Orientador: Antonio Celso Pezzato / Resumo: Este estudo tem por objetivo avaliar se a metodologia de isótopos estáveis convalida e acrescenta informações adicionais às obtidas com a metodologia convencional de dose e resposta de em estudos de exigências nutricionais em frangos de corte. O estudo presente no Capítulo II avaliou o período que compreendeu de 1 a 20 dias de idade e, foi realizado um ensaio experimental aplicando-se a metodologia de dose e resposta outro com a de diluição isotópica. Os ensaios foram em delineamento inteiramente casualisado e em ambos, foram utilizadas dietas experimentais seguindo as recomendações propostas por Rostagno et al. (2011) exceto em lisina digestível. As dietas foram balanceadas a base de plantas do ciclo fotossintético C3 e consistiram em: 100Lys (1,17% de lisina, seguindo a recomendação de Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1,01% de lisina); 90Lys (1,06% de lisina); 95Lys (1,11% de lisina); 105Lys (1,23% de lisina); 110Lys (1,29% de lisina) e 115Lys (1,35% de lisina digestível). No ensaio com aplicação da técnica de dose-resposta avaliou-se desempenho e rendimento de carcaça e no ensaio que foi utilizado técnica dos isótopos estáveis, foi avaliado o turnover de 13C do fígado, tíbia, músculo do peito e da coxa. Para desempenho foi observado diferença significativa para consumo de ração (P<0,013), com maior consumo para os frangos do tratamento 100Lys e menor para 95Lys. As aves do tratamento 105Lys (P<0,007) foi o que apresentou maior rendimento de carcaça, porém quando avaliado e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aims to evaluate and validate the methodology of stable isotopes and adds additional information to those obtained with conventional methodology dose and response in studies of nutrient requirements of broilers from 1 to 20 days of age fed with different levels of lysine digestible. We conducted a trial test using the dose response methodology and another with the isotopic dilution. The tests were completely randomized design and in both the diets followed the recommendations proposed by Rostagno et al. (2011) except lysine. Diets were formulated based on the plants photosynthetic cycle C3 and consisted of: 100Lys (1.17% lysine, according to the recommendation of Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1.01% lysine); 90Lys (1.06% lysine); 95Lys (1.11% lysine); 105Lys (1.23% lysine); 110Lys (1.29% lysine) and 115Lys (1.35% digestible lysine). In the assay with dose-response technique, performance and carcass yield were evaluated and the assay technique of stable isotopes was evaluated carbon-13 turnover in the liver, tibia, breast and thigh muscle. Performance analysis showed a significant difference only for feed intake (P<0,013), with higher consumption for 100Lys treatment and lower for 95Lys. The 105Lys treatment showed the highest carcass yield (P<0,007), but when measured in terms of absolute weight, there was a heavier weight for carcass (P<0,001), breast (P<0,001) and thigh (P<0,027) for 115Lys treatment and, the heavier weight for drumstick (P<0,001) for105Lys trea... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Objetivou-se avaliar o efeito da suplementação de um complexo enzimático, composto principalmente por endo 1,4 xilanase e endo 1,3(4) β-glucanases (CE), sobre o desempenho produtivo, a digestibilidade de aminoácidos (AA) e a utilização da energia em frangos de corte. Foram alojados 2.016 frangos de corte machos Cobb x Cobb 500 de um dia de idade em 72 boxes experimentais. As aves foram distribuídas em delineamento inteiramente casualizado com 9 tratamentos, 8 repetições e 28 aves por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de uma dieta controle, formulada com níveis usuais de energia metabolizável aparente (EMA) e aminoácidos digestíveis (AA dig.) sem a inclusão do CE; e 8 dietas com reduções de EMA (-80 e -120 kcal/kg) e de AA dig. (-3% e 6%), suplementadas ou não com 50 mg/kg do CE. Foi utilizado um programa alimentar de 3 fases: inicial (1 a 21 d), crescimento (22 a 35 d) e final (36 a 42 d). Todas as dietas foram formuladas a base de milho e farelo de soja e com 1% de Celite, utilizado como indicador indigestível. Ganho de peso, consumo de ração e conversão alimentar corrigida para mortalidade (CA) foram avaliados aos 21, 35 e 42 d. Nos dias 21 e 42, 4 aves por unidade experimental foram sacrificadas para coleta de conteúdo ileal e posterior determinação da energia digestivel ileal (EDI) e da digestibilidade de AA. Os dados foram submetidos à análise de variância e, quando significativas, as médias foram comparadas pelo teste de Student-Newman-Keuls a 5% de significância. Contrastes ortogonais foram realizados entre os tratamentos com reduções nutricionais com e sem adição do CE. Frangos alimentados com dietas com reduções de energia e de AA dig. sem a adição do CE apresentaram maior CA e menor EDI quando comparados aos frangos que receberam a suplementação do CE. A suplementação do CE nas dietas aumentou a digestibilidade total de AA aos 21 d, porém não houve efeito aos 42 dias. A maior liberação de energia proporcionada pelo CE foi observada aos 21 d em frangos de corte alimentados com dietas com -120 kcal/kg AME e -6% AA dig., sendo 5,8% maior quando comparados aos alimentados com a dieta análoga sem enzima. Conclui-se que a adição do CE melhorou o desempenho produtivo e resultou em aumento da digestibilidade de AA e do aproveitamento da energia em frangos de corte aos 21 e aos 42 d. / The objective of this study was to evaluate the effect of supplementation of an enzyme complex, composed of endo 1,4 xylanase and endo 1,3 (4) β-glucanases (EC), on the productive performance, amino acid digestibility (AA) and the use of energy in broilers. A total of 2,016 one-day-old Cobb x Cobb 500 male broilers were allocated in 72 floor pens. Chicks were distributed into 9 treatments with 8 replicates of 28 birds each in a completely randomized design. Treatments consisted of a control diet formulated with usual apparent metabolizable energy (AME) and nutrient levels without enzyme supplementation as well as 8 diets having reductions in formulated AME (-80 and -120 kcal/kg) and digestible amino acids (dig. AA; -3 and -6%) supplemented or not with 50 mg/kg of the supplemental enzyme complex. A 3 phases feeding program was used: Starter (1 to 21 d), Grower (22 to 35 d) and Finisher (36 to 42 d). All diets were corn-soybean meal based with 1% of Celite, used as marker. Body weight gain, feed intake and feed conversion corrected for the weight of dead birds (FCR) were evaluated at 21, 35 and 42 d. On days 21 and 42, four birds per experimental unit were sacrificed for ileal content collection and subsequent determination of ileal digestible energy (IDE) and AA digestibility. Data were submitted to analysis of variance and, when significant, the means were compared by the Student-Newman-Keuls test at 5% significance. Orthogonal contrasts were performed between treatments with nutritional reductions with and without EC addition. Diets with AME and dig. AA reductions without enzyme had higher FCR and lower IDE (P < 0.05). The supplemental enzyme increased total AA digestibility at 21 d; however, no effects were observed at 42 d. The highest energy improvement provided by the supplemental enzyme was observed at 21 d on broilers fed diets with -120 kcal/kg AME and -6% dig. AA, being 5.8% higher when compared to those fed the analogous diet without enzyme. Summarizing, the addition of EC led to improvements on growth performance, digestibility of AA and energy utilization on broilers at 21 and 42 d.

Esta tese foi realizada objetivando comparar 4 programas alimentares, em dietas à base de milho e farelo de soja, formuladas com ou sem restrição de proteína bruta (PB), suplementadas ou não com L-Val e L-Ile, e usando diferentes níveis de lisina digestível (dig.). Os programas alimentares (PRG) foram: PRG 1, PB limitada a um mínimo (22,4, 21,1, 19,8, 18,4% para as fases pré-inicial, inicial, crescimento e final, respectivamente, com relações de AA:Lis definidos apenas para Met+Cis (0,72) e Tre (0,65); PRG 2, a PB não foi restrita e as relações estendidas para Val (0,77) e Ile (0,67); PRG 3, mesmas restrições do PRG 2 e suplementadas com L-Val; PRG 4, mesmas restrições do PRG 3, e suplementadas com L-Ile. Dois experimentos foram realizados, um com 1.800 e outro com 4.800 pintos machos Cobb x Cobb 500 de 1 dia de idade. No primeiro experimento, as rações foram formuladas usando os 4 PRG e níveis de Lis dig. de 1,324%, 1,217%, 1,095% e 1,006% ou 5% maiores, para cada fase, totalizando 8 tratamentos e 9 repetições cada. Para o segundo experimento, os 4 PRG foram utilizados até 1-21 d, totalizando 4 tratamentos com 48 repetições. E de 22 a 42 dias, cada PRG foi subdividido nos 4 PRG, passando cada PRG da fase anterior a receber todos os 4 PRG para as fases de crescimento e final, totalizando 16 tratamentos com 12 repetições cada. Não houve interação entre os tratamentos em ambos os experimentos, com exceção para o ganho de peso (GP) e conversão alimentar (CA) de 36 a 43d, no primeiro experimento, onde aves alimentadas com PRG 2 demonstraram melhorias no GP e CA quando alimentadas com um aumento de 5% no nível de Lis. Também, o GP e a CA acumulados aos 35 e 43d foram melhores quando as aves foram alimentadas com o PRG 2, sem diferença estatística para o PRG 3 e 4. Um aumento em 5% no nível de Lis dig. resultou na melhoria da CA acumulativa aos 43d. A gordura abdominal, como porcentagem da carcaça eviscerada aos 43d, foi maior para as aves alimentadas com a PRG 1. No segundo experimento, as aves alimentadas com PRG 2 tiveram melhor CA de 22 a 42d e de 1 a 42d, mas sem diferença estatística para os PRG 3 e 4. As aves alimentadas com PGR 1 de 1 a 42d apresentou o menor GP e o pior CA sem diferenças entre os PGR 2 e 3, e os PGR 3 e 4, respectivamente. Os dados do presente estudo demonstram que a suplementação de dietas para frangos de corte com fontes sintéticas dos cinco primeiros AA limitantes permitiram resultados de desempenho semelhantes a uma dieta com PB restrita a um valor mínimo. / This thesis was carried out to compare four corn-soy feeding programs formulated with or without crude protein (CP) restrictions supplemented with or without L-Val and L-Ile, and using different digestible (dig.) Lys levels. Feeding programs (PRG) were: PRG 1, CP was restricted to a minimum (22.4, 21.1, 19.8, 18.4% for pre starter, starter, grower and finisher phases, respectively) with AA to Lys ratios set only for TSAA (0.72) and Thr (0.65); PRG 2, CP was not restricted while minimum ratios were also extended to Val (0.77) and Ile (0.67); PRG 3, restrictions were as in PRG 2 but with L-Val added; PRG 4, restrictions were as in PRG 3, but with L-Ile added. For this two experiments were conducted, one using 1,800 and the other using 4,800 oneday- old Cobb 500 male broiler chicks. For the first experiment, feeds had formulated using the 4 PRG and dig. Lys as 1.324%, 1.217%, 1.095% and 1.006% or 5% higher, for each phase, totaling 8 treatments with 9 replicates each. For the second experiment, the 4 PRG were used from 1 to 21 d, totaling 4 treatments with 48 replicates. From 22 to 42d, each PRG was subdivided in 4 PRG having the same rational as it was done to 21d, where each of the 4 PRG began receiving all 4 PRG for grower and finisher phases, totaling 16 treatments with 12 replicates each. No interaction was found between treatments in both experiments, with one exception for body weight gain (BWG) and feed conversion ratio (FCR) from 36 to 43d, in the first experiment, with birds fed PRG 2 demonstrating improvements in BWG and FCR when fed the 5% increasing in dig. Lys. And also, cumulative BWG and FCR at 35 and 43d and in each individual feeding phases showed broilers from PRG 2 having the best BWG and FCR; however, mean separations using Tukey showed no difference from birds fed PRG 3 and 4. Feeding a dietary program with 5% increase in dig. Lys resulted in improvement in cumulative FCR at 43d. Abdominal fat, as a percentage of the eviscerated carcass at 43d, was highest for birds fed the PRG 1. For the second experiment, birds fed with PRG 2 led to the best FCR from 22 to 42d and from 1 to 42d, but without statistical difference from PRG 3 and 4. Birds fed PGR 1 from 1 to 42d showed the lowest BWG and the highest FCR without statistical differences from PGR 2 and 3 and PGR 3 and 4, respectively. Data from the current study demonstrate that the supplementation of broiler diets with crystalline sources of the first five limiting AA allowed performance results similar to those produced when CP is restricted to a minimum.

O aumento do custo das matérias primas para produção de rações e a crescente preocupação com o meio ambiente têm alavancado diversos estudos com enzimas exógenas adicionadas na alimentação de aves. No presente estudo, uma protease foi adicionada em dietas de frangos de corte formuladas com milho, farelo de soja e farinha de carne e ossos. Utilizou-se um total de 1764 pintos de 1 dia de idade machos Ross X Ross 308 alojados em 63 boxes, com 28 aves cada. Estas aves foram divididas em sete tratamentos, com nove repetições cada. O programa alimentar teve uma dieta Inicial do alojamento até 21 d (2915 kcal EM/kg. 21,5% PB) e uma dieta crescimento até 40 d (3000 kcal EM/kg. 19,0% PB). As dietas foram suplementadas com 0, 100, 200, 400, 800, 1600 g/ton de um mono-componente enzimático proteolítico. Dióxido de titânio (1 kg/ton) foi adicionado como um marcador indigestível na dieta na última semana. Os tratamentos foram distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado. Aos 40 d, 8 aves de cada repetição foram retiradas aleatoriamente e sacrificadas após insensibilização elétrica. Estas aves foram processadas e tiveram seu conteúdo ileal coletado e homogeneizado dentro de cada repetição para análise de aminoácidos. Não houve resposta significativa para ganho de peso corporal, no entanto, conversão alimentar apresentou uma melhora linear (p 0.05) de acordo com o aumento da concentração enzimática na dieta. A análise de contraste entre as aves alimentadas ou não com a protease apresentou uma melhora significativa da uniformidade do peso corporal aos 40 d nas aves suplementadas com a protease (p 0,05). Além disso, aves alimentadas protease mostraram melhora significativa (p 0,05) na digestibilidade de met e his em 2,6 e 2,1 %, respectivamente. / Increased costs of feedstuffs for animal production and growing concerns with the environment have been fuelling studies with exogenous enzymes added to poultry feeds. In the present study a protease was added to broiler diets formulated with corn. soybean meal and meat and bone meal. A total of 1,764 male Ross X Ross 308 broiler chicks were placed in 63 floor pens. 28 in each. Birds were divided into seven treatments with nine replications each. The feeding program had a starter from placement to 21 d (2,915 kcal ME/Kg. 21.5% CP) and a grower diets to 40 d (3000 Kcal ME/kg. 19.0% CP). Diets were supplemented with 0, 100, 200, 400, 800 e 1,600 g/ton of a mono component protease. Titanium dioxide was added as an indigestible maker in the last week’s diet at 1 kg/ton. Treatments were distributed in a complete randomized design. At 40 d. 8 broilers were randomly taken from each pen and sacrificed after electrical stunning. Ileal contents were collected from each processed bird and pooled by pen for amino acid analyses. There was no significant response for body weight gain; however. FCR was linearly improved (p 0.05) as enzyme was gradually increased in the diets. The contrast analysis between birds fed or not with the protease demonstrated significant improvement in body weight uniformity at 40 d for those fed the protease (p 0.05). Also. birds fed any level of the protease showed significant (p 0.05) improvements in the digestibility of methionine and histidine by 2.6 and 2.1 %. respectively.

Esta tese foi realizada objetivando comparar 4 programas alimentares, em dietas à base de milho e farelo de soja, formuladas com ou sem restrição de proteína bruta (PB), suplementadas ou não com L-Val e L-Ile, e usando diferentes níveis de lisina digestível (dig.). Os programas alimentares (PRG) foram: PRG 1, PB limitada a um mínimo (22,4, 21,1, 19,8, 18,4% para as fases pré-inicial, inicial, crescimento e final, respectivamente, com relações de AA:Lis definidos apenas para Met+Cis (0,72) e Tre (0,65); PRG 2, a PB não foi restrita e as relações estendidas para Val (0,77) e Ile (0,67); PRG 3, mesmas restrições do PRG 2 e suplementadas com L-Val; PRG 4, mesmas restrições do PRG 3, e suplementadas com L-Ile. Dois experimentos foram realizados, um com 1.800 e outro com 4.800 pintos machos Cobb x Cobb 500 de 1 dia de idade. No primeiro experimento, as rações foram formuladas usando os 4 PRG e níveis de Lis dig. de 1,324%, 1,217%, 1,095% e 1,006% ou 5% maiores, para cada fase, totalizando 8 tratamentos e 9 repetições cada. Para o segundo experimento, os 4 PRG foram utilizados até 1-21 d, totalizando 4 tratamentos com 48 repetições. E de 22 a 42 dias, cada PRG foi subdividido nos 4 PRG, passando cada PRG da fase anterior a receber todos os 4 PRG para as fases de crescimento e final, totalizando 16 tratamentos com 12 repetições cada. Não houve interação entre os tratamentos em ambos os experimentos, com exceção para o ganho de peso (GP) e conversão alimentar (CA) de 36 a 43d, no primeiro experimento, onde aves alimentadas com PRG 2 demonstraram melhorias no GP e CA quando alimentadas com um aumento de 5% no nível de Lis. Também, o GP e a CA acumulados aos 35 e 43d foram melhores quando as aves foram alimentadas com o PRG 2, sem diferença estatística para o PRG 3 e 4. Um aumento em 5% no nível de Lis dig. resultou na melhoria da CA acumulativa aos 43d. A gordura abdominal, como porcentagem da carcaça eviscerada aos 43d, foi maior para as aves alimentadas com a PRG 1. No segundo experimento, as aves alimentadas com PRG 2 tiveram melhor CA de 22 a 42d e de 1 a 42d, mas sem diferença estatística para os PRG 3 e 4. As aves alimentadas com PGR 1 de 1 a 42d apresentou o menor GP e o pior CA sem diferenças entre os PGR 2 e 3, e os PGR 3 e 4, respectivamente. Os dados do presente estudo demonstram que a suplementação de dietas para frangos de corte com fontes sintéticas dos cinco primeiros AA limitantes permitiram resultados de desempenho semelhantes a uma dieta com PB restrita a um valor mínimo. / This thesis was carried out to compare four corn-soy feeding programs formulated with or without crude protein (CP) restrictions supplemented with or without L-Val and L-Ile, and using different digestible (dig.) Lys levels. Feeding programs (PRG) were: PRG 1, CP was restricted to a minimum (22.4, 21.1, 19.8, 18.4% for pre starter, starter, grower and finisher phases, respectively) with AA to Lys ratios set only for TSAA (0.72) and Thr (0.65); PRG 2, CP was not restricted while minimum ratios were also extended to Val (0.77) and Ile (0.67); PRG 3, restrictions were as in PRG 2 but with L-Val added; PRG 4, restrictions were as in PRG 3, but with L-Ile added. For this two experiments were conducted, one using 1,800 and the other using 4,800 oneday- old Cobb 500 male broiler chicks. For the first experiment, feeds had formulated using the 4 PRG and dig. Lys as 1.324%, 1.217%, 1.095% and 1.006% or 5% higher, for each phase, totaling 8 treatments with 9 replicates each. For the second experiment, the 4 PRG were used from 1 to 21 d, totaling 4 treatments with 48 replicates. From 22 to 42d, each PRG was subdivided in 4 PRG having the same rational as it was done to 21d, where each of the 4 PRG began receiving all 4 PRG for grower and finisher phases, totaling 16 treatments with 12 replicates each. No interaction was found between treatments in both experiments, with one exception for body weight gain (BWG) and feed conversion ratio (FCR) from 36 to 43d, in the first experiment, with birds fed PRG 2 demonstrating improvements in BWG and FCR when fed the 5% increasing in dig. Lys. And also, cumulative BWG and FCR at 35 and 43d and in each individual feeding phases showed broilers from PRG 2 having the best BWG and FCR; however, mean separations using Tukey showed no difference from birds fed PRG 3 and 4. Feeding a dietary program with 5% increase in dig. Lys resulted in improvement in cumulative FCR at 43d. Abdominal fat, as a percentage of the eviscerated carcass at 43d, was highest for birds fed the PRG 1. For the second experiment, birds fed with PRG 2 led to the best FCR from 22 to 42d and from 1 to 42d, but without statistical difference from PRG 3 and 4. Birds fed PGR 1 from 1 to 42d showed the lowest BWG and the highest FCR without statistical differences from PGR 2 and 3 and PGR 3 and 4, respectively. Data from the current study demonstrate that the supplementation of broiler diets with crystalline sources of the first five limiting AA allowed performance results similar to those produced when CP is restricted to a minimum.

Orientador: Prof. Dr. Luciano Puzer / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2018. / Serpinas sao proteinas inibidoras de serino-proteases, responsaveis pelo controle dos mais diversos processos fisiologicos e que cujo mecanismo de inibicao consite em formar um complexo covalente com a enzima alvo, em um processo de inibicao irreversivel. A alca de centro reativo (RCL) e responsavel por interagir com a protease, mimetizando um substrato, e quando clivada se insere como uma ¿À-fita no interior da serpina, trazendo a protease e causando uma distorcao no seu sitio ativo. Como as serpinas forma ligacoes covalentes com seus alvos durante a inibicao, essas proteinas tem sido utilizadas para o estudo do mecanismo de hidrolise das serino-proteases. No entanto, elas tambem oferecem a possibilidade do desenvolvimento de novas drogas contra enzimas relacionadas com patologias, como pode ser o caso da Vioserpina, uma serpina bacteriana capaz de inibir serino-proteases do tipo tripsina-like como a calicreina tecidual humana 5. Encontrar uma maneira de produzir uma Vioserpina fluorescente pode resultar no desenvolvimento de uma poderosa ferramenta para moniotramento e controle dessa e outras enzimas envolvidas com processos patologicos, como o antigeno prostatico especifico (PSA). Dessa maneira, realizamos mutacoes pontuais no gene da Vioserpina para a incorporacao do aminoacido cumarinico via par ortogonal tRNA/aaRS por supressao do codon ambar de parada. O aminoacido cumarinico e um aminoacido nao-canonico capaz de emitir fluorescencia na comprimento de onda de 450 nm quando excitado a 363 nm, permitindo o facil monitoramento e deteccao de uma proteina. Tres residuo distintos da Vioserpina foram escolhidos para a incorporacao do aminoacido cumarinico: Trp 208, Ile 342 (P4 da RCL) e Val 343 (P3 da RCL). A incorporacao nas posicoes Trp 208 e Ile 342 resultou em proteina fluorescentes, mas truncadas apos a insercao do aminoacido. Foi possivel obter uma Vioserpina completa com o aminoacido cumarinico na posicao Ile 342, embora com rendimento muito baixo. Tal mutante apresentou capacidade de inibicao e especificidade diferentes da Vioserpina wild type, em ensaios de inibicao enzimatica contra Tripsina e Quimotripsina, indicando que o aminoacido cumarinico em P4 parece causar diferentes interacoes no momento de inibicao da serpina. Para averiguar as melhores sequencias resultantes da incorporacao do aminoacido cumarinico, foi gerada uma biblioteca de genes da Vioserpina variando aleatoriamente as posicoes P4, P2, P1 e P1f da RCL, com incosporacao do aminoacido cumarinico na posicao P3 (Val 343). A biblioteca de Vioserpina foi apresentada por Phage Display no capsideo do fago M13 fusionada a proteina PIII, utilizando Biopanning para selecao das melhores sequencias com incorporacao do aminoacido nao-canonico, contra a serino-protease quimotripsina. A biblioteca de fagos gerou cinco sequencias com melhor inibicao que da Vioserpina, e mostrou que a insercao do aminoacido cumarinico parece acontecer com maior frequencia quando flanqueado por aminoacidos hidrofobicos ou sem cargas. A incorporacao do aminoacido cumarinico em sequencias da Vioserpina foi bem sucedida, sendo possivel avaliar a insercao de tal aminoacido na capacidade inibitoria dessa serpina. A investigacao da insercao de aminoacido nao-canonicos por Phage Display e Biopanning representa um grande passo para entender melhor como ocorre a incorporacao de tais aminoacidos, e quais residuos podem ocupar com maior naturalidade suas posicoes laterais. / Serpins are serine protease inhibitor proteins, responsible for the control of the most diverse physiological processes and whose mechanism of inhibition consists in forming a covalent complex with the target enzyme, in an irreversible inhibition process. The reactive center loop (RCL) acts as a bait for the protease, and when cleaved it inserts as a â-strand inside the molecule, distorting the protease active site. As serpins form covalent bonds with their targets, these proteins have been used to study the hydrolysis mechanism of serine proteases. However, they also offer the possibility of developing new drugs against disease-related enzymes, as is the case of Vioserpin, a bacterial serpin capable of inhibiting trypsin-like serine proteases such as human tissue kallikrein. Finding a way of producing fluorescent Vioserpin may result in the development of a powerful tool for monitoring and controlling this and other enzymes involved in pathological processes, such as prostate specific antigen (PSA). Thus, we performed point mutations in the Vioserpin gene for incorporation of the coumarin amino acid through tRNA/aaRS orthogonal pair by suppression of the amber stop codon. The coumarin amino acid is a non-canonical amino acid capable of emitting fluorescence at 450 nm when excited at 363 nm, allowing for easy detection of a protein. Three different residues of Vioserpin were chosen for incorporation of the coumarin amino acid: Trp 208, Ile 342 (P4 in RCL) and Val 343 (P3 in RCL). Incorporation at positions Trp 208 and Ile 342 resulted in fluorescent but truncated proteins following amino acid insertion. A complete Vioserpin bearing the coumarin amino acid at the Ile 342 position was possible, although at very low yield. Such a mutant exhibited different inhibition and specificity compared to Vioserpin wild type in enzymatic inhibition assays against trypsin and chymotrypsin, indicating that the coumarin amino acid at P4 appears to cause different interactions during serpin inhibition. To ascertain the best sequences resulting from coumarin amino acid incorporation, a Vioserpin gene library was generated by randomly varying the P4, P2, P1 and P1' positions in RCL, with coumarin amino acid incorporated at the P3 (Val 343) position. The Vioserpin library was exhibited by Phage Display in the M13 phage capsid fused to the PIII protein, using Biopanning against chymotrypsin to select the best sequences with incorporation of the non-canonical amino acid. The phage library generated five sequences with better inhibition than Vioserpin, and pointed to coumarin amino acid insertion appearing to occur more frequently when flanked by hydrophobic or uncharged amino acids. The incorporation of the coumarin amino acid into Vioserpin sequences was successful, and it is possible to evaluate the insertion of such amino acid in the inhibitory capacity of this serpin. The investigation of non-canonical amino acid insertion by Phage Display and Biopanning represents a great step to better understand how the incorporation of such amino acids occurs, and which residues may more naturally occupy their lateral positions

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-07T13:13:48Z No. of bitstreams: 1 Telga Lucena Alves Craveiro de Almeida.pdf: 3518080 bytes, checksum: d86396180de9528316281e363f148f12 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-07T13:13:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Telga Lucena Alves Craveiro de Almeida.pdf: 3518080 bytes, checksum: d86396180de9528316281e363f148f12 (MD5) Previous issue date: 2012-02-07 / Glutamine (GLN) is produced in different tissues through the enzime glutamine synthetase (GS). Muscular tissue, due to its extensiveness, is the largest producer of this amino acid, followed by lungs, liver and placenta. Enterocytes and immune system cells are the largest consumers. During severe infections and diseases that produce catabolism, there is an elevated breakdown of GLN, which can be compensated, up to a certain point, by an increase in GS expression. To better a understanding of GLN metabolism in dogs, whether healthy or not, we envisioned this experiment which had the objective of determining the [GLN] and other blood metabolites associated with protein metabolism in healthy dogs, blood donors, with cancer or with severe diseases. Blood samples were collected from 133 animals, divided into four groups: healthy, with cancer, severe infectious disease, and blood donors. [Glutamine], [Glutamate], [Urea], [Creatinine], [Total Plasma Protein] (TPP), [Glucose], [Fibrinogen] and hematocrit were determined in each sample. The body score index (BSI) was also determined. The results were analyzed using ANOVA, with a significance level of P<0,05, and Tukey's test with post hoc, with P<0,05. The results indicate thAT was no statistical difference in BSI between the group with cancer and the healthy group (P<0,05), but there was a difference when these were compared to the blood donor and infectious disease groups (P>0,05), where the latter had lower IEC. [GLN] and [GLN+GLU] were significantly lower than in the healthy animals (P<0,05), where the groups with cancer, infectious diseases and blood donors had a reduction of ~82%, ~73% e ~88%, respectively in their [GLN]. We observed a significant elevation in [Creatinine] in the blood donors and infectious diseases groups when compared to the healthy animals (P<0,05). There were no differences in [Urea], [Fibrinogen] and [Glucose] between groups (P>0,05). The [TPP] had higher values in the group with cancer (P<0,05) and the hematocrit in the group with blood donors (P<0,05). We conclude that, in the groups with sick animals and blood donors, there is an elevated degradation of GLN, which might compromise its availability for the consumer tissues during the evolution of an illness, which in turn could make for a difficult recovery. Establishing a hygienic and dietary management through GLN supplementation can be an important nutritional support for sick animals or blood donors. / A glutamina (GLN) é produzida por diferentes tecidos através da enzima glutamina sintetase (GS), sendo que o tecido muscular, devido à sua extensão, é o maior produtor desse aminoácido, seguido pelos pulmões, fígado, e placenta. Os enterócitos e as células do sistema imune são os maiores consumidores. Durante as infecções graves e enfermidades que produzam catabolismo há uma degradação elevada da GLN que pode ser compensada, até determinado ponto, pelo aumento da expressão da GS. Para se compreender melhor o metabolismo da GLN nos caninos, sadios ou não, foi desenvolvido um experimento que objetivou determinar a [GLN] e outros metabólitos sanguíneos associados ao metabolismo das proteínas em caninos sadios, doadores e não doadores de sangue, naqueles com câncer ou outras enfermidades graves. Foram colhidas amostras de sangue de cento e trinta e três (133) animais, divididos em quatro grupos: sadios, com câncer, doença infecciosa grave, e doadores de sangue. Nas amostras de sangue determinaram-se [Glutamina], [Glutamato], [Uréia], [Creatinina], [Proteína plasmática total] (PPT), [Glicose], [Fibrinogênio] e hematócrito. Também foi determinado o índice de escore corporal (IEC). Os resultados foram analisados pelo ANOVA, com significância de 5%, e pelo teste de Tukey com pos hoc, com P<0,05. Os resultados indicaram que não houve diferença estatística entre o IEC no grupo com câncer quando comparado ao grupo dos sadios (P>0,05), mas houve diferença quando estes foram comparados aos grupos doadores de sangue e os com doenças infecciosas (P<0,05), sendo que estes últimos apresentavam IEC mais baixos. As [GLN] e [GLN+GLU] foram significativamente mais baixas que nos animais sadios (P<0,05), sendo que o grupo com câncer, grupo com doenças infecciosas graves e o grupo de doadores apresentaram reduções de aproximadamente 73%, 88% e 82%, respectivamente, na [GLN]. Observou-se uma elevação significativa na [Creatinina] nos grupos doadores e com doenças infecciosas graves quando comparados aos animais sadios (P<0,05). Não ocorreram diferenças nas [Ureia], [Fibrinogênio] e [Glicose] entre os grupos (P>0,05). A [PPT] foi mais elevada no grupo com câncer (P<0,05) e o hematócrito no grupo doadores (P<0,05). Conclui-se, então, que nos grupos de animais enfermos e doadores de sangue, a degradação da GLN é elevada, o que pode comprometer a disponibilidade desse nutriente para os tecidos consumidores durante a evolução das enfermidades e pode dificultar a recuperação. O estabelecimento de um tratamento higiênico-dietético com a suplementação de GLN poderá ser um importante suporte nutricional para os enfermos ou doadores de sangue.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-03-31T13:47:03Z No. of bitstreams: 1 Clenilson Marquezin.pdf: 329825 bytes, checksum: ce5f5c8532740cd86db6eac9e541febc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-31T13:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Clenilson Marquezin.pdf: 329825 bytes, checksum: ce5f5c8532740cd86db6eac9e541febc (MD5) Previous issue date: 2010-07-23 / his experiment was conducted to evaluate the effect of supplementation with Aminogut® (L-glutamine and L-glutamic acid in the form of free amino acids) in sows on the morphometry of the intestinal villi and crypt depth of suckling piglets at 28 days old. We used 14 sows pluriparous numbers of births over 4 (four), crossbred, acquired through the crossbreeding of breeds (Large White X Landrace), distributed in a completely randomized design matrices were divided into two groups, 7 animals per replicate. T0- control, without supplementation, T1-supplementation with Aminogut® at a ratio of 2.5% of the total diet. Each treatment were sacrificed four piglets, which had chosen the piglet weaning weight closer to the average litter weight. The diets were isonitrogenous and isocaloric and obeyed the nutritional requirements of a proposal for each physiological state. The period of supplementation of females began 7 (seven) days before the expected date of childbirth. Analyses of the villi and crypt depth of small and large intestine were performed on biopsies / UFRPE. The group with Aminogut® had a greater crypt depth (P<0.01) differed from the control treatment which was less crypt depth, both the small intestine and for the bulk. In conclusion, supplementation in sows with L-glutamine and Lglutamic acid, increased the depth of the crypts of both small intestine and large intestine, and had no effect on the weight of the piglets. / presente experimento foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da suplementação com Aminogut® (L-glutamina e L-ácido glutâmico na forma de aminoácidos livres) em dietas para matrizes suínas sobre a morfometria das vilosidades intestinais e profundidade de criptas de leitões lactentes aos 28 dias de idade. Foram utilizadas 14 matrizes suínas pluríparas com números de partos acima de quatro, mestiças, provenientes do cruzamento das raças, (Landrace X Large White), distribuídas em um delineamento inteiramente casualizado. As matrizes foram divididas em dois tratamentos, com sete animais por repetição. Os tratamentos foram: T0- controle, sem suplementação, T1- suplementação com Aminogut® (L-glutamina e L-ácido glutâmico) incluídos a um nível de 2,5 % a dieta. De cada tratamento foram sacrificados quatro leitões, escolhido o leitão que teve o peso à desmama mais próximo do peso médio da leitegada. As rações obedeceram as exigências nutricionais propostas para cada um dos estados fisiológicos. O período de suplementação das fêmeas iniciou-se sete dias antes da data provável do parto. As análises das vilosidades e profundidade das criptas do intestino delgado e grosso foram realizadas no BIOPA/ UFRPE. O grupo com Aminogut® apresentou uma maior profundidade das criptas (P<0,01) em relação ao tratamento controle que apresentou menor profundidade das criptas, tanto para o intestino delgado como para o grosso. Concluiu-se que a suplementação das dietas das matrizes com Aminogut®, proporcionou aumento na profundidade das criptas tanto do intestino delgado como do intestino grosso, porém não apresentou efeito sobre o peso dos leitões.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-04-24T16:04:54Z No. of bitstreams: 1 Kedes Paulo Pereira.pdf: 146728 bytes, checksum: c8731b0bfca572bc124ee13380b4adf6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T16:04:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kedes Paulo Pereira.pdf: 146728 bytes, checksum: c8731b0bfca572bc124ee13380b4adf6 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The work objectived to evaluate the plasmatic and urine urea concentrations, the balance of nitrogen compounds, and to estimate the protein requirements for maintenance. It was used the equations recommended by the American and British systems, in four bovine and four bubaline steers, with initial average weight of 461,19±7,59 and 455.44±7,85 kg for the bovines and bubalines, respectively, distributed in two 4 x 4 Latin squares. The treatments consisted of different levels of concentrate (0.0; 24.0; 48.0; and 72.0%) composed by grinded corn, soybean meal, mineral salt, and Tifton-grass hay. Each period lasted 21 days, being 14 of adaptation and seven for collection. Samples of feces and urine (spot) were taken to estimate the production of fecal dry matter and urine volume. It was observed interactions between the species for N intake (NC), N-urine (UN) g/kg0,75 and urinary urea (UU); no interactions occurred for fecal-N (NF), absorbed-N (NABS), UN (g/d), balance of N (BN) and plasmatic urea (UP). Regardless of the difference observed between the species, the response variables increased linearly as the concentrate level increased. The increase of the concentrate level provided positive BN. The estimative of the metabolizable protein maintenance requirements of bovines and bubalines differs between the American and British systems. / O trabalho objetivou avaliar as concentrações de uréia plasmática e urinária; o balanço dos compostos nitrogenados e estimar as exigências de proteína para mantença por equações preconizadas pelos sistemas americano e britânico, em quatro bovinos e quatro bubalinos, com peso médio inicial de 461,19±7,59 e 455,44±7,85 kg para os bovinos e búfalos, respectivamente, distribuídos em dois quadrados latinos 4 x 4. Os tratamentos consistiram em diferentes níveis de concentrado (0,0; 24,0; 48,0; 72,0%) à base de milho moído, farelo de soja e sal mineral, e feno de capim-tifton. Cada período durou 21 dias, sendo 14 de adaptação e sete para coleta. Foram coletadas amostras de fezes e urina (spot) para estimativa da produção de matéria seca fecal e volume urinário. Houve interação entre as espécies para nitrogênio (N) consumido (NC), urinário (NU)g/kg0,75 e uréia urinária (UU); não ocorrendo para N fecal (NF), N absorvido (NABS), NU (g/d), balanço de N (BN) e uréia plasmática (UP). Independente do efeito observado entre as espécies, as variáveis aumentaram linearmente em função dos tratamentos. O aumento dos níveis de concentrado proporciona BN positivo. Os requerimentos de proteína metabolizável para mantença de bovinos e bubalinos, quando estimados por meio dos sistemas americano e britânico, são diferentes.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-06-20T14:08:57Z No. of bitstreams: 1 Priscila Antao dos Santos.pdf: 1037242 bytes, checksum: f92c76307a94b826876b81d1bd433c1b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-20T14:08:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Priscila Antao dos Santos.pdf: 1037242 bytes, checksum: f92c76307a94b826876b81d1bd433c1b (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The object of project was to determine the maximum genetic potential of nitrogen retention, modeling the digestible lysine requirements and estimate the amino acid relationships: lysine to methionine and cystine, threonine, tryptophan, arginine, valine, isoleucine and leucine with broiler slow growth, male, of Redbro plume strain. For this, the research was divided into two stage. The first stage consisted of three nitrogen balance tests in the following periods of age of the birds: 14-28 days (early phase); 42 to 56 days (growth phase); 70 the 84 days (last phase). The birds were housed individually and the collection period were divided into five days of adaptation and two periods of excreta collection, each with five days. The experimental design was completely randomized. The treatments were the same in different ages and consisted of seven isocaloric diets with different levels of nitrogen, being formulated by the technique of dilution, obtained from successive dilutions from the highest level and a diet free of nitrogen. The nitrogen levels were 8, 16, 24, 32, 40 and 48 g / kg. To prove that the responses of birds were due to the limiting amino acid has been added the seventh treatment consisting of diet with lower levels of nitrogen, but with the same lysine content of the second level. In the second stage they used 72 birds Redbro plume, males for each phase of the nitrogen balance. The treatments consisted of nine diets with eight repetitions formulated according to the nutritional recommendations suggested for chickens lineage Redbro plume, but the ideal relations of amino acids used was suggested by Brazilian tables. The diets with different amino acids were obtained by limiting dilution of the control diet with corn starch (70%) and supplemented with crystalline amino acids, amino acid except for the study. The relationship between amino acid utilization efficiency (b / c) estimated for each treatment relative to the amino acid was used to determine the ideal ratio of amino acids. The results of the first stage estimated the maximum potential for nitrogen retention was 3276, 2585 and 2603 mg/BWkg0.67.day, nitrogen maintenance requirement was 225, 135 and 122 mg/BWkg0.67.day and efficiency of nitrogen utilization were 313×10-6, 406×10-6 and 415×10-6 in the phases of 14-28, 42-56 and 70-84 days old birds. The digestible lysine intake for the periods I, II and III, based on 60% of the maximum potential for nitrogen retention, were 711, 989 and 1272 mg/day (1.225, 1.137 and 1.09 % of lysine in the diet for a daily feed intake of 58, 87 and 117 g/day), respectively. From the results of the experiments of stage II, the following aminoacidic relations were estimated: 67, 73 and 71metionina + cystine; 63, 69 and 69 threonine; 17, 18 and 17 tryptophan; 105, 102 and 103 arginine; 85, 80 and 78 valine; 67, 67 and 68 isoleucine; 104, leucine 109 and 108, respectively, for initial phase, growing and finishing the birds. / O presente projeto teve como objetivo determinar o máximo potencial genético de retenção de nitrogênio, modelar as exigências de lisina digestível e estimar as relações aminoácido:lisina para metionina+cistina, treonina, triptofano, arginina, valina, isoleucina e leucina com frangos de corte de crescimento lento, machos, da linhagem Redbro plumé. Para isso, a pesquisa foi dividida em duas Etapas. A primeira etapa consistiu de três ensaios de balanço de nitrogênio nos seguintes períodos de idade das aves: 14 a 28 dias (fase inicial); 42 a 56 dias (fase crescimento); 70 a 84 dias (fase final). As aves foram alojadas individualmente e o período de coleta foram divididos em cinco dias de adaptação e dois períodos de coleta de excretas, cada um com cinco dias. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Os tratamentos aplicados foram os mesmos nas diferentes idades e consistiram de sete dietas isoenergética com diferentes níveis de nitrogênio, sendo formuladas pela técnica da diluição, obtidos a partir de sucessivas diluições entre o maior nível e uma ração isenta de nitrogênio. Os níveis de nitrogênio foram: 8, 16, 24, 32, 40 e 48 g/kg. Para comprovar que as respostas das aves foram em função do aminoácido limitante foi incluído o sétimo tratamento, que consistiu da dieta com menor nível de nitrogênio, mas com o mesmo teor de lisina digestível do segundo nível. Na segunda Etapa utilizaram-se 72 aves Redbro plumé, machos para cada fase do balanço de nitrogênio. Os tratamentos consistiram de nove dietas com oito repetições formuladas de acordo com as recomendações nutricionais sugeridas para linhagem frangos Redbro plumé, mas as relações ideais de aminoácidos adotadas foram as sugeridas pelas tabelas brasileiras. As dietas com diferentes aminoácidos limitantes foram obtidas por diluição da dieta controle com amido de milho (70%) e suplementadas com aminoácidos cristalinos, exceto para o aminoácido em estudo. A relação entre as eficiências de utilização do aminoácido (b/c) estimados para cada tratamento relativo ao aminoácido foi utilizada para determinar a relação ideal dos aminoácidos. Os resultados da primeira etapa estimaram o potencial máximo para a retenção de nitrogênio 3276, 2585 e 2603 mg/PCkg0.67.dia, a exigência de nitrogênio de mantença foram de 225, 135 e 122 mg/PCkg0.67.dia e eficiência de utilização de nitrogênio foi 313 × 10-6, 406 × 10-6 e 415 × 10-6 nas fases de 14-28, 42-56 e 70-84 de idade das aves. O consumo de lisina digerível para os períodos I, II e III, com base em 60% do máximo potencial de retenção de nitrogênio, foram 711, 989 e 1272 mg/dia (1,225, 1,137 e 1,09% de lisina na dieta para um consumo diário de ração de 58, 87 e 117 g/dia), respectivamente. A partir dos resultados dos experimentos da etapa II foram estimadas as seguintes relações aminoacídicas: 67, 73 e 71 para metionina + cistina; 63, 69 e 69 para treonina; 17, 18 e 17 para triptofano; 105, 102 e 103 para arginina; 85, 80 e 78 para valina; 67, 67 e 68 para isoleucina; 104, 109 e 108 para leucina, respectivamente para fase inicial, crescimento e final das aves.