48h. In the blood eosinophils, 1400W decreased adhesion to VCAM-1 between 24-48h. Flow cytometric analysis showed no significant changes in the expression of CD11a on bone marrow and peripheral blood eosinophils obtained from both groups. An increased expression of CD11b on bone marrow eosinophils of controls was observed after 48h, while on that period, CD11b and CD49d expression were reduced in blood eosinophils. In the bone marrow eosinophils, treatment with 1400W increased CD11b expression in both 24h and 48h, but in the blood cells caused adverse effects by decreasing expression after 24h and increase after 48h. Similarly, the opposite 1400W effect was detected in the blood cells when CD49d expression had been reduced after 24h and increased after 48h. The OVA challenge resulted in increasing the levels of all cytokines in the control lungs after 24h. There were no other significant variations in the IFN-y and TNF-a levels in both groups. In control animals, the eotaxin showed peak production between 48-72h, while 1400W treatment reduced its synthesis in the lungs. IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13 were increased in control mice after 24 hours, with peaks of IL-4 and IL-13 were detected after 24h and 48h, respectively. Elevated levels of IL-5 were observed between 24-48h. Treatment with 1400W reduced the levels of IL-4 in lung between 24h-48h after OVA challenge, as well as IL-5 in 48 hours and IL-13 in 48h-72h. Only after 72h 1400W decreased the level of IL-10 in the lung. In conclusion, our results suggest that the involvement of NO in modulating the secretion of cytokines derived from Th2 lymphocytes and eotaxin in the lungs, as well as in the adhesion molecules expression in bone marrow and peripheral blood eosinophils may influence cell migration to the lungs of allergic mice. NO produces a temporal effect on the expression / function of Mac-1, suggesting that the main adhesion molecule involved in the efflux of bone marrow eosinophils after 24h, while Mac-1 and VLA-4 were involved in the mobilization of peripheral blood eosinophils to the lungs in 48 h after antigen challenge. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Celso Henrique de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T06:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_DanielaReginados_M.pdf: 551270 bytes, checksum: fa93b2a23595a4489633cef3a081bb1b (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: No Brasil, pacientes atópicos com rinite alérgica e/ou asma brônquica apresentam sensibilidade a aeroalérgenos, sobretudo ácaros. Outras potenciais fontes de alérgenos como a traça-de-livro ainda necessitam ser confirmadas como alergênicas e relacionadas a doenças alérgicas respiratórias. O objetivo do estudo foi avaliar a sensibilidade imediata de pacientes atópicos através do teste cutâneo de puntura, a extrato padronizado em Unidades Biológicas de corpo inteiro da traça-de-livro Lepisma saccharina. A padronização do extrato bruto de corpo inteiro de L. saccharina em Unidades Biológicas (UB) foi realizada através da regressão linear dos dados do teste de puntura obtidos em pacientes atópicos e voluntários sadios. O teste cutâneo foi realizado com extratos comerciais de ácaros, epitélios de cão e gato, baratas, poeira domiciliar e os extratos-testes de L. saccharina nas concentrações de 5.000, 10.000 e 25.000 PNU/mL. Após a padronização do extrato da traça, foram realizados novos testes de puntura em novos voluntários para se avaliar a sensibilidade imediata ao extrato na concentração de 100 UB/mL. Na fase de padronização do extrato, participaram 32 atópicos e 11 indivíduos sadios. O tamanho da pápula encontrado equivalente à histamina foi de 29.336 PNU/mL. Na segunda fase, participaram 21 atópicos e 16 voluntários sadios. Houve ainda uma significativa maior positividade aos extratos de D. pteronyssinus, B. tropicalis e Tyrophagus putrescentiae e poeira intradomiciliar no grupo de atópicos que no grupo controle. Encontramos sensibilidade ao extrato padronizado da traça L. saccharina (100 UB/mL) de 14,3% no grupo de paciente atópicos e 8,1% de prevalência global. A sensibilidade ao extrato padronizado de L. saccharina em UB foi considerada leve nos grupo / Abstract: In Brazil, allergic patients with allergic rhinitis and/or asthma present sensibility for several aeroallergens mainly from house dust mites. Other potential sources of allergens like silverfish remain to be investigated as really allergenic and firmly related to respiratory allergic diseases. The aim of this study was investigate by skin prick test the immediate sensitivity to a biological unit-standardized extract of silverfish Lepisma saccharina in allergic patients. The standardization of the crude extract of L. saccharina whole bodies by biological units (BU) was performed with linear regression of skin prick test data from allergic patients and healthy volunteers. Skin prick tests were performed using commercial extracts of mites, cat and dog dander, cockroaches, house dust and the crude-extracts of L. saccharina at 5.000, 10.000 and 25.000 PNU/mL. After standardization, the silverfish extract at 100 BU/mL was prick-tested to evaluate silverfish sensitivity in allergic patients. Thirty-two allergic patients and 11 healthy volunteers were enrolled in silverfish extract standardization test. The histamine equivalent papule area of silverfish extract was calculated at the concentration of 29.336 PNU/mL. To investigate the sensitivity of silverfish standardized extract another 21 allergic patients and 16 healthy volunteers were studied. There were significant higher skin test positive results for D. pteronyssinus, B. tropicalis, Tyrophagus putrescentiae and house dust extracts in allergic patients than controls. The sensitivity of silverfish L. saccharina (100 BU/mL) standardized extract was 14.3% in allergic patients with 8.1% of general prevalence. The sensibility to standardized extract of silverfish in BU was considerate light in allergic patients / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:48:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trevizan_Giovanna_M.pdf: 992041 bytes, checksum: 788bad7f2b885488c459d8cc22f66468 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As reações alérgicas à ferroada de inseto resultam de resposta exacerbada do sistema imune, com produção de elevados níveis de anticorpos IgE alérgeno-específicos e padrão de citocinas Th2. A diferenciação de linfócitos Th2 e a secreção de citocinas por estas células são reguladas pelo fator de transcrição GATA-3. A ligação da IgE ao seu receptor de alta afinidade (Fc?RI) em mastócitos e basófilos, promove a liberação de mediadores inflamatórios. Muitos estudos demonstram a eficácia da imunoterapia específica na dessensibilização e no desenvolvimento de tolerância em indivíduos com quadros graves de hipersensibilidade à ferroada de insetos, sobretudo da classe Hymenoptera. A histamina é o principal mediador liberado durante a resposta alérgica; através da ativação de diferentes receptores (HR1, HR2, HR3 ou HR4) as células do sistema imune podem ser tanto inibidas como estimuladas. Via HR1, a histamina estimula principalmente linfócitos Th1, enquanto inibe linfócitos Th2 via HR2. O receptor 4 desempenha papel central na diferenciação de linfócitos Th2 e também é capaz de modular a produção de citocinas. A liberação de histamina é regulada por fatores de liberação de histamina (HRF), sendo que os HRF dependentes de IgE induzem a liberação de histamina na fase tardia das reações alérgicas. Considerando-se todas essas informações, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos modulatórios da imunoterapia na expressão gênica dos receptores de histamina (HR1, HR2 e HR4), fatores de liberação de histamina (HRF) e cadeia ? do receptor de alta afinidade de IgE, além da expressão protéica do fator de transcrição GATA-3, em células linfomononucleares de pacientes alérgicos ao veneno de abelha. As células foram isoladas de pacientes submetidos à imunoterapia, em diferentes períodos do tratamento (Pré, 1, 3, 6, 12, 18 e 24 meses), após injeção subcutânea, e submetidas à cultura por 72 horas, com estimulo de veneno de abelha a 1 ng/ml. Indivíduos não alérgicos foram estudados como grupo controle. Com objetivo de avaliar a expressão gênica foram realizadas extração de RNA, seguida de síntese de cDNA e PCR, para avaliação da expressão protéica, utilizou-se a técnica de imunofluorescência. A expressão gênica de HR1 e HR4, assim como de HRF e da cadeia gama do Fc?RI foi significativamente reduzida ao final do período analisado. O receptor 2 de histamina não apresentou alterações bem definidas após 24 meses de imunoterapia. O fator de transcrição GATA-3 apresentou diminuição significativa na expressão a nível protéico. Nossos resultados demonstram que a imunoterapia específica ao veneno de abelha foi capaz de modular elementos envolvidos na resposta imune / Abstract: Allergic disease is an abnormal response from the immune system, with high levels of allergen specific IgE antibodies and Th2 pattern of cytokines. Development of Th2 cells and the production of cytokines are regulated by transcription factor GATA-3. Binding of IgE to its high affinity receptor (Fc?RI) in mast cells and basophils induces inflammatory mediators' release. Many studies have shown the efficacy of specific immunotherapy. Histamine is an important mediator in allergy, through activation of distinct histamine receptors (HR1, HR2, HR3 or HR4) in the immune system; cells can be either stimulated or inhibited. Histamine can stimulate, by HR1 receptor, especially Th1 response, and inhibit particularly Th2 cells through HR2 activation. HR4 plays a central role in Th2 polarization and also modulates cytokine profile production. IgE-dependent histamine releasing factors (IgE-HRF) induce histamine release in late phase reaction. In regard of this information, the aim of this study was to evaluate the modulating effects of specific immunotherapy in gene expression of histamine receptors (HR1, HR2 and HR4), histamine releasing factor (HRF), in patients with allergy and the gama chain of Fc?RI, and also GATA-3 protein levels. Bee venom allergic subjects underwent specific bee venom immunotherapy (VIT) in different stages of treatment (Pre, 3, 6, 12, 18 and 24 months) were studied. Peripheral blood mononuclear cells were isolated after subcutaneous venom injection and submitted to culture for 24, 48 and 72 hours stimulated with 1ng/ml of bee venom. In parallel healthy subjects were studied as well. Total RNA extraction, followed by cDNA synthesis and PCR were used to evaluate gene expression; GATA-3 protein expression was analyzed by immunofluorescence assay. Data from all time of cell culture - 24, 48 and 72 hours - were grouped and analyzed. Gene expression from HR1 and HR4 and also HRF and ? chain of Fc?RI were significantly reduced at the end of 24 months of immunotherapy. Histamine receptor 2 didn't show well established alterations. For transcription factor GATA-3 significant decrease at protein level was observed. Together, our results indicate that bee venom specific immunotherapy was able to modulate some of the elements involved in the immune response / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica