As plantas medicinais têm sido amplamente empregadas, constituindo parte das ferramentas terapêuticas utilizadas no controle das mais variadas moléstias humanas. Neste estudo, foi objetivado a verificação das atividades antibacteriana e antiparasitária de extratos aquoso e etanólico de Acanthospermum australe. Os extratos etanólico e aquoso de Acanthospermum australe (Loefl.) O. Kuntze foram obtidos por maceração estática a frio em etanol/água (9:1), e por infusão, em água deionizada, a 90°C, respectivamente. Ambos foram filtrados e os solventes removidos a 40°C, a pressão reduzida. O rendimento do extrato etanólico foi de 12,8% p/p e do extrato aquoso foi de 17,1% p/p. Os extratos secos foram reconstituídos em metanol para obter concentração final de 100 g/mL e 200 g/mL. A atividade antibacteriana dos extratos foi avaliada frente às bactérias Staphylococcus aureus (ATCC 6538P) e Escherichia coli (ATCC 25922), pelo método de difusão em ágar, e a atividade amebicida frente à A. polyphaga (ATCC 30461). O efeito citotóxico dos extratos foi testado em células de mamíferos utilizando brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol2-il]-2,5-difeniltertrazólio (MTT), sendo que ambos apresentaram efeito citotóxico contra células de linhagem VERO (ATCC CCL-81). Foi observada a inibição de crescimento dos microrganismos bacterianos por ambos os extratos, nas concentrações testadas. O extrato etanólico, na concentração de 10 mg/mL, apresentou 100% de letalidade a trofozoítos de A. polyphaga (ATCC 30461) nas concentrações de 10, 5, 2,5, 1,25 e 0,625 mg/mL, em 24 h. Paralelamente, foi realizada a análise fitoquímica dos extratos aquoso e etanólico para a determinação de compostos fenólicos (taninos, flavonóides, ácidos fenólicos e antraquinonas), alcalóides e compostos terpênicos. Os extratos apresentaram perfis qualitativamente semelhantes, caracterizados pela presença de taninos, flavonóides, ácidos fenólicos e compostos terpênicos. / Medicinal plants have been widely employed, constituting part of the therapeutic tools used in the control of various human diseases. In this study, was aimed do verify the antibacterial and amebicidal active evaluation of aqueous and athanolic extracts of Acanthospermum austral. The aqueous and ethanolic extracts of Acanthospermum australe (Loefl.) O. Kuntze were obtained by static maceration in cold ethanol / water (9:1), and infusion in deionized water at 90°C, respectively. Both were filtered and the solvents were removed at 40°C under reduced pressure. The yield of a ethanolic extract was 12.8% p/p and the aqueous extract was 17.1% w/p. The dried extracts were reconstituted in methanol to obtain final concentration of 100 g/mL and 200 g/mL. The antibacterial activity of extracts was evaluated against the bacteria Staphylococcus aureus (ATCC 6538P) and Escherichia coli (ATCC 25922) by agar diffusion method, and the amebic activity against A. Polyphaga (ATCC 30461). The cytotoxic effect of the extracts was tested in mammalian cells using bromide of 3-[4,5-dimethyl-tiazol2-yl]-difeniltertrazólio -2.5 (MTT), both of which showed cytotoxic effect against Vero cell line (ATCC CCL -81). It was observed inhibition of bacterial growth of microorganisms by both extracts at the concentrations tested. The ethanolic extract at a concentration of 10 mg/mL, showed 100% lethality of the trophozoites of A. Polyphaga (ATCC 30461) in concentrations of 10, 5, 2.5, 1.25 and 0.625 mg / mL in 24 hours. In parallel, we performed the phytochemical analysis of aqueous and ethanolic for the determination of phenolic compounds (tannins, flavonoids, phenolic acids and anthraquinones), alkaloids and terpene compounds. The extracts showed qualitatively similar profiles, characterized by the presence of tannins, flavonoids, phenolic acids and terpene compounds.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

As plantas medicinais têm sido amplamente empregadas, constituindo parte das ferramentas terapêuticas utilizadas no controle das mais variadas moléstias humanas. Neste estudo, foi objetivado a verificação das atividades antibacteriana e antiparasitária de extratos aquoso e etanólico de Acanthospermum australe. Os extratos etanólico e aquoso de Acanthospermum australe (Loefl.) O. Kuntze foram obtidos por maceração estática a frio em etanol/água (9:1), e por infusão, em água deionizada, a 90°C, respectivamente. Ambos foram filtrados e os solventes removidos a 40°C, a pressão reduzida. O rendimento do extrato etanólico foi de 12,8% p/p e do extrato aquoso foi de 17,1% p/p. Os extratos secos foram reconstituídos em metanol para obter concentração final de 100 g/mL e 200 g/mL. A atividade antibacteriana dos extratos foi avaliada frente às bactérias Staphylococcus aureus (ATCC 6538P) e Escherichia coli (ATCC 25922), pelo método de difusão em ágar, e a atividade amebicida frente à A. polyphaga (ATCC 30461). O efeito citotóxico dos extratos foi testado em células de mamíferos utilizando brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol2-il]-2,5-difeniltertrazólio (MTT), sendo que ambos apresentaram efeito citotóxico contra células de linhagem VERO (ATCC CCL-81). Foi observada a inibição de crescimento dos microrganismos bacterianos por ambos os extratos, nas concentrações testadas. O extrato etanólico, na concentração de 10 mg/mL, apresentou 100% de letalidade a trofozoítos de A. polyphaga (ATCC 30461) nas concentrações de 10, 5, 2,5, 1,25 e 0,625 mg/mL, em 24 h. Paralelamente, foi realizada a análise fitoquímica dos extratos aquoso e etanólico para a determinação de compostos fenólicos (taninos, flavonóides, ácidos fenólicos e antraquinonas), alcalóides e compostos terpênicos. Os extratos apresentaram perfis qualitativamente semelhantes, caracterizados pela presença de taninos, flavonóides, ácidos fenólicos e compostos terpênicos. / Medicinal plants have been widely employed, constituting part of the therapeutic tools used in the control of various human diseases. In this study, was aimed do verify the antibacterial and amebicidal active evaluation of aqueous and athanolic extracts of Acanthospermum austral. The aqueous and ethanolic extracts of Acanthospermum australe (Loefl.) O. Kuntze were obtained by static maceration in cold ethanol / water (9:1), and infusion in deionized water at 90°C, respectively. Both were filtered and the solvents were removed at 40°C under reduced pressure. The yield of a ethanolic extract was 12.8% p/p and the aqueous extract was 17.1% w/p. The dried extracts were reconstituted in methanol to obtain final concentration of 100 g/mL and 200 g/mL. The antibacterial activity of extracts was evaluated against the bacteria Staphylococcus aureus (ATCC 6538P) and Escherichia coli (ATCC 25922) by agar diffusion method, and the amebic activity against A. Polyphaga (ATCC 30461). The cytotoxic effect of the extracts was tested in mammalian cells using bromide of 3-[4,5-dimethyl-tiazol2-yl]-difeniltertrazólio -2.5 (MTT), both of which showed cytotoxic effect against Vero cell line (ATCC CCL -81). It was observed inhibition of bacterial growth of microorganisms by both extracts at the concentrations tested. The ethanolic extract at a concentration of 10 mg/mL, showed 100% lethality of the trophozoites of A. Polyphaga (ATCC 30461) in concentrations of 10, 5, 2.5, 1.25 and 0.625 mg / mL in 24 hours. In parallel, we performed the phytochemical analysis of aqueous and ethanolic for the determination of phenolic compounds (tannins, flavonoids, phenolic acids and anthraquinones), alkaloids and terpene compounds. The extracts showed qualitatively similar profiles, characterized by the presence of tannins, flavonoids, phenolic acids and terpene compounds.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

As plantas medicinais têm sido amplamente empregadas, constituindo parte das ferramentas terapêuticas utilizadas no controle das mais variadas moléstias humanas. Neste estudo, foi objetivado a verificação das atividades antibacteriana e antiparasitária de extratos aquoso e etanólico de Acanthospermum australe. Os extratos etanólico e aquoso de Acanthospermum australe (Loefl.) O. Kuntze foram obtidos por maceração estática a frio em etanol/água (9:1), e por infusão, em água deionizada, a 90°C, respectivamente. Ambos foram filtrados e os solventes removidos a 40°C, a pressão reduzida. O rendimento do extrato etanólico foi de 12,8% p/p e do extrato aquoso foi de 17,1% p/p. Os extratos secos foram reconstituídos em metanol para obter concentração final de 100 g/mL e 200 g/mL. A atividade antibacteriana dos extratos foi avaliada frente às bactérias Staphylococcus aureus (ATCC 6538P) e Escherichia coli (ATCC 25922), pelo método de difusão em ágar, e a atividade amebicida frente à A. polyphaga (ATCC 30461). O efeito citotóxico dos extratos foi testado em células de mamíferos utilizando brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol2-il]-2,5-difeniltertrazólio (MTT), sendo que ambos apresentaram efeito citotóxico contra células de linhagem VERO (ATCC CCL-81). Foi observada a inibição de crescimento dos microrganismos bacterianos por ambos os extratos, nas concentrações testadas. O extrato etanólico, na concentração de 10 mg/mL, apresentou 100% de letalidade a trofozoítos de A. polyphaga (ATCC 30461) nas concentrações de 10, 5, 2,5, 1,25 e 0,625 mg/mL, em 24 h. Paralelamente, foi realizada a análise fitoquímica dos extratos aquoso e etanólico para a determinação de compostos fenólicos (taninos, flavonóides, ácidos fenólicos e antraquinonas), alcalóides e compostos terpênicos. Os extratos apresentaram perfis qualitativamente semelhantes, caracterizados pela presença de taninos, flavonóides, ácidos fenólicos e compostos terpênicos. / Medicinal plants have been widely employed, constituting part of the therapeutic tools used in the control of various human diseases. In this study, was aimed do verify the antibacterial and amebicidal active evaluation of aqueous and athanolic extracts of Acanthospermum austral. The aqueous and ethanolic extracts of Acanthospermum australe (Loefl.) O. Kuntze were obtained by static maceration in cold ethanol / water (9:1), and infusion in deionized water at 90°C, respectively. Both were filtered and the solvents were removed at 40°C under reduced pressure. The yield of a ethanolic extract was 12.8% p/p and the aqueous extract was 17.1% w/p. The dried extracts were reconstituted in methanol to obtain final concentration of 100 g/mL and 200 g/mL. The antibacterial activity of extracts was evaluated against the bacteria Staphylococcus aureus (ATCC 6538P) and Escherichia coli (ATCC 25922) by agar diffusion method, and the amebic activity against A. Polyphaga (ATCC 30461). The cytotoxic effect of the extracts was tested in mammalian cells using bromide of 3-[4,5-dimethyl-tiazol2-yl]-difeniltertrazólio -2.5 (MTT), both of which showed cytotoxic effect against Vero cell line (ATCC CCL -81). It was observed inhibition of bacterial growth of microorganisms by both extracts at the concentrations tested. The ethanolic extract at a concentration of 10 mg/mL, showed 100% lethality of the trophozoites of A. Polyphaga (ATCC 30461) in concentrations of 10, 5, 2.5, 1.25 and 0.625 mg / mL in 24 hours. In parallel, we performed the phytochemical analysis of aqueous and ethanolic for the determination of phenolic compounds (tannins, flavonoids, phenolic acids and anthraquinones), alkaloids and terpene compounds. The extracts showed qualitatively similar profiles, characterized by the presence of tannins, flavonoids, phenolic acids and terpene compounds.

Bacteriocinas são peptídeos pequenos sintetizados por bactérias que possuem propriedades antimicrobianas. O presente estudo teve por objetivos identificar e caracterizar uma bacteriocina produzida por Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolado de solo da Mata Atlântica, Santa Catarina, Brasil. A produção da substância antimicrobiana tem início na fase exponencial de crescimento e sua atividade máxima ocorre na fase estacionária. O efeito do cocultivo de B. amyloliquefaciens com diferentes bactérias na produção do antimicrobiano foi investigado. O cultivo de células de Escherichia coli intactas ou inativadas pelo calor com a cepa produtora aumentou a síntese da substância antimicrobiana. A bacteriocina LBM 5006 apresentou amplo espectro de ação, produzindo atividade antagonista contra bactérias, fungos e amebas patogênicas. O modo de ação contra células de Listeria monocytogenes e Paenibacillus larvae foi bactericida e bacteriolítico. Atividade esporicida foi observada contra esporos de P. larvae após tratamento com 1600 UA mL-1. Efeitos amebistático e amebicida contra trofozoítos de Acanthamoeba polyphaga com a consequente lise celular foram observados. A bacteriocina não teve efeito inibitório em células Vero nas concentrações que foram efetivas contra as amebas. A substância antimicrobiana foi isolada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de gel filtração e extração com 1-butanol. O espectro ultravioleta foi típico de um polipeptídeo e o infravermelho indicou a presença de ligações peptídicas e grupamentos acil na sua estrutura. Análises por espectroscopia de massas indicaram que B. amyloquefaciens LBM 5006 produziu dois peptídeos antimicrobianos, com 1058 Da e 1464 Da, correspondentes a peptídeos tipo-iturina e tipo-fengicina, respectivamente. / Bacteriocins are small peptides synthesized by bacteria which have antimicrobiall properties. This study aimed to identify and characterize a bacteriocin produced by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolated from soil of Mata Atlântica, Santa Catarina, Brazil. It has been observed that the antimicrobial substance production starting at the exponencial grown phase and maximum activity occur at stationary phase. The effect of different bacteria on the production of antimicrobial activity by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 was investigate. It was concluded that the presence of intact or thermally inactivated cells of Escherichia coli enhanced the synthesis of antimicrobial peptides by B. amyloliquefaciens strain. Bacteriocin LBM 5006 showed broad spectrum of action, producing antagonistic activity against bacteria, fungi and pathogenic amoebas. The mode of action against Listeria monocytogenes and Paenibacillus larvae was bactericidal and bacteriolytic. Sporicidal activity was observed against P. larvae spores after treatment whit 1600 AU mL-1. Amoebicidal and amoebistatic effects were detected against throphozoites of Acanthamoeba poliphaga and cell lysis. The bacteriocin had no inhibitory effect on Vero cells at concentrations that were effective against amoebas.The antimicrobial substance was isolated by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography and 1-butanol extraction.The ultraviolet spectrum was typical of a polypeptide and the infrared spectrum indicates the presence of peptide bonds and acyl group(s) in its structure. Mass spectroscopy analysis indicated that B. amyloliquefaciens LBM 5006 produces two antimicrobial peptides, with main peaks at m/z 1058 Da and 1464 Da, corresponding to iturinlike and fengycin-like peptides, respectively.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-15T17:14:57Z No. of bitstreams: 1 Gustavo Santos. Padronização de condições experimentais.2011.pdf: 3612850 bytes, checksum: 6681f5cbe674b715c7de996edc26d29d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-15T17:14:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gustavo Santos. Padronização de condições experimentais.2011.pdf: 3612850 bytes, checksum: 6681f5cbe674b715c7de996edc26d29d (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O protozoário, Entamoeba histolytica, constitui a etiologia de milhares de óbitos anuais e, em muitos casos, a falta de saneamento, o grau de instrução e a falta de higiene da população podem favorecer a transmissão e a manutenção desses patógenos em uma comunidade. Por causar tantas mortes e problemas na saúde pública trabalhos que facilitem o estudo deste parasito fazem-se importantes. Uma vez que a padronização de cultivo de E. histolytica em placas de poços vai Existem indicações que mostram que este parasito pode se tornar resistente ao medicamento utilizado no tratamento desta protozoose, por isso, a busca por novas substâncias que possam atuar como tratamento alternativo é de suma importância. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi otimizar e padronizar o cultivo e a contagem deste parasito in vitro, além de identificar substâncias com potencial amebicida, que possam ser utilizadas no futuro como fármacos no tratamento da amebíase, sugerindo também uma via possível de ação das substâncias que apresentaram os melhores efeitos. Para tanto, os trofozoítos foram cultivados em placas de 24 poços sobre diferentes condições, quatro métodos de contagem de células foram comparados e 74 (setenta e quatro) substâncias foram testadas. Destas 13 (treze) apresentaram uma inibição na proliferação axênica dos trofozoítos de cerca de 70%. Destas, três compostos foram estudados em mais detalhes, os mesoiônicos derivados da piperina (as MII, MVI e MIX). Estas substâncias pertencem ao grupo dos compostos mesoiônicos, substâncias formadas por um anel heteroatômico composto por nitrogênio, carbono e enxofre, capazes de atravessar membranas e interagir com biomoléculas. Além disso, alguns mesoiônicos são doadores de radicais NO e tais grupamentos são capazes de induzir uma morte celular semelhante à apoptose em E. histolytica, como sugerido pela expressão de fosfatidil-serina revelada por anexina-V. Confirmando os resultados descritos na literatura, estas substâncias foram capazes de induzir uma morte programada, porém observações da ultra-estrutura, tais como figuras de mielina, das células tratadas apontaram para autofagia que também foi evidenciada por testes com MDC gerando apoptose tipo II, que pode ser iniciada pela presença de ROS, que neste caso foram por DCFDA. / The protozoan parasite, Entamoeba histolytica, is the etiology of thousands of deaths annually and in many cases lack of sanitation, education level and poor hygiene of the population may facilitate the transmission and maintenance of these pathogens in a community. There are indications showing that this parasite may become resistant to the drug used in treatment of protozoal disease, so the search for new substances that can act as an alternative treatment is of paramount importance. Therefore, the aim of this study was to optimize and standardize the cultivation and enumeration of this parasite in vitro, and identify substances with potential amebicidal, which can be used in future as drugs for the treatment of amoebiasis, suggesting a possible route of action of the compounds that showed the greatest effects. For this purpose, trophozoites were cultured in 24-well plates under different conditions, four methods of cell count were compared and 74 (seventy four) substances were tested. Of these thirteen (13) showed an inhibition in the proliferation of axenic trophozoites of about 70%. Of these, three compounds were studied in more detail, the mesoionic derivatives of piperine (the MII, MVI and MIX). These substances belong to the group of mesoionic compounds, formed by a heteroatomic ring composed of nitrogen, carbon and sulfur, able to traverse membranes and interact with biomolecules. Moreover, some donors are mesoionic radicals NO and such groups are able to induce a cell death similar to apoptosis in E. histolytica, as suggested by the expression of phosphatidyl-serine revealed by annexin-V. Confirming the results described in the literature, these substances were capable to inducing a programmed death, but observations of the ultra-structure, such as myelin figures, treated cells pointed out that autophagy was also evidenced by tests with MDC generating apoptosis type II can be initiated by the presence of ROS, which in this case were by DCFDA.

Bacteriocinas são peptídeos pequenos sintetizados por bactérias que possuem propriedades antimicrobianas. O presente estudo teve por objetivos identificar e caracterizar uma bacteriocina produzida por Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolado de solo da Mata Atlântica, Santa Catarina, Brasil. A produção da substância antimicrobiana tem início na fase exponencial de crescimento e sua atividade máxima ocorre na fase estacionária. O efeito do cocultivo de B. amyloliquefaciens com diferentes bactérias na produção do antimicrobiano foi investigado. O cultivo de células de Escherichia coli intactas ou inativadas pelo calor com a cepa produtora aumentou a síntese da substância antimicrobiana. A bacteriocina LBM 5006 apresentou amplo espectro de ação, produzindo atividade antagonista contra bactérias, fungos e amebas patogênicas. O modo de ação contra células de Listeria monocytogenes e Paenibacillus larvae foi bactericida e bacteriolítico. Atividade esporicida foi observada contra esporos de P. larvae após tratamento com 1600 UA mL-1. Efeitos amebistático e amebicida contra trofozoítos de Acanthamoeba polyphaga com a consequente lise celular foram observados. A bacteriocina não teve efeito inibitório em células Vero nas concentrações que foram efetivas contra as amebas. A substância antimicrobiana foi isolada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de gel filtração e extração com 1-butanol. O espectro ultravioleta foi típico de um polipeptídeo e o infravermelho indicou a presença de ligações peptídicas e grupamentos acil na sua estrutura. Análises por espectroscopia de massas indicaram que B. amyloquefaciens LBM 5006 produziu dois peptídeos antimicrobianos, com 1058 Da e 1464 Da, correspondentes a peptídeos tipo-iturina e tipo-fengicina, respectivamente. / Bacteriocins are small peptides synthesized by bacteria which have antimicrobiall properties. This study aimed to identify and characterize a bacteriocin produced by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolated from soil of Mata Atlântica, Santa Catarina, Brazil. It has been observed that the antimicrobial substance production starting at the exponencial grown phase and maximum activity occur at stationary phase. The effect of different bacteria on the production of antimicrobial activity by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 was investigate. It was concluded that the presence of intact or thermally inactivated cells of Escherichia coli enhanced the synthesis of antimicrobial peptides by B. amyloliquefaciens strain. Bacteriocin LBM 5006 showed broad spectrum of action, producing antagonistic activity against bacteria, fungi and pathogenic amoebas. The mode of action against Listeria monocytogenes and Paenibacillus larvae was bactericidal and bacteriolytic. Sporicidal activity was observed against P. larvae spores after treatment whit 1600 AU mL-1. Amoebicidal and amoebistatic effects were detected against throphozoites of Acanthamoeba poliphaga and cell lysis. The bacteriocin had no inhibitory effect on Vero cells at concentrations that were effective against amoebas.The antimicrobial substance was isolated by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography and 1-butanol extraction.The ultraviolet spectrum was typical of a polypeptide and the infrared spectrum indicates the presence of peptide bonds and acyl group(s) in its structure. Mass spectroscopy analysis indicated that B. amyloliquefaciens LBM 5006 produces two antimicrobial peptides, with main peaks at m/z 1058 Da and 1464 Da, corresponding to iturinlike and fengycin-like peptides, respectively.

Bacteriocinas são peptídeos pequenos sintetizados por bactérias que possuem propriedades antimicrobianas. O presente estudo teve por objetivos identificar e caracterizar uma bacteriocina produzida por Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolado de solo da Mata Atlântica, Santa Catarina, Brasil. A produção da substância antimicrobiana tem início na fase exponencial de crescimento e sua atividade máxima ocorre na fase estacionária. O efeito do cocultivo de B. amyloliquefaciens com diferentes bactérias na produção do antimicrobiano foi investigado. O cultivo de células de Escherichia coli intactas ou inativadas pelo calor com a cepa produtora aumentou a síntese da substância antimicrobiana. A bacteriocina LBM 5006 apresentou amplo espectro de ação, produzindo atividade antagonista contra bactérias, fungos e amebas patogênicas. O modo de ação contra células de Listeria monocytogenes e Paenibacillus larvae foi bactericida e bacteriolítico. Atividade esporicida foi observada contra esporos de P. larvae após tratamento com 1600 UA mL-1. Efeitos amebistático e amebicida contra trofozoítos de Acanthamoeba polyphaga com a consequente lise celular foram observados. A bacteriocina não teve efeito inibitório em células Vero nas concentrações que foram efetivas contra as amebas. A substância antimicrobiana foi isolada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de gel filtração e extração com 1-butanol. O espectro ultravioleta foi típico de um polipeptídeo e o infravermelho indicou a presença de ligações peptídicas e grupamentos acil na sua estrutura. Análises por espectroscopia de massas indicaram que B. amyloquefaciens LBM 5006 produziu dois peptídeos antimicrobianos, com 1058 Da e 1464 Da, correspondentes a peptídeos tipo-iturina e tipo-fengicina, respectivamente. / Bacteriocins are small peptides synthesized by bacteria which have antimicrobiall properties. This study aimed to identify and characterize a bacteriocin produced by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolated from soil of Mata Atlântica, Santa Catarina, Brazil. It has been observed that the antimicrobial substance production starting at the exponencial grown phase and maximum activity occur at stationary phase. The effect of different bacteria on the production of antimicrobial activity by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 was investigate. It was concluded that the presence of intact or thermally inactivated cells of Escherichia coli enhanced the synthesis of antimicrobial peptides by B. amyloliquefaciens strain. Bacteriocin LBM 5006 showed broad spectrum of action, producing antagonistic activity against bacteria, fungi and pathogenic amoebas. The mode of action against Listeria monocytogenes and Paenibacillus larvae was bactericidal and bacteriolytic. Sporicidal activity was observed against P. larvae spores after treatment whit 1600 AU mL-1. Amoebicidal and amoebistatic effects were detected against throphozoites of Acanthamoeba poliphaga and cell lysis. The bacteriocin had no inhibitory effect on Vero cells at concentrations that were effective against amoebas.The antimicrobial substance was isolated by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography and 1-butanol extraction.The ultraviolet spectrum was typical of a polypeptide and the infrared spectrum indicates the presence of peptide bonds and acyl group(s) in its structure. Mass spectroscopy analysis indicated that B. amyloliquefaciens LBM 5006 produces two antimicrobial peptides, with main peaks at m/z 1058 Da and 1464 Da, corresponding to iturinlike and fengycin-like peptides, respectively.