Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-04-07T12:39:40Z No. of bitstreams: 1 Tese_Octavio_Presgrave.pdf: 1825411 bytes, checksum: a3f455d814ff29be053649af03ea8d60 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-04-07T12:39:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Octavio_Presgrave.pdf: 1825411 bytes, checksum: a3f455d814ff29be053649af03ea8d60 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-04-07T12:40:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Octavio_Presgrave.pdf: 1825411 bytes, checksum: a3f455d814ff29be053649af03ea8d60 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-07T12:40:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Octavio_Presgrave.pdf: 1825411 bytes, checksum: a3f455d814ff29be053649af03ea8d60 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A experimentação animal é utilizada desde tempos remotos e tem ajudado no desenvolvimento da ciência ao longo de muitos anos. Através do uso de animais na pesquisa, não só o Homem tem se beneficiado, mas, também a Medicina Veterinária tem obtido grandes êxitos. Entretanto, a consciência ética tem obrigado pesquisadores de diversas áreas a buscarem alternativas à utilização de animais tanto na pesquisa, quanto no ensino. Apesar de filósofos demonstrarem sua preocupação com os experimentos em animais desde os anos 1700, foi somente no século XIX que novas teorias foram implementadas. A partir da introdução do princípio dos 3Rs (Replacement, Reduction and Refinement –Substituição, Redução e Refinamento), em 1959, por Russel e Burch, é que as pesquisas se intensificaram, ganhando força a partir dos anos 1980. Hoje em dia, é muito grande a pressão de grupos protecionistas contrários ao uso de animais não humanos na experimentação e na educação. Apesar de vários estudos estarem em andamento, buscando uma alternativa aos métodos clássicos que utilizam animais, o número de métodos validados ainda é bem pequeno em relação aos estudados. Para que um método possa substituir outro é necessário passar por um processo bem determinado de validação. Entretanto, no Brasil, ainda não existe uma organização no que tange o desenvolvimento e validação de testes. Tomando por base a criação e as atividades de centros internacionais já estabelecido se a crescente consciência ética sobre o uso de animais, surge, então, a necessidade de se criar um Centro Brasileiro para Validação de Métodos Alternativos, com o objetivo principal de promover pesquisas no nível nacional, bem como com a participação de laboratórios internacionais visando o aprimoramento, desenvolvimento e a validação de métodos alternativos contribuindo, dessa forma, tanto para a redução do uso de animais quanto para a inovação técnico-científica. / The animal experimentation has being used for a long time and it has helped the development of Science during this time. Benefits of animal use in research are seen not only for human beings but also for Veterinary Medicine. However, the ethical thoughts oblige researchers from differentare as to search for alternatives for using animals in experimentation and education. Although phylosophers demonstrated their feelings with experimentation since the 1700 years, only in 18thcentury new theories were developed.From the introduction of the 3Rs Principles (Replacement, Reduction and Refinement), by Russel and Burchin 1959, research has been intensified up to reach a higher level in 1980’s.Nowadays, the claim of protection groups for alternatives in experimentation and education is harder.Despite of the great number of groups working on the search of alternative methods, the amount of validated tests is lower than expected. For a method to be considered as a replacement of a classic one it is necessary to pass through a weel-defined validation process. Brazil has not adopted an organizing system for validation yet.Taking into account the creation and activities of international validation centers, the need of establishing a Brazilian center for Validation of Alternative Methodsis supported. The main objective of this Center is to promote collaborative studies with national and international entities in order to validate some alternative method.

BK channels are well studied targets of acute ethanol action. They play a prominent role in neuronal excitability and have been shown to play a significant role in behavioral ethanol tolerance in invertebrates. The focus of my work centers on the effects of alcohol on the BK channel and comprises studies that examine how subcellular location affects acute ethanol sensitivity and how duration of acute alcohol exposure impacts the development of rapid tolerance. My results also provide potential mechanisms which underlie acute sensitivity and rapid tolerance. I first explore BK channel sensitivity to ethanol in the three compartments (dendrite, cell body, and nerve terminal) of magnocellular neurons in the rat hypothalamic-neurohypophysial (HNS) system. The HNS system provides a particularly powerful preparation in which to study the distribution and regional properties of ion channel proteins because the cell bodies are physically separated from the nerve terminals. Using electrophysiological and immunohistochemical techniques I characterize the BK channel in each of the three primary compartments and find that dendritic BK channels, similar to somatic channels, but in contrast to nerve terminal channels, are insensitive to alcohol. Furthermore, the gating kinetics, calcium sensitivity, and iberiotoxin sensitivity of channels in the dendrite are similar to somatic channels but sharply contrast terminal channels. The biophysical and pharmacological properties of somatodendritic vs. nerve terminal channels are consistent with the characteristics of exogenously expressed αβ1 vs. αβ4 channels, respectively. Therefore, one possible explanation for my findings is a selective distribution of β1 subunits to the somatodendritic compartment and β4 subunits to the terminal compartment. This hypothesis is supported immunohistochemically by the appearance of distinct punctate β1 or β4 channel clusters in the membrane of somatodendritic or nerve terminal compartments, respectively. In conclusion, I found that alcohol sensitivity of BK channels within the HNS system is dependent on subcellular location and postulate that β-subunits modulate ethanol sensitivity of HNS BK channels. In the second and primary focus of my thesis I explore tolerance development in the striatum, a brain region heavily implicated in addiction. Numerous studies have demonstrated that duration of drug exposure influences tolerance development and drug dependence. To further elucidate the mechanisms underlying behavioral tolerance I examined if BK channel tolerance was dependent on duration of alcohol exposure using patch clamp techniques in cultured striatal neurons from P8 rats. I found that persistence of rapid tolerance is indeed a function of exposure time and find it lasts surprisingly long. For example, after a 6 hr exposure to 20 mM ethanol, acute sensitivity was still suppressed at 24 hrs withdrawal. However, after a 1 or 3 hr exposure period, sensitivity had returned after only 4 hrs. I also found that during withdrawal from a 6 hr but not a 3 hr exposure the biophysical properties of BK channels change and that this change is correlated with an increase in mRNA levels of the alcohol insensitive STREX splice variant. Furthermore, BK channel properties during withdrawal from a 6 hr exposure to alcohol closely parallel the properties of STREX channels exogenously expressed in HEK293 cells. In conclusion I have established that BK channels develop rapid tolerance in striatal neurons, that rapid tolerance is dependent upon exposure protocol, and is surprisingly persistent. These findings present another mechanism underlying BK channel tolerance and possibly behavioral tolerance. Since these phenomena are dependent on duration of drug exposure my results may find relevance in explaining how drinking patterns impact the development of alcohol dependence in humans.

Metazoan genomes contain thousands of protein-coding and non-coding RNA genes, most of which are differentially expressed, i.e., at different locations, at different times during development, or in response to environmental signals. Differential gene expression is achieved through complex regulatory networks that are controlled in part by two types of trans-regulators: transcription factors (TFs) and microRNAs (miRNAs). TFs bind to cis-regulatory DNA elements that are often located in or near their target genes, while microRNAs hybridize to cis-regulatory RNA elements mostly located in the 3’ untranslated region (3’UTR) of their target mRNAs. My work in the Walhout lab has centered on understanding how these trans-regulators interact with each other in the context of gene regulatory networks to coordinate gene expression at the genome-scale level. Our model organism is the free-living nematode Caenorahbditis elegans, which possess approximately 950 predicted TFs and more than 100 miRNAs Whereas much attention has focused on finding the protein-coding target genes of both miRNAs and TFs, the transcriptional networks that regulate miRNA expression remain largely unexplored. To this end, we have embarked in the task of mapping the first genome-scale miRNA regulatory network. This network contains experimentally mapped transcriptional TF=>miRNA interactions, as well as computationally predicted post-transcriptional miRNA=>TF interactions. The work presented here, along with data reported by other groups, have revealed the existence of reciprocal regulation between these two types of regulators, as well as extensive coordination in the regulation of shared target genes. Our studies have also identified common mechanisms by which miRNAs and TFs function to control gene expression and have suggested an inherent difference in the network properties of both types of regulators. Reverse genetic approaches have been extensively used to delineate the biological function of protein-coding genes. For instance, genome-wide RNAi screens have revealed critical roles for TFs in C. elegans development and physiology. However, reverse genetic approaches have not been very insightful in the case of non-coding genes: A single null mutation does not result in an easily detectable phenotype for most C. elegans miRNA genes. To help delineate the biological function of miRNAs we sought to determine when and where they are expressed. Specifically, we generated a collection of transgenic C. elegans strains, each containing a miRNA promoter::gfp (Pmir::gfp) fusion construct. The particular pattern of expression of each miRNA gene should help to identify potential genetic interactors that exhibit similar expression patterns, and to design experiments to test the phenotypes of miRNA mutants.

During my thesis work I studied the expression and potential function of brain expressed microRNAs (miRNAs) in human prefrontal cortex (PFC). Initially, I used combinatorial computational analysis and microarray data to identify miRNAs that are predicted with high probability to target the human Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) 3’ Untranslated Region (3’UTR) and are expressed in moderate to high levels in adult human prefrontal cortex. A subset of 10 miRNAs segregating into 5 different miRNA families (miR-30a-d, miR-103/107, miR-16/195, miR-191 and miR-495) met the above criteria. I then designed a protocol to detect these miRNAs with Locked Nucleic Acid (LNA) in situ hybridization in human prefrontal cortex and determine their layer and cellular expression patterns. LNA in situ revealed differential lamina and cellular enrichment of BDNF-related miRNAs. As an example, miR-30a-5p was found to be enriched in large pyramidal neurons of layer 3, which was verified using laser capture microdissection of layer 3 pyramidal neurons and quantitative Real Time Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR) following dissection of upper and deeper layers of human PFC. Parallel to this, I used miRNA qRT-PCR to determine the developmental expression of miRNAs using postmortem PFC tissues ranging from embryonic age to old adulthood and compared miRNA to BDNF protein levels. My results revealed a robust inverse correlation between BDNF-related miRNAs and BDNF protein during late maturation and aging of human prefrontal cortex. In vitro luciferase assays and/or lentivirus mediated neuronal miRNA overexpression experiments validated that at least two miRNAs, miR-30a-5p and miR-195, target human BDNF 3’UTR and mediate its translational repression. In the second part of my thesis work I measured levels of miR-30a and miR-195 in the prefrontal cortex of patients with schizophrenia and compared them with levels of BDNF protein and BDNF-related GABAergic mRNAs. According to my results differences in miR-195 levels in a subset of subjects diagnosed with schizophrenia were found to be associated with disease related changes in BDNF protein levels and deficits in BDNF dependent GABAergic gene expression. In the last part of my work I focused on miR-30b, another member of the miR-30 family, which I found to be reduced in the prefrontal cortex of female but not male subjects with schizophrenia. More importantly, disease related changes in miR-30b levels were strongly associated with the age of onset of the disease. Additional experiments in mouse cortex and hippocampus revealed a gender dimorphic expression pattern of this miRNA with higher expression in female brain. Collectively, my results suggest that miRNAs could participate in novel molecular pathways that play an important role during cortical development and maturation and are potentially linked to the pathophysiology of neuropsychiatric disease.

Introdução: O complexo anatômico-funcional localizado na junção esôfagogástrica é uma barreira ao refluxo gastresofágico. A pressão e o volume intragástricos necessário para vencer essa barreira são denominados Pressão de Vazão Gástrica e Volume de Vazão Gástrico e são utilizados em modelos animais para medir a sua competência, entretanto, a sua validação ainda não foi determinada. Objetivos: Desenvolver um modelo experimental suíno e validar a pressão e o volume intragástricos para estudo da barreira antirrefluxo. Métodos: Suínos da raça Large White com 8 semanas de vida, do sexo feminino foram utilizados neste experimento. Após a anestesia dos animais, foi realizada a manometria esofágica e um cateter de pHmetria posicionado 5 cm acima do esfíncter esofágico inferior. Uma sonda Foley de três vias foi introduzida no estômago através de gastrostomia e o duodeno obliterado através de um laço com gaze úmida. HCL (0,1N) foi infundido lentamente no estômago e medidos a pressão e o volume intragástricos, em tempo real em sistema digital. A pressão e o volume intragástricos no momento da queda abrupta do pH esofágico (pH< 3) foram definidas como Pressão de Vazão Gástrica (PVG) e Volume de Vazão Gástrico (VVG). Após o experimento, a sonda Foley foi retirada, o duodeno liberado e a gastrostomia ocluida com pontos cirúrgicos. Os animais foram mantidos em local apropriado até a repetição dos experimentos sete dias após. Resultados: Dez animais (peso médio = 20 Kg) foram estudados. Os valores médios (± DP) nos dias 0 e 7 foram, respectivamente: PVG 7,66 ± 3,02 versus 7,07 ± 3,54 (p =0,510 teste t de student e 0,557 para o teste exato de Wilcoxon) e VVG 636,70 ± 216.74 versus 608,30 ± 276,66; (p =0,771 teste t de Student e 0,846 para teste de Wilcoxon) não apresentaram diferença estatística significativa. Entretanto, quando aplicado o Coeficiente de Correlação de Concordância a reprodutibilidade foi significativa apenas para a PVG (CCC de 0,648), mas não para a VVG (CCC de 0,27). Conclusão: O modelo animal desenvolvido identifica reprodutibilidade para a PVG, mas não para a VVG. A PVG pode ser utilizada com confiança para o estudo da barreira anti-refluxo. / Introduction: The anatomic functional complex situated at the esophago-gastric junction is a barrier to gastroesophageal reflux. The intragastric pressure and volume necessary to overcome this barrier is called Gastric Yield Pressure and Gastric Yield Volume and used in animal models to measure the anti-reflux competence. However, its validation has not been determined. Objectives: Develop an experimental pig model and validate the intragastric pressure and volume to study the anti-reflux barrier. Methods: Large White pigs two month-old females were used in this experiment. After anesthesia esophageal manometry and a pH sensor placed 05 cm above the lower esophageal sphincter. A threeway Foley catheter was introduced into the stomach through a gastrostomy and duodenum tied with a wet gauze. The Foley probe allowed simultaneous HCl (0.1 N) infusion into the stomach and real time measurement of the intragastric pressure and volume on a digital system system. The intragastric pressure and volume simultaneous to a sudden fall in esophageal pH (pH <3) were defined as the Gastric Yield Pressure (GYP) and the Gastric Yield Volume (GYV). After the experiment, the Foley was removed, the duodenum untied and gastrostomy occluded with surgical stitches. The animals were kept in an appropriate room and the experiment repeated after seven days. Results: Ten animals (mean weight = 20 kg) were studied. The mean values (± SD) on days 0 and 7 were, respectively: GYP 7.66 ± 3.02 and 7.07 ± 3.54 (p = 0,510 student t test and 0.557 for Wilcoxon’s exact test) and GYV 636.70 ± 216.74 and 608.30 ± 276.66, (p =0,771 student t test and 0.846 for Wilcoxon) had no significant statistic difference. However, when the concordance correlation coefficient was applied reproducibility was found only for GYP (CCC = 0,648) but not for GYV (CCC = 0.27). Conclusion: The developed animal model disclosed reproducibility for GYP but not for GYV. GYP may be used with confidence to study the anti-reflux barrier.

Após 13 anos de debate parlamentar, o governo federal instituiu em 8 de outubro de 2008 uma nova ordem jurídico-administrativa através da Lei n.11.794 que foi regulamentada em 15 de julho de 2009 com o Decreto 6.899. A nova legislação introduziu modelos de condutas que antes não existiam, criou o Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA) e tornou obrigatória a implantação de Comissões de Ética no Uso de Animais (CEUAs) pelas instituições que criam ou utilizam animais para ensino e pesquisa. Partindo do pressuposto de que a Lei n. 11794/2008 é uma política pública regulatória de ciência, tecnologia e inovação em saúde (CT&I/S), o objetivo deste trabalho é demonstrar que a implementação da política regulatória em uma instituição pública federal de pesquisa em saúde é um processo atravessado por relações transnacionais, pelas interpretações que os atores da pesquisa fazem da Lei com base em suas práticas de trabalho, e pelas ações institucionais de tradução local de outras políticas governamentais. O estudo contempla dois níveis de descrição e análise complementares: o da formulação e o da implementação da política regulatória na Fiocruz. O primeiro descreve e analisa o processo de tramitação do Projeto de Lei que originou a Lei e sua regulamentação pelo CONCEA, até dezembro de 2011. O segundo é um estudo de caso inspirado pela abordagem interpretativa, centrado na tradução da Lei pelos pesquisadores, especialistas e gestores da Fiocruz em relação às suas práticas de trabalho. A tese formulada resulta do seguinte percurso metodológico: leitura do movimento de tradução dos interesses dos atores envolvidos no jogo parlamentar do Congresso Nacional de formulação, discussão e aprovação da Lei; delineamento do espaço institucional em que as interpretações dos pesquisadores estão embebidas e que as políticas de CT&I/S são implementadas; leitura das ações e dos programas em CT&I/S do MS para a Fiocruz entre 2004 e 2010; um ano de observação participante nas reuniões da Comissão de Ética no Uso de Animais da Fiocruz; entrevistas semi-estruturadas com 22 pesquisadores, gestores e especialistas em animais de laboratório para compreender o enquadramento da Lei pelos atores nas suas práticas de trabalho. Concluimos afirmando que a aproximação entre a pesquisa pré-clinica e clínica é uma estratégia de contorno às restrições vivenciadas pelos pesquisadores nos processos de trabalho com animais de pesquisa que se desenvolve no cenário da pesquisa translacional e transnacional. O modelo animal é um dispositivo que divide as comunidades instrumentais de pesquisadores biomédicos entre os que utilizam e os que não utilizam animais. A governança da pesquisa biomédica com animais de laboratório não está estabilizada no espaço institucional: as diferentes comunidades instrumentais de usuários de animais, produtores de animais, gestores e membros da CEUA estão em disputa. / After 13 years of parliamentary debate, the Brazilian federal government instituted on October 8, 2008 a new legal and administrative order to regulate the use of animals in research and education. A federal law (Law n. 11794/2008), a federal decree (Decree n. 6899/2009) and three normative resolutions were enacted from 2008 to 2011. Among its clauses, the legislation creates the National Council for the Control of Animal Experimentation (CONCEA) and made mandatory the implementation of an Ethics Committee on the Use of Animals (CEUA) in institutions that breed or use animals for educational purposes and research. We describe and analyze the implementation of the new regulatory regime. Inspired by interpretative policy analysis, we asked how the regulated actors frame the legislation in relation to their work practices. That is, what is directing their attention? How do they interpret and understand the legislation? Do they form different interpretative communities to address the issues associated to the current legislation? Our findings are based on a year participant observation inside of a local CEUA, semi structured interviews (15 seniors researchers, 4 managers and 3 specialists) and document analysis. We concluded by stating that: 1) animal modelsare devices that divide the instrumental community of biomedical researchers in two sub communities: users and not users of research animals; 2) the new legal framework separates the instrumental community of animal users in two subcommunities that strive for diverse interests: research bench and field researchers, (3) the diversity of interpretations of the law associated with each instrumental community may be associated to the lack of regulation of sensitive topics such as surgical procedures and anesthetics, euthanasia and reuse of animals, 4) governance of biomedical research based on laboratory animals is not stabilized inside the institutional space: different instrumental communities of users of animals, livestock producers, managers and CEUAs members are in dispute; 5) the proximity between preclinical research and clinical practice is a strategy to outline the restrictions experienced by researchers in the process of working with research animals that develops in the setting of transnational and translational research.

Generation of the primitive neuroectoderm into specialized brain subdivisions, such as the hindbrain primordium, involves the regulated coordination of complex morphogenetic and molecular mechanisms. These processes are evident in the segregation of the zebrafish hindbrain into seven distinct lineage-restricted compartments, termed rhombomeres (r), which are established by the interplay of several spatially-restricted expressed genes. These include transcription factors, members of specific signaling pathways and specialized molecules that mediate cell adhesion and identity. Despite their extensive characterization, it is evident that other genes are involved to mediate the proper specification and segregation of individual rhombomeres. One candidate that likely fits this role is related to the no ocelli/l(2)35Ba gene in Drosophila, termed nlz (nocA-like zinc-finger). Nlz-related proteins behave as transcriptional repressors and are related to the vertebrate Sp1-like family of transcription factors. nlz is dynamically expressed in the zebrafish hindbrain, residing in the caudal hindbrain at gastrula stages and rostrally expanding from presumptive r3/r4 boundary to encompass r3 and r2 at segmentation stages. Nlz localizes to the nucleus and associates with the co-repressors Groucho and histone deacetylases, suggesting that Nlz acts as a repressor. Consistent with this, misexpression of nlz into zebrafish embryos results in a loss of gene expression in the rostral hindbrain (rl-r3). Taken together, the findings in this thesis suggest that Nlz functions as a transcriptional repressor to control segmental gene expression in the rostral hindbrain.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-03-10T12:57:43Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 713760 bytes, checksum: 394901f3ccd2300f1e8cb0702d61c799 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-10T12:57:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 713760 bytes, checksum: 394901f3ccd2300f1e8cb0702d61c799 (MD5) Previous issue date: 2015-12-01 / Monoterpenes are the major bioactive compounds found in essential oils from medicinal plants used in the treatment of diseases. Among these, (S)-(-)-perillyl alcohol (PA) stands as a promising molecule with antitumor, anti-inflammatory and antioxidant properties. This study investigated the antinociceptive effects of PA on orofacial nociception in Swiss male mice using tests of formalin-, capsaicin-, and glutamate-induced pain. For each test, eight animals per group were pretreated intraperitoneally by a blinded investigator with PA (50 and 75 mg/kg, i.p.), morphine (5 mg/kg, i.p.) or vehicle (saline + 0.2% Tween 80). The treatment was performed thirty minutes before the induction of orofacial nociception by injecting formalin (20 µl, 2%), capsaicin (20 µl, 2.5 µg) or glutamate (40 µl, 25 mM) solution in the right area of the upper lip. The orofacial nociceptive behavior was timed in all tests by an investigator blinded to the treatments. Statistical analysis was performed by a blinded researcher. Groups were compared with Mann-Whitney’s test and the correlation was calculated with Spearman’s correlation test, describing its median and interquartile range. The magnitude of statistical analysis was also analyzed with confidence intervals, effect size and power. The results indicate that PA blocked the orofacial nociceptive behavior at all tested doses (P <.05) similarly to morphine (P > .05) in the formalin, capsaicin and glutamate tests. Effect size was high in phase I of formalin test for 50 mg/kg and 75 mg/kg of PA (CI95%: 2,32/0,48; power: 84% and CI95%: 2,76/0,82; power: 96.2%, respectively), 75 mg/kg of PA in phase II (CI95%: 2,26/0,44; power: 82.3%) and for 75 mg/kg of PA in glutamate test (CI95=3,16/1,11; power: 99.2%). These findings confirm a strong evidence of antinociceptive properties of PA in the orofacial region considering high values of power observed in formalin and glutamate models, suggesting it as a potential substance for the treatment of clinical conditions involving orofacial pain. / Os monoterpenos são os principais componentes bioativos encontrados em óleos essenciais de plantas com uso medicinal para o tratamento de doenças. Dentre eles, o (S)-(-)-álcool perílico (AP) representa uma molécula promissora com atividades antitumoral, anti-inflamatória e antioxidantes. O presente estudo investigou os efeitos antinociceptivos do AP na nocicepção orofacial em camundongos suíços utilizando os testes de dor induzida por formalina, capsaicina e glutamato. Para cada teste, oito animais por grupo foram pré-tratados via intraperitoneal (i.p.) por um investigador cego com AP (50 e 57 mg/kg, i.p.), morfina (5 mg/kg, i.p.) ou veículo (salina + Tween 80 0.2%). O tratamento foi realizado trinta minutos antes da indução da nocicepção orofacial através da injeção de uma solução de formalina (20 µl, 2%), capsaicina (20 µl, 2.5µg) ou glutamato (40 µl, 25 mM) no lábio superior direito do animal utilizando uma agulha calibre 27G. O tempo de comportamento de nocicepção orofacial foi medido por um investigador cego para os grupos de tratamento, assim como a análise estatística. Os grupos foram comparados utilizando o teste de Mann-Whitney e a correlação entre as doses foi calculada pelo teste de correlação de Spearman, descrevendo para cada grupo os valores de mediana e distância interquartil. A magnitude da análise estatística foi verificada com os intervalos de confiança, magnitude do efeito e poder. Os resultados indicaram que o AP bloqueou o comportamento de nocicepção orofacial em todas as doses testadas (p <,05) de modo similar à morfina (p <,05) nos testes da formalina, capsaicina e glutamato. A magnitude do efeito foi alta para a fase 1 do teste da formalina nas doses de 50 e 75 mg/kg de AP (IC95%: 2,32/0,48; poder: 84% e IC95%: 2,76/0,82; poder: 96,2%, respectivamente), assim como na dose de 75 mg/kg na fase II do teste da formalina (IC95%: 2,26/0,44; poder: 82,3%) e no teste do glutamato (IC95=3,16/1,11; poder: 99,2%). Os testes com AP confirmam uma forte evidência de sua atividade antinociceptiva considerando os altos valores de poder principalmente nos modelos da formalina e glutamato, sendo assim uma substância potencial para o tratamento de condições clínicas envolvendo dor orofacial.

Após 13 anos de debate parlamentar, o governo federal instituiu em 8 de outubro de 2008 uma nova ordem jurídico-administrativa através da Lei n.11.794 que foi regulamentada em 15 de julho de 2009 com o Decreto 6.899. A nova legislação introduziu modelos de condutas que antes não existiam, criou o Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA) e tornou obrigatória a implantação de Comissões de Ética no Uso de Animais (CEUAs) pelas instituições que criam ou utilizam animais para ensino e pesquisa. Partindo do pressuposto de que a Lei n. 11794/2008 é uma política pública regulatória de ciência, tecnologia e inovação em saúde (CT&I/S), o objetivo deste trabalho é demonstrar que a implementação da política regulatória em uma instituição pública federal de pesquisa em saúde é um processo atravessado por relações transnacionais, pelas interpretações que os atores da pesquisa fazem da Lei com base em suas práticas de trabalho, e pelas ações institucionais de tradução local de outras políticas governamentais. O estudo contempla dois níveis de descrição e análise complementares: o da formulação e o da implementação da política regulatória na Fiocruz. O primeiro descreve e analisa o processo de tramitação do Projeto de Lei que originou a Lei e sua regulamentação pelo CONCEA, até dezembro de 2011. O segundo é um estudo de caso inspirado pela abordagem interpretativa, centrado na tradução da Lei pelos pesquisadores, especialistas e gestores da Fiocruz em relação às suas práticas de trabalho. A tese formulada resulta do seguinte percurso metodológico: leitura do movimento de tradução dos interesses dos atores envolvidos no jogo parlamentar do Congresso Nacional de formulação, discussão e aprovação da Lei; delineamento do espaço institucional em que as interpretações dos pesquisadores estão embebidas e que as políticas de CT&I/S são implementadas; leitura das ações e dos programas em CT&I/S do MS para a Fiocruz entre 2004 e 2010; um ano de observação participante nas reuniões da Comissão de Ética no Uso de Animais da Fiocruz; entrevistas semi-estruturadas com 22 pesquisadores, gestores e especialistas em animais de laboratório para compreender o enquadramento da Lei pelos atores nas suas práticas de trabalho. Concluimos afirmando que a aproximação entre a pesquisa pré-clinica e clínica é uma estratégia de contorno às restrições vivenciadas pelos pesquisadores nos processos de trabalho com animais de pesquisa que se desenvolve no cenário da pesquisa translacional e transnacional. O modelo animal é um dispositivo que divide as comunidades instrumentais de pesquisadores biomédicos entre os que utilizam e os que não utilizam animais. A governança da pesquisa biomédica com animais de laboratório não está estabilizada no espaço institucional: as diferentes comunidades instrumentais de usuários de animais, produtores de animais, gestores e membros da CEUA estão em disputa. / After 13 years of parliamentary debate, the Brazilian federal government instituted on October 8, 2008 a new legal and administrative order to regulate the use of animals in research and education. A federal law (Law n. 11794/2008), a federal decree (Decree n. 6899/2009) and three normative resolutions were enacted from 2008 to 2011. Among its clauses, the legislation creates the National Council for the Control of Animal Experimentation (CONCEA) and made mandatory the implementation of an Ethics Committee on the Use of Animals (CEUA) in institutions that breed or use animals for educational purposes and research. We describe and analyze the implementation of the new regulatory regime. Inspired by interpretative policy analysis, we asked how the regulated actors frame the legislation in relation to their work practices. That is, what is directing their attention? How do they interpret and understand the legislation? Do they form different interpretative communities to address the issues associated to the current legislation? Our findings are based on a year participant observation inside of a local CEUA, semi structured interviews (15 seniors researchers, 4 managers and 3 specialists) and document analysis. We concluded by stating that: 1) animal modelsare devices that divide the instrumental community of biomedical researchers in two sub communities: users and not users of research animals; 2) the new legal framework separates the instrumental community of animal users in two subcommunities that strive for diverse interests: research bench and field researchers, (3) the diversity of interpretations of the law associated with each instrumental community may be associated to the lack of regulation of sensitive topics such as surgical procedures and anesthetics, euthanasia and reuse of animals, 4) governance of biomedical research based on laboratory animals is not stabilized inside the institutional space: different instrumental communities of users of animals, livestock producers, managers and CEUAs members are in dispute; 5) the proximity between preclinical research and clinical practice is a strategy to outline the restrictions experienced by researchers in the process of working with research animals that develops in the setting of transnational and translational research.

Introdução: O complexo anatômico-funcional localizado na junção esôfagogástrica é uma barreira ao refluxo gastresofágico. A pressão e o volume intragástricos necessário para vencer essa barreira são denominados Pressão de Vazão Gástrica e Volume de Vazão Gástrico e são utilizados em modelos animais para medir a sua competência, entretanto, a sua validação ainda não foi determinada. Objetivos: Desenvolver um modelo experimental suíno e validar a pressão e o volume intragástricos para estudo da barreira antirrefluxo. Métodos: Suínos da raça Large White com 8 semanas de vida, do sexo feminino foram utilizados neste experimento. Após a anestesia dos animais, foi realizada a manometria esofágica e um cateter de pHmetria posicionado 5 cm acima do esfíncter esofágico inferior. Uma sonda Foley de três vias foi introduzida no estômago através de gastrostomia e o duodeno obliterado através de um laço com gaze úmida. HCL (0,1N) foi infundido lentamente no estômago e medidos a pressão e o volume intragástricos, em tempo real em sistema digital. A pressão e o volume intragástricos no momento da queda abrupta do pH esofágico (pH< 3) foram definidas como Pressão de Vazão Gástrica (PVG) e Volume de Vazão Gástrico (VVG). Após o experimento, a sonda Foley foi retirada, o duodeno liberado e a gastrostomia ocluida com pontos cirúrgicos. Os animais foram mantidos em local apropriado até a repetição dos experimentos sete dias após. Resultados: Dez animais (peso médio = 20 Kg) foram estudados. Os valores médios (± DP) nos dias 0 e 7 foram, respectivamente: PVG 7,66 ± 3,02 versus 7,07 ± 3,54 (p =0,510 teste t de student e 0,557 para o teste exato de Wilcoxon) e VVG 636,70 ± 216.74 versus 608,30 ± 276,66; (p =0,771 teste t de Student e 0,846 para teste de Wilcoxon) não apresentaram diferença estatística significativa. Entretanto, quando aplicado o Coeficiente de Correlação de Concordância a reprodutibilidade foi significativa apenas para a PVG (CCC de 0,648), mas não para a VVG (CCC de 0,27). Conclusão: O modelo animal desenvolvido identifica reprodutibilidade para a PVG, mas não para a VVG. A PVG pode ser utilizada com confiança para o estudo da barreira anti-refluxo. / Introduction: The anatomic functional complex situated at the esophago-gastric junction is a barrier to gastroesophageal reflux. The intragastric pressure and volume necessary to overcome this barrier is called Gastric Yield Pressure and Gastric Yield Volume and used in animal models to measure the anti-reflux competence. However, its validation has not been determined. Objectives: Develop an experimental pig model and validate the intragastric pressure and volume to study the anti-reflux barrier. Methods: Large White pigs two month-old females were used in this experiment. After anesthesia esophageal manometry and a pH sensor placed 05 cm above the lower esophageal sphincter. A threeway Foley catheter was introduced into the stomach through a gastrostomy and duodenum tied with a wet gauze. The Foley probe allowed simultaneous HCl (0.1 N) infusion into the stomach and real time measurement of the intragastric pressure and volume on a digital system system. The intragastric pressure and volume simultaneous to a sudden fall in esophageal pH (pH <3) were defined as the Gastric Yield Pressure (GYP) and the Gastric Yield Volume (GYV). After the experiment, the Foley was removed, the duodenum untied and gastrostomy occluded with surgical stitches. The animals were kept in an appropriate room and the experiment repeated after seven days. Results: Ten animals (mean weight = 20 kg) were studied. The mean values (± SD) on days 0 and 7 were, respectively: GYP 7.66 ± 3.02 and 7.07 ± 3.54 (p = 0,510 student t test and 0.557 for Wilcoxon’s exact test) and GYV 636.70 ± 216.74 and 608.30 ± 276.66, (p =0,771 student t test and 0.846 for Wilcoxon) had no significant statistic difference. However, when the concordance correlation coefficient was applied reproducibility was found only for GYP (CCC = 0,648) but not for GYV (CCC = 0.27). Conclusion: The developed animal model disclosed reproducibility for GYP but not for GYV. GYP may be used with confidence to study the anti-reflux barrier.