OLIVEIRA, Geórgia Mesquita de. Prospecção de proteínas envolvidas no amadurecimento pós-colheita da graviola (Annona muricata L.), 2011. 83 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-20T12:45:41Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_gmoliveira.pdf: 22870177 bytes, checksum: 523d913e6270072f06047beb7e1591f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-05-20T13:10:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_gmoliveira.pdf: 22870177 bytes, checksum: 523d913e6270072f06047beb7e1591f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T13:10:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_gmoliveira.pdf: 22870177 bytes, checksum: 523d913e6270072f06047beb7e1591f1 (MD5) Previous issue date: 2011 / The soursop (Annona muricata L.) fruit is widely used in food, because it provides vitamins, carbohydrates, proteins, lipids and other molecules for human nutrition. In recent years, soursop (exotic tropical fruit) has had a prominent position in the Brazilian economy, especially for northeastern states such as, Ceara, Alagoas, Bahia and Pernambuco. The high production of soursop fruit is mainly in the Northeast by flowering occurs throughout the year, however it is estimated that the post-harvest losses reach 50% of production, as with other native or exotic fruits. Such post-harvest losses of the product are due to the accelerated rate of development and senescence of the fruit. Although some studies on Graviola, biochemical and molecular understanding of the maturation process is very limited making it important to move forward on this knowledge to develop strategies for increasing the shelf life of fruit. In this study, we sought a better protocol for protein extraction from soursop pulp to generate two-dimensional maps and identification of potential proteins involved in post-harvest ripening of the fruit. The soursop fruit in pre-climacteric stage were collected and allowed to ripen at 25 ° C for up to 8 days. Samples of the fruit pulp were collected at 0, 2, 4, 6 and 8 days post-harvest and used for protein extraction and establishment of two-dimensional gels (2D). Two different protein extraction methods were tested and the best one concerning performance and spots with good resolution in two-dimensional gel was chosen for protein analysis. The two-dimensional gels were analyzed using the Image Master for the identification of specific or differential spots, as well as determination of their isoelectric points (IPs) and their molecular masses (MM). The pI and MM data were used to track homologous proteins in angiosperms through searches on databases UniProtKB / Swiss-Prot and UniProtKB / Tremble featuring more than 16 million deposited information. 2D gels initially produced in the pH range 3 to 10 revealed the protein concentrated in the more acidic pHs. This fact determined the pH range 4-7 was used for better separation of spots in the following analysis. After two-dimensional gel analysis of 21 specific spots and 6 differential spots were selected. The analysis in databases allowed inferences about 26 proteins. Among these proteins, several were related to fruit ripening in other species such as proteins with expression regulated by ethylene, protein related to the establishment of the organoleptic characteristics of the fruit and proteins of energy metabolism. With respect to the metabolism of proteins glycolytic pathway, Krebs cycle and ETC were inferred. Previous studies on the participation of the alternative pathway of electrons in the ripening of climacteric graviola have been strengthened. However, this study also showed that in addition to the alternative oxidase (AOX), other components may participate in the regulation of this pathway. The results reveal possible protein targets for the development of strategies and biochemical and molecular control of postharvest ripening of soursop. / A graviola (Annona muricata L.) é uma fruta bastante utilizada na alimentação, pois fornece vitaminas, carboidratos, proteínas, lipídios, fibras e outras moléculas para nutrição humana. Nos últimos anos a graviola (fruto tropical exótico) tem apresentado uma posição de destaque na economia brasileira, principalmente para Estados do Nordeste como Ceará, Alagoas, Bahia e Pernambuco. A alta produção do fruto de graviola no Nordeste se dá principalmente pela floração ocorrer durante o ano todo, contudo estima-se que a perda pós-colheita chega a 50% da produção, como ocorre com outros frutos nativos ou exóticos. Tal perda pós-colheita do produto se deve à acelerada taxa de desenvolvimento e senescência do fruto. Apesar de haver alguns estudos sobre graviola, o entendimento bioquímico e molecular do processo de amadurecimento é muito limitado tornando-se importante avançar nesses conhecimentos a fim de desenvolver estratégias para o aumento da vida de prateleira desse fruto. No presente trabalho, buscou-se por um melhor protocolo de extração de proteínas da polpa de graviola para gerar mapas bidimensionais e identificação de possíveis proteínas envolvidas no amadurecimento pós-colheita do fruto. Os frutos de graviola no estádio pré-climatérico foram colhidos e deixados amadurecer a temperatura de 25° C por até 8 dias. Amostras da polpa do fruto foram coletadas nos tempos 0, 2, 4, 6 e 8 dias pós-colheita e usadas para a extração de proteínas e estabelecimento de géis bidimensionais (2D). Dois diferentes métodos de extração de proteínas foram testados e o que apresentou melhor rendimento e spots com boa resolução em géis bidimensionais foi escolhido para análise de proteínas. Os géis bidimensionais foram analisados através do programa Image Master para a identificação de spots específicos e ou diferenciais, bem como determinação de seus pontos isoelétricos (pIs) e de respectivas massas moleculares (MM). Os dados de pI e MM foram usados para rastrear proteínas homólogas em angiospermas através de buscas nos bancos de dados UniProtKB/Swiss-Prot e UniProtKB/TrEMBL dispondo de mais de 16 milhões de informações depositadas. Géis 2D inicialmente produzidos na faixa de pH de 3 a 10 revelaram proteínas concentradas na região de pHs mais ácidos. Tal fato determinou que a faixa de pH de 4 a 7 fosse usada para melhor separação dos spots em análises seguintes. Após análise dos géis bidimensionais 21 spots específicos e 6 spots diferenciais foram selecionados. As análises em bancos de dados possibilitaram inferir sobre 26 proteínas. Entre essas proteínas, várias estavam relacionadas com o amadurecimento de frutos em outras espécies tais como: proteínas com expressão regulada pelo etileno, proteínas relacionadas com o estabelecimento das características organolépticas do fruto e proteínas do metabolismo energético. Com relação ao metabolismo enegético proteínas da via glicolítica, ciclo de Krebs e CTE foram inferidas. Estudos prévios sobre a participação da via alternativa de elétrons no amadurecimento climatérico da graviola foram reforçados. Entretanto, nesse trabalho foi observado que além da oxidase alternativa (AOX), outros componentes podem participar da regulação dessa via. Os resultados obtidos revelam possíveis proteínas alvo para o desenvolvimento de estratégias bioquímicas e ou moleculares no controle do amadurecimento pós-colheita da graviola.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-11-06T18:48:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_IsolamentoBiomonitoradoAtivos.pdf: 1682506 bytes, checksum: d089c22ff8b90442cdf6cdbb24270b26 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T12:55:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_IsolamentoBiomonitoradoAtivos.pdf: 1682506 bytes, checksum: d089c22ff8b90442cdf6cdbb24270b26 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:57:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_IsolamentoBiomonitoradoAtivos.pdf: 1682506 bytes, checksum: d089c22ff8b90442cdf6cdbb24270b26 (MD5) Previous issue date: 2012 / Neste trabalho foi realizado o estudo biomonitorado da toxicidade de frações e metabólitos secundários isolados das folhas de Annona crassiflora Mart., planta conhecida popularmente como araticum ou marolo. Além disso, foi investigada a atividade antimalárica dos compostos isolados e veiculados em nanoemulsões. O fracionamento do extrato etanólico, obtido de suas folhas, foi biomonitorado através do teste de letalidade sobre as larvas de Artemia salina, para a seleção de frações potenciais para obtenção de substâncias bioativas. O fracionamento do extrato etanólico bruto foi realizado através de extração ácida e métodos cromatográficos “flash” e CLAE-PDA. As frações obtidas foram submetidas à prospecção fitoquímica, com reagentes e reveladores para identificação das classes de metabólitos secundários, que levaram à detecção de alcaloides nas frações clorofórmicas (ACF-CI e ACF-CII). Foi isolado o alcaloide majoritário norestefalagina (NOR). Sua identificação foi realizada através de métodos espectrométricos como UV, IV, RMN de 1H e de 13C, DEPT 135, mapas de contornos COSY, HSQC, HMBC e NOESY. Foi também desenvolvido e validado um método CLAE-PDA para quantificação da NOR em nanoemulsões, através da avaliação da linearidade, precisão, exatidão, seletividade e limites de quantificação e detecção para a metodologia escolhida. Nanoemulsões contendo NOR (NE-NOR) foram produzidas e apresentaram tamanho e índice de polidispersão inferiores a 300nm nas concentrações entre 0,1 e 1,0 mg/mL. O potencial zeta das NE foi determinado, mas não foram observadas diferenças significativas entre as formulações testadas, estando todas em torno de -50 mV. A eficiência de encapsulação determinada foi de 22,0; 45,6 e 44,9% nas concentrações de 1,0; 2,0 e 5,0 mg/mL, respectivamente. As NE-NOR nas concentrações de 0,1 e 0,5 mg/mL apresentaram estabilidade de nove meses considerando os parâmetros físico-químicos avaliados. Na determinação da atividade hemolítica da NOR, foi constatado que esta foi inferior a 10% nas concentrações de 0,5 e 2,0 μg/mL. No ensaio de atividade antimalárica, a NOR em solução nas doses de 4,0; 8,0 e 20,0 mg/kg por via intraperitoneal reduziu significativamente (68 a 83%) a parasitemia dos camundongos infectados pelo Plasmodium berghei NK65 no quarto dia de infecção, quando comparada ao grupo controle não tratado. A redução da parasitemia foi de 80 a 84% para a NOR encapsulada nas nanoemulsões nas mesmas concentrações. A formulação de NE-NOR (4 mg/kg) apresentou maior redução da parasitemia ao longo do estudo, revelando seu efeito inibitório tardio sobre a carga parasitária dos animais. ____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: This work reports the bioguided study of the toxicity of fractions and secondary metabolites isolated from the leaves of Annona crassiflora Mart. popularly known as “araticum” or “marolo”, as well as the investigation of the antimalarial activity of isolated substances loaded in nanoemulsions. Fractionation of leave’s ethanolic extract was bioguided by the test of lethality using brine shrimp metanauplii. Itallows the selection of potential fractions containing bioactive substances. The crude ethanol extract fractionation was performed by acid-base extraction using flash chromatography and detected by HPLC-PDA. Phytochemical screening of the fractions with reagents enables detection of alkaloids from chloroform fractions (ACF and ACF-CI-CII) and isolation of the major aporphine alkaloid norstephalagine (NOR). Its identification was performed by spectrometric methods such as UV, IR, 1H NMR and 13C NMR, DEPT 135, contour maps COSY, HSQC, HMBC and NOESY. It was developed and validated an HPLC-PDA methodology for quantification of NOR in nanoemulsions, assessed by linearity, precision, accuracy, selectivity and limits of quantification and detection determination of the method. Nanoemulsions containing NOR were developed and presented suitable size distribution and surface charge (-50mV) between 0,1 e 1,0 mg/mL. Encapsulation efficiency was 22,0; 45,6 e 44,9% for the concentrations of 1.0; 2.0 e 5.0 mg/mL respectively. NE-NOR at 0,1 e 0,5 mg/mL had shown good stability following 9 months in all physicochemical parameters evaluated. The hemolytic activity of NOR was lower than 10% at concentrations of 0.5 e 2.0 μg/mL. The antimalarial activity of alkaloid in mice infected with Plasmodium berghei NK65 was also performed. In 4th and 7th days pos-infection, the parasitemia of mice decreased in the range of 70 and 80% for the tested groups, similarly with chloroquine group (90%). The NOR nanoemulsified treated group showed prolonged effect of alkaloid on parasitemia reduction, indicating the maintenance of activity when this substance was associated to nanostructures.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-22Bitstream added on 2014-06-13T19:12:31Z : No. of bitstreams: 1 corsato_jm_me_botib.pdf: 479238 bytes, checksum: f0cb01da3cfdcc3e0d0cdcc7f0091f97 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho foi realizado no Departamento de Botânica, Instituto de Biociências – UNESP, Campus de Botucatu, e teve como objetivo avaliar a tolerância à dessecação de sementes de araticum-de-terra-fria (Annona emarginata (Schldtl.) H. Rainer), os açúcares envolvidos no processo e o efeito de GA4+7 N- (fenilmetil)-aminopurina na germinação das sementes submetidas aos níveis de secagem e além de avaliar o comportamento fisiológico das sementes após armazenadas no fruto (repouso pós-colheita). Foram instalados dois experimentos em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições de 25 sementes por parcela. No primeiro As sementes foram secas em estufa de circulação forçada de ar (50°C) obtendo-se níveis de água de: 31% testemunha, 19%, 12% e 5%. Após secagem, as sementes foram embebidas em GA4+7 N-(fenilmetil)-aminopurina (0, 250, 500, 750 e 1000 mg L-1) por 60 horas. Já O segundo experimento foi divido em duas etapas. Na primeira os frutos maduros foram armazenados a 5°C pelo período de 0, 7, 14, 21 e 28 dias. Após armazenamento as sementes foram colocadas para embeber em água destilada e em solução de GA4+7 N-(fenilmetil)-aminopurina (800 mg L-1 ) por 60 horas. Na segunda etapa, as sementes foram armazenadas em sacos de papel tipo Kraft, envoltas por um saco de polietileno e acondicionadas em câmaras de germinação nas temperaturas de 5°C, 15°C e 25°C, onde permaneceram armazenadas por 30, 60, 90, 120 e 150 dias sendo o tempo 0 a testemunha. Após armazenamento as sementes foram colocadas para embeber em água destilada e em solução de GA4+7 N-(fenilmetil)- aminopurina (800 mg L-1 ) por 60 horas. As variáveis analisadas foram: condutividade elétrica, porcentagem, tempo médio, índice de velocidade, freqüência e sincronização da germinação, porcentagem de sementes dormentes, porcentagem de plântulas normais, comprimento... / The present study was carried out at the Department of Botany, Institute of Biosciences – UNESP, Botucatu Campus, São Paulo State, Brazil, aimed to assess the tolerance to desiccation of “araticum-de-terra-fria” (Annona emarginata (Schldtl.) H. Rainer) seeds, the sugars involved in this process, the effect of GA4+7 + N- (phenylmethyl)-1H-purine-6-amine on the germination of seeds subjected to different desiccation levels, and the physiological behavior of seeds stored in the fruit (postharvest resting period) and after fruit extraction. Two experiments were carried out in completely randomized design, including 4 replicates of 25 seeds per plot. In the first one, seeds were drought in forced aeration oven (50°C) and the following water levels were obtained: 31% control, 19%, 12% and 5%. After desiccation, seeds were immersed in GA4+7 + N-(phenylmethyl)-1H-purine-6-amine (0, 250, 500, 750 and 1000 mg L-1) for 60h. The second experiment was divided into two steps: in the first one, mature fruits were stored at 5°C for 0, 7, 14, 21 and 28 days. Then, the fruits were manually pulped and the seeds were allowed to imbibe in distilled water and in GA4+7 + N- (phenylmethyl)-1H-purine-6-amine solution at the concentration of 800 mg L-1 for 60h. In the second step, the seeds were involved with polyethylene bags, placed inside Krafttype paper bags and stored in a germination chamber at 5°C, 15°C and 25°C for 30, 60, 90, 120 and 150 days; time 0 was adopted as control. Following storage, seeds were allowed to imbibe in distilled water and in GA4+7 + N-(phenylmethyl)-1H-purine-6- amine solution at the concentration of 800 mg L-1 for 60h. The evaluated variables were electrical conductivity; germination percentage, mean time, speed index, frequency and synchronization; percentage of dormant seeds; quantitative analysis of total and reducing soluble sugars; and sugar profile by using ... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-09-24T21:52:57Z No. of bitstreams: 1 2018_AlexandreCesarPalermo.pdf: 7779427 bytes, checksum: 91804ca8b5c55be16b216ae3fdeba60a (MD5) / Approved for entry into archive by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-09-25T19:41:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_AlexandreCesarPalermo.pdf: 7779427 bytes, checksum: 91804ca8b5c55be16b216ae3fdeba60a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-25T19:41:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_AlexandreCesarPalermo.pdf: 7779427 bytes, checksum: 91804ca8b5c55be16b216ae3fdeba60a (MD5) Previous issue date: 2018-09-19 / O mosaico vegetacional do Cerrado possui composição florística única para cada área observada. Além disso, com a presente redução da cobertura vegetal do Cerrado, diversas espécies arbóreas têm suas áreas de ocorrência diminuídas e como consequência perdem parte de sua diversidade genética. Nesse aspecto, a espécie Annona crassiflora que possui importância econômica e social sofre com a redução de sua área de ocorrência, polinização e dispersão deficientes e consequente perda de diversidade genética. O objetivo deste trabalho foi avaliar diferenças nos padrões espaciais de Annona crassiflora em quatro populações do Brasil Central, investigar a diversidade genética populacional de Annona crassiflora por meio de dados morfométricos de frutos e sementes e simular uma seleção genética por meio de parâmetros de variância por usando o programa Selegen-REML/BLUP. Os padrões de distribuição foram relacionados com o grau de antropização das áreas mostrando efeitos negativos da degradação nas populações estudadas. O aumento da endogamia gerado pela degradação culmina na redução da diversidade genética da população. De forma geral as maiores dimensões foram encontradas nas populações de Planaltina e Buritis. Diante disso as análises indicam alta diversidade genética e frutos/sementes com dimensões maiores nos locais com melhor estado de conservação. Tanto a análise de variância quanto a análise de deviance empregadas mostraram grande diversidade genética interpopulacional que se refletiu no dendrograma obtido onde as matrizes formaram oito grupos distintos. A simulação de seleção das populações mostrou que as populações FAL, Planaltina e Buritis são as mais proeminentes e que não há um predomínio de uma população na simulação. Assim, a estratégia de seleção a ser utilizada deve levar em consideração esse cenário. / The Cerrado vegetative mosaic has a unique floristic composition for each area observed. In addition, with the present reduction of the vegetation cover of the Cerrado, several tree species have their areas of occurrence diminished and as a consequence they lose part of their genetic diversity. In this aspect, the species Annona crassiflora that has economic and social importance suffers with the reduction of its area of occurrence, pollination and dispersion deficient and consequent loss of genetic diversity. The objective of this work was to evaluate differences in the spatial patterns of Annona crassiflora in four populations of Central Brazil, to investigate the population genetic diversity of Annona crassiflora by means of morphometric data of fruits and seeds and to simulate a genetic selection by means of variance parameters by using the Selegen-REML / BLUP program. The distribution patterns were related to the degree of anthropization of the areas showing negative effects of the degradation in the populations studied. The increase in inbreeding generated by the degradation culminates in the reduction of the genetic diversity of the population. In general, the largest dimensions were found in the populations of Planaltina and Buritis. Therefore, the analyzes indicate high genetic diversity and fruits / seeds with larger dimensions in the best preserved state. Both the analysis of variance and the deviance analysis employed showed great interpopulational genetic diversity that was reflected in the dendrogram obtained where the matrices formed eight distinct groups. The simulation of population selection showed that the FAL, Planaltina and Buritis populations are the most prominent and that there is no predominance of a population in the simulation. Thus, the selection strategy to be used must take into account this scenario.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-02-21T21:07:28Z No. of bitstreams: 1 AlexandreCoelhoSerquiz_TESE.pdf: 8370235 bytes, checksum: aa1e631572517b48190e74a0576f6dee (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-02-22T00:34:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AlexandreCoelhoSerquiz_TESE.pdf: 8370235 bytes, checksum: aa1e631572517b48190e74a0576f6dee (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T00:34:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlexandreCoelhoSerquiz_TESE.pdf: 8370235 bytes, checksum: aa1e631572517b48190e74a0576f6dee (MD5) Previous issue date: 2017-11-27 / A exposi??o ? fatores ambientais, n?veis elevados de xenobi?ticos na dieta e at? as rea??es bioqu?micas realizadas pelo metabolismo humano aumentam a gera??o de esp?cies reativas de oxig?nio (ERO) e nitrog?nio (ERN). Essa eleva??o de ERO e ERN pode promover estresse oxidativo e gerar uma s?rie de problemas fisiopatol?gicos. Estudos bioqu?micos relatam que os antioxidantes diet?ticos possuem benef?cios na preven??o de doen?as. As frutas se destacam pela grande quantidade de subst?ncias bioativas com essa atividade ben?fica. A atem?ia, nosso objeto de estudo, ainda foi pouco estudada e portanto n?o se sabe seus componentes qu?micos (nutrientes) e seus efeitos no metabolismo ap?s sua ingesta. Portanto, ? muito importante compreender os mecanismos da rea??o dos antioxidantes presentes na fruta atem?ia com as esp?cies reativas. Neste trabalho foram feitos ensaios in vitro e in vivo, dos quais destacam-se a forma??o de extrato aquoso e farinha das partes da semente, casca e polpa, quantifica??o de prote?nas, carboidratos e compostos fen?licos, como tamb?m a avalia??o da presen?a de inibidores de proteases e hemaglutininas, al?m dos testes antioxidantes; capacidade antioxidante total (CAT), sequestro de radicais hidroxila (SRH), sequestro de radicais super?xido (SRS), quela??o de metais (QM), al?m da avalia??o de estresse oxidativo por par?metros bioqu?micos e histol?gico em animais alimentados com as partes da atemoia. Foram detectados a presen?a de inibidores de protease e aglutininas nos extratos da atemoia, essas subst?ncias possuem potencial para serem utilizadas na ?rea da biotecnologia ou biom?dica, ajudando na preven??o de doen?as ou at? mesmo no melhoramento gen?tico das frutas. Os extratos apresentaram prote?nas, carboidratos e compostos fen?licos em sua composi??o, fato que sugere uma sinergia entre esses compostos no efeito antioxidante, vale ressaltar que no estudo sup?em-se a presen?a de outras subst?ncias n?o conhecidas, que podem estar influenciando nesses efeitos. J? os estudos in vivo mostram um efeito n?o t?xico dos extratos. Os melhores resultados in vivo foram obtidos com extrato semente. Sendo assim, prop?em-se que os extratos de atemoia tem propriedades funcionais. E estudos futuros devem ser realizados com intuito de se elucidar as vias e compostos espec?ficos que possam atuar nesses benef?cios. / An exhibition of human food, biochemistry and mathematics, increase the generation of reactive oxygen species (ROS) and nitrogen (RN). This elevation of ROS and RNS creates an oxidative stress, which can generate a series of pathophysiological problems. Biochemical studies report that dietary antioxidants have benefits in disease prevention. Fruits stand out for the great amount of bioactive substances with this beneficial activity. Nutrition is one of them, however, it has been little studied and it is not possible to know its chemical components (nutrients) and their effects on metabolism after its ingestion. Therefore, it is very important for the mechanisms of the reaction of the antioxidants present in the fruit to the redo with the reactive species. In this work, in vitro and in vivo assays, which include the formation of aqueous extract and flour of the parts of the seed, peel and pulp, quantification of proteins, carbohydrates and phenolic compounds, as well as an evaluation of the presence of protease inhibitors and hemagglutinins, in addition to the antioxidant testes; total antioxidant capacity (CAT), hydroxyl radical sequestration (SRH), superoxide radical scavenging (SRS), metal chelation (QM), and biochemical and histological evaluation of oxidative stress in animals fed as parts of atemoia. A presence of protease inhibitors and agglutinins have been detected in atemoia extracts, these are necessary for use in the biotechnology or biomedical area, helping to prevent diseases or even genetic improvement of fruits. Extruders presented proteins, carbohydrates and phenolic compounds in their composition, a fact that suggests a synergy between these compounds, it is not an antioxidant effect, it is worth mentioning that the study supposes a presence of other substances not known, which may be influencing these effects . Already in vivo studies show a nontoxic effect of the extracts. The best in vivo results were obtained with seed extract. Thus, it is proposed that the extracts of atemoia have properties. Future studies should be carried out to become segmental and specific segments.

Orientador: Maria Ligia Rodrigues Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T16:03:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coelho_MirelaBatista_D.pdf: 2076971 bytes, checksum: 2ad2d77c61af65420ba1c0a4c66e5571 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As lectinas são um grupo de proteínas e/ou glicoproteínas que se ligam específica e reversivelmente a carboidratos. Estudos têm demonstrado que essas proteínas possuem importantes atividades biológicas como atividade inseticida contra insetos e respostas imunológicas e fisiológicas em animais. Neste trabalho, tivemos como objetivos comparar os efeitos da lectina de sementes de Annona coriacea (ACLEC), com massa molecular de aproximadamente 14 kDa, sobre o desenvolvimento dos lepidopteras Anagasta kuehniella e Corcyra cephalonica assim como o estudo dos índices nutricionais desses insetos, e investigar a habilidade dessa lectina em induzir a migração de leucócitos em camundongos e os mecanismos farmacológicos delineadores desse processo, utilizando peritonite como modelo experimental. Os resultados da atividade inseticida de ACLEC mostraram que a lectina não produziu efeitos significativos sobre a sobrevivência e o peso larval de Corcyra cephalonica alimentada em dieta contendo até 2,0% de ACLEC, porém, para Anagasta kuehniella, em uma dieta artificial contendo 1,5% e 1,0% de ACLEC produziu um LD50 e WD50, respectivamente. Os resultados dos experimentos do consumo alimentar dos insetos apresentaram apenas uma redução na eficiência de conversão do alimento ingerido (ECI) e do alimento digerido (ECD) em larvas de A. kuehniela. A presença de ACLEC (2,0%) na dieta alimentar em ambos os insetos não modificou a digestibilidade aproximada (AD), mas promoveu um aumento no custo metabólico (CM) e um aumento da atividade proteolítica nas fezes do lepidóptero A. kuehniella. Este mecanismo pode promover uma modificação no meio ambiente da membrana e consequente disrupção do mecanismo de reciclagem ede enzimas, idicando a possibilidade de utulizar esta lectinas como uma estratégia biotecnológica para o manejo de insetos. Para a análise da atividade proinflamatória de ACLEC, camundongos Swiss machos foram injetados intraperitonealmente com ACLEC (3-100 µg/cavidade), de 4 a 96 h e logo após a contagem de leucócitos no fuído do lavado peritoneal foi avaliado. ACLEC induziu uma acumulação de neutrófilos dose-dependente, alcançando a respsota máxima a 16 h após a injeção (aproximadamente um aumento de 40x para 30 µg/cavidade). Uma significante acumulação de células mononucleares foi observada a 72 h (aumento de 2,7x). O carboidrato manose aboliu o inlfuxo de neutrófilos, porém sacarose e glicose não tiveram efeito. Dexametasona, o inibidor de ciclooxigenase-2 celecoxibe e o antagonista do receptor PAF PCA4248 significantemente reduziram o influxo de neutrófilos induzido por ACLEC. O antagonista de taquicinina NK1 SR140333, o antagonista de taquicinina NK2 SR48968, o inibidor não seletivo de NO L-NAME, o inibidor seletivo de NOS Aminoguanidina e o inibidor de lipoxigenase AA861 todos falharam em modificar a resposta induzida por ACLEC. Em conclusão, ACLEC é capaz de atrair neutrófilos na cavidade peritoneal de camundongos por mecanismos envolvendo interações da lectinas com o reconhecimento específico de resíduos de manose presentes nas células, induzindo a liberação de mediadores derivados de COX-2 e PAF / Abstract: Lectins are a group of proteins and/or glycoproteins, which exhibit specific and reversible carbohydrate-binding activities. Studies have demonstrated that such proteins possess important biological activities including insecticide activity as well as immunological and physiological responses in animals. In this investigation, our aim was to compare the effects of lectin isolated of Annona coriacea (ACLEC) seeds, with a molecular mass of 14 kDa, on the development of Anagasta kuehiella and Corcyra cephalonica Lepidopteras, as well as the study of their nutritional index. Since plant lectins are known to present inflammatory activity, this study also sought to investigate the leukocyte migration induced by ACLEC, and inflammatory mediators involved in this phenomenon. The results of insecticide activity of ACLEC showed that the lectin did not produce significant effects on survival and weight of C. cephalonica on an artificial diet of 2,0% of ACLEC, however, for A. kuehniella,on an artificial diet containing 1.5% and 1.0% ACLEC, it produced a LD50 and WD50, respectively. The results from dietary utilization experiments carried out with caterpillars presented only a reduction in efficiency of conversion of ingested food (ECI) and digested food (ECD) in A. kuehniella. ACLEC in the diet did not modify the approximate digestibility (AD) of any insect, but an increase of CM (metabolic cost) and an increase of proteolytic activity in the faeces were observed in A. kuehniella. These results indicate that ACLEC possesses an insecticide effect only towards A. kuehniella larvae, possibly through the binding of lectin on chitin components of membrane peritrophic or glycosylated proteins in the insect midgut. This mechanism can promote a change in membrane environment with the consequent disruption of enzyme recycling mechanisms, indicating the possibility of using this lectin in a biotechnological strategy for insect management. To test proinflammatory activity of ACLEC, male Swiss mice were intraperitoneally injected with ACLEC (3-100 µg/cavity), and at 4 to 96 h thereafter the leukocyte counts in peritoneal washing fluid were evaluated. ACLEC induced a dose-dependent neutrophil accumulation, reaching maximal responses at 16 h after injection (approximately 40-fold increase for 30 µg/cavity). Significant accumulation of mononuclear cells was observed at 72 h (2.7-fold increase). The carbohydrate mannose nearly abolished the neutrophil influx, whereas sucrose and glucose had no effect. Dexamethasone, the cyclooxygenase-2 inhibitor celecoxib and the PAF receptor antagonist PCA4248 significantly reduced ACLEC-induced neutrophil influx. The tachykinin NK1 antagonist SR140333, the tachykinin NK2 antagonist SR48968, the non-selective NO inhibitor L-NAME, the selective inducible NOS inhibitor aminoguanidine and the lypoxygenase inhibitor AA861 all failed to modify the ACLEC-induced responses. In conclusion, ACLEC is able to attract neutrophils into the mice peritoneal cavity by mechanisms involving interactions of the lectin with cell-specific mannose recognition, leading to the release of COX-2-derived mediators and PAF / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Estudos anteriores dos alcalóides totais (AT) de Annona coriacea Mart. (Annonaceae) revelaram atividade antiprotozoária promissora. No presente trabalho, realizou-se o fracionamento biomonitorado dos AT de folha e selecionaram-se duas frações ativas (100% morte), frente às formas promastigotas de Leishmania (L.) chagasi in vitro, para a caracterização dos alcalóides, por CG-EM. Os AT bioativos de caule (100% morte) foram analisados sem fracionamento prévio. Em paralelo, efetuou-se amostragem de três exemplares de A. coriacea, analisados em conjunto, para o acompanhamento da variação do rendimento em AT e da atividade leishmanicida, por 12 meses. Nas frações bioativas de folha, foram caracterizados: estefarina (proaporfínico) e nornuciferina (noraporfínico) e nos AT de caule: pronuciferina (proaporfínico), asimilobina (noraporfínico) e boldina (aporfínico). A presença de boldina foi confirmada pela análise CG-EM do padrão, nas mesmas condições dos AT. Os resultados mostraram-se inéditos para a espécie e a ocorrência de pronuciferina e boldina constituiu o primeiro relato, no gênero Annona. Os dados referentes ao rendimento em AT (folha e caule) e à atividade antipromastigota in vitro indicaram comportamento, praticamente, constante dos parâmetros ao longo do ano. O óleo volátil de folha foi analisado, por CG-EM, tendo-se identificado 60 compostos, em mistura complexa de sesquiterpenos (76,7%) e monoterpenos (23,3%). O constituinte majoritário foi o sesquiterpeno biciclogermacreno (39,8%). O óleo volátil foi avaliado in vitro e apresentou atividade frente às formas promastigotas de quatro espécies de Leishmania e nas formas tripomastigotas de T. cruzi. A determinação e obtenção dos compostos bioativos motiva a continuidade da pesquisa. / Previous studies of total alkaloids (TA) from Annona coriacea Mart. (Annonaceae) have revealed potential antiprotozoal activity. In this study a bioguided fractionation of leaves TA was conducted and two fractions were active in vitro against Leishmania (L.) chagasi promastigotes (100% death) and selected in order to identify the alkaloid constituents, by GC-MS analysis. Stem bioactive TA (100% death) were also analyzed, without previous fractionation. Parallel to that, a sample of three combined specimens of A. coriacea (leaves and stem) was evaluated for the annual variation of TA production and the leishmanicide activity. Stefarine (proaporphine) and nornuciferine (noraporphine) were identified in the bioactive fractions of leaves while pronuciferine (proaporphine), asimilobine (noraporphine) and boldine (aporphine) were identified in stem TA. Boldine was confirmed by the GC-MS evaluation of the standard, under the same conditions of the TA. It was the first report of those alkaloids in this species and for pronuciferine and boldine occurrence in Annona genus. The TA yields (leaves and stem) and the in vitro antipromastigote activity remained almost unaltered throughout the year. The volatile oil of leaves was also analyzed by GC-MS. Sixty compounds were indentified in a complex mixture of sesquiterpenes (76.7%) and monoterpenes (23.3%). Byciclogermacrene was its major component (39.8%). The volatile oil was evaluated in vitro and was active against four species of Leishmania promastigotes and also against T. cruzi tripomastigotes. The identification of the bioactive constituents and their isolation are promising for further studies.

O envenenamento humano por Lachesis, embora pouco freqüente, é bastante severo, caracterizado por pronunciado dano tecidual local e efeitos sistêmicos, como hipotensão e bradicardia, tonturas, náuseas, cólicas abdominais e diarréia. A soroterapia é única terapia específica disponível. Entretanto, para muitas plantas é atribuída ação antiofídica. No Norte e Nordeste brasileiro, o suco da fruta (SAm) e o extrato aquoso de folhas (EFAm) de graviola (Annona muricata) são freqüentemente usados pela população local para tratar o envenenamento por Lachesis muta rhombeata. O objetivo deste estudo foi avaliar a letalidade, as alterações de parâmetros hematológicos, bioquímicos, de pressão arterial e processo inflamatório induzidos pela peçonha de L. m. rhombeata (PLmr), bem como a relevância do tratamento com EFAm e SAm no envenenamento. O perfil hematológico mostra uma hemoconcentração inicial seguida de extensa hemólise, evidenciada pela redução do hematócrito, hemoglobina total e contagem global de eritrócitos, não alterado pelos tratamentos. A contagem diferencial de leucócitos revela neutrofilia nas primeiras horas de envenenamento e aumento de linfócitos 24h após a injeção da peçonha, características de processo inflamatório agudo, não influenciado pelos tratamentos. Houve diminuição de albumina e proteínas totais e aumento de uréia, decorrentes do envenenamento. Os valores de AST foram ainda maiores nos animais tratados, mas os aumentos de CK foram reduzidos pelos tratamentos com EFAm e SAm. Houve aumento de TP e TTPA na primeira hora, e diminuição da pressão arterial tempo dependente no envenenamento. O suco intensificou a queda da pressão. Foi observado aumento de IL-6 nas primeiras horas de envenenamento e alterações das proteínas plasmáticas características de processo inflamatório agudo, como esperado em casos de envenenamento. O ensaio de letalidade revela DL50 de 51,0 ± 6,3 mg/kg, para o grupo injetados com a peçonha e sem tratamento; de 56,3 ± 8,5 mg/kg, para o grupo injetado com a peçonha e tratado com SAm e de 62,2 ± 6,8 mg/kg, para o grupo injetado com a peçonha e tratado com EFAm. Concluindo, o quadro clínico do envenenamento laquético foi bem analisado, que era o objetivo principal do trabalho. Avaliou-se também a eficiência do uso popular da graviola (A. muricata) nos acidentes ofídicos com a serpente L. m. rhombeata. De forma geral, os tratamentos com EFAm e com SAm não alteram de forma relevante o quadro clínico do envenenamento, como observado pelos valores semelhantes de DL50. Entretanto, o tratamento com suco parece agravar a hipotensão causada pelo envenenamento e provocar um aumento significativo das transaminases hepáticas. Por outro lado, é possível notar nos animais tratados menores alterações da hemostasia, bem como uma possível proteção contra a miotoxicidade da peçonha. / The human envenomation by Lachesis, although rare, is quite severe, characterized by pronounced local tissue damage and systemic effects, such as hypotension and bradycardia, dizziness, nausea, abdominal cramps and diarrhea. The only specific therapy available is the serum therapy. However, for many plants is attributed antiophidic action. In North and Northeast Brazil, the fruit juice and the aqueous extract of leaves of soursop (Annona muricata) are often used by local population to treat Lachesis muta rhombeata envenomation. The aim of this study was evaluate the lethality, hematological, biochemical, blood pressure, and inflammation parameters induced by L. m. rhombeata snake venom, as well as the relevance of treatment with fruit juice and the aqueous extract of leaves of soursop. The hematological parameters shows an initial hemoconcentration followed by extensive hemolysis, as evidenced by decreased hematocrit, total hemoglobin and total red blood cells count, which were not altered by the treatments. The leukocytes differential count revealed neutrophilia in the early hours after the envenomation and increased lymphocytes 24h after the injection of L. m. rhombeata venom, characteristics of acute inflammatory process, which were not influenced by treatments. There was a decrease of albumin and total proteins and urea increased as a result of the envenomation. The AST concentration were still higher in treated animals, although the increases in CK values were reduced by treatments with leaves extract and soursop juice. There was an increase of prothrombin time and activated partial thromboplastin time during the first hour, and there were time dependent decrease of the blood pressure after the envenomation. The juice intensified the pressure decrease. An increase of IL-6 was observed in the early hours after the envenomation, as well as changes in the profile of plasmatic proteins, characteristic of acute inflammatory process, as expected in cases of snake bite. The lethality assay reveals LD50 of 51,0 ± 6,3 mg / kg for the group injected with venom without treatment; 48,3 ± 8,6 mg /kg for the group injected with venom and treated with juice of A. muricata; and 62,2 ± 6,8 mg/kg for the group injected with venom and treated with leaves extract of A. muricata. In conclusion, the clinical profile of L. m. rhmobeata envenomation was well analyzed, the main goal of this work. The efficiency of the popular use of soursop on envenomation by L. m. rhombeata snakes was also evaluated. In general, treatments with extracts of leaves and soursop juice do not significantly modify the clinical profile of the envenomation, as observed by similar LD50 values. However, treatment with juice seems to worsen the hypotension caused by envenomation and induce a significant increase in AST levels. On the other hand, there are lower changes in hemostasis on treated animals, as well as a possible protection against the myotoxicity of the venom.

Annona hypoglauca Mart. foi coletada em área inundada da Floresta Amazônica, próximo à Manaus (Brasil). Os alcalóides foram obtidos do extrato bruto do caule por partição ácido-base, e a partir do resíduo dessa extração foi realizada a partição com solventes de diferentes polaridades, originando as frações livres de alcalóides. A partir da análise de CG-EM dos alcalóides totais foi possível caracterizar sete alcalóides aporfínicos (actinodafinina, anonaina, glaucina, isoboldina, isodomesticina, nornuciferina e roemerina) e possivelmente duas protoberberinas (esculerina e caseadina). Os alcalóides totais foram fracionados em coluna cromatográfica e posteriormente purificados em placa cromatográfica preparativa permitindo o isolamento de dois alcalóides aporfínicos: actinodafinina e isoboldina. As estruturas desses produtos naturais foram definidos com base em espectros de dados, incluindo 1H RMN, 13C RMN, 13C DEPT e CG-EM. Pela primeira vez a ocorrência da actinodafinina esta sendo reportada em uma espécies de Annona. O extrato bruto, as frações livres de alcalóides, os alcalóides totais e suas frações foram submetidos a avaliação da atividade antibacteriana por microdiluição e atividade citotóxica in vitro frente a células de tumores humanos. Para todos os extratos testados, somente os alcalóides totais e suas frações apresentaram atividade frente a bactérias Gram +. No ensaio de citotoxicidade com linhagens de células de tumores, o extrato bruto foi capaz de inibir o crescimento de todas as linhagens celulares testadas, apresentando efeito letal para a linhagem de Câncer de Cólon (KM-12), enquanto as frações livres de alcalóides demonstraram baixa atividade. Por outro lado, as frações livres de alcalóides apresentaram atividade mais pronunciada para a linhagem de Câncer de Pulmão (NCIH-460) do que os alcalóides. Assim, a atividade citotóxica encontrada no extrato bruto é decorrente do sinergismo ou complementação entre os componentes das frações alcaloídicas e não alcaloídicas, isto é, nenhuma das frações isoladamente é responsável pela atividade observada no extrato bruto. / Annona hypoglauca Mart. was collected in the flooded areas of the Amazonian Forest near Manaus (Brazil). The alkaloids were obtained from the stems crude extract by acid-base partitioning and the remaining alkaloid-free extract was partitioned with organic solvents of different polarity. The GC/MS analysis of the total alkaloids allowed the identification of seven aporphine alkaloids (actinophanine, anonaine, glaucine, isoboldine, isodomesticine, nornuciferine and roemerine) and possibly two proberberine alkaloids (scoulerine and caseadine). The total alkaloids were fractionated by column chromatography and further purified by preparative thin-layer chromatography allowing the isolation of two aporphine alkaloids: actinodaphnine and isoboldine. The structures of these natural products were defined based on their spectral data, including 1H NMR, 13C NMR, 13C DEPT and CG/MS. This is the first report for the occurrence of actinodaphnine in Annona species. The crude extract, alkaloid-free organic extracts, total alkaloids and its fractions were tested for their antibacterial activity by the microdilution broth assay and cytotoxic activity against in vitro tissue culture cells of human. From all the extracts assayed, only the total alkaloids and their fractions showed a relevant antibacterial activity against Gram positive organisms. In the cytotoxicity assay with human tumor cell lines, the crude extract was able to inhibit the growth of all cell lines tested, with a lethal effect for the colon cancer (KM-12) cell line. The evaluation of this activity with the total alkaloid and alkaloid-free fractions indicated selectivity for the different cellular lines. The alkaloid fraction presented high growth inhibition for the colon cancer cell line (KM-12), while the alkaloid-free fractions displayed lower activity. On the other hand, the alkaloid free fractions showed a higher activity for the lung cancer cell line (NCIH-460) than the total alkaloids. Thus, the cytotoxic activity found in the crude extract is the result of the synergism or complementary activity among the components of the alkaloid and alkaloid-free fractions, e.g, none of the fractions separately is responsible for the activity observed in the crude extract.

Estudos anteriores dos alcalóides totais (AT) de Annona coriacea Mart. (Annonaceae) revelaram atividade antiprotozoária promissora. No presente trabalho, realizou-se o fracionamento biomonitorado dos AT de folha e selecionaram-se duas frações ativas (100% morte), frente às formas promastigotas de Leishmania (L.) chagasi in vitro, para a caracterização dos alcalóides, por CG-EM. Os AT bioativos de caule (100% morte) foram analisados sem fracionamento prévio. Em paralelo, efetuou-se amostragem de três exemplares de A. coriacea, analisados em conjunto, para o acompanhamento da variação do rendimento em AT e da atividade leishmanicida, por 12 meses. Nas frações bioativas de folha, foram caracterizados: estefarina (proaporfínico) e nornuciferina (noraporfínico) e nos AT de caule: pronuciferina (proaporfínico), asimilobina (noraporfínico) e boldina (aporfínico). A presença de boldina foi confirmada pela análise CG-EM do padrão, nas mesmas condições dos AT. Os resultados mostraram-se inéditos para a espécie e a ocorrência de pronuciferina e boldina constituiu o primeiro relato, no gênero Annona. Os dados referentes ao rendimento em AT (folha e caule) e à atividade antipromastigota in vitro indicaram comportamento, praticamente, constante dos parâmetros ao longo do ano. O óleo volátil de folha foi analisado, por CG-EM, tendo-se identificado 60 compostos, em mistura complexa de sesquiterpenos (76,7%) e monoterpenos (23,3%). O constituinte majoritário foi o sesquiterpeno biciclogermacreno (39,8%). O óleo volátil foi avaliado in vitro e apresentou atividade frente às formas promastigotas de quatro espécies de Leishmania e nas formas tripomastigotas de T. cruzi. A determinação e obtenção dos compostos bioativos motiva a continuidade da pesquisa. / Previous studies of total alkaloids (TA) from Annona coriacea Mart. (Annonaceae) have revealed potential antiprotozoal activity. In this study a bioguided fractionation of leaves TA was conducted and two fractions were active in vitro against Leishmania (L.) chagasi promastigotes (100% death) and selected in order to identify the alkaloid constituents, by GC-MS analysis. Stem bioactive TA (100% death) were also analyzed, without previous fractionation. Parallel to that, a sample of three combined specimens of A. coriacea (leaves and stem) was evaluated for the annual variation of TA production and the leishmanicide activity. Stefarine (proaporphine) and nornuciferine (noraporphine) were identified in the bioactive fractions of leaves while pronuciferine (proaporphine), asimilobine (noraporphine) and boldine (aporphine) were identified in stem TA. Boldine was confirmed by the GC-MS evaluation of the standard, under the same conditions of the TA. It was the first report of those alkaloids in this species and for pronuciferine and boldine occurrence in Annona genus. The TA yields (leaves and stem) and the in vitro antipromastigote activity remained almost unaltered throughout the year. The volatile oil of leaves was also analyzed by GC-MS. Sixty compounds were indentified in a complex mixture of sesquiterpenes (76.7%) and monoterpenes (23.3%). Byciclogermacrene was its major component (39.8%). The volatile oil was evaluated in vitro and was active against four species of Leishmania promastigotes and also against T. cruzi tripomastigotes. The identification of the bioactive constituents and their isolation are promising for further studies.